CN103582488A - 低变应原的谷物组合物用于诱导特异性口服耐受的用途 - Google Patents

低变应原的谷物组合物用于诱导特异性口服耐受的用途 Download PDF

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Abstract

公开了用于在对谷物蛋白过敏的幼年哺乳动物中诱导特异性口服耐受的谷物蛋白的部分水解物，其中所述水解物的水解度介于9-18%之间。

Description

低变应原的谷物组合物用于诱导特异性口服耐受的用途
发明领域
本发明涉及低变应原的谷物组合物在诱导年幼哺乳动物对谷物、尤其是对小麦或大米的特异性口服耐受中的用途，所述动物对谷物具有IgE介导的过敏症。
发明背景
生命中首个发生的食物过敏是牛奶过敏，其很多情况下是由对食物中蛋白的反应引起的。在生命的早期，免疫系统仍处于发育阶段，可能未能建立对食物抗原的耐受性(这也可称为口服耐受的诱导不足)。其结果是婴儿或幼年动物对食物蛋白具有过度的免疫应答，从而产生对其的过敏反应。食物过敏不仅影响人类，还可影响其他哺乳动物，例如狗和猫。
通常，当易感或有风险的婴儿、儿童或幼年动物首次接触含有潜在过敏原的新的食物时会发生食物超敏反应。除母乳外，人类婴儿首个接触的食物性蛋白至少有牛奶蛋白，如上文所述，牛奶过敏是婴儿最常见的食物过敏。通常认为，具有牛奶过敏的婴儿发展成特应性疾病和对其他食物蛋白例如蛋和谷物蛋白过敏的风险增加，然而，在断奶时向膳食中引入这些食品后，即使对牛奶蛋白具有口服耐受的那些婴儿随后也有可能对其他食物蛋白例如蛋和谷物蛋白过敏。这些过敏在临床上可能表现为特应性疾病，例如特应性皮炎、湿疹和哮喘。
从饮食的观点看，有两种方法用于治疗已建立的过敏——完全避免含有过敏原的食物，或者食物必须经过处理以减少其致敏可能，例如，通过深度水解作用。为了后一目的，制备了含有深度水解的牛奶蛋白(由不超过5个氨基酸组成的肽)的婴儿配方食品。类似的，在美国专利号6403142中也已提出，制备用于伴侣动物的低变应原性宠物食品，其中所述动物疑似发生了食物过敏。
如前所述，除母乳外，幼年哺乳动物遭遇的首个食物蛋白通常是来自其他动物的乳蛋白，例如对于人类婴儿来说为牛奶。通常，下一个遭遇的食物蛋白是谷物蛋白，其在断奶初期被引入，对于人类婴儿来说通常为婴儿谷物形式。当首次引入幼年哺乳动物的饮食中时，谷物蛋白也可能引起过敏反应，即使之前已成功引入过乳蛋白。具体而言，小麦中的蛋白质：白蛋白、球蛋白、麦谷蛋白和麦醇溶蛋白与人类婴儿的过敏发展有关。谷物蛋白的特定变应原性特征与这些蛋白的特殊性质有关，由此需要开发能避免变应原性的特异性方法和产品。
对建立谷物蛋白过敏反应的一级预防已经引起了一些关注，例如WO2009/077457中公开的那些，即在第一地点就减少发生过敏的风险。US5,039,532A涉及低变应原的乳清蛋白水解物。EP1236405A1涉及低变应原的大豆蛋白，其被设计以避免“有风险的”动物的致敏作用。
如前所述，一旦过敏条件建立，含有过敏原的食物必须完全避免，或者食物应当进行处理以减少其过敏可能性。例如通过深度水解。某些情况下，可能通过诱导对过敏原的特异性口服耐受来缓和或降低过敏反应。
因此，本发明的一个目的是提供液态形式或易于在水或奶中重构的干燥产物形式的低变应原的谷物制剂，用于对所述的食物过敏反应脱敏，或诱导对所述变应原性蛋白例如谷物蛋白的口服耐受。换句话说，本发明的一个目的是在年轻个体中重建对变应原性蛋白、例如谷物蛋白的口服耐受，所述个体已显示出对所述蛋白的过敏反应。这不同于基于个体的医疗记录或基于个体父母的医疗记录而提供设计用于避免有发生过敏反应的高风险个体的过敏反应的低变应原的产品。
发明概述
因此，在第一方面，本发明提供了谷物蛋白的部分水解物，其用于诱导对所述谷物蛋白过敏的幼年哺乳动物中的特异性口服耐受，其中所述水解物的水解度介于9-18%之间。
第二方面，本发明提供了谷物粉，其用于诱导对所述谷物蛋白过敏的幼年哺乳动物中的特异性口服耐受，其中所述蛋白被部分水解，并且水解度介于9-18%之间。
