CN103694218A - 嘧啶化合物、pi3k抑制剂、包含pi3k抑制剂的药物组合物及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种嘧啶化合物，其结构如通式（Ⅰ）所示：
Description
技术领域
本发明涉及嘧啶化合物、PI3K抑制剂、包含PI3K抑制剂的药物组合物及应用。
背景技术
恶性肿瘤是严重威胁人类生命健康的一类疾病，其发病率和死亡率呈逐年上升的趋势，人类因癌症引起的死亡率仅次于心脑血管疾病位列第二位。目前，临床上肿瘤的治疗用药分为传统细胞毒类药物和新型分子靶向药物。前者由于主要作用于DNA、RNA和微管蛋白等与细胞生死攸关的共有组分，非特异性地阻断细胞分裂从而引起细胞死亡，在杀死肿瘤细胞的同时，也破坏了人体正常细胞，致使其选择性低、毒性大；而后者则通常具有相对明确的靶点，主要作用于在正常细胞和肿瘤细胞中差别巨大的调控细胞生长、增殖的关键分子及其信号转导通路，可以抑制肿瘤细胞生长而减少对正常细胞的作用，从而增加了对肿瘤的选择性、降低了对正常组织的毒性，极大地提高了治疗水平。
各制药公司对靶向抗肿瘤药物的研制加速，再加上市场对这一类别的抗肿瘤药物需求强劲，分子靶向药物已经成为全球抗肿瘤药物市场上增长最快的部分。磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）是许多生命活动中关键的信号分子。PI3K介导的信号通路（PI3K/Akt/m-TOR）控制着众多在肿瘤发生发展中至关重要的细胞生物学过程，包括细胞增殖、凋亡、转录、翻译、代谢、血管生成以及细胞周期的调控等。在人肿瘤细胞中，该信号通路与其它信号通路相比，发生基因改变如基因突变、基因扩增、基因重排的机率更高，从而与肿瘤的发生发展、转移及耐药性密切相关。因此，PI3K抑制剂在抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和逆转肿瘤细胞耐药性等方面具有独特的优势，可以单独用药或与其它靶向药物联合用药。以PI3K信号通路中关键分子为靶点的抗肿瘤药物研究成为肿瘤靶向治疗的热点之一。
PI3Ks是一类胞内具有丝氨酸/苏氨酸（Ser/Thr）激酶的活性的磷脂酰肌醇激酶，可以磷酸化磷脂酰肌醇（PtdIns）、磷脂酰肌醇-4-磷酸（PtdIns4P）、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PtdIns（4,5）P2）的3位羟基。根据其结构特征和作用底物特异性，PI3Ks家族可以分为四类：I型、II型、III型和IV型。到目前为止，研究最多的是I型PI3K，根据催化亚基的不同分为：PI3Kα，PI3Kβ，PI3Kγ和PI3Kδ四个亚型（Nat. Rev. Drug Discov. 2009, 8, 627-644）。I型PI3K的四种亚型虽然在结构组成上具有较高的同源性，其生理功能具有一定的重叠，但由于其活性口袋外周结构的不同，导致他们在功能及癌症的发生发展中起着不同的作用。
目前已有近20个化合物进入临床试验阶段，其中有十几个化合物处于II期临床阶段，有4个化合物进入了III期临床试验。进入III期临床试验的化合物分别为Novartis公司开发的具有结构式1的Buparlisib（NVP-BKM120）、Onconova Therapeutics 公司开发的具有结构式2的Rigosertib（ON-01910）、ICOS公司开发的具有结构式3的Idelalisib（CAL-101，GS-1101）以及ASTA Medica 公司开发的具有结构式4的Perifosine（KRX-0401）。上述结构式1-4如下：
然而，至今尚无PI3K抑制剂上市，研发人员还需要研发更多的PI3K抑制剂分子，以便选择有效性和选择性更好的化合物用于癌症的治疗。
发明内容
本发明的目的在于提供嘧啶化合物、PI3K抑制剂、包含PI3K抑制剂的药物组合物及应用。
本发明所采取的技术方案是：
一种嘧啶化合物，其结构如通式（Ⅰ）所示：
其中，X，Y，Z独立地选自N或-CH-；W独立地选自-CH2-、-NH-、O或S；
n = 0或1；
R1，R2独立地选自H、C1-C4烷基、含一个或多个取代基的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、含一个或多个取代基的C1-C4烷氧基、C1-C4烷基酰基、C1-C4烷基磺酰基、C3-C6杂环基、含一个或多个取代基的C3-C6杂环基、C4-C8稠合杂双环基或含一个或多个取代基的C4-C8稠合杂双环基，所述取代基选自氟，氯，溴，碘，羟基，氨基，氰基，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基，羟基C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷氧基，羟基C1-C4烷氧基或C1-C4烷氧基C1-C4烷基。
该嘧啶化合物的结构如通式（Ⅱ）所示：
X选自N或者-CH-；
R2独立地选自H、C1-C4烷基、含一个或多个取代基的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、含一个或多个取代基的C1-C4烷氧基、C1-C4烷基酰基、C1-C4烷基磺酰基、 C3-C6杂环基、含一个或多个取代基的C3-C6杂环基、C4-C8稠合杂双环基或含一个或多个取代基的C4-C8稠合杂双环基，所述取代基选自氟，氯，溴，碘，羟基，氨基，氰基，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基，羟基C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷氧基，羟基C1-C4烷氧基或C1-C4烷氧基C1-C4烷基。
通式（Ⅰ）或通式（Ⅱ）中，R1，R2独立地选自如下结构：
；
；
；
其中，A，B，C，D独立地选自-CH2-，-O-，-S-或-NR8-；R3，R4，R5，R6，R7，R8独立地选自H，卤素，羟基，氨基，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基，羟基C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷氧基，羟基C1-C4烷氧基，C1-C4烷基酰基或C1-C4烷基磺酰基。
通式（Ⅰ）或通式（Ⅱ）中，R1，R2独立地选自如下结构：
通式（Ⅰ）或通式（Ⅱ）中，R1，R2独立地选自如下结构：
所述的嘧啶化合物为(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉嘧啶-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮或(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮。
一种PI3K抑制剂，其是由以下几种物质中的至少一种组成：通式（Ⅰ）所示的嘧啶化合物、该嘧啶化合物的立体异构体、该嘧啶化合物的水合物、该嘧啶化合物的药学上可接受的盐。
