CN103739487B - β-酸单酯盐及其做为动物饲料添加剂的应用 - Google Patents

β-酸单酯盐及其做为动物饲料添加剂的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种β-酸单酯盐及其做为动物饲料添加剂的应用。本发明的如式1所示的β-酸单酯盐对畜禽低毒或者无毒,最重要是稳定性大幅提高,其比目前专利覆盖相关化合物有更高的稳定性及更强的生长促进性能,因此更适合作为饲料用生长促进剂,在养殖行业具有非常好的应用前景。

Description

β-酸单酯盐及其做为动物饲料添加剂的应用
技术领域:
本发明属于动物饲料添加剂领域,具体涉及高稳定性的β-酸单酯盐及其做为动物饲料添加剂的应用。
背景技术:
虽然一系列美国专利US8197863B2,US8012516B2,US20080213342A1,US20060269588,US20040219240,US7090873,US20060134248,US8012516,US20110311663,US7553504,US20130018106,US6251461等以及一系列欧洲专利EP2606742A1,EP1542543A1,EP2429311A2,EP1722635A2等都描述了酒花酸(Hops acids)作为替代饲用抗生素类生长促进剂的应用。但是,首先这些专利所描述的都是应用酒花植物或酒花酸的提取物(α-酸及β-酸混合物等)作为饲料添加剂应用,而这些酒花提取物(混合物)其实已经在中国饲料添加剂目录上,只是作为饲用香料应用;其次,这些专利所依据的基本是体外试验结果,体外消化试验等,动物饲养试验结果很少;再次,这些天然产物及它们的组分、以及不同酯、盐、等的稳定性在满足作为动物饲料添加剂应用必须的要求方面没有资料支持。
发明内容:
本发明的第一个目的是提供具有更高的稳定性、能够促进畜禽生长的,更适合作为饲料添加剂应用的β-酸单酯盐。
本发明的β-酸单酯盐,其结构通式如式1所示:
其中:R1为异丙基、仲丁基或异丁基,R2为1~17碳直链烷烃基,L为钙、镁、铜、锌、锰或钴。
所述的R2优选为甲基、乙基或丙基。
所述的L优选为钙或镁。
所述的β-酸是现有技术中的物质,其含合蛇麻酮(colupulone)、蛇麻酮(lupulone)及加蛇麻酮(adlupulone)三个主要组分,它们的含量范围分别在商业提取物标定范围内即可。
本发明的第二个目的是提供上述β-酸单酯盐在制备动物饲料添加剂中的应用。
所述的动物为各个生长阶段的猪、鸡、鸭、鹅、肉牛、奶牛、羊、鱼、虾、狐、貂或貉等动物。
所述的β-酸单酯盐,其在动物饲料中的添加剂量为0.1~500ppm,优选剂量为0.5~50ppm。
所述的动物饲料可以是全价配合饲料。
本发明的如式1所示的β-酸单酯盐对畜禽低毒或者无毒,最重要是稳定性大幅提高,其比目前专利覆盖相关化合物有更高的稳定性及更强的生长促进性能,因此更适合作为饲料用生长促进剂,在养殖行业具有非常好的应用前景。
附图说明:
图1是β-酸单乙酯鎂盐的HPLC图谱;
图2是β-酸单乙酯钙盐的HPLC图谱;
图3是β-酸单乙酯锌盐的HPLC图谱;
图4是β-酸单乙酯铜盐的HPLC图谱;
图5是β-酸单乙酯钴盐的HPLC图谱;
图6是β-酸单乙酯锰盐的HPLC图谱;
图7是β-酸镁盐的HPLC图谱;
图8是β-酸钙盐的HPLC图谱。
具体实施方式:
以下实施例是对本发明的进一步说明,而不是对本发明的限制。
实施例1:β-酸单酯合成 
以下实施例中的β-酸均购自美国斯丹纳酒花集团公司。
1.β-酸单乙酯(IST-010-005)制备操作过程
称取50gβ-酸(121mmol),溶于20ml二氯甲烷中,加12.2g三乙胺(121mmol),搅拌降温至-5~0℃。将9.5g乙酰氯(121mmol)溶于80ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1 小时加完。然后继续反应2小时,HPLC监控。反应完成后自然升温到室温,加100ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,100ml水洗三次,分出有机相,无水硫酸钠干燥,减压脱溶,得到59g油状产品,即为β-酸单乙酯,收率107%。
2.β-酸单丙酯(IST-010-010)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于20ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5~0℃。将2.2g丙酰氯(24.1mmol)溶于80ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1小时加完。然后继续反应1小时,HPLC监控。反应完成后自然升温到室温,加80ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,80ml水洗三次,分出有机相,无水硫酸钠干燥,脱溶,得到7g油状产品,即为β-酸单丙酯,收率60%。