第三方面，本发明提供了谷物产品，其用于诱导对所述谷物蛋白过敏的幼年哺乳动物中的特异性口服耐受，所述谷物产品包括(按干物质的重量百分比)1-100%、优选15-100%的如上文所定义的谷物粉，其中所述蛋白是部分水解的，并且水解度介于9-18%之间；0-40%糖；0-30%淀粉以及0-30%脂肪和1-85%的水。所述产品可以是流体，或者具有半流质的粘度和质地。在一个实施方案中，所述产品是干的或基本上干的粉末形式。
在第四方面，本发明提供了用于诱导对所述谷物蛋白过敏的幼年哺乳动物中的对谷物蛋白的特异性口服耐受的方法，包括对所述幼年哺乳动物喂食治疗量的谷物蛋白的部分水解物，其水解度介于9-18%之间。
根据本发明的第一、第二、第三和第四方面，谷物蛋白的部分水解物的水解度优选介于10-16%，更优选介于11-13%。
根据本发明的第一、第二、第三和第四方面，优选地，所述过敏是IgE-介导的过敏。
根据本发明的第一、第二、第三和第四方面，优选地，所述谷物是小麦、大米、或小麦和大米的混合物。
根据本发明的第一、第二、第三和第四方面，优选地，所述幼年哺乳动物是人类婴儿。
附图简述
图1显示了完整和水解的大米蛋白的SDS-PAGE分析。
图2显示了完整和水解的小麦蛋白的SDS-PAGE分析。
图3显示了根据本发明的水解的大米蛋白残留的变应原性。
图4显示了根据本发明的水解的小麦蛋白残留的变应原性。
发明详述
在该说明书里，下列术语具有以下含义：
“谷物蛋白”表示在谷物中，例如大米、小麦、燕麦、玉米、大麦、黑麦及其混合物中发现具有食用价值的任何和所有的蛋白；
蛋白质的“水解度”或“DH”表示完整蛋白在水解过程中解离的肽键数目除以完整蛋白中肽键总数的百分比；
“低变应原的(HA)谷物蛋白”表示部分水解的谷物蛋白，其变应原性至少比完整的谷物蛋白低100倍(类似于欧盟指导原则96/4/EC关于乳蛋白的规定)；
“口服耐受”表示对经口服途径递送的抗原的免疫学低反应性的活性状态；
“特异性口服耐受诱导”表示对具有对谷物蛋白过敏、优选IgE介导的过敏的幼年哺乳动物的部分或完全的口服脱敏作用或重建对所述抗原的耐受。
“具有IgE-介导的过敏”表示基于一种或多种下列测试推定或诊断为IgE介导的过敏：
-对过敏原，优选谷物蛋白的阳性皮肤刺伤测试(SPT)，
-对过敏原，优选谷物蛋白的阳性特异性IgE，
-对过敏原，优选谷物蛋白的快速阳性反应(IgE)，如激发(口服激发)试验所示。
“谷物蛋白过敏反应的一级预防”表示预防所述过敏反应发生，包括降低所述过敏反应的风险；
“纯化的蛋白酶”表示未被其他能水解碳水化合物的酶例如阿法淀粉酶污染的蛋白酶;
“糖”表示在谷物产品中使用的碳水化合物，用于提供甜味，其包括但不限于蔗糖、葡萄糖和果糖；
除非另外说明，所有引用的百分比表示重量百分比。本发明的产品中特定成分的“干重百分比”表示该成分占产品中总干物质的百分比的量。
本发明使用的谷物蛋白部分水解物的DH介于9-18%之间，优选介于10-16%之间。所述谷物可以是任何食用的谷物，包括大米、小麦、燕麦、玉米、大麦、黑麦或其混合物。优选地，所述谷物是小麦、大米、或小麦和大米的混合物。
经Fritsché等人描述的技术(Int.Arch.Aller and Appl Imm.,93,289-293,1990)测定，谷物蛋白的部分水解物可具有比完整谷物蛋白降低至少100倍的变应原性。这些部分水解的谷物蛋白和含有它们的产品因此可描述为低变应原的。
谷物蛋白的部分水解物可由本领域任何适当的已知方法产生。适当的原料是谷物粉，例如小麦粉或大米粉。粉的粒度测量不是关键的，颗粒大小例如可介于200-500微米之间变化。
根据本发明，制备所用的部分谷物水解物的过程的实例如下：谷物粉与水混合，混合物加热至60-65℃持续10分钟，随后冷却至55℃。加入蛋白酶，例如细菌的丝氨酸内切蛋白酶枯草杆菌蛋白酶(市售，例如商标为
Figure BDA0000429495970000051
将混合物维持在55℃持续2小时。随后升温至70-75℃，保持10分钟。将混合物再次冷却至55℃，加入不同的蛋白酶，例如来自解淀粉芽胞杆菌和藓样芽胞杆菌的细菌蛋白酶的混合物(可从丹麦的Novozymes A/S Bagsvaerd获得，商标名为
Figure BDA0000429495970000052
将混合物继续维持在55℃2小时，随后升温至85-95℃，保持30分钟以失活酶，终止水解。由此获得的部分水解的谷物蛋白为液态形式，可以该状态使用或通过任何本领域已知的适当技术、例如滚筒干燥、喷雾干燥或挤压进行干燥。