一种包含PI3K抑制剂的药物组合物，其是由PI3K抑制剂以及如下所列物质中的至少一种组成：药学上可接受的辅料、辅助剂、载体。
PI3K抑制剂在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗PI3K作用的增殖性疾病的药物中的应用。
所述的PI3K抑制剂或包含PI3K抑制剂的药物组合物在体外抑制癌症细胞生长中的应用。
本发明的有益效果是：本发明所提供的PI3K抑制剂、包含其的药物组合物能够用于抑制PI3激酶，以及PI3激酶作用的增殖性疾病，能够为PI3激酶作用的增殖性疾病的治疗提供有效性和选择性更好的抑制剂。
具体实施方式
一种嘧啶化合物，其结构如通式（Ⅰ）所示：
其中，X，Y，Z独立地选自N或-CH-；W独立地选自-CH2-、-NH-、O或S；
n = 0或1；
R1，R2独立地选自H、C1-C4烷基、含一个或多个取代基的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、含一个或多个取代基的C1-C4烷氧基、C1-C4烷基酰基、C1-C4烷基磺酰基、C3-C6杂环基、含一个或多个取代基的C3-C6杂环基、C4-C8稠合杂双环基或含一个或多个取代基的C4-C8稠合杂双环基，所述取代基选自氟，氯，溴，碘，羟基，氨基，氰基，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基，羟基C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷氧基，羟基C1-C4烷氧基或C1-C4烷氧基C1-C4烷基。
进一步优选的，该嘧啶化合物的结构如通式（Ⅱ）所示：
X选自N或者-CH-；
R2独立地选自H、C1-C4烷基、含一个或多个取代基的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、含一个或多个取代基的C1-C4烷氧基、C1-C4烷基酰基、C1-C4烷基磺酰基、 C3-C6杂环基、含一个或多个取代基的C3-C6杂环基、C4-C8稠合杂双环基或含一个或多个取代基的C4-C8稠合杂双环基，所述取代基选自氟，氯，溴，碘，羟基，氨基，氰基，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基，羟基C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷氧基，羟基C1-C4烷氧基或C1-C4烷氧基C1-C4烷基。
通式（Ⅰ）或通式（Ⅱ）中，R1，R2独立地选自如下结构：
其中，A，B，C，D独立地选自-CH2-，-O-，-S-或-NR8-；R3，R4，R5，R6，R7，R8独立地选自H，卤素，羟基，氨基，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基，羟基C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷氧基，羟基C1-C4烷氧基，C1-C4烷基酰基或C1-C4烷基磺酰基。
进一步优选的，通式（Ⅰ）或通式（Ⅱ）中，R1，R2独立地选自如下结构：
再进一步优选的，通式（Ⅰ）或通式（Ⅱ）中，R1，R2独立地选自如下结构：
再进一步优选的，所述的嘧啶化合物为(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉嘧啶-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮或 (4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮。
一种PI3K抑制剂，其是由以下几种物质中的至少一种组成：通式（Ⅰ）所示的嘧啶化合物、该嘧啶化合物的立体异构体、该嘧啶化合物的水合物、该嘧啶化合物的药学上可接受的盐。
优选的，一种PI3K抑制剂，其是由以下几种物质中的至少一种组成：嘧啶化合物：(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉嘧啶-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮、该嘧啶化合物的立体异构体、该嘧啶化合物的水合物、该嘧啶化合物的药学上可接受的盐。
优选的，一种PI3K抑制剂，其是由以下几种物质中的至少一种组成：嘧啶化合物：(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮、该嘧啶化合物的立体异构体、该嘧啶化合物的水合物、该嘧啶化合物的药学上可接受的盐。
一种包含PI3K抑制剂的药物组合物，其是由PI3K抑制剂以及如下所列物质中的至少一种组成：药学上可接受的辅料、辅助剂、载体。
PI3K抑制剂在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗PI3K作用的增殖性疾病的药物中的应用。
PI3K抑制剂或包含PI3K抑制剂的药物组合物在体外抑制癌症细胞生长中的应用。
本发明所提供的PI3K抑制剂能够用于抑制PI3激酶，以及PI3激酶作用的增殖性疾病，能够为PI3激酶作用的增殖性疾病的治疗提供有效性和选择性更好的抑制剂。
本发明的PI3K抑制剂可以包括嘧啶化合物药学上可接受的盐。药学上可接受的盐是指把母体化合物中的碱性基团转换成盐的形式。药学上可接受的盐包括，但不仅限于，碱性基团例如胺（氨）基的无机或有机酸盐类。本发明药学上可接受的盐可以由母体化合物合成，即母体化合物中的碱性基团与1-4当量的酸在一个溶剂系统中反应。合适的盐列举在Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 和Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977)中。
本发明中化合物碱性基团可与酸成盐，这些酸成盐的例子包括：与无机酸，尤其氢卤酸（如氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸）、硝酸、硫酸、磷酸、碳酸等形成的盐；低级烷基磺酸，如甲磺酸，三氟甲磺酸形成的盐；与芳基磺酸，如苯磺酸或对甲苯磺酸形成的盐；与有机酸，如乙酸、富马酸、酒石酸、草酸、柠檬酸、马来酸、苹果酸或琥珀酸形成的盐；与氨基酸，如天冬氨酸或谷氨酸形成的盐。
本发明的化合物和药学上可接受的盐还包括溶剂化物或水合物的形式。一般来说，溶剂化物或水合物的形式与非溶剂化的或非水合的形式等同，并涵盖在本发明的范围内。本发明中的某些化合物有可能存在多晶体或无定形的形式。总的来说，所有的物理形式具有同等的用途，并且涵盖在本发明的范围内。
