CN103547270A

CN103547270A - 用于抑制肝癌复发、恶化或转移之医药组成物

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Publication number: CN103547270A
Application number: CN201180071058.XA
Authority: CN
Inventors: 张世忠; 赖冠郎
Original assignee: Medigen Biotechnology Corp
Current assignee: Medigen Biotechnology Corp
Priority date: 2011-06-09
Filing date: 2011-06-09
Publication date: 2014-01-29
Also published as: KR20140050605A; WO2012167434A1; CN107362168A; EP2722049A1; US20180215775A1; US20140135282A1; EP2722049A4; JP2014516058A

Abstract

本案提出一种用于抑制肝癌复发、恶化或转移的医药组合物，该医药组合物包含至少一通式(I)化合物及一医药上可接受的载体。

Description

用于抑制肝癌复发、恶化或转移之医药组成物技术领域

本发明是关于一种医药组合物，尤指一种用于抑制肝癌复发、恶化或转移的医药组合物。本发明另关于一种制备药物的方法，尤指一种制备供抑制肝癌复发、恶化或转移的药物的方法。背景技术

依据癌症国际杂志（International Journal of Cancer)的信息，肝癌 (Liver Cancer) 是全球发生率第五高的恶性肿瘤，肝癌大部份乃属肝细胞 (Hepatocellular Carcinoma, HCC)，约占所有肝癌患者的 70%~85%，目前多透过手术切除（Resection)、局部消融疗法（Local Ablation)及肝脏移植进行治疗，但仅对 15~20%的患者适用。虽然肝癌早期发现与治疗能提高存活率，但即使是接受手术切除的病人，往往在治疗后肝癌仍会复发。外科手术年报 (Annals of Surgery)的数据显示 60%的肝癌病患在手术后 12个月内会复发，而肝癌的微小转移（micro-metastasis)能在手术时透过灵敏的检测技术测得，其发现患者在术后一年时仍有 3(Γ40%的复发率。此外，手术后余留下来的病变肝组织亦有可能进一步重新形成肝癌。肝癌的复发将大幅缩短患者的整体存活期，因此，如何避免或延迟肝癌患者在接受手术治疗后再度复发，仍是一有待解决的大问题。

过去有许多试验在于寻找降低术后肝癌复发率的有效方式，例如动脉化学治疗 (trans- arterial chemotherapy)、类视色素 (retinoids)、辅助性干扰素 (adjuvant interferon) ^ 过继性免疫疗法 (adoptive immunotherapy) 及云力脉内放射性碘油 (intra-arterial radioactive lipiodol)等。虽然上述方法具有降低肝癌复发风险或提高患者存活率的潜力，却都未通过临床试验的验证，而尚未能成为肝癌术后辅助治疗的标准疗法，因此对于新药物或新治疗方法仍然有迫切的需求。

从肝癌形成的角度进行分析，肝癌具有高度血管化的特性，且其发展与血管新生因子（angiogenic factors)有很大的关联。包括研究血管新生的权威科学家 Judah Folkman在内的研究人员，已从学理上以及实验上指出抗血管新生药物合并其他疗法可以在癌症治疗上得到更好的效果（Christopher Rice, L Eric Huang. From antiangiogenesis to hypoxia: current research and future directions. Cancer Management and Research. 2011:3 9-16)。此外，细胞外基质（extracellular matrix, ECM)中的成分之一，硫酸乙酰肝素（heparan sulfate, HS)的降解已被证实为肿瘤的侵犯与转移的关键因素。参与此一降解过程的主要酶之一即为类肝素酶（heparanase)。

类肝素酶是一内源性葡萄糖醛酸酶，能降解细胞外基质中的硫酸乙酰肝素侧链，并且是惟一能降解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的内源性葡萄糖醛酸酶，其可在特定部位裂解硫酸乙酰肝素以促进肿瘤的浸润和转移。类肝素酶透过参与细胞外基质的降解、血管生长因子的释放以及血管重构等过程，在肿瘤转移与血管生成中产生关键影响。此外，硫酸乙酰肝素经过类肝素酶的裂解后会释放具有生物活性的血管生长因子于细胞外基质中，这些血管生长因子会促成血管生长进而促进癌细胞增生、转移与癌症的恶化。因此，抑制类肝素酶可能对抑制肿瘤生长及转移产生效果，类肝素酶的过量表现与否成为预防或治疗恶性肿瘤的重要目标。