由此制备的部分谷物水解物或产品可进一步通过挤压步骤处理。可使用任何本领域已知的挤压方法和设备。然而，优选的挤压步骤使用双螺杆挤压机进行，速度为200-260rpm，温度介于130℃-150℃，产品流速介于6-8kg/h，水流速为7-11ml/min，压力介于50-150巴。挤压步骤能使产品获得特定的质地，具有独特的物理性质，例如溶解时间、重构的粘度等。
根据本发明，一种特别优选的用于制备谷物蛋白部分水解物的方法包括混合谷物粉和水和缓冲剂(pH优选介于7-8)，进行初步(第一次)热处理(然而是任选的)，加入纯化的蛋白酶，使混合物的温度维持在40-80℃或40℃-70℃(第二次热处理)，保持30分钟至240分钟，获得部分水解物，其水解度介于9-18%。
在一个实施方案中，初步(第一次)热处理在40℃-90℃进行，优选60℃-80℃，保持1-8小时，优选2-3小时。
在一个实施方案中，上述第二次热处理用渐进的热处理替代：温度在2-5小时内，优选在3-4小时内从室温缓慢升至70℃或80℃。温度增加的速率可介于0.05℃/min至0.40℃/min，优选介于0.08-0.3℃/min，最优选介于0.10℃/min至0.15℃/min。任选地，在热处理的最终温度下可将水解物维持一段平台期(1、2、3或5小时)。
用于热处理的最佳温度高度依赖于谷物蛋白和所用的酶的性质。高于70℃时注意酶活性可能降低。
纯化的蛋白酶可以是细菌蛋白酶，其未被阿法淀粉酶污染，例如以商标名Alcalase
Figure BDA0000429495970000061
(Novozymes A/S Bagsvaerd,丹麦)市售的酶，或动物来源的蛋白酶，例如胰蛋白酶。
本领域技术人员将了解，初步热处理的目的是促进蛋白分子的解折叠，使其更容易被随后的酶水解。初步热处理可包含例如在50-130℃下，在热交换器中加热15秒-10分钟，或通过蒸气直接注入加热。
优选地，所述水解在50-80℃进行30-180分钟，优选进行60-120分钟。然而，也可使用更长时间，例如4或5小时。某些情况下，很短的时间(10或15分钟)可能是有益的。
根据本发明的谷物蛋白的部分水解物可代替完整的谷物蛋白，用于幼年哺乳动物例如人类婴幼儿以及幼年伴侣动物例如狗和猫的食品中。
本发明使用的产品包括(按干物质的重量百分比算)：1-100%的谷物粉，优选15%-100%，其中所述蛋白是部分水解的，水解度为9-18%；0-40%的糖，以及0-30%的脂肪和1-85%的水。
所述产品可以包含天然或水解的淀粉，水解的淀粉可随着水解蛋白谷物的量增加而增加。
所述产品可以是流体(液体)形式。其可以以直接食用(不需要进一步稀释)的形式销售。
所述产品可以是脱水粉末的形式，其可通过用水或奶重构而制备食用。
所述产品可以是挤压的零食产品形式，尤其是用于幼儿消费的产品。
当产品为用液体(水或奶)重构的脱水临时粉末形式或液体谷物产品形式时，本发明所覆盖的粘度范围为0mPa·s到4000mPa·s，优选介于1000-3500mPa·s。优选地，对于断奶食品而言，粘度为2000-3000mPa·s。粘度测量可通过任何已知的标准方法进行。上述数值在60℃、50rpm、10min下，使用用水稀释的15.6%固体的产品测定。
根据本发明的脱水谷物粉末优选含有70-80%的谷物粉末，10-30%糖(优选15%-20%)，2-10%的脂肪和1-3%的水(优选2%-3%)。所述产品还可包含高达20%的淀粉。它们以脱水形式销售，通过与液态奶(或者奶粉和水的混合物)混合而再次水合，以形成便于食用的半流质。
优选地，所述半流质使用前述的本发明的谷物产品、水和粉末化的低变应原的婴儿配方食品(即含有部分水解的乳蛋白混合物并符合指导原则96/4/EC要求的婴儿配方食品)制备。或者，如果可行的话，即时食用的液态HA婴儿配方食品可用于重构该谷物产品。其优点是提供基于谷物的断奶食品，其具有显著降低的变应原性，因为食物中所有的蛋白都经过了部分的水解。
所述半流质也可通过混合本发明的谷物产品和其他含蛋白的低变应原的制剂而制备。
在一个实施方案中，本发明的部分水解物或部分水解的谷物蛋白与低变应原的卵制剂一起提供。
在另一个实施方案中，另一种低变应原制剂可包含低变应原的奶或低变应原的婴儿配方食品。
