CN110559363A - 一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液及其制备工艺 - Google Patents

一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液及其制备工艺 Download PDF

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Abstract

本发明涉及兽药技术领域，具体涉及一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液及其制备方法。该复方发酵口服液选用附子、黄芪、大黄、熟地黄、当归、党参、黄连、升麻、甘草和柴胡，并采用酿酒酵母、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和粪肠球菌活性益生菌进行发酵，能够将大分子物质分解为易吸收的小分子，且能够补充患病机体内的益生菌数量，维持机体内益生菌和兼性致病菌的平衡；该复方发酵口服液严格按照药理进行配伍，口感好、易吸收、高效低毒、药效显著，治愈率高而且还能增强机体免疫力、固本培元。

Description

一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液及其制备工艺
技术领域
本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液及其制备工艺。
背景技术
非洲猪瘟 (African swine fever，ASF) 是由非洲猪瘟病毒 (African swinefever virus，ASFV) 通过感染猪群而引起的一种高度接触性、广泛出血性猪烈性传染病，其不会感染猪以外的其他动物，猪与猪之间的传播，最简单的传播途径是通过接触猪的排泄物（污染物）传染。首次发现感染病例是1921年爆发于非洲的肯尼亚地区，从此之后便蔓延到了其他非洲地区甚至欧洲、美洲、亚洲等60 多个国家和地区。我国2018年8月首次在沈阳发现ASF感染，最新研究报道显示截止到目前为止，我国除台湾地区之外，其他省份都出现了非洲猪瘟病例。
非洲猪瘟自然感染的潜伏期为7~9d，其病状与猪瘟类似，病初体温上升到40℃以上，能够持续4d。病猪在发热期除了体温升高，食欲、精神状态良好，无其他明显症状；在发热后7d左右体温下降，呈现精神萎靡、食欲废绝、伏卧、行走困难、后肢无力甚至麻痹状态；有的猪皮肤溃疡、坏死，有的皮肤黄染，有的猪呕吐、腹泻、粪便带血，共济失调或步态僵直，四肢僵硬，不愿站立；眼结膜有脓性分泌物，鼻镜干燥，四肢以及耳廓出现紫斑，有的病猪发生腹泻甚至便血，怀孕母猪甚至出现流产症状。这种情况持续1~2d后死亡，死时常伴有口吐白沫，感染死亡的猪耳、尾末梢、腹腔及肛门周围皮肤出现红斑，血液中白细胞减少量约为正常的一半，红细胞、血红素等无明显变化，对病死猪剖检以淋巴结出血、水肿，脾脏极度肿大、呈暗红色至黑色、易碎、胆囊肿胀、肺间质性水肿等为主要特征。
非洲猪瘟疫情传播快，传播途径多，比如软蜱以及卵或者去过疫区的人、车辆、啄过病猪的飞鸟、两个猪场之间老鼠互串，都有可能引起非洲猪瘟传播。与猪流感病毒相比，非洲猪瘟病毒不仅存活时间较长，同时具备强大的耐受能力，要想对其彻底灭活，往往需要更长的时间进行消毒。由于其感染猪的致死率可达到100%，且该病毒的遗传物质是DNA 上，分子量较大，结构复杂，迄今未能研制出安全有效的疫苗，世界动物卫生组织 (OIE) 将其列为法定报告动物疫病，一经发现，必须进行扑杀。截至到当前，由于非洲猪瘟疫情我国已经捕杀了几十万头生猪，导致巨大经济损失，除了预防和加强消毒、安全管理，尚无有效药物控制防治非洲猪瘟，可以说，非洲猪瘟防控是我国养殖行业当前的大事，故急需一种药物，能够治愈或预防非洲猪瘟，解决猪肉产业重大难题。
中药相对于西药来说，具有补中益气、固本培元的特性，且安全易吸收，不易产生耐药性。中药的有效药用成分十分复杂，主要包括生物碱、皂苷类、挥发油、黄酮类、多糖类、有机酸以及矿物元素和维生素，这些活性成分有助于增强机体免疫功能、抗应激功能和抗菌等作用。针对目前对非洲猪瘟的防治仍没有将多种中药联合起来以组方的形式用于防治非洲猪瘟可能有意想不到的疗效。然而中药由于其成分和药理作用的复杂性，不便于控制，且有些中药甚至具有一定毒性。
