发明内容
本发明要解决的技术问题是针对现有抗衰剂存在抗衰途径相对单一、稳定性差、有效性不高问题,以及孔雀石提取物在抗衰老应用方面的技术不足,提供一种含有孔雀石提取物、多种抗衰途径协同并运用载体技术提高透皮吸收的抗衰老制剂。
本发明的另一个目的是提供一种含有抗衰老制剂的化妆品。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现:
一种抗衰老制剂,通过以下方法制备得到:
S1前脂质体A的制备:将硫辛酸和谷胱甘肽或棕榈酰寡肽中的一种或两种一起包裹在前脂质体A中,得到前脂质体A粉末;
S2.将前脂质体A粉末、孔雀石提取物、白茶提取物、VA或丹参酮中的一种或两种和葡萄籽提取物、碧萝芷提取物、银杏叶提取物或猴面包树提取物中的一种或多种一起包裹在脂质体B中,即得抗衰老制剂。
作为优选的实施方案,前脂质体A中,硫辛酸可部分用VE代替。
优选地,所述抗衰老制剂通过以下方法制备得到:
S1.将硫辛酸和谷胱甘肽或棕榈酰寡肽中的一种或两种一起包裹在前脂质体A中,得到前脂质体A粉末;
S2.将脂质材料、VA或丹参酮中的一种或两种、乳化剂、抗氧化剂和醇类溶解于乙醇溶剂中,水浴溶解得类脂质溶液T1;
S3.将保护剂、前脂质体A粉末、孔雀石提取物、白茶提取物和葡萄籽提取物、碧萝芷提取物、银杏叶提取物或猴面包树提取物中的一种或多种溶解于磷酸缓冲液中得溶液T2;
S4.将类脂质溶液T1与溶液T2按比例混匀后得溶液B,溶液B经过滤、冷冻干燥、压盖封口即得脂质体B粉末,该粉末即为抗衰老制剂。优选地,S4所述类脂质溶液T1与溶液T2的重量比为1:20~30。
优选地,在脂质体B的制备中:(前脂质体A粉末+VA或丹参酮中的一种或两种+孔雀石提取物、白茶提取物和葡萄籽提取物、碧萝芷提取物、银杏叶提取物或猴面包树提取物中的一种或多种):脂质材料:抗氧化剂:乳化剂:保护剂:醇类的重量比为8~20:15~50:0.5~2:0.2~2:0.5~5:0~1。所述前脂质体A粉末:(VA或丹参酮中的一种或两种):(孔雀石提取物、白茶提取物和葡萄籽提取物、碧萝芷提取物、银杏叶提取物或猴面包树提取物中的一种或多种)的重量比为3~6:0.5~1:1~2.5。
所含脂质材料为磷脂和胆固醇,磷脂:胆固醇的重量比为1~4:1。
所含抗氧剂为生育酚或生育酚乙酸酯中的一种或两种。
所含乳化剂为吐温80、异硬脂醇二聚甘油琥珀酸酯、聚甘油-3-二异硬脂酸酯或胆酸钠中的一种或多种,复配成与体系HLB值相匹配的乳化剂。
所含保护剂采用甘露醇、山梨醇、乳酸、海藻糖或蔗糖的一种或多种。
所述醇类为丙二醇。
其中,所述前脂质体A粉末的制备方法包括如下步骤:
S1.将脂质材料、硫辛酸、乳化剂、抗氧化剂和醇类溶解于乙醇中得溶液1,向溶液1中加入适量水,充分搅拌并均质后得Ⅰ相;
S2.将保护剂和谷胱甘肽或棕榈酰寡肽中的一种或两种溶解于磷酸缓冲液中,混合均匀得Ⅱ相;
S3.将Ⅱ相缓慢加入到Ⅰ相中,边加入边超声,加入完毕再过滤制备得到脂质体A,脂质体A经冷冻干燥即得前脂质体A粉末。其中,硫辛酸可部分用VE代替。
优选地,S1所述脂质材料、硫辛酸、乳化剂和抗氧化剂的重量总和:乙醇:水的重量比为1:4~8:3~5;S3所述Ⅰ相:Ⅱ相的重量比为1~2:1。
优选地,在前脂质体A的制备过程中硫辛酸+谷胱甘肽或棕榈酰寡肽中的一种或两种:脂质材料:抗氧化剂:保护剂:乳化剂:醇类的重量比为5~15:15~50:0.5~2:0.5~5:0.2~1.5:0~1.5。其中,硫辛酸:谷胱甘肽或棕榈酰寡肽中的一种或两种的重量比为1~5:0.1~10。
所述脂质材料为磷脂和胆固醇,磷脂:胆固醇的重量比为1~4:1。
所述抗氧剂采用的是生育酚或生育酚乙酸酯中的一种或两种。
所含乳化剂为吐温80、异硬脂醇二聚甘油琥珀酸酯、聚甘油-3-二异硬脂酸酯或胆酸钠中的一种或多种,复配成与体系HLB值相匹配的乳化剂。
所含保护剂采用甘露醇、山梨醇、乳酸、海藻糖或蔗糖的一种或多种。
所述醇类为丙二醇。
通过本发明包裹模式得到的抗衰老制剂在使用的时候,最主要的纸质体结构形式为:从外到内,最外层是脂质体壁材,壁材中包裹了VA或丹参酮中的一种或两种活性成分,接下来芯材,芯材中包裹了前脂质体A和水溶性活性成分,水溶性活性成分为孔雀石提取物、白茶提取物和银杏叶提取物、葡萄籽提取物、碧萝芷提取物或猴面包树提取物中的一种或多种的活性成分。在前脂质体A中,前脂质体A的壁材中含有硫辛酸,芯材中包裹了水溶性的谷胱甘肽或棕榈酰寡肽中的一种或两种活性成分,最主要的纸质体结构形式如图1所示。当然在制备的抗衰制剂中除了上述脂质体存在形式外,还存在少量单室脂质体(单室脂质体即为未被包裹的前纸质体A),及少量未被包裹的活性成分和其他成分等。