在另一个实施方案中，本发明的部分水解物或部分水解的谷物蛋白包含低变应原的卵制剂和低变应原的奶或婴儿配方食品二者。
低变应原的蛋制剂可参见专利出版物EP1867237A1和WO2007/144397A1所述。
低变应原的婴儿配方食品可以是含有部分水解的乳蛋白的婴儿配方食品，其符合指导原则96/4/EC的要求。其优点在于提供基于谷物-蛋的断奶食品，其具有显著降低的变应原性，因为食物中所有的蛋白都经过了部分的水解。
在另一个实施方案中，所述谷物产品还包括乳固体。所述产品可通过简单与水混合制备以供食用。同样，如果存在乳固体的话，其优选通过低变应原的婴儿配方食品提供。
根据本发明使用的液体谷物产品优选包含5-10%的谷物粉，2-7%的乳固体，最高15%的脂肪，最高30%的糖，最高5%的淀粉和75-90%的水。所述产品可设定为谷物乳饮料，通常以单次食用的纸盒或瓶装售卖以供消费。所述乳固体优选通过低变应原的婴儿配方食品提供。
谷物产品可包含淀粉。如果存在淀粉，其可以是天然淀粉或通过本领域已知方法部分水解的淀粉，例如美国专利4,374,860的方法。淀粉的水解度可以是DE5-55或DE20-45，最终介于DE25-35。淀粉的水解度被优化以获得本发明最终应用的正确的感官和物理化学性质。如果需要含有部分水解的淀粉和部分水解的蛋白的产品，用作原料的谷物粉可能需要进行两步水解，一步针对淀粉，另一步针对蛋白。这些水解可同时或先后进行。
除上述的谷物产品以外，谷物蛋白的部分水解物可作为例如谷物粉形式(其中蛋白部分水解，其水解度介于9-18%)的成分用在任何通常含有谷物粉的食品中，例如生面团、面包和饼干等。
如前所述，谷物蛋白的脱敏依赖于对所述蛋白的口服耐受的成功诱导。发明人相信该目的可以通过平衡所述部分水解的蛋白残留的抗原性和其诱导口服耐受的能力而实现。通常，所述水解蛋白残留的抗原性应当比完整蛋白至少低100倍。
蛋白质之间的不同不仅仅在于分子量，尤其还在于其序列、疏水-亲水程度、三维结构、pKa和许多其他性质。因此，尽管不是不可能的，但预测口服耐受诱导也是有难度的。此外，蛋白质家族之间变应原性的性质/潜能差异巨大。同样，不同蛋白质之间的蛋白/宿主相互作用以及免疫系统的反应都有很大区别。因此，关于奶或大豆蛋白的知识不能直接用于谷物蛋白。
本发明将通过下述实施例进一步说明。
部分谷物水解物的制备
实施例1
将10Kg的大米粉(按照美国专利4,374,860预处理以部分水解碳水化合物成分)和23kg的水混合，在55℃加热。制备缓冲剂溶液(Na(OH)2或K(OH)2或Ca(OH)2)，加入混合物进行pH调节。加入5%的
Figure BDA0000429495970000091
酶(批号PW2A1006,Novozymes A/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在55℃2小时。该第一步水解结束后，将混合物在90℃加热10分钟。冷却所述混合物至55℃，加入5%的
Figure BDA0000429495970000092
1000L酶(批号400904,Novozymes A/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在55℃2小时。该第二步水解后，将混合物在90℃加热30分钟，随后喷雾干燥获得含有部分水解的大米蛋白的粉末，DH为14.2%，将其放置在铝包中。
实施例2
将10Kg的大米粉(按照美国专利4,374,860预处理以部分水解碳水化合物成分)和23kg的水混合，在55℃加热。制备缓冲剂溶液(Na(OH)2或K(OH)2或Ca(OH)2)，加入混合物进行pH调节(至pH7.8)。加入10%的酶(批号500357,Novozymes A/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在55℃2小时。该第一步水解结束后，将混合物在90℃加热10分钟。冷却所述混合物至55℃，加入10%的Alcalase酶，将混合物维持在55℃2小时。该第二步水解后，将混合物在90℃加热30分钟，随后喷雾干燥获得含有部分水解的大米蛋白的粉末，DH为15.9%，将其放置在铝包中。
实施例3