发明内容
针对目前仍未研究出安全有效的疫苗的缺陷和问题，本发明提供一种防治非洲猪瘟的中药复合物发酵口服液及其制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的方案是：一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液，包括以下重量份比的中药：附子48-70份，黄芪18-42份，大黄16-34份，熟地黄15-30份，当归14-31份，党参10-30份，黄连6-15份，升麻6-13份，甘草4-12份，柴胡5-15份。
优选的，一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液，包括以下重量份比的中药：附子60份，黄芪30份，大黄30份，熟地黄20份，当归20份，党参20份，黄连12份，升麻10份，甘草10份，柴胡10份。
优选的，一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液，所述附子为附子饮片，所述熟地黄为熟地黄饮片。
本发明还提供一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液的制备工艺，包括以下步骤：
步骤一、按重量份比分别称取附子、黄芪、大黄、熟地黄、当归、党参、黄连、升麻、甘草和柴胡；将黄芪、大黄、当归、党参、黄连、升麻、甘草、柴胡分别碎断至1.5-3mm，混合均匀得到混合粉末。
步骤二、将步骤一制得的混合粉末放入容器中，加入混合粉末重量8-10倍量的水浸泡0.5-1.5h，浸泡后煎煮2-4h，过滤药渣收集滤液；将药渣重复提取2-3次，将每次收集的滤液进行混合得到混合提取液一。
步骤三、将附子和熟地黄分别于清水中浸泡1-3小时；将浸泡后的附子和熟地黄混合后放入容器中，加入混合药材8-10倍量的水继续浸泡60-100min，然后煎煮2-4h，过滤药渣收集滤液；将药渣重复提取2-3次，将每次收集的滤液进行混合得到混合提取液二；
步骤四、将步骤二得到的混合提取液一和步骤三得到的混合提取液二合并，然后将合并药液减压浓缩，使药液浓度为0.8-1.5g/mL，冷却至30℃以下得到浓缩药液。
步骤五、向浓缩药液中依次加入酿酒酵母菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉和粪肠球菌菌粉，并搅拌0.5-1h进行混合，混合均匀后倒入无菌容器内，密封。
步骤六、将密封的容器置于25-32℃条件下，发酵48~72h即可得到本发明中药复方发酵口服液。
优选的，一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液的制备工艺，所述酿酒酵母菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉和粪肠球菌菌粉的添加量均为浓缩药液的0.8%-1.4%。
优选的，一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液的制备工艺，步骤四中按照药液与原药材重量比1:1的比例进行减压浓缩，使药液浓度为1g/mL。
优选的，一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液的制备工艺，所述酿酒酵母菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉和粪肠球菌菌粉的添加量均为浓缩药液的1%。
方中附子为主药，附子性辛、甘，大热；有毒，归心、肾、脾经。具有回阳救逆，温中散寒，补火助阳的作用，主治大汗亡阳，四肢厥冷，伤水冷痛，冷肠泄泻，风寒湿痹。
黄芪、党参、当归与附子具有相同性味归经，附子温中散寒的作用搭配黄芪的托毒排脓，敛疮生机，辅以党参的健脾益肺和当归的补血养血、润燥通便，不仅能够治疗不同程度的虚寒证疾病，还能够增强动物机体免疫力和抗病力，起到抗应激、活血化淤、扶正祛邪功能。