3.β-酸单丁酯(IST-010-011)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于20ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5~0℃。将2.6g丁酰氯(24.3mmol)溶于50ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1小时加完。然后继续反应1小时,TLC监控。反应完成后自然升温到室温,加80ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,50ml水洗三次,分出有机相,无水硫酸钠干燥,脱溶,得到7g油状产品,即为β-酸单丁酯,收率60%。
4.β-酸单戊酯(IST-010-012)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于20ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5~0℃。将2.9g戊酰氯(24.0mmol)溶于50ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1小时加完。反应完成后自然升温到室温,加80ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,50ml水洗三次,分出有机相,无水硫酸钠干燥,脱溶,得到9g油状产品,即为β-酸单戊酯,收率 74%。
5.β-酸单庚酯(IST-010-014)制备操作过程
称取10.0gβ-酸(24.1mmol),溶于20ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5~0℃。将3.6g庚酰氯(24.2mmol)溶于20ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1小时加完。然后继续反应1小时,HPLC监控。反应完成后自然升温到室温,加80ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,80ml水洗三次,分出有机相,无水硫酸钠干燥,脱溶,得到11g油状产品,即为β-酸单庚酯,收率87%。
6.β-酸单辛酯(IST-010-006)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于20ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5~0℃。将3.9g辛酰氯(23.9mmol)溶于30ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1小时加完。然后继续反应1小时,TLC监控。反应完成后自然升温到室温,加50ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,80ml水洗三次,分出有机相,无水硫酸钠干燥,脱溶,得到11.5g油状产品,即为β-酸单辛酯,收率88%。
7.β-酸单壬酯(IST-010-019)制备操作过程
称取20gβ-酸(48.2mmol),溶于40ml二氯甲烷中,加4.8g三乙胺(48.2mmol),搅拌降温至-5~0℃。将12.8g壬酰氯(72.4mmol)溶于30ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约0.5小时加完。然后继续反应1小时,TLC监控。反应完成后自然升温到室温,加50ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,50ml水洗三次,分出有机相,无水硫酸钠干燥,脱溶,得到28g油状产品,即为β-酸单壬酯,收率104%(含有少量醋酸)。
8.β-酸单癸酯(IST-010-015)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于30ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5~0℃。将4.6g癸酰氯(24.1mmol)溶于20ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1小时加完。然后继续反应1小时,TLC监控。反应完成后自然升温到室温,加40ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,50ml水洗三次,分出有机相,无水硫酸钠干燥,硅胶脱色,脱溶,得到7g油状产品,即为β-酸单癸酯,收率51%。
9.β-酸单十一酸酯(IST-010-016)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于20ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5~0℃。将4.9g十一烷酰氯(23.9mmol)溶于20ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1小时加完。然后继续反应1小时,TLC监控。反应完成后自然升温到室温,加40ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,50ml水洗三次,分出有机相,无水硫酸钠干燥,脱溶,得到10g油状产品,即为β-酸单十一酸酯,收率69%。
