CN103719542B - 一种复合微生物活性添加剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及畜禽用中药技术领域，特别涉及一种复合微生物活性添加剂：称取山楂、当归、五味子、黄芪、枸杞子、茵陈、淡竹叶、生地，粉碎至60目，灭菌，按比例加入乳酸菌，混匀后发酵，即得发酵中间品；将发酵中间品与地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母菌、苹果酸、柠檬酸混均，加入载体混匀即得发酵终产品。将微生物、发酵中药、酸化剂的健胃功能结合起来，有效减缓了毒物对肝脏的损伤，促进了毒物的排放，提高了肝脏的解毒功能；地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌形成芽孢，在使用时可与抗生素同时使用；既可以提高效物的有效利用，保护内脏器官不受损伤，又可加速代谢毒物的排放，降低药物残留问题，为推动我国绿色养殖业的发展做出应有贡献。

Description

一种复合微生物活性添加剂及其应用

技术领域    

本发明涉及畜禽用中药与微生物技术领域，特别涉及一种复合微生物活性添加剂，还涉及所述复合微生物活性添加剂的应用。

背景技术   

随着我国养殖业向集约化、规模化发展，畜禽疾病的发病率逐年上升，新的疾病不断增加，尤其是危害畜禽安全的常见疾病具有迅速蔓延的趋势，成为困扰我国养殖业的重要问题。到目前为止，市场上控制畜禽疾病的药物众多（例如大环内酯类抗生素、氟喹诺酮类）已近十种剂型，但是多为化学合成或发酵生产的抗生素，由于这些药物的长期大量应用，易产生耐药性和药物残留，对动物的肝脏造成不可逆的损伤，并丧失部分解毒功能，严重影响畜禽的健康。不仅造成经济损失，而且危害人体健康，因此研制安全、毒副作用小，又不易产生耐药性、疗效高、成本低的药物来营养肝脏、减缓肝脏损伤、提高肝脏解毒功能是当前养殖业急待解决的难题。而目前尚未有利用微生物生产技术发酵中药超微粉技术共同研制临床应用的复方制剂。

中草药发酵新技术，采用微生物固体或液体发酵技术，对不同材质的中草药原药材进行粗粉；然后对粉碎后的药物进行微生物发酵，研制出复合生态新剂型；再对中药散剂新剂型进行药效、临床等方面的综合研究，从而实现兽用中药制药技术的一项新突破。中药发酵技术能够对目前普遍应用的散剂、片剂工艺进行彻底改进，克服散剂生产过程中的粉尘污染，采用全封闭式生产还可减少产品的污染。与冲剂相比，超微细胞粉碎技术可保持药材全部的成分被充分利用，避免了挥发油及脂溶性成分在冲剂生产过程中大量流失的问题，同时不产生废渣废液，对环境没有污染，再者，中药发酵技术设备投资与中草药冲剂、口服液相比大大减少并且设备操作简单，占空间小，因此中药发酵技术在兽用中草药生产方面的推广应用及产业化前景十分广阔。

随着科学发展，抗生素问世及广泛应用、无菌动物的出现，大大促进了微生态学的发展，在日本、法国、德国等欧美一些国家，开始利用人体肠道内正常生理性细菌（主要为双歧杆菌、乳酸菌），在体外培养发酵后制成活菌制剂，然后再回到体内，可以调整肠内微生态平衡，防治菌群失调引起的腹泻等疾病。以后又利用一些外来的、对人无毒无害的芽孢菌（例如枯草杆菌、丁酸梭菌等）制成活菌制剂，用寡糖类物质做成制剂，在肠道内能促进正常菌群的生长繁殖，间接调整恢复微生态平衡，达到防治疾病的目的。近20年来随着免疫学、分子生物学技术的发展，微生态制剂的研制与应用更为迅速、广泛。近10余年来，在我国随着微生态学理论的发展，运用微生态学知识为人类健康服务已逐渐被国人认识，微生态制剂应运而生，并发展迅速。

发明内容   

为了解决现有技术中畜禽用添加剂有药物残留、对肝脏损伤大的问题，本发明提供了一种微生物、发酵中药结合起来，可降低药物残留对畜禽肝脏损伤的复合微生物活性添加剂。

本发明还提供了所述复合微生物活性添加剂在保护肝脏中的应用。

本发明是通过以下措施实现的：

一种复合微生物活性添加剂，通过以下步骤得到的：

（1）称取山楂10-15kg、当归15-20kg、五味子10-15kg、黄芪5-10kg、枸杞子5-10kg、茵陈10-20kg、淡竹叶10-15kg、生地5-10kg，粉碎至60目，灭菌，按10%重量比例加入每毫升含100亿个乳酸菌的种子液，混匀后，放在无菌温室中37℃培养48-72小时，即得发酵中间品；

（2）将发酵中间品与地衣芽孢杆菌10¹²CFU、枯草芽孢杆菌10¹²CFU、啤酒酵母菌10¹⁴CFU、苹果酸1-10g、柠檬酸1-10g混均，加入载体，混匀即得。