一种化妆品,在化妆品中的添加用量为5~10%重量百分比的如上所述的抗衰老制剂。
本发明的有益效果是:
1、本发明通过特殊的包裹方式,
最主要的纸质体结构形式为:从外到内,最外层是脂质体壁材,壁材中包裹了VA或丹参酮中的一种或两种活性成分,接下来芯材,芯材中包裹了前脂质体A和水溶性活性成分,水溶性活性成分为孔雀石提取物、白茶提取物和银杏叶提取物、葡萄籽提取物、碧萝芷提取物或猴面包树提取物中的一种或多种的活性成分。在前脂质体A中,前脂质体A的壁材中含有硫辛酸,芯材中包裹了水溶性的谷胱甘肽或棕榈酰寡肽中的一种或两种活性成分,最主要的纸质体结构形式如图1所示。当然在制备的抗衰制剂中除了上述脂质体存在形式外,还存在少量单室脂质体(单室脂质体即为未被包裹的前纸质体A),及少量未被包裹的活性成分和其他成分等。
2、本发明主要通过上述主要脂质体多层包裹技术发挥作用,将抗衰老制剂添加到化妆品中,大部分柔性的脂质体穿透或进入角质层,最外面的壁材首先破裂,壁材中的油溶性的VA、丹参酮等将最早发挥功效,维A酸能够促进上皮细胞增生、分化、角质溶解等代谢,健全皮肤角质层组织、改善皮肤的粗糙、干燥状态,并具有抗菌作用。丹参酮可以抑制低密度蛋白的氧化、抑制脂质代谢酶活性、改善脂质代谢过程,保护内皮细胞、改善血液代谢等功效,两者或一种能改善角质层并具有抗菌抗敏的作用。接下来是第一次水溶性活性成分的释放,该水溶性成分主要是孔雀石提取物、白茶提取物、银杏叶提取物、葡萄籽提取液、碧萝芷提取物、猴面包树提取物中的一种或多种,孔雀石提取物主要是在细胞间质中通过促进胶原蛋白之间的键合,此外作为信号因子刺激机体内抗氧化活性酶的产生,间接发挥抗氧化及清除自由基作用,白茶提取物及银杏提取物在细胞间质中发挥抗氧化、抗炎、吸收紫外线等作用,葡萄籽提取液及碧萝芷提取物也主要发挥抗氧化清除自由基等作用,猴面包树提取物主要为多糖类物质,能更好的保护角质层细胞的完整性,弹性,蓄水性等,上述可溶性活性成分首先在角质层,及角质层下面的细胞间质中释放,主要作用是抗菌、抗炎、抗紫外线、保护角质层细胞、保护及促进胶原蛋白的作用,当然部分水溶性成分能进一步向下迁移,通过主动或被动吸收进入到基地细胞中,进一步发挥相关作用;随着脂质体最外层壁材的破裂和相关活性成分的释放,被包裹的较小的前脂质体A在外一层脂质体的保护下进一步向皮肤底层迁徙,该部分脂质体部分能进入到基底层细胞中,其中的活性成分硫辛酸、VE、谷胱甘肽、棕榈酰寡肽中的一种或多种能进入到细胞中,参与到细胞内的自由基的清除、抗氧化、激活抗氧化酶、促进胶原生成等,发挥抗衰作用。
3、本发明所述抗衰老制剂的包裹模式是发明人综合考虑各抗衰老活性成分的作用机理、细胞衰老代谢过程间的复杂关系,创造性地探索出的一种新的模式,这种新的包裹模式获得了一种意想不到的技术效果。按照这种包裹模式,各抗衰老活性成分可以先后释放出来,在细胞特点的代谢周期及时起到抗衰老作用,这样的释放模式,既可以起到保护活性成分稳定性和溶剂性的作用,同时,能从根本上起到抗衰老作用,抗衰老效果显著并持久。
综上所述,本发明所述抗衰老制剂,通过活性成分分阶段的释放作用,在不同的位置发挥立体抗衰老的作用。
说明书附图
图1.本发明抗衰老制剂中主要形式的纸质体B的结构示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明,本发明采用的试剂、设备为本技术领域常规试剂和设备。
实施例1
一种抗衰老制剂,通过以下方法制备得到:
S1前脂质体A粉末的制备:按重量份数计,前脂质体A粉末含有如下各组分:
制备方法:(1)Ⅰ相制备:将脂质材料(磷脂+胆固醇)、油溶性活性成分(硫辛酸)、乳化剂(吐温80+异硬脂醇二聚甘油琥珀酸酯)、抗氧化剂(生育酚)和醇类(丙二醇)充分混合,再溶解到乙醇溶剂中得溶液1,向溶液1中加入适量水,充分搅拌并均质得Ⅰ相,其中(脂质材料+活性成分+乳化剂+抗氧化剂+醇类):乙醇:水的重量比为1:6:4;(2)Ⅱ相制备:将水溶性活性成分(棕榈酰寡肽)及保护剂(甘露醇)溶解于磷酸缓冲液(pH6.4)中,充分混合均匀得Ⅱ相;(3)将Ⅱ相缓慢加入到Ⅰ相中,边加入边超声,其中Ⅰ相:Ⅱ相的重量比为2:1,加入完毕,经0.22um超滤膜高压挤出过滤得滤液A。将滤液A经冷冻干燥(-20℃10h,-10℃8h,-4℃5h,25℃2h,真空度小于0.1MPa),得到前脂质体A粉末。