10.β-酸单十二酸(月桂酸)酯(IST-010-017)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于20ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5~0℃。将5.3g十二烷酰氯(24.1mmol)溶于30ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1小时加完。然后继续反应1小时,TLC监控。反应完成后自然升温到室温,加40ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,50ml水洗三次,分出有机相,无水硫酸钠干燥,脱溶,得到12g油状产品,即为β-酸单十二酸(月桂酸)酯,收率83%。
11.β-酸单十四酸酯(IST-010-018)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于20ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5~0℃。将5.8g十四烷酰氯(23.5mmol)溶于50ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中, 大约1小时加完。然后继续反应1小时,TLC监控。反应完成后自然升温到室温,加80ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,80ml水洗三次,分出有机相,无水硫酸钠干燥,脱溶,得到14g油状产品,即为β-酸单十四酸酯,收率93%。
12.β-酸单棕榈酸酯(IST-010-007)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于50ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5~0℃。将6.6g棕榈酰氯(24.1mmol)溶于50ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1小时加完。然后继续反应1小时,TLC监控。反应完成后自然升温到室温,加50ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,无水硫酸钠干燥,脱溶,得到13g油状产品,即为β-酸单棕榈酸酯,收率82%。
13.β-酸单硬脂酸酯(IST-010-025)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于30ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5℃。将7.3g棕榈酰氯(24.1mmol)溶于50ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1小时加完。然后继续反应2小时,TLC监控。反应完成后自然升温到室温,加50ml纯水,分相。分出有机相,无水硫酸钠干燥,脱溶,得到14g油状产品,即为β-酸单硬脂酸酯,收率85%。
14.β-酸单苯甲酸酯(IST-010-009)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于50ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5℃。将3.4g棕榈酰氯(24.2mmol)溶于30ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,大约1小时加完。然后继续反应3小时,TLC监控。反应完成后自然升温到室温,加50ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,50ml水洗3次无水硫酸钠干燥,脱溶,得到10g油状产品,即为 β-酸单苯甲酸酯,收率80%。
15.β-酸单磷酸酯(IST-010-002)制备操作过程
称取10gβ-酸(24.1mmol),溶于30ml二氯甲烷中,加2.4g三乙胺(24.1mmol),搅拌降温至-5~0℃。取3.7g三氯氧磷(24.1mmol)溶于20ml二氯甲烷,滴加到β-酸溶液中,约1小时加完。继续反应1小时HPLC监控。反应完成后自然升温到室温,加80ml纯水,搅拌,分相。分出有机相,水洗三次,分出有机相,脱溶,得到9g棕黑色油状产品,即得β-酸单磷酸酯,收率75%。
上述15个化合物的结构式如表1所示
表1:上述15个化合物的结构式
表中的R为异丙基、仲丁基或异丁基。
实施例2:β-酸单乙酯盐的合成