另外，除非其它方面表明，本发明所描述的本发明的PI3K抑制剂中嘧啶化合物的结构式包括所有的同分异构形式（如对映异构，非对映异构，和几何异构（或构象异构））：例如含有不对称中心的R、S构型，双键的（Z）、（E）异构体，和（Z）、（E）的构象异构体。因此，本发明的化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体，非对映异构体，或几何异构体（或构象异构体）的混合物都属于本发明的范围。
除非其它方面表明，本发明PI3K抑制剂中嘧啶化合物的所有互变异构形式都包含在本发明的范围之内。另外，除非其它方面表明，本发明所描述的化合物的结构式包括一个或多个不同的原子的富集同位素。
下面将详细描述本发明的示例性实施方案。然而，这些实施方案仅为说明目的，并不旨在限制本发明的范围。
如本文所使用的，如果为提供具体的限定，本发明的术语具有下述含义。
术语“烷基”为包括1-20个碳原子饱和直链或支链的单价烃基，其中烷基可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。其中一些实施例是，烷基基团含有1-10个碳原子，另外一些实施例是，烷基基团含有1-8个碳原子，另外一些实施例是，烷基基团含有1-6个碳原子，另外一些实施例是，烷基基团含有1-4个碳原子。烷基基团更进一步的实例包括，但并不限于，甲基（Me，-CH3），乙基（Et，-CH2CH3），正丙基（n-Pr，-CH2CH2CH3），异丙基（i-Pr，-CH(CH3)2），正丁基（n-Bu，-CH2CH2CH2CH3），异丁基（i-Bu，-CH2CH(CH3)2），仲丁基（s-Bu，-CH(CH3)CH2CH3），叔丁基（t-Bu，-C(CH3)3）等等。术语“烷基”和其前缀“烷”在此处使用，都包含直链和支链的饱和碳链。
术语“烷氧基”涉及到烷基的部分与前述“烷基”的定义相同，其是通过氧原子连接到“烷基”主要的碳链上形成的。
术语“卤代烷基”或“卤代烷氧基”是表示“烷基”或“烷氧基”可以被一个或多个相同或不同卤素原子所取代的情况。其中烷基和烷氧基基团具有如本发明前述的含义，这样的实例包括，但并不限于三氟甲基，三氟甲氧基等。
术语“羟基烷基”或“羟基烷氧基” 是表示“烷基”或“烷氧基”可以被一个或多个羟基所取代的情况。其中“烷基”和“烷氧基”基团具有如本发明前述的含义，这样的实例包括，但并不限于羟甲基，1-羟乙基，羟丙基，1,2-二羟基丙基，羟甲氧基，1-羟乙氧基等。
术语“卤素”，“卤原子”或“卤素原子”包括氟，氯，溴，碘。
术语“杂环基”可以是碳基或杂原子基。“杂环基”同样也包括杂环基团与饱和或部分不饱和环或杂环并合所形成的基团。杂环的实例包括，但并不限于，吡咯烷基，四氢呋喃基，二氢呋喃基，四氢噻吩基，四氢吡喃基，二氢吡喃基，四氢噻喃基，哌啶基，噻噁烷基，氮杂环丁基，氧杂环丁基，硫杂环丁基，哌啶基，高哌啶基，环氧丙基，氮杂环庚基，氧杂环庚基，硫杂环庚基，N-吗啉基，2-吗啉基，3-吗啉基，硫代吗啉基，N-哌嗪基，2-哌嗪基，3-哌嗪基，高哌嗪基，4-甲氧基-哌啶-1-基，1,2,3,6-四氢吡啶-1-基，氧氮杂卓基，二氮杂卓基，硫氮杂卓基，吡咯啉-1-基，2-吡咯啉基，3-吡咯啉基，二氢吲哚基，2H-吡喃基，4H-吡喃基，二氧杂环己基，1,3-二氧戊基，吡唑啉基，二噻烷基，二噻茂烷基，二氢噻吩基，吡唑烷基咪唑啉基，咪唑烷基，1,2,3,4-四氢异喹啉基，1,2,6-噻二嗪烷，1,1-二氧-2-基，喹嗪基和N-吡啶基尿素。并且所述杂环基可以是取代或非取代的，其中取代基可以是，但并不限于，氧代(=O)，羟基，氨基，卤素，氰基，杂芳基，烷氧基，烷氨基，烷基，烯基，炔基，杂环基，巯基，硝基，芳氧基，羟基取代的烷氧基，羟基取代的烷基-C(=O)，烷基-C(=O)，羧基烷氧基等。
术语“稠合双环”，“稠环”，“稠合双环基”或“稠环基”表示饱和或不饱和的稠环体系，涉及到非芳香族的双环体系。这样的体系可以包含独立的或共轭的不饱和状态，但其核心结构不包含芳香环或芳杂环（但是芳香族可以作为其上的取代基）。稠合双环中的每一个环或者是碳环或者是杂脂环族，这样的实例包括，但并不限于，2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-茚基，7-氮杂双环[2.2.1]庚烷基，稠合双环[3.3.0]辛烷基，稠合双环[3.1.0]己烷基，1,2,3,4,4a,5,8,8a-八氢萘基，这些都包含在稠合双环的体系之内。并且所述稠合双环基可以是取代或非取代的，其中取代基可以是，但并不限于，卤素，羟基，氨基，氰基，芳基，杂芳基，烷氧基，烷基，烯基，炔基，杂环基，巯基，硝基，芳氧基等。
术语“稠合杂双环基”表示饱和或不饱和的稠环体系，涉及到非芳香族的双环体系。这样的体系可以包含独立的或共轭的不饱和状态，但其核心结构不包含芳香环或芳杂环（但是芳香族可以作为其上的取代基）。且至少一个环体系包含一个或多个杂原子，其中每一个环体系包含3-7元环，即包含1-6个碳原子和选自N，O，P，S的1-3个杂原子，在此S或P任选地被一个或多个氧原子所取代得到像SO，SO2，PO，PO2的基团，这样的实例包括，但并不限于六氢-2H-[1,4]二氧噁[2,3-c]吡咯基等。并且所述稠合杂双环基可以是取代或非取代的，其中取代基可以是，但并不限于，卤素，羟基，氨基，氰基，芳基，杂芳基，烷氧基，烷基，烯基，炔基，杂环基，巯基，硝基，芳氧基等。
本发明所提供的上述PI3K抑制剂中嘧啶化合物可以通过多种方式制备，本领域技术人员在本申请中所提供的结构式的启发下寻找适当的方式进行制备。为了便于理解，在本申请中提供了关于上述通式Ⅱ的制备方法。
一种制备具有通式Ⅱ的嘧啶化合物的方法：以2,4,6-三氯嘧啶（A）为原料，根据嘧啶2与4位反应活性的差异，先与吗啉发生亲核取代反应得到中间体（B），随后在对甲苯磺酸催化下发生取代反应引入R2C(O)PhNH得到中间体（C），最后再与2-氨基-4-三氟甲基吡啶-5-硼酸酯发生Suzuki偶联反应，得到具有结构通式Ⅱ的目标化合物（D）。也可以从2,4,6-三氯-1,3,5-三氮嗪出发，得到X=N的具有结构通式Ⅱ的目标化合物（D）
上述方法的反应式如下：
在上述制备步骤中式A至式D中取代基R2的定义与由通式Ⅰ和Ⅱ中取代基R2相同。
同时，在本发明的一种实施方式中还提供了一种药物组合物，这种药物组合物包含至少一种药学上可接受的辅料、辅助剂或载体；以及有效治疗剂量的至少一种上述PI3K抑制剂。
术语“治疗有效量”指的是在给予需要这样的治疗的哺乳动物时，足以有效治疗的通式化合物的量。治疗有效量将依赖于所用的治疗药剂的特定活性、患者的年龄、生理状况、其它疾病状态的存在和营养状况而变化。此外，患者可能正接受的其它药物治疗将影响要给予的治疗药剂的治疗有效量的确定。
术语“治疗”意味着对于哺乳动物体内疾病的任何治疗，包括：(i) 防止疾病，即造成疾病的临床症状不发展；(ii) 抑制疾病，即，阻止临床症状的发展；和/或(iii) 减轻疾病，即，造成临床症状的消退。
术语“药学上可接受的辅料、辅助剂或载体”包括任何和全部的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌药剂、等渗和吸收延迟剂等。这样的介质和药剂用于药学活性物质在本领域是众所周知的。除非任何常规介质或药剂与活性成分不相容，其在治疗组合物中的应用是可预期的。补充的活性成分也可以并入组合物中。