S2.脂质体B的制备:
按重量份数计,所述脂质体B含有如下成分:
所述脂质体B的制备方法为:(1)称取脂质材料(磷脂+胆固醇)、油溶性活性成分(VA)、乳化剂(吐温80+甘油硬脂酸酯柠檬酯)和抗氧剂(生育酚+生育酚乙酸酯)充分溶解于乙醇溶剂中,(脂质材料+油溶性活性成分+抗氧化剂+乳化剂):乙醇的重量比为1:3,于60℃下水浴溶解,充分搅拌直到完全溶解得类脂质溶液T1;(2)取一定质量的过200目筛的保护剂粉末(甘露醇+蔗糖),前脂质体A粉末、水溶性活性成分(孔雀石提取物、白茶提取物、碧萝芷提取物)与适量磷酸缓冲液(pH6.4)混匀后得溶液T2;(3)将溶液T2与类脂质溶液T1充分高速搅拌混合均匀(T1:T2的重量比为1:20),经5um滤膜挤出过滤得滤液B。将滤液B于-20℃预冷12h,冷冻干燥(-20℃10h,-10℃8h,-4℃5h,25℃2h,真空度小于0.1MPa),压盖封口即得脂质体B粉末,该脂质体B粉末即为抗衰老制剂。
实施例2
一种抗衰老制剂,通过以下方法制备得到:
S1前脂质体A粉末的制备:按重量份数计,前脂质体A粉末含有如下各组分:
制备方法:(1)Ⅰ相制备:将脂质材料(磷脂+胆固醇)、油溶性活性成分(硫辛酸+VE)、乳化剂(吐温80+聚甘油-3-二异硬脂酸酯)、抗氧化剂(生育酚乙酸酯)和醇类(丙二醇)充分混合,再溶解到乙醇溶剂中的溶液1,向溶液1中加入适量水,充分搅拌并均质得Ⅰ相,其中(脂质材料+活性成分+乳化剂+抗氧化剂+醇类):乙醇:水的重量比为1:8:5;(2)Ⅱ相制备:将水溶性活性成分(谷胱甘肽)及保护剂(甘露醇+海藻糖)溶解于磷酸缓冲液(pH6.4)中,充分混合均匀得Ⅱ相;(3)将Ⅱ相缓慢加入到Ⅰ相中,边加入边超声,其中Ⅰ相:Ⅱ相的重量比为2:1,加入完毕,经0.22um超滤膜高压挤出过滤得滤液A。将滤液A经冷冻干燥(-20℃10h,-10℃8h,-4℃5h,25℃2h,真空度小于0.1MPa),得到前脂质体A粉末。
S2.脂质体B的制备:按重量份数计,所述脂质体B含有如下成分:
所述脂质体B的制备方法为:(1)称取脂质材料(磷脂+胆固醇)、油溶性活性成分(丹参酮)、乳化剂(吐温80)和抗氧剂(生育酚)充分溶解于乙醇溶剂中,(脂质材料+油溶性活性成分+抗氧化剂+乳化剂):乙醇的重量比为1:4,于60℃下水浴溶解,充分搅拌直到完全溶解得类脂质溶液T1;(2)取一定质量的过200目筛的保护剂粉末(甘露醇+蔗糖+乳酸),前脂质体A粉末、水溶性活性成分(孔雀石提取物、白茶提取物、碧萝芷提取物+猴面包树提取物)与适量磷酸缓冲液(pH6.4)混匀后得溶液T2;(3)将溶液T2与类脂质溶液T1充分高速搅拌混合均匀得溶液B(T1:T2的重量比为1:25),经5um滤膜挤出过滤得滤液B。将滤液B于-20℃预冷12h,冷冻干燥(-20℃10h,-10℃8h,-4℃5h,25℃2h,真空度小于0.1MPa),压盖封口即得脂质体B粉末,该脂质体B粉末即为本发明抗衰老制剂。
实施例3
一种抗衰老制剂,通过以下方法制备得到:
S1前脂质体A粉末的制备:按重量份数计,前脂质体A粉末含有如下各组分:
制备方法:(1)Ⅰ相制备:将脂质材料(磷脂+胆固醇)、油溶性活性成分(硫辛酸)、乳化剂(吐温80+聚甘油-3-二异硬脂酸酯+胆酸钠)、抗氧化剂(生育酚乙酸酯)和醇类(丙二醇)充分混合,再溶解到乙醇溶剂中得溶液1,向溶液1中加入适量水,充分搅拌并均质得Ⅰ相,其中(脂质材料+活性成分+乳化剂+抗氧化剂+醇类):乙醇:水的重量比为1:4:3;(2)Ⅱ相制备:将水溶性活性成分(谷胱甘肽+棕榈酰寡肽)及保护剂(甘露醇)溶解于磷酸缓冲液(pH6.4)中,充分混合均匀得Ⅱ相;(3)将Ⅱ相缓慢加入到Ⅰ相中,边加入边超声,其中Ⅰ相:Ⅱ相的重量比为2:1,加入完毕,经0.22um超滤膜高压挤出过滤得滤液A。将滤液A经冷冻干燥(-20℃10h,-10℃8h,-4℃5h,25℃2h,真空度小于0.1MPa),得到前脂质体A粉末。
S2.脂质体B的制备:按重量份数计,所述脂质体B含有如下成分:
所述脂质体B的制备方法为:(1)称取脂质材料(磷脂+胆固醇)、油溶性活性成分(丹参酮+VA)、乳化剂(吐温80+甘油硬脂酸酯柠檬酯+胆酸钠)、醇类(丙二醇)和抗氧剂(生育酚)充分溶解于乙醇溶剂中,(脂质材料+油溶性活性成分+抗氧化剂+乳化剂+醇类):乙醇的重量比为1:5,于60℃下水浴溶解,充分搅拌直到完全溶解得类脂质溶液T1;(2)取一定质量的过200目筛的保护剂粉末(甘露醇+海藻糖),前脂质体A粉末、水溶性活性成分(孔雀石提取物、白茶提取物、银杏叶提取物+猴面包树提取物)与适量磷酸缓冲液(pH6.4)混匀后得溶液T2;(3)将溶液T2与类脂质溶液T1充分高速搅拌混合均匀得溶液B(T1:T2的重量比为1:30),经5um滤膜挤出过滤得滤液B。将滤液B于-20℃预冷12h,冷冻干燥(-20℃10h,-10℃8h,-4℃5h,25℃2h,真空度小于0.1MPa),压盖封口即得脂质体B粉末,该脂质体B粉末即为抗衰老制剂。
对比例1
一种抗衰老制剂,通过以下方法制备得到:
S1前脂质体A粉末的制备:按重量份数计,前脂质体A粉末含有如下各组分:
制备方法:(1)Ⅰ相制备:将脂质材料(磷脂+胆固醇)、油溶性活性成分(丹参酮+VA)、乳化剂(吐温80+聚甘油-3-二异硬脂酸酯)、抗氧化剂(生育酚乙酸酯)和醇类(丙二醇)充分混合,再溶解到乙醇溶剂中得溶液1,向溶液1中加入适量水,充分搅拌并均质得Ⅰ相,其中(脂质材料+活性成分+乳化剂+抗氧化剂+醇类):乙醇:水的重量比为1:4:3;(2)Ⅱ相制备:将水溶性活性成分(孔雀石提取物、白茶提取物、银杏叶提取物+猴面包树提取物)及保护剂(甘露醇)溶解于磷酸缓冲液(pH6.4)中,充分混合均匀得Ⅱ相;(3)将Ⅱ相缓慢加入到Ⅰ相中,边加入边超声,其中Ⅰ相:Ⅱ相的重量比为2:1,加入完毕,经0.22um超滤膜高压挤出过滤得滤液A。将滤液A经冷冻干燥(-20℃10h,-10℃8h,-4℃5h,25℃2h,真空度小于0.1MPa),得到前脂质体A粉末。
S2.脂质体B的制备:按重量份数计,所述脂质体B含有如下成分:
所述脂质体B的制备方法为:(1)称取脂质材料(磷脂+胆固醇)、油溶性活性成分(硫辛酸)、乳化剂(吐温80+甘油硬脂酸酯柠檬酯)、醇类(丙二醇)和抗氧剂(生育酚)充分溶解于乙醇溶剂中,(脂质材料+油溶性活性成分+抗氧化剂+乳化剂+醇类):乙醇的重量比为1:5,于60℃下水浴溶解,充分搅拌直到完全溶解得类脂质溶液T1;(2)取一定质量的过200目筛的保护剂粉末(甘露醇+海藻糖),前脂质体A粉末、水溶性活性成分(谷胱甘肽+棕榈酰寡肽)与适量磷酸缓冲液(pH6.4)混匀后得溶液T2;(3)将溶液T2与类脂质溶液T1充分高速搅拌混合均匀的溶液B(T1:T2的重量比为1:30),经5um滤膜挤出过滤得滤液B。将滤液B于-20℃预冷12h,冷冻干燥(-20℃10h,-10℃8h,-4℃5h,25℃2h,真空度小于0.1MPa),压盖封口即得脂质体B粉末,该脂质体B粉末即本发明所述抗衰老制剂。
对比例2
一种抗衰老制剂,通过以下方法制备得到。本实施例所述的抗衰老制剂是将所有的水溶性抗衰老活性成分和所有的油溶性抗衰老活性成分同时包裹在同一个脂质体腔室内。
按重量份数计,所述抗衰老制剂含有如下各组分:
制备方法:(1)按上述配方称取脂质材料(磷脂+胆固醇)、油溶性抗衰老活性成分(硫辛酸+丹参酮+VA)、水溶性抗衰老成分(孔雀石提取液+白茶提取物+银杏叶提取物+猴面包树提取物+谷胱甘肽+棕榈酰寡肽)、乳化剂(吐温80+聚甘油-3-二异硬脂酸酯+甘油硬脂酸酯柠檬酯)、醇类(丙二醇)和抗氧化剂(生育酚+生育酚乙酸酯)充分溶解于乙醇溶剂中,于60℃下水浴溶解,充分搅拌直到完全溶解得类脂质溶液T1;S2.取一定质量的过200目筛的甘露醇和海藻糖粉末,与适量磷酸缓冲液(pH6.4)混匀后得溶液T2;S3.将溶液T2与类脂质溶液T1充分搅拌混合均匀(T1:T2=1:30),并进行均质处理得溶液B,经0.22um超滤膜高压挤出过滤得滤液B。将滤液B于-20℃预冷12h,冷冻干燥(-20℃10h,-10℃8h,-4℃5h,25℃2h,真空度小于0.1MPa),压盖封口即得脂质体B粉末,该粉末即为抗衰老制剂。
实施例4抗衰老组合物实验报告如下:
一、体外评价
1、试验目的:与市售常用抗衰剂进行清除自由基能力测定的比较。