熟地黄性甘，微温。归肝、肾经，功能为滋阴补血，益精填髓。主治肝肾阴虚，血虚精亏，腰胯痿软，虚喘久咳，虚热盗汗；熟地黄为至阴之品，附子为至阳之品，两药一阴一阳，属阴阳配伍，彼此间功能相互协调、相互制约，刚柔相济，补阳之中得以阴配，益阴之中得以阳助，为阴阳兼补之剂。
黄连与大黄二药均性苦，寒，归心、脾、胃、肝、胆、大肠经。且均具有清热燥湿、泻火解毒、凉血解毒、破积行瘀的功能，二者联用能够起到协同作用，增强疗效，可用于缓解湿热泻痢，心火亢盛，胃火炽盛，肝胆湿热，目赤肿痛，火毒疮痈、实热便秘、目赤肿痛、烧伤烫伤、跌打损伤等症状；辅以柴胡的发表和里、升举阳气、舒肝解郁，升麻的清热解毒、发表透疹，更有利于缓解发热，中和大黄泻下作用带来的脾虚久泻。
甘草性甘、平。归心、肺、脾、胃经，可以补脾益气，祛痰止咳，和中缓急，解毒，调和诸药，缓解药物毒性；本方的主药附子由于具有毒性，可用甘草来中和降低其毒副作用，而大黄具有强烈的泻下作用，也可用甘草来缓和。
本发明的有益效果：
1、本发明以附子、黄芪、大黄、熟地黄、当归、党参、黄连、升麻、甘草、柴胡为原料，严格按照药理进行配伍，配方合理；采用高温蒸汽加热的方法从中药材中提取有效成分，制备过程中无任何化学物质的添加；采用微生物发酵法，各组分原料为菌体提供生长环境，同时又能够被菌体分解代谢产生多种有效活性成分及营养物质，实现全药性提取，降解环境污染物，大大提高了药用功效减少药物毒副作用，改善活性成分，增强药效。
2、本发明的复方口服液所用菌体均为有活性的益生菌，能够将大分子物质分解为易吸收的小分子，且能够补充患病机体内的益生菌数量，维持机体内益生菌和兼性致病菌的平衡。
3、本发明的复方口服液对非洲猪瘟病毒等多种病毒性感染具有防治作用，高效低毒，同时能够增强动物机体免疫力、抗应激，还具有固本、扶正、祛邪作用。
4、本发明的复方口服液各组分间具有协同作用，能够共同抑制非洲猪瘟病毒，对治疗非洲猪瘟具有显著的效果，治愈率75％以上，可达86％。
5、本发明的复方口服液成品色泽均匀，通过发酵掩盖了中药的苦味，口感好、易吸收，在保证药效的同时提高了适口性。
6、本发明的复方口服液不需要复杂的基质，制备过程简单，不需要过多人力和物力，适合批量生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步说明，以便更好地理解本发明技术方案，需要说明的是：下述实施例中各中药原料在选取量上10 g为1份。
实施例1：本实施例提供一种防治非洲猪瘟的中药复合物发酵口服液，该口服液包括以下重量的中药：附子饮片600g，黄芪300g，大黄300g，熟地黄饮片200g，当归200g，党参200g，黄连120g，升麻100g，甘草100g，柴胡100g。
制备工艺：
步骤一、按重量份分别称取将黄芪、大黄、当归、党参、黄连、升麻、甘草、柴胡分别碎断至1.5-3mm，混合均匀得到混合粉末。该步骤选择药粉形式是因为能提高原料在液体中的回收率，避免提取过程中由于中药材粒度过大造成的浸泡不完全和提取不充分；而粉末不能太细则是为了避免在煎煮过程中粉末渗出造成的浪费，且有利于后期过滤，若粉末过小，药渣不易过滤，易造成口服时有颗粒感。
步骤二、将步骤一制得的混合粉末放入容器中，加入混合粉末重量8倍量的水浸泡0.5-1.5h，浸泡后煎煮2-4h，过滤药渣收集滤液；将药渣重复提取2-3次，将每次收集的滤液进行混合得到混合提取液一。
步骤三、将附子饮片和熟地黄饮片分别于清水中浸泡1-3小时以保证药材完全浸透；这是由于附子和熟地质地坚硬，不易粉碎，若强硬粉碎耗时耗力，因此以饮片的形式进行额外煎煮。且附子有毒，若以粉末煎煮，过滤不完全会有部分药渣残留，易造成中毒；将浸泡后的附子饮片和熟地黄饮片混合后放入容器中，加入混合药材8-10倍量的水继续浸泡60-100min，然后煎煮2-4h，过滤药渣收集滤液；将药渣重复提取2-3次，将每次收集的滤液进行混合得到混合提取液二。
步骤四、将步骤二得到的混合提取液一和步骤三得到的混合提取液二合并，然后将合并药液减压浓缩，使药液浓度为1g/mL，冷却至30℃以下得到浓缩药液。
步骤五、向浓缩药液中依次加入酿酒酵母菌粉（编号：ATCC9763，拉丁文名Saccharomyces cerevisiae）、地衣芽孢杆菌菌粉(原菌粉，平台编号：bio-67660，拉丁文名Bacillus licheniformis)、枯草芽孢杆菌菌粉(发酵粉，平台编号：bio-67659，拉丁文名Bacillus subtilis)和粪肠球菌菌粉（平台编号：bio-53252，拉丁文名Enterococcus faecalis），四种菌粉的添加量均为浓缩药液的1%，并搅拌0.5-1h进行混合，混合均匀后倒入无菌容器内，密封。