过去的相关研究发现类肝素酶在许多类型的肿瘤中有较高程度的表现，且与致病过程的发展有所关联，导致许多研究报告是以抑制此一酶作为癌症治疗的策略，包括小分子药物、经化学修饰的天然物，以及中和性抗体 (neutralizing antibodies)的开发等等。

美国第 6， 143,730号专利是揭示一种硫酸化寡糖的制备和应用，该寡糖具有如通式 I: Rl -(Rx)n-R2的结构，其中 R1和 R2以及每个 Rx为单糖单元，其全部可相同或不同，相邻的单糖单元由 1→2、 1→3、 1→4及 /或 1→6糖苷键所连接，且 n为 1至 6 的整数，以及该寡糖作为抗血管生成、抗转移及 / 或抗发炎剂的用途。前述抗血管生成功效已经体外实验及临床试验数据佐证，而抗转移功效则仅有动物实验数据，皆未有人体临床试验数据验证。

综上所述，虽然目前已有部分用于降低肝癌复发风险或提高肝癌患者存活率的方法，却都未有足够的人体临床数据加以验证，因此，对具有安全性及有效性的新医药组合物及治疗方法的需求仍然存在。发明内容

就本案的一方面而言，本案提出一种用于抑制肝癌复发、恶化或转移的医药组合物，其包含一治疗有效量的至少一通式（I)化合物及一医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载体;

其中该通式（I)化合物的 n为 0至 3的整数，且有 3n+6或 3n+7个 R代表 S0₃H，其余 R皆代表 H。

根据上述构想，其中该通式（I)化合物中有 3n+7个 R代表 S0₃H者是为主要组分。

根据上述构想，其中该通式（I)化合物的 n为 2或 3且有 3n+7个 R代表 S0₃H 者是为主要组分。

根据上述构想，其中该通式（I)化合物的 n为 3且有 3n+7个 R代表 S0₃H者的相对含量为最高。

根据上述构想，其中该治疗有效量是介于每日 80 mg至每日 315 mg间。根据上述构想，其中该治疗有效量较佳是为每日 160 mg。

于本案所提出的医药组合物中，作为活性成分的通式（I)化合物是以钠盐形式存在与使用，惟亦可以其他医药上可接受的盐，如钙盐或胺盐的形式存在与使用。因此，本案医药组合物的活性成分是包括了通式（I)化合物的钠盐或其他医药上可接受的盐。

前述医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载体是包括溶剂、分散介质、填充剂、固体载体、水溶液、抗细菌剂、抗霉菌剂及延迟吸收剂或前述的类似物。除了与活性成份不兼容的传统介质或试剂外，本发明的医药组合物中是使用可相容的介质或试剂。前述本案所提出的医药组合物是可与至少一治疗方式合并用于抑制肝癌的复发、恶化或转移。前述治疗方式是包括栓塞治疗、标靶药物治疗、化学治疗、放射治疗及肝脏切除手术。

根据上述构想，本案医药组合物是用于降低肝癌患者的术后复发率或延长肝癌患者术后复发所需的时间。

就本案的另一方面而言，本案提出一种使用通式（I)化合物制备供抑制肝癌复发、恶化或转移的药物的方法，包括将一治疗有效量的通式（I)化合物与一医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载体相结合。

根据上述构想，该通式（I)化合物的 n为 0至 3的整数，且有 3n+6或 3n+7 个 R代表 S0₃H，其余 R皆代表 H。

根据上述构想，该医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载体是为水或以水为溶剂的溶液。

根据上述构想，该医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载体是为生理食盐水或葡萄糖水溶液。

本案得藉由以下图式与实施方式说明而更易于让在此领域具通常知识者了解本案的精神。附图说明

图 1是本案医药组合物的活性成分经 LC/ESI-FTMS分析的总离子色谱图

(Total i on chromatogram , TIC)。

图 2是试验终止时，对照组、投予剂量为每日 160mg本案医药组合物活性成分的试验组及投予剂量为每日 250mg本案医药组合物活性成分的试验组的受试者群体中，未复发肝癌人数及中途退出试验人数所占的比率。