2、试验仪器与试剂:分光光度计SpectronicGENESYS-5,美国Thermo公司;其他试剂为常规试剂;比较本发明实施例1~3抗衰老组合物(6%)、本发明对比例1和对比例2(6%)、微生物C(3%)、维生素E(3%)、芦丁(5%)的抗氧化能力。
3、试验方法
清除DPPH自由基能力的测定:依次将3mLpH6.8磷酸缓冲液,4mL、0.4mmol/LDPPH无水乙醇溶液,0.2mL待测样品加入到10mL离心管中充分混匀,30min后,离心10min(8000r/min),取上清液,在516nm处测定吸光度值,平行操作3次取平均值,样品对DPPH自由基的清除率=[1-(A1-A2)/A3]。式中A1为加样品反应后DPPH溶液的吸光度值,A2为不加DPPH(用无水乙醇代替)只加样品溶液的吸光值,A3为不加样品只加DPPH及水溶液的吸光值。
清除超氧阴离子自由基能力的测定:配制pH值为8.20的缓冲体系(Tris-HCl-EDTA)。在10mL离心管中加入待测样品0.6mL,加入5.2mL缓冲液,用移液管加入0.045mol/L邻苯三酚溶液0.2mL,迅速摇匀,等待反应5分钟(时间必须精确)后迅速于干燥比色皿中,在325nm处测吸光度值,记为A0,10min后再测记为A4。以蒸馏水代替样品测定的吸光值分别记为B0和B4。平行操作3次取平均值,样品对超氧阴离子的抑制率=[(B4-B0)-(A4-A0)]/(B4-B0)。
清除羟自由基能力的测定:分别将1mL、0.4mmol/L结晶紫,3mL、0.2mol/LpH7.4磷酸缓冲液,1mL、0.001mol/LFeSO4溶液,1mL待测样品,加入10mL离心管中,最后加1mL30%H2O2启动反应,于室温下反应1h后12000r/min离心5min,取上清液在510nm下测定吸光值记为C,用蒸馏水代替样品时的吸光值记为C1,用蒸馏水代替样品和H2O2时的吸光值记为C2。平行操作3次取平均值,样品对羟自由基的清除率=(C-C1)/(C2-C1)。
4.试验结果
表1清除DPPH自由基能力的测定结果
*P<0.5,**P<0.01,与芦丁比较
表2清除超氧阴离子自由基能力的测定结果
*P<0.5,**P<0.01,与芦丁比较
表3清除羟自由基能力的测定结果
*P<0.5,**P<0.01,与芦丁比较
从皮肤衰老的机制可知,皮肤衰老与体内抗氧化机能减弱、自由基增多有关。自由基可以从多方面对皮肤造成损伤,从而加速皮肤的衰老,因此,抗衰老产品是否具有抗衰老作用可由其对自由基的清除、抑制效果来判定。自由基的种类繁多,抗衰老产品应具有全面清除自由基的作用。由表1、表2、表3可知,本发明实施例1~3所述抗衰老组合物均具有较强的清除自由基和抗氧化能力,而采用两种典型的不同的包裹形式的脂质体在抗氧化及清除自由基方面也具有较优的性能。
二、人体皮肤刺激性试验
1.试验目的:对该发明抗衰老组合物的安全性进行检测。
2.试验方法:检测人体安全性的斑贴试验方法采用48h封闭式斑贴试验。分别称取该发明抗衰老组合物稀释水溶液0.020mL至斑试剂中,同时设置空白对照组,对照即为该化妆品的稀释剂。选取健康志愿者(在校学生)60名,年龄18~24,无过敏史。清洁受试者背部后,将加有该发明抗衰老组合物的斑试器用无刺激胶带贴敷于背部已选定位置,粘贴好后用手指轻压使之均匀贴于皮肤上,持续48h。嘱受试者48h内保持斑贴部位干燥,避免激烈运动、挠抓斑试部位、长时间日光照射等。48h后去除试器并做好标记,30min后等压痕消失在充足灯光下进行判定,并分别在72h和96h内进行回访观察。
表4皮肤不良反应分级标准
4、试验结果
表5实施例1所述抗衰老制剂的皮肤不良反应结果
反应程度 |
评分等级 |
例数 |
所占比率 |
- |
0 |
59 |
98.3% |
± |
1 |
1 |
1.7% |
+ |
2 |
0 |
0 |
++ |
3 |
0 |
0 |
+++ |
4 |
0 |
0 |
表6实施例2所述抗衰老制剂的皮肤不良反应结果
反应程度 |
评分等级 |
例数 |
所占比率 |
- |
0 |
60 |
100% |
± |
1 |
0 |
0 |
+ |
2 |
0 |
0 |
++ |
3 |
0 |
0 |
+++ |
4 |
0 |
0 |
表7实施例3所述抗衰老制剂的皮肤不良反应结果
反应程度 |
评分等级 |
例数 |
所占比率 |
- |
0 |