该组合物优选被配制成单位剂型。术语“单位剂型”指的是适于用作给予人类受试者和其他哺乳动物的单一剂量的物理离散单位，每一单位含有计算出用以产生所需要的治疗有效的活性物质的预定的量以及相关的合适的药用赋形剂（如片剂、胶囊、安瓿）。PI3K抑制剂中嘧啶化合物在广泛的剂量范围内是有效的并且通常给予有效药物量。优选地，对于口服给药，每个剂量单位包含10 mg至2 g的PI3K抑制剂中嘧啶化合物，更优选为10至700 mg，而对于肠胃外给药，优选为10至700 mg的PI3K抑制剂中嘧啶化合物，更优选约50至200 mg。然而，应当明了，实际给予的PI3K抑制剂中嘧啶化合物的量将由医师根据有关的情况来确定，包括要治疗的病症，选择的给药途径，给予的实际化合物以及其相对活性，各个患者的年龄、体重、以及反应，患者症状的严重性等。
为了制备固体组合物如片剂，将主要的活性组分与药物赋形剂（或载体）进行混合以形成固体预配制组合物，其包含本发明的化合物的均匀混合物。当称这些预配制组合物为均匀的时候，它是指活性组分被均匀分散在整个组合物中，以致组合物可以容易地被细分成相同有效的单位剂型如片剂、丸剂以及胶囊剂。
本发明的片剂或丸剂可以被涂布或用其它方式被复合以提供一种具有延长作用优点的剂型，或保护片剂或丸剂免受胃中酸性条件的作用。例如，片剂或丸剂可以包括内剂量和外剂量成分，后者具有在前者之上的外皮的形式。可以用肠溶层来分隔两种成分，其中肠溶层用来阻止在胃中的崩解以及允许内成分完整进入十二指肠或被延迟释放。各种材料可以用于这样的肠溶层或涂层，上述材料包括许多高分子酸以及高分子酸与这样的材料如虫胶、十六烷醇、以及醋酸纤维素的混合物。
用于吸入法或吹入法的组合物包括在药学上可接受的含水溶剂或有机溶剂、或其混合物中的溶液和悬浮液，以及散剂。液体或固体组合物可以包含如上文所述的适宜的药用赋形剂。优选地，通过口服或鼻呼吸途径给予这些组合物以获得局部或全身效应。可以通过使用惰性气体来雾化在优选的药学可接受的溶剂中的组合物。可以直接从雾化装置吸入雾化溶液，或雾化装置可以连接于面罩帐状物、或间歇正压呼吸机。可以由以适当方式递送剂型的装置，优选口服或鼻途径，给予溶液、混悬剂、或散剂组合物。
在另一个方面，本发明还提供了一种上述P13K抑制剂PI3K抑制剂在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗PI3K作用的增殖性疾病的药物中的应用。其中PI3激酶作用的增殖性疾病为癌症。这种癌症包括实体癌症和血液性癌症的形式。优选地，该PI3激酶作用的增殖性疾病为结直肠癌，胃癌，乳腺癌，肺癌，肝癌，前列腺癌，胰腺癌，甲状腺癌，膀胱癌，肾癌，脑瘤，颈癌，CNS的癌症，恶性胶质瘤，或骨髓增生病，以及白血病和淋巴癌。
在另一个方面，本发明还提供了一种上述P13K抑制剂或上述药物组合物体外抑制癌症细胞生长的应用。
下面将实施例为对本发明做进一步的描述，然而，这些实施例不应作为对本发明的范围的限制。
下面所描述的实施例中除非其他方面表明所有的温度定为摄氏度。试剂购买于商品供应商如Alfa Aesar Chemical Company，百灵威科技有限公司，阿拉丁试剂有限公司，北京偶合科技有限公司等，使用时都没有经过进一步纯化，除非其他方面表明。一般的试剂从汕头西陇化工厂，广州化学试剂厂，天津致远化学试剂有限公司和青岛海洋化工厂等购买得到。
下面所描述的实施例中色谱柱使用硅胶柱，硅胶（200-300目）购于青岛海洋化工厂。核磁共振光谱以CDC13或DMSO-d 6 为溶剂（以ppm为单位），用TMS（0 ppm）或氯仿（7.26 ppm）作为参照标准。当出现多重峰的时候，将使用下面的缩写：s（singlet，单峰），d（doublet，双峰），t（triplet，三重峰），m（multiplet，多重峰），br（broadened，宽峰），dd（doublet of doublets，四重峰），dt（doublet of triplets，双三重峰）。偶合常数，用赫兹（Hz）表示。
下面所描述的实施例中低分辨率质谱（MS）数据通过配备G1311B四元泵和G1316B TCC（柱温保持在30 oC）的Agilent 6120 系列LC-MS的光谱仪来测定的，G1329B自动采样器和G1315C DAD检测器应用于分析，ESI源应用于LC-MS光谱仪。
下面所描述的实施例中注射体积是通过样品浓度来确定；流速为0.5 mL/min；HPLC的峰值是通过在210 nm 和254 nm处的UV-Vis波长来记录读取的。流动相为异丙醇/正己烷 （40：60）。
下面描述的实施例便于表述，部分原料会以其简称进行描述，这些简称与其全称对照说明如下：DCM为CH2Cl2，即二氯甲烷；CHCl3为氯仿，即三氯甲烷；CDC13为氘代氯仿；PE为石油醚；EtOAc与EA均为乙酸乙酯；MeOH与CH3OH均为甲醇；EtOH与CH3CH2OH均为乙醇；HCl为盐酸；AcOH与醋酸均为乙酸；NH4OH与NH3 ·H2O均为氨水；Et3N与TEA均为三乙胺；K2CO3为碳酸钾；KI为碘化钾；NBS为溴代琥珀酰亚胺；NaHSO3为亚硫酸氢钠；DIPEA为N,N-二异丙基乙胺；THF为四氢呋喃；Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2为[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物；DMF为N,N-二甲基甲酰胺；SOCl2为二氯亚砜；POCl3为三氯氧磷；DMSO为二甲亚砜；DMSO-d 6 为六氘代二甲亚砜；H2O为水；mL为毫升；Rt为保留时间。
实施例1：(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉嘧啶-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮（ZJQ-33）的合成
步骤1：5-溴-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺的合成
5-溴-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺的结构式：
合成方法：将4-三氟甲基-2-氨基吡啶（10 g，61.69 mmol）溶于CH2Cl2（100 mL）中，室温下分批加入溴代琥珀酰亚胺（NBS，12.08 g，67.86 mmol），避光室温反应过夜。反应体系用CH2Cl2（100 mL）稀释，用饱和NaHSO3洗两次，饱和NaCl水溶液洗一次，无水硫酸钠干燥。减压蒸去溶剂，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯 = 4/1，得到目标产物13.08 g，棕色固体，收率：87.96%。