图 3是比较对照组与投予剂量为每日 160mg本案医药组合物活性成分的试验组，随试验的进行（0至 48周），未复发肝癌人数占该组受试总人数比率的变化情形。具体实施方式

本案 "用于抑制肝癌复发、恶化或转移的医药组合物" 将可透过以下的实施例说明而让在此领域具通常知识者了解其创作精神，并可据以完成。然本案的实施并非由下列实施例而限制其实施型态。以下分就本案医药组合物的制备、确认及用途的实施方式分别说明于下。本案医药组合物的制备

本案医药组合物活性成分的原料是来自于酵母菌 Pichia holstii ，其制备主要可分为酵母菌培养与发酵、产物水解、纯化及磺化等步骤，分别叙述如下：

将菌株名为 NRRL Y-2448 的酵母菌 Pichia holstii 于有氧气且氮源受限制的培养基中培养，以右旋葡萄糖（D-glucose)作为碳源并提供过量的正磷酸盐（ortho- phosphate)，将产出细胞夕卜的磷酸甘露聚糖（phosphoman PS)，其包含多种多糖结构，并以此作为本案医药组合物活性成分的半合成 (Semi-synthesis)基本原料。磷酸甘露聚糖是由分子结构高度分枝且具有高分子量（约 5 X 106 ~ 39 X 106 Dalton)的憐酸甘露聚糖核（phosphomannan core, PC)所组成。 P. holstii 的培养、发酵方法及磷酸甘露聚糖的分离是依据 Jeanes, A. Pittsley, J. E. Watson, P. R. Dimler, R. J. Arch. Biochem. Biophys. 1961 92, 343 - 350 ¾ Bretthauer, R. K. Kaczorowski , G. J. Weise, M. J. Biochemistry 1973, 12, 1251 - 1256所揭示的信息。一般情况下的产率约为 400L的发酵规模可产出 20公斤的磷酸甘露聚糖粗产物。

在一较佳实施例中，磷酸甘露聚糖的水解反应是在 10CTC下实行 6至 10 小时，磷酸甘露聚糖的浓度约控制在 4(T50g/L之间。水解环境的 pH值介于 2.2〜2.5，以 1M的 HC1溶液作为催化剂并在 KC1的存在下进行水解。在水解反应的初始 1小时期间，当磷酸甘露聚糖渐与溶液混合时， pH值将稍微升高约至 3，因此必须再加入 1M的 HC1溶液以将酸碱值调整回 pH2.2~2.5。单次水解反应所处理的磷酸甘露聚糖约为 2.5公斤（湿重），水解后的产物包括分子量较低的寡糖磷酸盐级分 (oligosaccharide phosphate fraction, 0PF) , 将水解产物以 1M的 NaOH溶液进行中和，使酸碱值调整至 pH 9~9.5。

在一更佳实施例中，用于进行水解的溶液配制是将 600克的 KC1溶于 60L 水中，加入 1M的 HC1溶液至酸碱值调整为 pH 2.4，并将此溶液置于 75L的不锈钢反应容器中。将发酵所得的磷酸甘露聚糖粗产物（湿重 2.49公斤）经由反应容器的添加口分次加入至溶液中，并将混合后的溶液加热至 100°C，在剧烈搅拌状态下维持 7小时。反应环境的 pH值每小时检测一次，并在反应开始后 1小时加入 1M的 HC1使酸碱值调整回 pH 2.3。水解反应终止后，将水解产物冷却至室温并加入 1M的 NaOH，使酸碱值调整至 pH 9.5。