59 |
98.3% |
± |
1 |
1 |
1.7% |
+ |
2 |
0 |
0 |
++ |
3 |
0 |
0 |
+++ |
4 |
0 |
0 |
由表5、6和7结果可知,60例受试者中出现1级皮肤不良反应的人数为1例,其他受试者均为阴性反应,结果判定该发明抗衰老组合物对人体无不良反应。
三、抗衰老功效评价试验
1、试验目的:为验证该发明抗衰老组合物的抗衰老功效性,进行人体试验。
2、试验仪器:分光光度计SpectronicGENESYS-5,皮肤弹性测试仪CutometerMPA,皮肤水分流失(TEWL)测试探头ProbeMexameter。
3、试验原理:选取健康志愿者70名,年龄25~40,无过敏史。
试验前准备:将受试者分为七组,每组受试者左臂分别涂抹添加发明实施例1、2、3抗衰老制剂、本发明对比例1、对比例2所述抗衰老制剂、及维生素E、芦丁的抗衰老霜,实施例1、2、3和对比例1、对比例2抗衰老制剂添加量为6%;维生素E、芦丁添加量分别为3%和5%
涂抹方法:受试者连续使用受试产品30天,每天早晚洗漱后涂于左前臂臂弯处。涂抹量以略见涂抹层即可。右前臂臂弯处涂抹不添加抗衰成分的霜,作为对照用。
测试部位:受试者左、右前臂臂弯处涂抹样品部位,连续测试6次,取平均值。
测试时间:使用受试产品前1天(记为0天),以及在连续使用10天、20天,30天后测量表皮更新速率、皮肤弹性、经皮水分流失量(TEWL)。将所使用的抗衰霜放置六个月后再次使用,连续使用30天后再次测量表皮更新速率、皮肤弹性、经皮水分流失量(TEWL)。
抗衰老霜配方:
C相三乙醇胺 0.2
氮酮/PEG40氢化蓖麻油 1.0
抗衰老制剂/维生素E/芦丁6/3/5
抗衰老霜制备工艺:将A相分散后加入到B相中,均质10min,降温至50℃以下后,加入C相,温和搅拌。
测试方法
皮肤弹性测定:标记测试部位,将探头垂直轻压于被测皮肤表面进行测试。弹性参数采用比值,代表皮肤形变后恢复到最初位置的能力。比值越接近1,皮肤弹性越好。R2:无负压时皮肤的回弹量与有负压时的最大拉伸量之比,R5:皮肤测试的第一次循环过程中皮肤恢复过程的弹性部分与加负压过程的弹性部分之比,R7:皮肤测试的第一次循环过程中皮肤恢复过程的弹性部分与这次循环过程中皮肤的最大拉伸量之比。
表皮更新速率测定:丹磺酰氯法简便可行、重复性好且对人体安全,本次试验有70名受试者,无一例因丹磺酰氯染色而引起皮肤的过敏或刺激反应;故本试验采用此丹磺酰氯法来测定表皮的更新速率。丹磺酰氯是一种蛋白质荧光标记物,特别对纤维性蛋白有很高的亲和性;角蛋白是一种不溶性纤维性蛋白,它是角质层细胞的基本骨架,当表皮用丹磺酰氯染色时,丹磺酰氯可与角蛋白牢固结合在一起,待荧光消失的时间即是整个角质层脱落同时被表皮新产生、未被染上丹磺酰氯的细胞所取代的时间,也即表皮细胞更新时间。具体操作方法如下:
丹磺酰氯使用前用液体石蜡配制成5%使用液。表皮角质层染色和观察:据文献报道,用丹磺酰氯对受试者皮肤进行荧光染色:将纱布剪成lcm2大小,涂满丹磺酰氯溶液,然后平贴在已选定的受试部位,上覆玻璃红,用胶带固定。24h后除去丹磺酰氯斑贴物,用水洗去过量的染液。以后每天按盲法专人在紫外灯(300nn~400nm)下检测荧光消退情况。五组受试者分别使用添加该发明实施例1、2、3抗衰老组合物、维生素E、芦丁的抗衰老霜,右侧涂抹不添加抗衰成分的霜作对照。
经皮水分流失量(TEWL)测定:
测试条件:测量环境为一个空气流动相对稳定,室温23±2℃,湿度50±10%的房间内;要求受试者清洁测试部位后静息20~25分钟以确保受试者皮肤温度与室温相对平衡稳定。
方法:开机后预热15min,并进行校准和零点校准,测量开始3秒钟内将探头放于测量部位,仪器发出响声表明测量开始,1~2min左右后仪器再次发出响
声提示测量值稳定。测量单位为g/m2h。
4、试验结果
皮肤弹性测定结果:五组受试者分别使用添加该发明实施例1、2、3抗衰老
组合物、维生素E、芦丁的抗衰霜,均未出现不良反应,试验结果如下:
表8使用添加实施例1抗衰老制剂的抗衰霜不同时间后皮肤弹性比较
与使用前比较,*P<0.5,**P<0.01
表9使用添加实施例2抗衰老制剂的抗衰霜不同时间后皮肤弹性比较
与使用前比较,*P<0.5,**P<0.01
表10使用添加实施例3抗衰老制剂的抗衰霜不同时间后皮肤弹性比较
