CN103665095A - 一种疏水性多肽修饰抗体的合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的是针对水溶性抗体不能在BLM表面自动镶嵌，无法实现BLM表面功能模拟的问题，提供一种疏水性多肽修饰抗体的合成方法，实现疏水性多肽修饰后的抗体在BLM的自动镶嵌。反应采用活性酯法，EDC活化多肽羧基形成酰胺键，NHS取代EDC活化酯而形成NHS活化酯，之后与抗体上的氨基结合，实现疏水性多肽在抗体上的修饰。
Description
技术领域
本发明涉及一种疏水性多肽修饰抗体的合成方法，具体涉及一种采用疏水性多肽RRRRRRRR或AC-FAAAVLAAPIL修饰雌二醇抗体的合成方法。
背景技术
生物膜是生命活动中许多重要反应发生的场所，但由于生物膜的结构、组成和功能的复杂性，利用人工模型选择较为简单的反应进行离体研究，对逐步认识和掌握生物膜功能是必由之径。双层类脂膜(BLM)作为模拟生物膜模型已获得了广泛支持，用电化学的理论、方法和技术进行模拟生物膜功能的研究是认识生命活动最直接和明确的途径，通过膜蛋白在人工脂膜上镶嵌，进行功能模拟，相关的研究是近期生物电化学研究的热点内容之一。
发明内容
本发明的目的是针对水溶性抗体不能在BLM表面自动镶嵌，无法实现BLM表面功能模拟的问题，提供一种疏水性多肽修饰抗体的的合成方法，实现疏水性多肽修饰后的抗体在BLM的自动镶嵌。
本发明的技术方案概述如下：EDC活化多肽羧基形成酰胺键，NHS取代EDC活化酯而形成NHS活化酯，之后与抗体上的氨基结合，实现疏水性多肽在抗体上的修饰。
合成方案包括如下步骤：
(1)配制20-150mg/mL的疏水性多肽溶液，溶剂为10-30％的甲醇。
(2)按照多肽：NHS：EDC摩尔质量为1∶2∶2-5的比例向多肽溶液中依次加入N-羟基丁二酰亚胺(NHS)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)，充分溶解后，800-1000转/分钟避光震荡反应15-30分钟，得到活化后的多肽溶液。
(3)按照活化后的多肽和抗体30-40∶1的摩尔质量比，将活化后的多肽溶液逐滴加于3-6倍体积的抗体磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，4℃避光反应8-12小时。
(4)超滤离心去处未结合的多肽。
(5)将超滤管中剩余液体用适量的PBS重新定容，从超滤管吸出，冰箱4℃保存备用。
如上所述的多肽为RRRRRRRR或AC-FAAAVLAAPIL。
如上所述的抗体为水溶性抗体。
如上所述的磷酸盐缓冲溶液pH6.5-7.5，浓度为0.01mol/L。
如上所述超滤离心使用离心管所用膜：5000-20000MWCO PES。
附图说明
图1为合成路线示意图。
具体实施方式
实施方案1
(1)0.0173g多肽(RRRRRRRR，分子量1267.53)溶于500μL10％的甲醇溶液，浓度为34.6mg/mL。
(2)向多肽溶液中依次加入0.0031gNHS，0.0052gEDC·HCl，震荡溶解后，800-1000转/分钟避光震荡反应20分钟，得到活化后的多肽溶液。
(3)称取0.0261g雌二醇抗体(多克隆抗体，分子量66830Da)溶于2mL浓度为0.01的PBS溶液，将500μL活化后的多肽溶液逐滴于雌二醇抗体的PBS溶液中，4℃避光反应9小时。
(4)5000转/分钟超滤离心管(膜：10000MWCO PES)离心10分钟。
(5)将超滤管内剩余液体补加PBS至2mL，取出冰箱4℃保存备用。
实施方案2
(1)0.0150g多肽(AC-FAAAVLAAPIL，分子量1098.32)溶于500μL10％的甲醇溶液，浓度为30mg/mL。
(2)向多肽溶液中依次加入0.0031g NHS，0.0052g EDC·HCl，震荡溶解后，800-1000转/分钟避光震荡反应20分钟，得到活化后的多肽溶液。
(3)称取0.0261g雌二醇抗体(多克隆抗体，分子量66830Da)溶于2mL浓度为0.01的PBS溶液，将500μL活化后的多肽溶液逐滴于雌二醇抗体的PBS溶液中，4℃避光反应9小时。
(4)5000转/分钟超滤离心管(膜：10000MWCO PES)离心10分钟。
(5)将超滤管内剩余液体补加PBS至2mL，取出冰箱4℃保存备用。
Claims (5)
1.一种疏水性多肽修饰抗体的合成方法，具体涉及一种采用疏水性多肽RRRRRRRR或AC-FAAAVLAAPIL修饰雌二醇抗体的合成方法，其特征在于包括以下合成步骤：
(1)配制20-150mg/mL的疏水性多肽溶液，溶剂为10-30％的甲醇。
(2)按照多肽：NHS：EDC摩尔质量为1∶2∶2-5的比例向多肽溶液中依次加入N-羟基丁二酰亚胺(NHS)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)，充分溶解后，800-1000转/分钟避光震荡反应15-30分钟，得到活化后的多肽溶液。
(3)按照活化后的多肽和抗体30-40∶1的摩尔质量比，将活化后的多肽溶液逐滴加于3-6倍体积的抗体磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，4℃避光反应8-12小时。
(4)超滤离心去处未结合的多肽。
(5)将超滤管中剩余液体用适量的PBS重新定容，从超滤管吸出，冰箱4℃保存备用。
2.根据权利要求1所述的合成方法，如上所述的多肽为RRRRRRRR或AC-FAAAVLAAPIL。
3.根据权利要求1所述的合成方法，如上所述的抗体为水溶性抗体。
4.根据权利要求1所述的合成方法，如上所述的磷酸盐缓冲溶液pH6.5-7.5，浓度为0.01mol/L。
5.根据权利要求1所述的合成方法，所述超滤离心使用离心管所用膜：5000-20000MWCO PES。
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