水解反应后的纯化步骤是利用分子孔径为 10, 000 Dalton 的滤膜 (nominal molecular weight cut off membrane , NMWC0 membrane)进行超过滤（ultrafiltration) , 水解产物中的寡糖磷酸盐级分、未磷酸化的寡糖及盐类将通过该滤膜，而分子量较高的磷酸甘露聚糖核则留置于滤膜上，从而使寡糖磷酸盐级分及未磷酸化的寡糖与磷酸甘露聚糖核相分离。前述分离过程是在渗滤（diafiltration)模式下以切流式（tangential)或扫流式（cross flow)过滤系统完成，此一系统能够透过提高可用滤膜面积及流速而轻易地增加处理量，其中滤膜的分子孔径较佳是介于 3， 000至 100， 000 Dalton间，而最佳则为 10， 000 Daltono

在一较佳实施例中，是将水解产物稀释至 70L 并置于一 150L 的不锈钢槽内，接着使用连续两组 Sartorius Hydrosart 10K (NMWC0 10， 000)滤膜匣 (每一滤膜匣的滤膜面积为 0.6 m²)所组成的超过滤系统，以八倍渗滤体积的纯水进行渗滤。前述渗滤的参数设定为：进气压力（inlet pressure)为 200 kPa, 排气压力（outlet pressure)为 150kPa，在渗滤过程中未能通过滤膜而被保留下的滞留物（retentate)的扫流流速 (cross flow rate)为 15· 6 L/min, 通透物（permeate)的流速则为 66~87 L/h/m² (16~22°C)。经过渗滤后的通透物（630L，导电度为 1.1 mS / cm)被分成六批以进行后续的离子交换色谱 (ion-exchange chromatography)。

接着进一步对前述的滤出物进行二次纯化，二次纯化是利用离子交换色谱法。在一较佳实施例中，离子交换色谱法是先使用 30L的 DEAE-Spherilose 管柱以 0.01M的 NH₄HC0₃溶液在流速为 1.5 L / min下达到平衡，接着将前述滤出物（每次约 100 L，共六次）由管柱上端加入，以 0.01M的 NH₄HC0₃溶液进行冲提直到流出物（effluent)的导电度在 0.2 mS / cm的基线以内时，中性级分（neutral fraction)则被冲提出。接下来使用 0.25M的 NH₄HC0₃溶液将寡糖磷酸盐级分冲提出，收集 1L的流出物进行高效液相色谱仪（HPLC)分析。将前述六次冲提所得的适当级分结合并以逆渗透法浓缩至 20L同时去除盐类。逆渗透是在渗滤模式下持续进行直到滤出物的导电度小于等于 0.2 mS I cm, 溶液再浓缩至最终的 6 L。所得产物进行冻干法（lyophilization)后，当中的寡糖磷酸盐级分将以白色、具吸湿性的粉末呈现，约 566克。产物经 HPLC 检测后纯度约 93%，足以在不须进一步纯化的情况下用于本案医药组合物的制备

前述的逆渗透步骤可将大量水解产物（每次水解约 5(T60 L)快速地减少至后续冻干法可处理的程度，同时也是后续提高产量的关键步骤。此外，逆渗透步骤还能移除级分中大量的无机盐类，从而得到仅含有少许无机盐类的高纯度终产物。

最后，将前述由酵母菌 Pichia holstii NRRL Y-2448 经培养、发酵、水解及纯化后所得的磷酸甘露聚糖产物进行磺化（sulfonation)，以得到本案医药组合物的活性成分。首先将前述纯化所得的磷酸甘露聚糖产物 478克与 10 L的二甲基甲酰胺（Dimethylformamide, DMF )混和，并加入 3.78公斤的三氧化硫-吡啶复合物（sulfur trioxide pyridine- complex)，在 25°C下樘拌混合三天，届时产物将以厚实的油状（thick oil) 物被分离出来。将二甲基甲酰胺抽干，并以 1 L的乙醇清洗残余物三次后将之溶于约 3L水中。接着在该溶液中加入 1M的 NaOH溶液约 5L以将酸碱值调整至 pH 9.5，以 3L的二氯甲烷（Dichloromethane)进行萃取三次以将释出的吡啶移除。水相（aqueous phase)部分以水进行稀释并通过炭过滤（charcoal filter, Cuno R53S)以脱色。将溶液以水稀释至 20L并以八倍体积的 1M NaCl溶液进行渗滤，再以纯水渗滤至滤出物的导电度小于 0.2 mS / cm。最后将该溶液以逆渗透法浓缩至 6L，并以孔径 0.2 μ ηι滤膜进行过滤，经冻干处理后得到白色、具吸湿性、无定形的固体物 760克，为本案医药组合物的活性成分。本案医药组合物的确认