1.β-酸单乙酯镁盐制备过程
称取6.1gβ-酸单乙酯溶于30ml95%乙醇,搅拌冷却到-10℃。滴加100ml3%KOH水溶液,约0.5h滴完。称取1.8g硫酸镁,溶于100ml水中,滴加到前述溶液中。加完后继续搅拌1h。过滤,水洗,干燥,得到淡黄色固体5.6g,即为β-酸单乙酯镁盐,收率约90%。
β-酸单乙酯镁盐的HPLC条件:色谱柱是Wondasil C18(250mm×4.6mm,5μm)柱;流动相是乙腈-1.4%磷酸水溶液(85:15,v/v);检测波长315nm;柱温25℃;进样量20μL;流速1.0ml/min。分析图如图1所示,其中后3个峰为β-酸单乙酯镁盐。
2.β-酸单乙酯钙盐制备过程
称取5.7gβ-酸单乙酯溶于25ml95%乙醇,搅拌冷却到-10℃。滴加80ml3%KOH水溶液,约0.5h滴完。称取2.0g氯化钙加到前述溶液中。加完后继续搅拌1h。过滤,水洗,干燥,得到淡黄色固体5g,即为β-酸单乙酯钙盐,收率约84%。
β-酸单乙酯钙盐的HPLC条件同“β-酸单乙酯镁盐制备过程”,分析图如图2所示,其中后3个峰为β-酸单乙酯钙盐。
3.β-酸单乙酯锌盐制备过程
称取8.5gβ-酸单乙酯溶于40ml95%乙醇,搅拌冷却到-10℃。滴加137ml3%KOH水溶液,约0.5h滴完。称取3.3g氯化锌,加到前述溶液中。加完后继续搅拌1h。过滤,水洗,干燥,得到淡黄色固体8.2g,即为β-酸单乙酯锌盐,收率约89%。
β-酸单乙酯锌盐的HPLC条件同“β-酸单乙酯镁盐制备过程”,分析图如图3所示,其中后3个峰为β-酸单乙酯锌盐。
4.β-酸单乙酯铜盐制备过程
称取10.2gβ-酸单乙酯溶于50ml95%乙醇,搅拌冷却到-10℃。滴加162ml3%KOH水溶液,约0.5h滴完。称取5.0g氯化铜,溶于20ml水中,滴加到前述溶液中。加完后继续搅拌1h。过滤,水洗,干燥,得到墨绿色固体9.8g,即为β-酸单乙酯铜盐,收率约89%。
β-酸单乙酯铜盐的HPLC条件同“β-酸单乙酯镁盐制备过程”,分析图如图4所示,其中后3个峰为β-酸单乙酯铜盐。
5.β-酸单乙酯钴盐制备过程
称取6.2gβ-酸单乙酯溶于60ml95%乙醇,搅拌冷却到-10℃。滴加100ml3%KOH水溶液,约0.5h滴完。称取4.2g六水合二氯化钴加到前述溶液中。加完后继续搅拌1h。过滤,水洗, 干燥,得到淡黄色固体5.8g,即为β-酸单乙酯钴盐,收率约88%。
β-酸单乙酯钴盐的HPLC条件同“β-酸单乙酯镁盐制备过程”,分析图如图5所示,其中后3个峰为β-酸单乙酯钴盐。
6.β-酸单乙酯锰盐制备过程
称取10.5gβ-酸单乙酯溶于50ml95%乙醇,搅拌冷却到-10℃。滴加180ml3%KOH水溶液,约0.5h滴完。称取4.1g氯化锰,溶于30ml水中,滴加到前述溶液中。加完后继续搅拌1h。过滤,水洗,干燥,得到咖啡色固体10.1g,即为β-酸单乙酯锰盐,收率约91%。
β-酸单乙酯锰盐的HPLC条件同“β-酸单乙酯镁盐制备过程”,分析图如图6所示,其中后3个峰为β-酸单乙酯锰盐。
7.β-酸镁盐制备过程
8.称取5.0g贝塔酸溶于15ml乙醇。称取1.8gKOH溶于20ml水中,加入贝塔酸溶液中,搅拌1h。称取5.0g六水氯化镁,溶于100ml水中,滴加到贝塔酸碱液中。逐渐形成类白色固体。过滤,水洗,干燥,得到白固体5.5g,收率约104%。HPLC条件同“β-酸单乙酯镁盐制备过程”,分析图如图7所示,其中后3个峰为β-酸镁盐。
9.β-酸钙盐制备过程
称取5.0g贝塔酸溶于15ml95%乙醇。称1.9g KOH溶于32ml水,滴加到贝塔酸中,搅拌成钾盐。称取2.7g氯化钙,溶于100ml水中,滴加到前述溶液中,搅拌1h。过滤,水洗,凉干,得到淡黄色固体3.1g,收率约56%。HPLC条件同“β-酸单乙酯镁盐制备过程”,分析图如图8所示,其中后3个峰为β-酸钙盐。
本实施例所用到的β-酸单乙酯是实施例1中制备的β-酸单乙酯。 
实施例3:β-酸单酯或/和盐系列产品高温稳定性试验
将β酸和实施例1和2制备的不同的β酸酯及β-酸单乙酯盐分别用玉米芯粉配制为终浓度质量分数2%的预混剂。称取待测试样(预混剂)于坩埚中,平铺,于100℃烘箱中处理17小时后,测试预混剂中相应产品含量的变化。
测试方法:称取1.0g样品(每个样平行制备3份)于具塞锥形瓶中加乙醇50ml,超声提取10min,用滤纸过滤,滤液转移至50ml容量瓶中,乙醇定容至刻度,摇匀,取滤液经0.45μm微孔滤膜过滤,进行HPLC分析。色谱条件如下:色谱柱是Wondasil C18(250mm×4.6mm,5μm)柱;流动相是乙腈-1.4%磷酸水溶液(85:15,v/v);检测波长315nm;柱温25℃;进样量20μL;流速1.0ml/min。
试验结果如表2显示,所有β酸单酯类衍生物稳定性有提高但是仍不理想,所有β酸盐类仍不稳定。β-酸单乙酯镁盐在100℃加热17小时后,其中主要成分的含量未发生较大变化,由此说明β-酸单乙酯镁盐在100℃的情况下稳定性较好,说明β-酸的单乙酯镁盐是基本稳定的。
表2:β-酸单酯或/和盐系列产品在100℃加热17h时主要成分的变化情况
实施例4:β-酸单乙酯盐系列产品高温稳定性试验