将10Kg大米粉(按照美国专利4,374,860预处理以部分水解碳水化合物成分)和23kg的水混合，在55℃加热。制备缓冲剂溶液(Na(OH)2或K(OH)2或Ca(OH)2)，加入混合物进行pH调节(至pH7.8)。加入5%的
Figure BDA0000429495970000101
酶(批号500357,Novozymes A/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在55℃2小时。该第一步水解结束后，将混合物在90℃加热10分钟。冷却所述混合物至55℃，加入5%的酶(批号PW2A1006,Novozymes A/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在55℃2小时。该第二步水解后，将混合物在90℃加热30分钟，随后喷雾干燥获得含有部分水解的大米蛋白的粉末，DH为11.2%，将其放置在铝包中。
实施例4
将15Kg小麦粉(按照美国专利4,374,860预处理以部分水解碳水化合物成分)和70kg的水混合，在55℃加热。制备缓冲剂溶液(Na(OH)2或K(OH)2或Ca(OH)2)，加入混合物进行pH调节。加入5%的
Figure BDA0000429495970000103
酶(批号PW2A1006,Novozymes A/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在55℃2小时。该第一步水解结束后，将混合物在90℃加热10分钟。冷却所述混合物至55℃，加入5%的
Figure BDA0000429495970000104
1000L酶(批号400904,NovozymesA/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在55℃2小时。该第二步水解后，将混合物在90℃加热30分钟，随后喷雾干燥获得含有部分水解的小麦蛋白的粉末，DH为12.7%，将其放置在铝包中。
实施例5(非本发明的部分)
将15Kg小麦粉(按照美国专利4,374,860预处理以部分水解碳水化合物成分)和70kg的水混合，在55℃加热。制备缓冲剂溶液(Na(OH)2或K(OH)2或Ca(OH)2)，加入混合物进行pH调节。加入10%的
Figure BDA0000429495970000105
酶(批号500357,Novozymes A/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在55℃2小时。该第一步水解结束后，将混合物在90℃加热10分钟。冷却所述混合物至55℃，加入10%的Alcalase酶，将混合物维持在55℃2小时。该第二步水解后，将混合物在90℃加热30分钟，随后使用4kDa的膜进行超滤，喷雾干燥获得含有深度水解的小麦蛋白的粉末，DH为20.0%，将其放置在铝包中。
实施例6
将15Kg大米粉、70kg水和用于调节pH的缓冲剂溶液(Na(OH)2或K(OH)2或Ca(OH)2)混合，通过蒸气注射加热数秒钟，加入5%的
Figure BDA0000429495970000111
AF酶(批号RBN00013,Novozymes A/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在60℃1小时。该水解步骤后，混合物再次用蒸气注射加热数秒。随后滚筒干燥混合物，获得含有部分水解的大米蛋白的粉末，DH为13.2%，将其放置在铝包中。
实施例7
将15Kg小麦粉、70kg水和用于调节pH的缓冲剂溶液(Na(OH)2或K(OH)2或Ca(OH)2)混合，通过蒸气注射加热数秒钟，加入5%的
Figure BDA0000429495970000112
AF酶(批号RBN00013,Novozymes A/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在60℃2小时。该水解步骤后，混合物再次用蒸气注射加热数秒。随后滚筒干燥混合物，获得含有部分水解的小麦蛋白的粉末，DH为11%，将其放置在铝包中。
实施例8
将15Kg谷物粉混合物(大米，小麦)、70kg水和用于调节pH的缓冲剂溶液(Na(OH)2或K(OH)2或Ca(OH)2)混合，通过蒸气注射加热数秒钟，加入5%的