本案医药组合物的活性成分所含的组分是经由液相色谱 /电洒法 -傅立叶变换质谱仪 (Liquid Chromatography / Electrospray Ionization - Fourier transform mass spectrometry, L /ESI- FTMS)进行分析与石角认，其检测分析条件描述如后。

高效液相色谱 (high performance liquid chromatography, HPIX)部分的条件设定：高效液相色谱系统为 Shimadzu LC-20ATvp Shimadzu LC-20ADvp pumps, Shimadzu SIL-20AC 自云力注射器 (Autosampler)以及 Shimadzu SCL-20A System Controller; 紫夕卜线检测器（UV Detector) Shimadzu SPD-20AV Detector并设定于波长 280 nm_; 数据系统 (Data System)为 Xcalibur 2.0.7；高效液相色谱管柱是使用 ACE3， C18-AR, 4.6 x 150 mm; 保护管柱（guard column)是使用 ACE3， C18, 3.0μ m, 3.2 x 10mm; 管柱温度为周围环境温度；自动注射器温度为 4°C; 流动相 A (mobile phase A)为含有 5mM二丁基醋酸铵（dibutyl ammonium acetate)且由水：甲醇体积比 8： 2所混合配置的溶液；流云力相 B (mobile phase B)为含有 5mM 二丁基醋酸按（dibutyl ammonium acetate)且由水：甲醇体积比 1:9所混合配置的溶液。冲提梯度表则如下表 1 所示：

表 1、高效液相色谱所使用的冲提梯度表（Gradient Table)。

质谱仪部分的条件设定为：质谱仪是采用 Thermo LTQ Orbitrap XL, 数据系统 (Data System)为 Xcalibur 2.0.7；离子化模式 (Ionization Mode)为电洒法的负离子模式；离子喷洒电压（Ion Spray Voltage)为 4.5kV; 毛细管温度（Capillary Temperature) 350°C，毛细管电压（Capillary Voltage) 为 -18V; 管透镜（Tube Lens)为 -100V，鞘流气体流速（Sheath Gas Flow)为 60单位，辅助气体流速 (Auxiliary Gas Flow)为 30单位，扫流气体流速 (Sweep Gas Flow)为 5单位；碰撞气体为氦气（Helium)。

经前述方法分析后，本案医药组合物的活性成分所含的组分呈现如下表

2o 表 2、本案医药组合物的活性成分所含组分及其结构、分子式及分子量。

如表 2所示，本案医药组合物的活性成分在排除同分异构物的情况下，包含组分 1至组分 8共八种组分。其基础结构是为由二至五个甘露糖（mannose) 单元透过 1→3及 /或 1→2糖苷键（glycos i di c bond)所连接而成的寡糖分子。进一步言之，除与末端糖单元是透过 1→2糖苷键连接外，其余糖单元间皆透过 1→3糖苷键相连接。若对应表 1 中的结构通式，当 n=0时即代表双糖、 n=l 时代表三糖、 n=2时代表四糖而 n=3时即代表五糖。