将试验制备的β-酸单乙酯盐系列产品用玉米芯粉配制为终浓度质量分数约2%的预混剂。称取待测试样β-酸单乙酯盐系列样品(预混剂)于坩埚中,平铺,于60℃或100℃烘箱中处理不同时间后,称取1.0g样品(每个样平行制备3份)于具塞锥形瓶中加乙醇50ml,超声提取10min,用滤纸过滤,滤液转移至50ml容量瓶中,乙醇定容至刻度,摇匀,取滤液经0.45μm微孔滤膜过滤,进行HPLC分析。色谱条件如下:色谱柱是Wondasil C18(250mm*4.6mm,5μm)柱;流动相是乙腈-1.4%磷酸水溶液(85:15,v/v);检测波长315nm;柱温25℃;进样量20μL;流速1.0ml/min。
稳定性结果见表3
表3:不同β-酸单乙酯盐的高温稳定性试验
从表3可以看出,本发明的β-酸单乙酯盐在60℃加热20h后,其中主要成份的含量都没有发生较大变化,由此说明β-酸单乙酯盐在60℃的情况下稳定性较好。本发明的β-酸单乙酯盐中除了β-酸单乙酯钴盐在100℃加热20h后,其中主要成份的含量有较大幅度的降低之外,其他β-酸单乙酯盐都没有较大变化,甚至加热40h也未发生较大变化,由此说明本发明的β-酸单乙酯盐中除了β-酸单乙酯钴盐在100℃的情况下稳定性较好。
综上所述,本发明的β-酸单乙酯盐是基本稳定的。
实施例5:β-酸单酯盐在猪料中的应用效果
60头体重相近的67日龄杜大长三元杂瘦肉型小猪随机分为6组,每组10头。按表4每组添加不同种类或剂量的β-酸单乙酯盐。试验期自由采食和饮水。试验期共14天,试验期β-酸单乙酯钙盐和β-酸单乙酯镁盐试验组在试验猪的增重和料肉比方面均有显著改善。分组及结果见表4及表5。
表4:试验动物分组及添加剂用法、用量
组别 试验数量 添加物质 剂量(mg/kg) 用药方式
1 10 - - -
2 10 - - -
 
3 10 β-酸单乙酯钙盐 5 混料
4 10 β-酸单乙酯钙盐 25 混料
5 10 β-酸单乙酯镁盐 5 混料
6 10 β-酸单乙酯镁盐 25 混料
-:表示不添加β-酸单酯盐的空白对照。
表5:β-酸单酯盐在猪料中的应用的试验结果
组别 平均初重(kg) 平均增重(kg) 平均日增重(kg/头*d) 耗料(kg) 料肉比
1 17.27 6.09 0.435 135.55 2.226
2 17.24 5.67 0.405 128.63 2.269
3 17.03 7.81 0.558 150.23 1.923
4 17.04 7.13 0.51 134.78 1.89
5 17.27 7.28 0.52 135.07 1.856
6 17.25 7.45 0.532 138.36 1.86
实施例6:β-酸单酯盐在鸡料中的应用效果
250羽1日龄健康、生长状态相同且体重相近的快大黄羽肉鸡(母苗)按表6随机分成5个处理组,每组50羽,并分别在每组中添加不同剂量的β-酸单乙酯镁盐或β-酸。试验期笼养,自由采食和自由饮水。试验期共30天,试验期β-酸单乙酯镁盐试验组在试验鸡的增重和料肉比方面均有显著改善,且相同剂量的β-酸单乙酯镁盐较β-酸对动物的生产性能改进更明显(表7)。
表6:试验动物分组及添加剂用法、用量
组别 试验数量(只) 药物种类 剂量 用药方法
1 50 - - -
2 50 β-酸 2ppm 混料
 
3 50 β-酸单乙酯镁盐 2ppm 混料
4 50 β-酸 20ppm 混料
5 50 β-酸单乙酯镁盐 20ppm 混料
-:表示不添加β-酸单酯盐或β-酸的空白对照。
表7:β-酸单酯盐在鸡料中的应用的试验结果
组别 初重(g) 存活率(%) 平均增重(g) 耗料(kg) 平均日增重(g) 料肉比
1 40.0 100 741 77.3.2 24.70 2.087
2 40.0 100 744 73.88 24.80 1.986
3 39.8 100 769 73.97 25.63 1.924
4 40 100 771 74.59 25.70 1.935
5 39 100 788 73.21 26.27 1.858

Claims (7)

1.β-酸单酯盐,其结构通式如式1所示:
其中:R1为异丙基、仲丁基或异丁基,R2为1~17碳直链烷烃基,L为钙、镁、铜、锌、锰或钴。
2.根据权利要求1所述的β-酸单酯盐,其特征在于,所述的R2为甲基、乙基或丙基。
3.根据权利要求1所述的β-酸单酯盐,其特征在于,所述的L为钙或镁。
4.权利要求1所述的β-酸单酯盐在制备动物饲料添加剂中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述的动物为各个生长阶段的猪、鸡、鸭、鹅、肉牛、奶牛、羊、鱼、虾、狐、貂或貉。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述的β-酸单酯盐,其在动物饲料中的添加剂量为0.1~500ppm。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述的β-酸单酯盐,其在动物饲料中的添加剂量为0.5~50ppm。
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