所述的复合微生物活性添加剂，称取山楂11-12kg、当归16-18kg、五味子12-14kg、黄芪6-7kg、枸杞子6-7kg、茵陈12-16kg、淡竹叶13-15kg、生地7-10kg。

所述的复合微生物活性添加剂，称取山楂12kg、当归18kg、五味子12kg、黄芪6kg、枸杞子6kg、茵陈13kg、淡竹叶14kg、生地7kg。

所述的复合微生物活性添加剂，称取山楂15kg、当归18kg、五味子13kg、黄芪8kg、枸杞子6kg、茵陈18kg、淡竹叶13kg、生地5kg，粉碎至60目。

所述的复合微生物活性添加剂，所述载体为麦饭石，加入量与发酵中间品的重量比为40：60。

所述的复合微生物活性添加剂在肝脏保护中的应用。

山楂：以果实作药用，性微温，味酸甘，入脾、胃、肝经，有消食健胃、活血化淤、收敛止痢之功能。

当归：性温，味甘、辛。归肝、心、脾经。补血活血，调经止痛，润肠通便。

五味子：收敛固涩，益气生津，补肾宁心。

黄芪：味甘微温。主痈疽久败创，排脓止痛，大风，痢疾，五痔，鼠瘘，补虚，小儿百病。

枸杞子：处方名又做枸杞，归肝经；肾经；肺经。功能：养肝；滋肾；润肺。主治：肝肾亏虚；头晕目眩；目视不清；腰膝酸软；阳痿遗精；虚劳咳嗽；消渴引饮。

茵陈：苦、辛，微寒。归脾、胃、肝、胆经。清热利湿；退黄。主治：黄疸、小便不利、湿疮瘙痒、传染性黄疸型肝炎。

淡竹叶：入心经、肾经。功能：甘淡渗利，性寒清降，善导心与小肠之火下行而利尿通淋。主治：胸中疾热，咳逆上气。吐血、热毒风、止消渴、压丹石毒。消痰，治热狂烦闷。中风失音不语，痛头风，止惊悸，瘟疫迷闷，妊妇头旋倒地，小儿惊痈天吊，喉痹，烦热。

生地：清热、生津、润燥、滑肠、破瘀、生新、止痛、调经、金疮瘀、凉血、止血。

本发明的有益效果：组方新颖、独特，将微生物、发酵中药、酸化剂的健胃功能结合起来，有效减缓了毒物对肝脏的损伤，促进了毒物的排放，提高了肝脏的解毒功能，对四氯化碳所致小鼠的组织学损伤具有明显的防护作用，对四氯化碳所致细胞及细胞器膜损伤而引起的SGPT升高有明显的拮抗作用，有显著的护肝降酶作用；地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌形成芽孢，在使用时可与抗生素同时使用；既可以提高效物的有效利用，保护内脏器官不受损伤，又可加速代谢毒物的排放，降低药物残留问题，为推动我国绿色养殖业的发展做出应有贡献。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。

实施例1：

一种复合微生物活性添加剂，其特征是通过以下步骤得到的：

（1）称取山楂12kg、当归18kg、五味子12kg、黄芪6kg、枸杞子6kg、茵陈13kg、淡竹叶14kg、生地7kg，粉碎至60目，灭菌，按10%重量比例加入每毫升含100亿个乳酸菌的种子液，混匀后，放在无菌温室中37℃培养48-72小时，即得发酵中间品；

（2）将发酵中间品与地衣芽孢杆菌10¹²CFU、枯草芽孢杆菌10¹²CFU、啤酒酵母菌10¹⁴CFU、苹果酸1g、柠檬酸10g混均，加入载体混匀即得。

每1公斤添加剂与500公斤饲料混合使用。

混饮，每1kg添加剂兑水1000公斤使用。

实施例2：

一种复合微生物活性添加剂，其特征是通过以下步骤得到的：

（1）称取山楂12kg、当归16kg、五味子12kg、黄芪6kg、枸杞子6kg、茵陈16kg、淡竹叶13kg、生地7kg，粉碎至60目，灭菌，按10%重量比例加入每毫升含100亿个乳酸菌的种子液，混匀后，放在无菌温室中37℃培养48-72小时，即得发酵中间品；

（2）将发酵中间品与地衣芽孢杆菌10¹²CFU、枯草芽孢杆菌10¹²CFU、啤酒酵母菌10¹⁴CFU、苹果酸10g、柠檬酸1g混均，加入载体混匀即得。

在本实施例中，所用载体可以为麦饭石，加入量与发酵中药的重量比为40：60。

每1公斤添加剂与500公斤饲料混合使用。

混饮，每1kg添加剂兑水1000公斤使用。

实施例3：

一种复合微生物活性添加剂，其特征是通过以下步骤得到的：

（1）称取山楂11kg、当归16kg、五味子14kg、黄芪7kg、枸杞子7kg、茵陈12kg、淡竹叶15kg、生地10kg，粉碎至60目，灭菌，按10%重量比例加入每毫升含100亿个乳酸菌的种子液，混匀后，放在无菌温室中37℃培养48-72小时，即得发酵中间品；