步骤六、将密封的容器置于28℃条件下，发酵60h即可得到本发明中药复方发酵口服液。
实施例2：本实施例提供一种防治非洲猪瘟的中药复合物发酵口服液，该口服液包括以下重量的中药：附子饮片480g，黄芪420g，大黄160g，熟地黄饮片150g，当归310g，党参100g，黄连150g，升麻60g，甘草120g，柴胡50g。
制备工艺：
步骤一、按重量份比分别称取将黄芪、大黄、当归、党参、黄连、升麻、甘草、柴胡分别碎断至1.5-3mm，混合均匀得到混合粉末。
步骤二、将步骤一制得的混合粉末放入容器中，加入混合粉末重量10倍量的水浸泡0.5-1.5h，浸泡后煎煮2-4h，过滤药渣收集滤液；将药渣重复提取2-3次，将每次收集的滤液进行混合得到混合提取液一。
步骤三、将附子饮片和熟地黄饮片分别于清水中浸泡1-3小时；将浸泡后的附子饮片和熟地黄饮片混合后放入容器中，加入混合药材8-10倍量的水继续浸泡60-100min，然后煎煮2-4h，过滤药渣收集滤液；将药渣重复提取2-3次，将每次收集的滤液进行混合得到混合提取液二。
步骤四、将步骤二得到的混合提取液一和步骤三得到的混合提取液二合并，然后将合并药液减压浓缩，使药液浓度为0.8g/mL，冷却至30℃以下得到浓缩药液。
步骤五、向浓缩药液中依次加入酿酒酵母菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉和粪肠球菌菌粉，四种菌粉的添加量均为浓缩药液的0.8%，并搅拌0.5-1h进行混合，混合均匀后倒入无菌容器内，密封。
步骤六、将密封的容器置于32℃条件下，发酵48h即可得到本发明中药复方发酵口服液。
实施例3：本实施例提供一种防治非洲猪瘟的中药复合物发酵口服液，该口服液包括以下重量的中药：附子饮片480g，黄芪420g，大黄160g，熟地黄饮片150g，当归310g，党参100g，黄连150g，升麻60g，甘草120g，柴胡50g。
制备工艺：
步骤一、按重量份比分别称取将黄芪、大黄、当归、党参、黄连、升麻、甘草、柴胡分别碎断至1.5-3mm，混合均匀得到混合粉末。
步骤二、将步骤一制得的混合粉末放入容器中，加入混合粉末重量10倍量的水浸泡0.5-1.5h，浸泡后煎煮2-4h，过滤药渣收集滤液；将药渣重复提取2-3次，将每次收集的滤液进行混合得到混合提取液一。
步骤三、将附子饮片和熟地黄饮片分别于清水中浸泡1-3小时；将浸泡后的附子饮片、熟地黄饮片混合后放入容器中，加入混合药材8-10倍量的水继续浸泡60-100min，然后煎煮2-4h，过滤药渣收集滤液；将药渣重复提取2-3次，将每次收集的滤液进行混合得到混合提取液二。
步骤四、将步骤二得到的混合提取液一和步骤三得到的混合提取液二合并，然后将合并药液减压浓缩，使药液浓度为1.5g/mL，冷却至30℃以下得到浓缩药液。
步骤五、向浓缩药液中依次加入酿酒酵母菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉和粪肠球菌菌粉，四种菌粉的添加量均为浓缩药液的1.4%，并搅拌0.5-1h进行混合，混合均匀后倒入无菌容器内，密封。
步骤六、将密封的容器置于25℃条件下，发酵72h即可得到本发明中药复方发酵口服液。
疗效验证
为验证本发明的中药复方发酵口服液的治疗效果，将本发明的中药复方发酵口服液随机试用于250头病猪，所述病猪来源于河南某养殖场，均出现高热、呼吸困难、咳嗽、流鼻液和眼分泌物、皮肤发绀、精神沉郁、厌食、母猪出现流产等症状，经过抗生素药物治疗后无好转，于第7天开始出现死亡，死猪经过剖检确诊为感染非洲猪瘟。
将病猪随机分为9组，给药组每组30头，空白对照组10头。其中给药组中前三组为按照本发明工艺制备所得的口服液，区别在于中药材的比例不同，但最终浓度不变；第四组为按照本发明工艺制备但不加菌体（即不经发酵）所得的口服液；第五-八组为按照本发明工艺制备所得的口服液，区别在于每组分别只加四种菌体的一种菌体；剩下的10头为第九组空白对照组，不给药，但正常饲养。用药方法为：猪灌胃给药，5ml/次，一日2次，连续给药3天，跟踪观察疗效，治疗效果及情况详见表1，统计结果见表2。