Figure BDA0000429495970000113
AF酶(批号RBN00013,Novozymes A/SBagsvaerd,丹麦)，将混合物在60℃通过连续的管道泵出，维持1小时。该水解步骤后，混合物再次用蒸气注射加热数秒。随后喷雾干燥混合物，获得含有部分水解的大米和谷物蛋白的粉末，DH为9.2%，将其放置在铝包中。
实施例9
将25Kg小麦粉和70kg水混合，在130℃加热。加入5%
Figure BDA0000429495970000121
AF酶(批号RBN00013批号500357,Novozymes A/SBagsvaerd,丹麦)，将混合物温度从60升至80℃3小时(～0.11℃/min)。该水解步骤后，混合物在90℃加热15分钟。随后混合物冷却至60℃用于制剂步骤，接着滚筒干燥获得含有部分水解的小麦蛋白的粉末，将其放置在铝包中。
实施例10
将15Kg谷物粉(大米，小麦)和乳蛋白、70kg水和用于调节pH的缓冲剂溶液(Na(OH)2或K(OH)2或Ca(OH)2)混合，通过蒸气注射加热数秒钟，加入5%的
Figure BDA0000429495970000122
AF酶(批号RBN00013,Novozymes A/SBagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在60℃1小时。该水解步骤后，混合物再次用蒸气注射加热数秒。随后滚筒干燥混合物，获得水解的谷物粉末，将其放置在铝包中。
实施例11
将20Kg小麦粉(按照美国专利4,374,860预处理以部分水解碳水化合物成分)和30kg的水和用于调节pH的缓冲剂溶液(Na(OH)2或K(OH)2或Ca(OH)2)混合，加入5%的
Figure BDA0000429495970000123
酶(批号RBN00013,NovozymesA/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在60℃2小时。该第一步水解结束后，将混合物在90℃加热15分钟。向混合物中加入蔗糖、淀粉和脂肪；最终混合物通过蒸气注射加热数秒钟，滚筒干燥、研磨获得水解的谷物粉末，将其放置在铝包中。
实施例12
将20Kg小麦粉(按照美国专利4,374,860预处理以部分水解碳水化合物成分)、30kg的水和用于调节pH的缓冲剂溶液(Na(OH)2或K(OH)2或Ca(OH)2)与4kg未处理的小麦粉混合，通过蒸气注射加热数秒钟，加入5%的
Figure BDA0000429495970000131
酶(批号RBN00013,Novozymes A/S Bagsvaerd,丹麦)，将混合物维持在60℃2小时。该第一步水解结束后，将混合物在90℃加热15分钟。向混合物中加入蔗糖、淀粉和脂肪；最终混合物通过蒸气注射加热数秒钟，滚筒干燥、研磨获得水解的谷物粉末，将其放置在铝包中。
含有谷物蛋白的部分水解物的谷物产物
说明书和实施例中提到的谷物产物可用于在对谷物蛋白过敏的幼年哺乳动物中诱导对该谷物蛋白的特异性口服耐受中。所述方法包括向该幼年哺乳动物提供治疗量的谷物蛋白的部分水解物，其水解度介于9-18%。优选地，所述幼年哺乳动物是人类婴儿，年龄介于1到12岁。
通常，特异性的口服耐受诱导包括下列步骤：
–鉴定幼年哺乳动物的“维持剂量”，即不产生过敏反应的谷物蛋白部分水解物的最大剂量。为鉴定维持剂量，从很低的剂量(例如0.2g谷物产品)开始向幼年哺乳动物施用增加量的谷物蛋白部分水解物，直到等于口服的通常每日摄入量为止。该步骤应当在医学监督下进行。
–使用维持剂量喂养幼年哺乳动物一至数月，例如2到10个月，通常约4-6个月。优选地，所述维持剂量应当每天给予一次。
所述谷物产品可溶于水或奶后喂养，其也可以与食物例如苹果酱、酸奶、果汁或汤混合。
所述谷物产品可含有7-10g蛋白/100g谷物产品，优选8-9.5g蛋白/100g谷物产品。
为了检查是否获得了特异性口服耐受诱导，可在医学监督的条件下用低剂量的天然谷物蛋白激发幼年哺乳动物。
实施例13
谷物产品组成的一个实例如下(除水以外的成分重量基于干物质):
Figure BDA0000429495970000141
实施例14
另一个谷物产品组成的实例如下(除水以外的成分重量基于干物质):