产物的核磁数据为1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ：8.28 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 4.82 (s, 2H)。与ACS Med. Chem. Lett. 2011, 2, 774–779文中相同。由上述数据可知，经上述方法所制备的产物为目标产物5-溴-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺。
步骤2：5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺的合成
5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺的结构式：
合成方法：将步骤1中合成的5-溴-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺（6.54 g，27.26 mmol）溶于二氧六环（100 mL）中，然后依次加入醋酸钾（8.03 g, 81.77 mmol），频哪醇硼酸酯（7.62 g，29.98 mmol），氮气置换，并于室温搅拌10 min，加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（1.12 g，1.37 mmol），然后升温到115 ℃反应24 h。减压蒸去溶剂，残留物溶于乙酸乙酯（200 mL）中，水洗两次，饱和NaCl水溶液洗一次，无水硫酸钠干燥。浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，得到棕色固体，将固体重新悬浮于正己烷中，过滤，得到目标产物6.60 g，白色固体，收率：84.04%。
产物的质谱数据为LC-MS：289 (M+H)。与ACS Med. Chem. Lett. 2011, 2, 774–779文中相同。由上述数据可知，经上述方法所制备的产物为目标产物5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺。
步骤3：(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)(4-硝基苯基)甲酮的合成
(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)(4-硝基苯基)甲酮的结构式：
合成方法：将4-硝基苯甲酸（0.43 g，2.56 mmol）溶于DMF（10 mL）中，加入甲磺酰基哌嗪（0.42 g，2.56 mmol），然后再加入HATU（0.97 g，2.56 mmol），室温搅拌反应48 h。加入乙酸乙酯（50 mL）稀释，加入水（50 mL），分出有机层，水层用乙酸乙酯萃取（30 mL×2），合并有机层，水洗（30 mL×3），然后用饱和NaCl（50 mL）洗一次，无水Na2SO4干燥。减压蒸去溶剂，残留物直接柱层析分离，洗脱剂：EA/PE = 1/1-3/1得到目标产物0.40 g，收率：50.20%。
产物的质谱数据为LC-MS：314.1 (M+H)。产物的核磁数据为1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ：8.31 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.62-7.56 (m, 2H), 3.91 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.28 (d, J = 33.9 Hz, 4H), 2.83 (s, 3H). 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ：167.22, 147.89, 141.76, 128.31, 123.77, 46.41, 45.19, 34.25。由上述数据可知，经上述方法所制备的产物为目标产物(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)(4-硝基苯基)甲酮。
步骤4：(4-氨基苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮的合成
(4-氨基苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮的结构式：
合成方法：将步骤3合成的(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)(4-硝基苯基)甲酮（0.4 g，1.28 mmol）溶于MeOH/EA（80 mL，1/3，V/V）混合溶剂中，加入10% Pd/C（0.20 g），氢气置换三次，氢解反应12 h。过滤，少量甲醇淋洗，减压蒸去溶剂得到灰色固体产物0.32 g，收率：88.40%。
产物的质谱数据为LC-MS：284.1 (M+H)。与J. Med. Chem. 2010, 53 4367–4378中报道相同。由上述数据可知，经上述方法所制备的产物为目标产物(4-氨基苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮。
步骤5：4-(2,6-二氯嘧啶-4-基)吗啉的合成
4-(2,6-二氯嘧啶-4-基)吗啉的结构式：
合成方法：将2,4,6-三氯嘧啶（1.0 g，5.45 mmol）溶于干燥的二氯甲烷（10 mL）中，加入DIPEA（0.74 g，0.95 mL），冷却至 -5 ℃，缓慢滴加入吗啉（0.47 g，5.45 mmol）。缓慢升温至室温反应2 h。向体系中加入水，分出有机相，饱和NaCl水溶液洗一次，无水硫酸钠干燥。减压蒸去溶剂，残留物柱层析分离（洗脱剂：EA/PE = 1/4）得到产物1.02 g，收率：65.81%。
产物的核磁数据为1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ：6.39 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 3.88-3.49 (m, 8H)。与WO 2006005918中相同。由上述数据可知，经上述方法所制备的产物为目标产物4-(2,6-二氯嘧啶-4-基)吗啉。
步骤6：(4-(4-氯-6-吗啉嘧啶-2-基氨基)苯基(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮的合成
(4-(4-氯-6-吗啉嘧啶-2-基氨基)苯基(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮的结构式：