与使用前比较,*P<0.5,**P<0.01
表11使用添加对比例1抗衰老制剂的抗衰霜不同时间后皮肤弹性比较
与使用前比较,*P<0.5,**P<0.01
表12使用添加对比例2抗衰老制剂的抗衰霜不同时间后皮肤弹性比较
与使用前比较,*P<0.5,**P<0.01
表13使用添加维生素E的抗衰霜不同时间后皮肤弹性比较
与使用前比较,*P<0.5,**P<0.01
表14使用添加芦丁的抗衰霜不同时间后皮肤弹性比较
与使用前比较,*P<0.5,**P<0.01
由表8可知,使用添加实施例1抗衰老组合物的抗衰霜后与使用前对比,使用20天后R2、R5、R7值表现出显著差异性增大,表明使用添加实施例1抗衰老组合物的抗衰霜后皮肤弹性有明显改善;将所使用的抗衰霜放置六个月后再次使用,连续使用30天后再次测量皮肤弹性变化,结果表明皮肤弹性有明显改善。分别使用添加实施例2、3抗衰老组合物、对比例1、对比例2和维生素E、芦丁的抗衰霜后皮肤弹性测量值如表9、10、11、12、13、14,可知,均表现上述类似的结果,并且实施例2、3抗衰老组合物的效果优于维生素E和芦丁,采用本发明专利中提到的包裹次序及方式的组合物的效果要优于采用其他两种典型包裹方式。
同时将护肤霜放置6个月后使用表明,该抗衰老组合物在延缓皮肤衰老方面具有一定的功效性及长效性,即采用脂质体包裹形式能减缓活性成分的衰减和变性。
表皮更新速率测定结果:
表15使用添加实施例1抗衰老组合物的抗衰霜后丹磺酰氯荧光消退时间变化
T1为荧光消退时间;W1为增快速率,W1(%)=(0天消退时间-实验组时间)/0天消退时间x100%
表16使用添加实施例2抗衰老组合物的抗衰霜后丹磺酰氯荧光消退时间变化
T2为荧光消退时间;W2为增快速率,W2(%)=(0天消退时间-实验组时间)/0天消退时间x100%
表17使用添加实施例3抗衰老组合物的抗衰霜后丹磺酰氯荧光消退时间变化
T3为荧光消退时间;W3为增快速率,W3(%)=(0天消退时间-实验组时间)/0天消退时间x100%
表18使用添加对比例1抗衰老制剂的抗衰霜后丹磺酰氯荧光消退时间变化
T3为荧光消退时间;W3为增快速率,W3(%)=(0天消退时间-实验组时间)/0天消退时间x100%
表19使用添加对比例2抗衰老组合物的抗衰霜后丹磺酰氯荧光消退时间变化
T3为荧光消退时间;W3为增快速率,W3(%)=(0天消退时间-实验组时间)/0天消退时间x100%
表20使用添加维生素E的抗衰霜后丹磺酰氯荧光消退时间变化
T4为荧光消退时间;W4为增快速率,W4(%)=(0天消退时间-实验组时间)/0天消退时间x100%
表21使用添加芦丁的抗衰霜后丹磺酰氯荧光消退时间变化
T5为荧光消退时间;W5为增快速率,W5(%)=(0天消退时间-实验组时间)/0天消退时间x100%
由表15可知,使用添加实施例1抗衰老组合物的抗衰霜后与使用前对比,结果表明可加速丹磺酰氯荧光消退时间,即使用添加实施例1抗衰老组合物的抗衰霜后皮肤细胞的更新速率明显增加;由表16、17、18、19、20、21也得出类似的结果,随着抗衰老组合物活性成分比重的增大,皮肤细胞的更新速率增大,且随着使用时间的增加更新速率渐趋平缓;抗衰老组合物的表皮更新速率高于维生素E和芦丁,以上结果表明,该发明的抗衰老组合物能够有效、安全的促使皮肤细胞的更新;在活性成分含量接近最优的情况下,而改变脂质体包裹形式的对比例1及对比例2,其对应表皮跟新速率反而较弱。在间隔6个月使用后,采用
脂质体包裹的复合抗衰剂仍具有较高的活性,且采用本发明提及的包裹形式优于
对比例1及对比例2中的包裹形式,而对比例中的维生素E、芦丁的抗衰活性则
出现降低。
经皮水分流失量(TEWL)测定结果:
表22使用添加实施例1抗衰老制剂的抗衰霜后皮肤TEWL值变化
组别 |
指标 |
0天 |
10天 |
20天 |
30天 |
隔六月,30天 |
实施例1 |
TEWL值 |
19.16±0.56 |
19.22±0.48 |
18.91±0.69 |
17.22±0.61* |
16.93±0.38* |
对照 |
TEWL值 |
19.23±0.65 |
19.11±0.36 |
18.98±0.47 |
18.48±0.65 |
18.79±0.78 |
*表示与0天相比差异显著
表23使用添加实施例2抗衰老制剂的抗衰霜后皮肤TEWL值变化
组别 |
指标 |