Figure BDA0000429495970000142
实施例13和14的产品可通过混合在实施例6中获得的产品制备(实施例13)或通过混合实施例3和4中获得的产品制备(实施例14)，其中略去脂肪和蔗糖的最终干燥步骤。所述混合物进行常规谷物产品的热处理、滚筒干燥和研磨。此时可通过干混加入任何热或湿度敏感的成分，例如维生素或益生菌。也可加入非复制性益生菌。
实施例15
另一个谷物产品组成的实例如下(除水以外的成分重量基于干物质):
Figure BDA0000429495970000143
实施例16
液态谷物产品组成的一个实例如下(除水以外的成分的重量以干物质百分比表示):-
Figure BDA0000429495970000151
实施例17
液态谷物产品组成的一个实例如下(除水以外的成分的重量以干物质百分比表示):-
Figure BDA0000429495970000152
实施例16和17的产品可通过在水中混合部分水解的大米和小麦粉与水解的乳清蛋白质、乳糖、淀粉以及矿物质和维生素预混合物制备。随后，产物混合物预热至70℃，在线加入脂肪混合物(仅对于实施例17)，所述产品经UHT处理后冷却。在冷却期间产物在250/50巴下匀浆，随后继续冷却至环境温度，在无菌条件下装入纸盒或类似容器中。
实施例18
另一个谷物产品组成的实例如下(除水以外的成分重量基于干物质):-
Figure BDA0000429495970000161
实施例19
另一个谷物产品组成的实例如下(除水以外的成分重量基于干物质):-
实施例20
另一个谷物产品组成的实例如下(除水以外的成分重量基于干物质):-
Figure BDA0000429495970000163
Figure BDA0000429495970000171
实施例13至20的组合物可用于在对小麦或大米蛋白过敏的幼年哺乳动物中诱导对小麦或大米的特异性口服耐受。
蛋白质/肽的凝胶电泳分析
大米和小麦粉中蛋白质的酶促水解效应通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析，使用NuPAGE12%Bis-Tris凝胶和银染。结果显示在图1(大米)和图2(小麦)中。在图1中，泳道5对应于实施例1的水解物，泳道6对应于实施例2的水解物，以及泳道4对应于实施例3的水解物。在图2中，泳道3对应于实施例4的水解物，泳道4对应于实施例5的水解物。这些图显示，与全大米粉或小麦粉相比，在所有的水解情况下，部分水解的产品都大幅减少了蛋白条带。
水解产物中的总氮量通过Kjeldahl法测定。水解度根据Adler-Nissen的(J.Agric.Food.Chem.27:1256-1262,1979)TNBS方法测定。
谷物水解物残留的变应原性
在部分水解前后，使用致敏的大鼠肥大细胞中氚标记的5-羟色胺释放的体外功能测试确定来自大米和小麦的潜在过敏原分子导致的IgE依赖的变应原性。大米使用了总蛋白组分，小麦的研究则集中于麦醇溶蛋白，其是一种已知涉及发生小麦过敏的小麦蛋白。
简而言之，该方法如下：将RBL-2H3细胞在RPMI中在250ml瓶内培养。对于脱颗粒实验，去除培养基，向细胞层加入4ml胰蛋白酶-EDTA，在37℃温育10分钟。轻微振荡使细胞脱壁，加入6ml RPMI并混合。将9.5ml分装于15ml蓝顶Falcon管内，在310g离心5分钟(Sorvall,转子75006445)。弃去上清，向细胞沉淀中加入10ml RPMI，混合并在310g离心5分钟。弃去上清，向细胞沉淀中加入10ml RPMI，混合，计数细胞并再悬浮于RPMI中(4x105/ml)。将100μl该细胞混悬液分装在96孔Costar板的孔中，板在37℃温育过夜。
从各孔去除50μl培养基，替之以50μl鼠抗变应原(麦醇溶蛋白/大米蛋白)IgE抗血清，其含有1μl3H5-羟色胺；在37℃温育2小时。用250μlHBSS轻轻洗涤所有的孔2次，完全除去上清，加入150μl变应原标准品/样品/HBSS/用HBSS稀释的TritonX。37℃温育45min，140g(Mistral2000)下离心8min。将50μl上清转移到Optiplate中，加入200μl Microsint40，混合并计数放射性(Topcount Packard β-计数器).