合成方法：将步骤5 所合成的4-(2,6-二氯嘧啶-4-基)吗啉（0.58 g，2.47 mmol）溶于n-BuOH（40 mL）中，加入步骤4中所合成的(4-氨基苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮（0.70g，4.47 mmol）及一水合对甲苯磺酸（0.94 g，4.95 mmol），加热至100 ℃避光反应24 h。减压蒸去溶剂，乙酸乙酯（50 mL）溶解残留物，饱和NaHCO3水溶液（50 mL）洗一次，饱和NaCl水溶液（50 mL）洗一次，无水Na2SO4干燥。蒸去溶剂，柱层析分离纯化，洗脱剂：EA/PE = 2/1，得到产物0.18 g，收率：15.30%。
产物的质谱数据为LC-MS：481.2 (M+H)。核磁数据为1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ：9.72 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.41 (s, 1H), 3.73-3.54 (m, 12H), 3.16 (s, 4H), 2.90 (s, 3H)。13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ：169.28, 163.22, 159.25, 158.61, 141.94, 128.12, 127.71, 118.13, 95.53, 65.70, 45.56, 44.58, 42.03, 33.97。由上述数据可知，经上述方法所制备的产物为目标产物(4-(4-氯-6-吗啉嘧啶-2-基氨基)苯基(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮的结构式。
步骤7：嘧啶化合物ZJQ-33的合成
(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉嘧啶-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮，即化合物ZJQ-33的结构式：
合成方法：将步骤6所合成的4(4-(4-氯-6-吗啉嘧啶-2-基氨基)苯基(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮（0.16 g，0.34 mmol）溶于脱氧的二氧六环（3.00 mL）中，依次加入步骤2所合成的5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺（0.19 g，0.67 mmol），2M 碳酸钾水溶液（0.51 mL，1.02 mmol），通入氮气10 min，然后加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（14 mg，0.017 mmol），密封，于150 ℃微波反应1 h。浓缩除去溶剂，残留物溶于乙酸乙酯（50 mL）中，水洗两次，饱和NaCl水溶液洗一次，无水硫酸钠干燥。减压蒸去溶剂，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=3/1-1/2，得到一灰色固体。该固体进行二次柱层析纯化，洗脱剂：二氯甲烷/甲醇 = 50/1，得到目标产物40 mg，白色固体，收率：19.80%，纯度：98.50%。
产物的高分辨质谱数据为HRMS (ESI)：m/z [M+H]+ calcd. for [C26H30F3N8O4S]+: 607.2057, found: 607.2049。核磁数据为1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ：8.28 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.78 (s, 1H), 6.16 (s, 1H), 4.89 (s, 2H), 3.79 (dd, J = 14.2, 9.1 Hz, 8H), 3.65 (d, J = 4.5 Hz, 4H), 3.24 (s, 4H), 2.80 (s, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ：170.76, 163.06, 162.86, 158.95, 150.85, 142.23, 128.46, 127.29, 124.27, 123.28, 121.47, 118.27, 100.12, 104.94, 95.66, 66.51, 45.88, 44.45, 34.80。由上述数据可知，经上述方法所制备的产物为目标产物(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉嘧啶-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮，即化合物ZJQ-33。
实施例2：(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮（ZJQ-34）
步骤1：4-(4,6-二氯-1,3,5-三氮嗪-2-基)吗啉的合成
4-(4,6-二氯-1,3,5-三氮嗪-2-基)吗啉的结构式：
合成方法：将2,4,6-三氯-1,3,5-三氮嗪（5.0 g，27.33 mmol）溶于CH2Cl2（100 mL）中，冷却至 -5 ℃，缓慢滴加入DIPEA（4.10 mL，24.64 mmol）与吗啉（2.15 mL，24.64 mmol）的CH2Cl2（20 mL）混合液，低温反应1 h，升至0 ℃反应过夜。反应体系用CH2Cl2（50 mL）稀释，1M HCl洗两次（50 mL×2），饱和NaCl洗一次，无水硫酸钠干燥。柱层析分离纯化，洗脱剂：PE/EA = 10/1-5/1，得到目标产物4.59 g，白色固体，收率：59.74%。
产物的核磁数据为1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ：3.97-3.80 (m, 4H), 3.80-3.65 (m, 4H)。与WO 2011039735中相同。由上述数据可知，经上述方法所制备的产物为目标产物4-(4,6-二氯-1,3,5-三氮嗪-2-基)吗啉。
步骤2：(4-(4-氯-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮的合成
(4-(4-氯-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮的结构式：
合成方法：将步骤1所合成的4-(4,6-二氯-1,3,5-三氮嗪-2-基)吗啉（0.50 g, 2.14 mmol）溶于n-BuOH（40 mL）中，加入实施例1步骤4中所合成的(4-氨基苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮（0.61 g, 2.14 mmol）及一水合对甲苯磺酸（0.82 g，4.28 mmol），加热至100 ℃避光反应24 h。减压蒸去溶剂，乙酸乙酯（50 mL）溶解残留物，水洗（50 mL×2），饱和NaHCO3水溶液（50 mL）洗一次，饱和NaCl水溶液（50 mL）洗一次，无水硫酸钠干燥。蒸去溶剂，柱层析分离纯化，洗脱剂：EA/PE = 1/1，DCM/MeOH = 10/1，梯度淋洗，得到产物0.45 g，收率：43.69%。