（2）将发酵中间品与地衣芽孢杆菌10¹²CFU、枯草芽孢杆菌10¹²CFU、啤酒酵母菌10¹⁴CFU、苹果酸4g、柠檬酸6g混均，加入载体混匀即得。

每1公斤添加剂与500公斤饲料混合使用。

混饮，每1kg添加剂兑水1000公斤使用。

对比实施例：

按照上述实施例3的中药配比加量，不进行乳酸菌发酵，粉碎后直接与实施例3中等量的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母菌、苹果酸、柠檬酸混合，制得对比添加剂。

每1公斤添加剂与500公斤饲料混合使用。

混饮，每1kg添加剂兑水1000公斤使用。

效果验证试验

（一）试验方法

1、药品：上述实施例1-3和对比实施例中制备的添加剂；橄榄油，四氯化碳，分析纯，均购自相关厂家。

2、动物昆明小鼠，雌雄兼用，体重(为25士2)g，由山东省动物实验中心提供。

3、四氯化碳所致肝损伤的方法参照相关文献（徐叔云，卞如谏，陈修，等.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社，1988:868-869.）方法。

4、用药方式：

将60只小鼠随机分为6组，即正常组、生理盐水组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、对比实施例组。

正常组按常规饲喂方式饲喂；生理盐水组每天给饮生理盐水；实施例1组、实施例2组、实施例3组、对比实施例组，每天给饮上述实施例中制得的添加剂混饮，连续9天。

生理盐水组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、对比实施例组在第3、6、9天分别按600mg/kg的剂量腹腔注射含10%四氯化碳的橄榄油溶液。

末次造模24h(总第10天)后，全部组摘眼球，取血，分离血清；剖取肝脏，用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基移换酶(SGpT)值；切取左叶肝脏，10%甲醛固定肝组织，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察。

（二）结果

1、对血清SGPT酶的影响见表l。

表1试验组对SGPT的影响(x土s)

注:实施例1-3组与正常组比较差异不显著（P<0.05）。对比实施例组与正常组有较明显差异。生理盐水组SGPT活性明显升高，实施例1-3组SGPT酶活性明显低于生理盐水组，组间比较差异具有显著性(P<0.05，P<0.01)。

2、病理组织学检查：正常组肝小叶结构正常；生理盐水组肝小叶结构及肝细胞索排列紊乱，可见广泛的细胞浊肿变性，肝细胞灶性坏死，尤以小叶中央区为突出；对比实施例组肝小叶结构及肝细胞索排列紊乱，细胞轻度浊肿变性，肝细胞稍有灶性坏死；实施例1-2组肝窦周边细胞仍见有轻度的浊肿变性，汇管区可见少量炎症细胞浸润。实施例3组仅少数肝细胞出现浊肿变性。

（三）结论

四氯化碳从对肝细胞具有剧烈毒性，四氯化碳诱发的急性肝损伤是研究保肝降酶药物的常用实验模型。近年研究表明，肝损伤是多因素参与的复杂过程，自由基损伤和脂质过氧化反应在肝疾病中起着十分重要的作用。本实验结果显示，本发明实施例1-3制备得到的添加剂对四氯化碳所致小鼠的组织学损伤具有明显的防护作用;对四氯化碳所致细胞及细胞器膜损伤而引起的SGPT升高有明显的拮抗作用。本研究结果提示，本发明的复合微生物活性添加剂有显著的护肝降酶作用。

Claims (6)

1.一种复合微生物活性添加剂，其特征是通过以下步骤得到的：

（1）称取山楂10-15kg、当归15-20kg、五味子10-15kg、黄芪5-10kg、枸杞子5-10kg、茵陈10-20kg、淡竹叶10-15kg、生地5-10kg，粉碎至60目，灭菌，按10%重量比例加入每毫升含100亿个乳酸菌的种子液，混匀后，放在无菌温室中37℃培养48-72小时，即得发酵中间品；

（2）将发酵中间品与地衣芽孢杆菌10¹²CFU、枯草芽孢杆菌10¹²CFU、啤酒酵母菌10¹⁴CFU、苹果酸1-10g、柠檬酸1-10g混均，加入载体，混匀即得。

2.根据权利要求1所述的复合微生物活性添加剂，其特征在于称取山楂11-12kg、当归16-18kg、五味子12-14kg、黄芪6-7kg、枸杞子6-7kg、茵陈12-16kg、淡竹叶13-15kg、生地7-10kg。

3.根据权利要求1所述的复合微生物活性添加剂，其特征在于称取山楂12kg、当归18kg、五味子12kg、黄芪6kg、枸杞子6kg、茵陈13kg、淡竹叶14kg、生地7kg。

4.根据权利要求1所述的复合微生物活性添加剂，其特征在于称取山楂15kg、当归18kg、五味子13kg、黄芪8kg、枸杞子6kg、茵陈18kg、淡竹叶13kg、生地5kg，粉碎至60目。

5.根据权利要求1所述的复合微生物活性添加剂，其特征在于所述载体为麦饭石，加入量与发酵中间品的重量比为40：60。

6.一种权利要求1-5中任一项所述的复合微生物活性添加剂在制备肝脏保护药物中的应用。