结果如图3和4所示，其中可以看到，部分水解的谷物的变应原性与相应的完整谷物蛋白相比显著下降：
8-25μg大米蛋白抗原/g蛋白。
25-175μg麦醇溶蛋白/g蛋白。
结果表示为每克蛋白能引发肥大细胞的大米蛋白/麦醇溶蛋白的量。
在图3中，从左到右，第二个柱来自实施例3的水解物，第三个柱来自实施例1的水解物，第四个柱来自实施例2的水解物。在图4中，从左到右，第二个柱来自实施例4的水解物，第三个柱来自实施例5的水解物。

Claims (14)

1.谷物蛋白的部分水解物，其用于诱导对所述谷物蛋白过敏的幼年哺乳动物中的特异性口服耐受，其中所述水解物的水解度介于9-18%之间。
2.根据权利要求1的水解物，其中所述水解度介于10-16%之间。
3.根据权利要求1或2的水解物，其中所述谷物是大米、小麦、黑麦、玉米、大麦、燕麦或其混合物。
4.谷物粉，其用于诱导对所述谷物蛋白过敏的幼年哺乳动物中的特异性口服耐受，其中所述蛋白被部分水解，并且水解度介于9-18%之间。
5.根据权利要求4的谷物粉，其中所述水解度介于10-16%之间。
6.谷物产品，其用于诱导对所述谷物蛋白过敏的幼年哺乳动物中的特异性口服耐受，所述产品包括按干物质的重量百分比计的15-100%的根据权利要求4或5的谷物粉，0-40%的糖，0-30%的淀粉和0-30%的脂肪；和1-85%的水。
7.根据权利要求6的谷物产品，其粘度在60℃/50rpm下介于2000-3000mPas。
8.根据权利要求6或7的谷物产品，其中所述谷物产品包括低变应原的卵蛋白。
9.根据权利要求6-8任意一项的谷物产品，包括按干物质的重量百分比计的5-10%的根据权利要求4或5的谷物粉，2-7%的乳固体，最高15%的脂肪，最高30%的糖和最高5%的淀粉；以及75-90%的水。
10.根据权利要求9的谷物产品，其中所述乳固体通过低变应原的婴儿配方食品提供。
11.根据权利要求5-10任一项的谷物产品，其中所述谷物是大米、小麦、黑麦、燕麦、大麦或其混合物。
12.在对谷物蛋白过敏的幼年哺乳动物中诱导对所述谷物蛋白的特异性口服耐受的方法，包括对所述幼年哺乳动物喂食治疗量的谷物蛋白的部分水解物，其水解度介于9-18%之间。
13.根据权利要求12所述的方法，其中幼年哺乳动物是人类婴儿。
14.根据权利要求12或13任一项所述的方法，其中水解度介于10-16%之间。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5039532A (en) * 1987-12-23 1991-08-13 Nestec S.A. Preparation of a hypoallergenic whey protein hydrolyzate and food
EP1236405A1 (en) * 2001-03-01 2002-09-04 Societe Des Produits Nestle S.A. Hypoallergenic formulae inducing oral tolerance to soy proteins
CN101896078A (zh) * 2007-12-14 2010-11-24 雀巢产品技术援助有限公司 低过敏原谷蛋白及其用途

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH641645A5 (fr) 1979-12-19 1984-03-15 Nestle Sa Procede de fabrication d'un produit alimentaire amylace pulverulent facilement miscible a l'eau.
GB9808579D0 (en) * 1998-04-22 1998-06-24 Novartis Nutrition Ag Improvements in or relating to organic compounds
US6403142B1 (en) 1998-12-11 2002-06-11 Ralston Purina Company Hypoallergenic pet food
EP1034704A1 (en) * 1999-03-12 2000-09-13 Societe Des Produits Nestle S.A. Nutritional composition intended for specific gastro-intestinal maturation in premature mammals
CN101460067B (zh) 2006-06-15 2012-09-26 雀巢产品技术援助有限公司 诱导对卵蛋白的耐受
EP1867237A1 (en) 2006-06-15 2007-12-19 Nestec S.A. Hypoallergenic Egg

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5039532A (en) * 1987-12-23 1991-08-13 Nestec S.A. Preparation of a hypoallergenic whey protein hydrolyzate and food
EP1236405A1 (en) * 2001-03-01 2002-09-04 Societe Des Produits Nestle S.A. Hypoallergenic formulae inducing oral tolerance to soy proteins
CN101896078A (zh) * 2007-12-14 2010-11-24 雀巢产品技术援助有限公司 低过敏原谷蛋白及其用途

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