产物的质谱数据为LC-MS：482.2 (M+H)。核磁数据为1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ：9.52 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 3.75-3.56 (m, 12H), 3.23 (s, 4H), 2.88 (s, 3H)。13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ：170.30, 168.91, 165.34, 164.08, 140.63, 130.86, 127.48, 116.50, 65.85, 46.90, 44.26, 42.11, 34.51。由上述数据可知，经上述方法所制备的产物为目标产物(4-(4-氯-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮。
步骤3：嘧啶化合物ZJQ-34的合成
(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮，即化合物ZJQ-34的结构式：
合成方法：将步骤2所合成的(4-(4-氯-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮（0.25 g，0.52 mmol）溶于脱氧的二氧六环（4.00 mL）中，依次加入实施例1步骤2所合成的5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺（0.30 g，1.04 mmol），2M 碳酸钾水溶液（0.78 mL，1.56 mmol），通入氮气10 min，然后加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（22 mg，0.026 mmol），密封，于150 ℃微波反应1 h。浓缩除去溶剂，残留物溶于乙酸乙酯（50 mL）中，水洗（50 mL×2），饱和NaCl水溶液（50 mL）洗一次，无水硫酸钠干燥。减压蒸去溶剂，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=3/1-1/2，得到一灰色固体。该固体进行二次柱层析纯化，洗脱剂：二氯甲烷/甲醇 = 50/1，得到目标产物82 mg，白色固体，收率：25.95%，纯度：98.60%。
产物的高分辨质谱数据为HRMS (ESI)：m/z [M+H]+ calcd. for [C25H29F3N9O4S]+：608.2015, found：608.2008。核磁数据为1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ：8.72 (s, 1H), 7.65 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.78 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 4.90 (s, 2H), 3.73-3.55 (m, 12H), 3.25 (s, 4H), 2.82 (s, 3H)。13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ：170.51, 167.45, 165.90, 165.23, 165.05, 150.30, 140.62, 131.05, 130.50, 128.44, 123.52, 116.20, 115.58, 100.52, 66.10, 46.58, 44.26, 44.10, 40.51。由上述数据可知，经上述方法所制备的产物为目标产物(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮，即化合物ZJQ-34。
体外PI3Kα抑制测试：
本发明化合物抑制PI3Kα活性，由此抑制细胞信号通路的转导，从而影响细胞周期和细胞增殖。该类化合物对PI3Kα的抑制作用通过下述Kinase-Glo Luminescent Kinase Assay方法评价。
检测工具：采用Kinase-Glo Plus Luminescent Kinase Assay（Kinase-Glo Plus 激酶发光检测）试剂盒来测试目标化合物激酶抑制活性。
检测原理：Kinase-Glo Plus Luminescent Kinase Assay是一种均质的非放射性的检测方法，它是通过检测激酶反应后体系中ATP的含量来定量测定纯化激酶的活性。ATP含量的测定是通过由Mg2+、ATP和氧催化萤火虫荧光素（beetle luciferin）发生氧化后产生的光强度来定量的。在反应体系中加入一定量的ATP，激酶反应需要消耗ATP，剩余的ATP可以与Kinase-Glo试剂中的萤火虫荧光素酶发生反应后发光，从而可以定量检测剩余的ATP的量，间接测定反应激酶的活性。
检测方法：将受试化合物用100 %二甲亚砜（DMSO）配制为最高反应抑制浓度的100×浓度，吸取100 μL至96孔板一孔中。然后用100 % DMSO逐孔进行3倍的浓度梯度稀释，配制10个浓度。“完全”和“空白”对照孔用100 μL的100 % DMSO代替。其中，“完全”对照孔为无化合物组，“空白”对照孔为无激酶组。随后，配制含4% DMSO的化合物中间稀释物，配制方法为向检测板的各孔中加入4 μL化合物和96μL 1× 激酶基础缓冲液。将2.5 μL上述化合物中间稀释物加入反应板，然后将2.5 μL 4× 激酶溶液（将激酶加入1× 激酶基础缓冲液（50 mM HEPES、pH 7.5、1 mM EGTA、100 mM NaCl、3 mM MgCl2、2 mM DTT、0.03% CHAPS配制而成）加入至检测板各孔中。室温孵育10 min。将5 μL 2× 的底物溶液（将PIP2 和ATP加入1× 激酶基础缓冲液配制而成）加入检测板各孔中。室温孵育1 h。加入10 μL终止液（Kinase-Glo reagent）终止反应。振荡，离心1 min，低速振荡15 min，然后Flexstation读板进行检测，最后根据RLU值及“完全”和“空白”对照孔的读数计算出化合物各浓度下的抑制率，结合化合物浓度作图计算IC50值。
试验结果：见表1。
表1 目标化合物PI3Kα体外抑制活性
体外PI3激酶亚型抑制活性测试：
目标化合物对PI3Kα和PI3Kδ的抑制作用通过Kinase-Glo Luminescent Kinase Assay方法评价，对PI3Kβ及PI3Kγ的抑制作用通过ADP-Glo Luminescent Kinase Assay方法来评价。
Kinase-Glo Plus Luminescent Kinase Assay方法的检测原理如上所述。
ADP-Glo Luminescent Kinase Assay方法的检测原理：