0天 |
10天 |
20天 |
30天 |
隔六月,30天 |
实施例2 |
TEWL值 |
19.79±0.32 |
18.87±0.68 |
17.11±0.56 |
15.63±0.49* |
15.28±0.58* |
对照 |
TEWL值 |
19.31±0.91 |
19.18±0.85 |
18.86±0.64 |
18.81±0.59 |
18.91±0.81 |
*表示与0天相比差异显著
表24使用添加实施例3抗衰老制剂的抗衰霜后皮肤TEWL值变化
组别 |
指标 |
0天 |
10天 |
20天 |
30天 |
隔六月,30天 |
实施例3 |
TEWL值 |
20.91±0.69 |
18.56±0.72 |
17.73±0.66 |
15.01±0.63* |
14.86±0.52* |
对照 |
TEWL值 |
18.83±0.81 |
18.96±0.46 |
18.27±0.53 |
18.32±0.61 |
18.21±0.64 |
*表示与0天相比差异显著
表25使用添加对比例1抗衰老制剂的抗衰霜后皮肤TEWL值变化
组别 |
指标 |
0天 |
10天 |
20天 |
30天 |
隔六月,30天 |
对比例1 |
TEWL值 |
19.18±0.55 |
19.10±0.56 |
18.76±0.62 |
17.52±0.51* |
17.93±0.38* |
对照 |
TEWL值 |
19.27±0.49 |
19.01±0.46 |
18.91±0.68 |
18.45±0.55 |
18.89±0.73 |
*表示与0天相比差异显著
表26使用添加对比例2抗衰老制剂的抗衰霜后皮肤TEWL值变化
组别 |
指标 |
0天 |
10天 |
20天 |
30天 |
隔六月,30天 |
对比例2 |
TEWL值 |
19.16±0.56 |
18.92±0.48 |
18.01±0.69 |
16.72±0.61* |
16.88±0.38* |
对照 |
TEWL值 |
19.13±0.60 |
18.91±0.36 |
18.88±0.77 |
18.58±0.45 |
18.87±0.65 |
*表示与0天相比差异显著
表27使用添加维生素E的抗衰霜后皮肤TEWL值变化
组别 |
指标 |
0天 |
10天 |
20天 |
30天 |
隔六月,30天 |
维生素E |
TEWL值 |
19.82±0.85 |
19.26±0.63 |
18.15±0.61 |
17.36±0.39 |
17.65±0.64 |
对照 |
TEWL值 |
18.92±0.67 |
18.68±0.52 |
18.73±0.72 |
18.28±0.67 |
18.06±0.49 |
*表示与0天相比差异显著
表28使用添加芦丁的抗衰霜后皮肤TEWL值变化
组照 |
指标 |
0天 |
10天 |
20天 |
30天 |
隔六月,30天 |
芦丁 |
TEWL值 |
19.94±0.59 |
19.31±0.67 |
18.58±0.76 |
18.15±0.63 |
18.23±0.78 |
对照 |
TEWL值 |
19.92±0.62 |
18.88±0.63 |
18.65±0.56 |
18.16±0.78 |
18.11±0.85 |
*表示与0天相比差异显著
TEWL值是判断皮肤角质层屏障功能好坏的常规指标,值越大,皮肤的屏障功能就越差,经皮肤散失的水分就越多,皮肤就越易干燥、缺水,越易受外界有害物质的伤害,最终加速皮肤衰老。
由表22可知,随着使用添加实施例1抗衰老组合物的抗衰霜时间的推移,皮肤的TEWL值总体呈降低趋势,表明该实施例1抗衰老组合物的抗衰霜具有增强皮肤屏障功能的作用。表23、24、25、26、27、28亦表现出同样的结果,并且抗衰老组合物的增强皮肤屏障功能的作用比维生素E和芦丁的能力强。而在较优的活性成分配比及含量的情况下,采用了不同的典型的包裹形式的对比例1及对比例2比实施例显示较弱的保水性,但是强于或接近芦丁和VE的保水性。
以上结果说明,该抗衰老组合物能够明显提高皮肤的屏障功能,增强皮肤的保水能力。
综合上述所有试验发现,采用本发明专利提及的包裹技术及活性成分配比所得的抗衰剂相对于现有技术中的常规抗衰剂具有较优的性能,且本发明中提及的包裹次序在皮肤的逐层释放上优于采取其他典型包裹形式。