由表1和表2结果可知，按照本发明配方制备的口服液不论中药材比例如何，均有较好疗效；按照本发明工艺制备但不加菌体（即不经发酵）所得的口服液也有一定效果，但是发酵型口服液治疗效果明显优于非发酵型口服液；添加四种菌粉的发酵型口服液效果明显优于只添加一种菌体的口服液和效果明显优于不经发酵得到的口服液，但是略弱于四种菌体联合发酵。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不限制本发明，凡在本发明的精神和原则范围内所做的任何修改、等同替换和改进，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液，其特征在于：包括以下重量份比的中药：附子48-70份，黄芪18-42份，大黄16-34份，熟地黄15-30份，当归14-31份，党参10-30份，黄连6-15份，升麻6-13份，甘草4-12份，柴胡5-15份。
2.根据权利要求1所述的一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液，其特征在于：包括以下重量份比的中药：附子60份，黄芪30份，大黄30份，熟地黄20份，当归20份，党参20份，黄连12份，升麻10份，甘草10份，柴胡10份。
3.根据权利要求1或2所述的一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液，其特征在于：所述附子为附子饮片，所述熟地黄为熟地黄饮片。
4.一种如权利要求1-3所述的防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液的制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、按重量份比分别称取附子、黄芪、大黄、熟地黄、当归、党参、黄连、升麻、甘草和柴胡；将黄芪、大黄、当归、党参、黄连、升麻、甘草、柴胡分别碎断至1.5-3mm，混合均匀得到混合粉末；
步骤二、将步骤一制得的混合粉末放入容器中，加入混合粉末重量8-10倍量的水浸泡0.5-1.5h，浸泡后煎煮2-4h，过滤药渣收集滤液；将药渣重复提取2-3次，将每次收集的滤液进行混合得到混合提取液一；
步骤三、将附子和熟地黄分别于清水中浸泡1-3小时；将浸泡后的附子和熟地黄混合后放入容器中，加入混合药材8-10倍量的水继续浸泡60-100min，然后煎煮2-4h，过滤药渣收集滤液；将药渣重复提取2-3次，将每次收集的滤液进行混合得到混合提取液二；
步骤四、将步骤二得到的混合提取液一和步骤三得到的混合提取液二合并，然后将合并药液减压浓缩使药液浓度为0.8-1.5g/mL，冷却至30℃以下得到浓缩药液；
步骤五、向浓缩药液中依次加入酿酒酵母菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉和粪肠球菌菌粉，并搅拌0.5-1h进行混合，混合均匀后倒入无菌容器内，密封；
步骤六、将密封的容器置于25-32℃条件下，发酵48~72h即可得到本发明中药复方发酵口服液。
5.根据权利要求4所述的一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液的制备工艺，其特征在于：所述酿酒酵母菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉和粪肠球菌菌粉的添加量均为浓缩药液的0.8%-1.4%。
6.根据权利要求4所述的一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液的制备工艺，其特征在于：步骤四中按照药液与原药材重量比1:1的比例进行减压浓缩，使药液浓度为1g/mL。
7.根据权利要求5所述的一种防治非洲猪瘟的中药复方发酵口服液的制备工艺，其特征在于：所述酿酒酵母菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉和粪肠球菌菌粉的添加量均为浓缩药液的1%。
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