ADP-Glo Luminescent Kinase Assay是一个发光法的激酶检测试剂盒，它检测激酶反应中所形成的ADP，ADP 被转化成ATP，再进一步被Ultra-Glo萤光素酶转化发光。发光信号与激酶活性正相关。
检测方法：将受试化合物用100 %二甲亚砜（DMSO）配制为最高反应抑制浓度的100×浓度，吸取100 μL至96孔板一孔中。然后用100 % DMSO逐孔进行3倍的浓度梯度稀释，配制10个浓度。“阴性”和“阳性”对照孔用100 μL的100 % DMSO代替。其中，“阴性”对照孔为DMSO有酶组，“阳性”对照孔为无激酶组。随后，配制含4% DMSO的化合物中间稀释物，配制方法为向检测板的各孔中加入4 μL化合物和96μL 1× 激酶基础缓冲液。将2.5 μL上述化合物中间稀释物加入反应板，然后将2.5 μL 4× 激酶溶液（将激酶加入1× 激酶基础缓冲液（50 mM HEPES、pH 7.5、1 mM EGTA、100 mM NaCl、3 mM MgCl2、2 mM DTT、0.03% CHAPS配制而成）加入至检测板各孔中。室温孵育10 min。将5 μL 2× 的底物溶液（将PIP2 和ATP加入1× 激酶基础缓冲液配制而成）加入检测板各孔中。室温孵育1 h。加入5 μL终止液（ADP-Glo reagent）终止反应，室温下孵育1小时。加入10μL激酶检测液（kinase detection reagent）振荡，离心1 min，低速振荡1 h，然后SnygerMax读板进行检测，最后根据RLU值及“ 阳性”和“ 阴性”对照孔的读数计算出化合物各浓度下的抑制率，结合化合物浓度作图计算IC50值。
表2 目标化合物PI3激酶亚型体外抑制活性（IC50, nM）
由表1中数据可以看出专利所保护的化合物均对PI3Kα具有抑制活性。与目前背景技术中指出的已经进入III期临床试验的化合物Novartis公司开发的具有结构式1的Buparlisib（NVP-BKM120）相比，本发明所提供的化合物具有更好的抑制活性。由表2中数据可以看出化合物ZJQ-33和ZJQ-34对四种亚型都有一定的抑制作用，其中对PI3Kδ的抑制作用优于PI3Kα，同时对PI3Kβ的选择性优于阳性化合物Buparlisib（ACS Med. Chem. Lett. 2011, 2, 774–779文中，Buparlisib对PI3Kα、β、γ、δ的IC50值分别为52 nM, 166 nM, 166 nM和262 nM），可以进一步开发成PI3激酶亚型高选择性抑制剂。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种嘧啶化合物，其特征在于：其结构如通式（Ⅰ）所示：
其中，X，Y，Z独立地选自N或-CH-；W独立地选自-CH2-、-NH-、O或S；
n = 0或1；
R1，R2独立地选自H、C1-C4烷基、含一个或多个取代基的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、含一个或多个取代基的C1-C4烷氧基、C1-C4烷基酰基、C1-C4烷基磺酰基、C3-C6杂环基、含一个或多个取代基的C3-C6杂环基、C4-C8稠合杂双环基或含一个或多个取代基的C4-C8稠合杂双环基，所述取代基选自氟，氯，溴，碘，羟基，氨基，氰基，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基，羟基C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷氧基，羟基C1-C4烷氧基或C1-C4烷氧基C1-C4烷基。
2.根据权利要求1所述的一种嘧啶化合物，其特征在于：该嘧啶化合物的结构如通式（Ⅱ）所示：
X选自N或者-CH-；
R2独立地选自H、C1-C4烷基、含一个或多个取代基的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、含一个或多个取代基的C1-C4烷氧基、C1-C4烷基酰基、C1-C4烷基磺酰基、 C3-C6杂环基、含一个或多个取代基的C3-C6杂环基、C4-C8稠合杂双环基或含一个或多个取代基的C4-C8稠合杂双环基，所述取代基选自氟，氯，溴，碘，羟基，氨基，氰基，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基，羟基C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷氧基，羟基C1-C4烷氧基或C1-C4烷氧基C1-C4烷基。
3.根据权利要求1或2所述的一种嘧啶化合物，其特征在于：通式（Ⅰ）或通式（Ⅱ）中，R1，R2独立地选自如下结构：
；
；
；
其中，A，B，C，D独立地选自-CH2-，-O-，-S-或-NR8-；R3，R4，R5，R6，R7，R8独立地选自H，卤素，羟基，氨基，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基，羟基C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷氧基，羟基C1-C4烷氧基，C1-C4烷基酰基或C1-C4烷基磺酰基。
4.根据权利要求1或2所述的一种嘧啶化合物，其特征在于：通式（Ⅰ）或通式（Ⅱ）中，R1，R2独立地选自如下结构：
5.根据权利要求1或2所述的一种嘧啶化合物，其特征在于：通式（Ⅰ）或通式（Ⅱ）中，R1，R2独立地选自如下结构：
6.根据权利要求1或2所述的一种嘧啶化合物，其特征在于：所述的嘧啶化合物为(4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉嘧啶-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮或 (4-(4-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-6-吗啉-1,3,5-三嗪-2-基氨基)苯基)(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮。
7.一种PI3K抑制剂，其特征在于：其是由以下几种物质中的至少一种组成：权利要求1中通式（Ⅰ）所示的嘧啶化合物、该嘧啶化合物的立体异构体、该嘧啶化合物的水合物、该嘧啶化合物的药学上可接受的盐。
8.一种包含PI3K抑制剂的药物组合物，其特征在于：其是由权利要求7所述的PI3K抑制剂以及如下所列物质中的至少一种组成：药学上可接受的辅料、辅助剂、载体。
9.权利要求7所述的PI3K抑制剂在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗PI3K作用的增殖性疾病的药物中的应用。
10.权利要求7所述的PI3K抑制剂或权利要求8所述的包含PI3K抑制剂的药物组合物在体外抑制癌症细胞生长中的应用。
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