依据前述的基础结构，本案医药组合物活性成分的各组分在首个糖单元的 6号碳（C6)位置上的羟基（OH group) , 其 H被取代为 P03H2或其盐类，其余 3n+7个羟基中，则有 3n+6或 3n+7个羟基其 H被取代为磺基（S03H)或其盐类。若对应表 2中的结构通式，其中组分 1、组分 3、组分 5及组分 7是分别为有 3n+6个羟基其 H被取代为 S03H或其盐类的双糖、三糖、四糖及五糖，亦即除首个糖单元的 6号碳（C6)位置上的羟基外，仅有一羟基未被 S03H或其盐类所取代；而组分 2、组分 4、组分 6及组分 8是分别为有 3n+7个羟基其 H被取代为 S03H或其盐类的双糖、三糖、四糖及五糖，亦即除首个糖单元的 6号碳（C6)位置上的羟基外，所有羟基皆被取代为 S03H或其盐类。图 1是本案医药组合物的活性成分经 LC/ESI-FTMS分析的总离子色谱图 (Total i on chromatogram , TIC)。如图 1所示，本案医药组合物的活性成分中，组分 8及组分 6是为主要的组分，亦即通式（I)化合物中， n为 2或 3且有 3n+7个 R代表 S03H者是为主要组分。此外，图 1亦显示本案医药组合物的活性成分中，组分 8的相对含量为最高，亦即通式（I)化合物中， n为 3且有 3n+7个 R代表 S03H者的相对含量为最高。

由图 1亦可得知，本案医药组合物的活性成分中，除组分 1至组分 8夕卜，亦可能包含其他成分，如滞留时间 1. 86分钟、 9. 33分钟、 37. 75分钟及 40. 53 分钟所对应者。

依据前述 LC/ESI-FTMS的总离子色谱图分析结果所得的各组分数据，包括峰顶所对应的滞留时间（Apex Retent i on Time)、波峰面积、波峰面积所占比例、波峰高度及波峰高度所占比例如下表 3所示。表 3、本案医药组合物经 LC/ESI-FTMS分析后各组分的相关数据

由表 3数据中各组分波峰面积所占比例亦可得知，本案医药组合物的活性成分中，组分 8及组分 6是为主要的组分，该二组分波峰面积所占比例总合为 82. 2% ,亦即通式（I)化合物中 n为 2或 3且有 3n+7个 R代表 S03H者是为主要组分。此外，表 3亦显示本案医药组合物的活性成分中，组分 8的相对含量为最高，其波峰面积所占比例为 48. 26%，亦即通式（I)化合物中 n为 3 且有 3n+7个 R代表 S0₃H者的相对含量为最高。若以结构中羟基被取代为磺基（S0₃H)的情形加以区隔，由表 3的分析结果亦可得知，通式（I)化合物中，除首个糖单元的 6号碳（C6)位置上的羟基外，其余 3n+7个羟基皆完全被取代为磺基者，即组分 2、组分 4、组分 6及组分 8，其波峰面积加总所占的比例为 92. 01% ; 而通式（I)化合物中，其 3n+7个羟基中有 3n+6个羟基被取代为磺基者，即组分 1、组分 3、组分 5及组分 7，其波峰面积加总所占的比例为 7. 99%，足见本案医药组合物的活性成分中，是以 3n+7个羟基皆完全被取代为磺基者为主要组分。本案医药组合物的用途

本案的医药组合物目前是用于作为肝癌治疗过程中的辅助疗法，在一较佳实施例中，本案的医药组合物是用于抑制肝癌复发、恶化或转移；再进一步言之，本案医药组合物的临床功效是在于延长肝癌患者术后复发所需的时间，或降低肝癌患者的术后复发率。以下针对本案医药组合物的适用病症、药理作用、有效剂量、使用方法、药理试验方法及结果进行实施例说明，以证明本案医药组合物的实际医药用途。

本案医药组合物的适用病症为肝癌（L iver Cancer) , 其可与栓塞、标靶药物治疗、化学治疗、放射治疗或肝脏切除手术等治疗方式中的至少一种合并用于抑制肝癌的复发、恶化或转移。在一较佳实施例中，本案医药组合物是适用于接受肝脏切除手术（hepatec tomy)后的肝癌患者。本案医药组合物的药理作用是透过抑制类肝素酶及血管生长因子的活性，而抑制肝肿瘤转移与肝肿瘤血管新生，以达到抑制肝癌复发、恶化或转移的效果。在一较佳实施例中，本案医药组合物的安全性、初步有效性及有效剂量已透过人体临床试验而确认，且可有效延长肝癌患者术后复发所需的时间，或降低肝癌患者的术后复发率。该人体临床试验方法为一多试验机构（mul t i-center)、随机分派（randomi zed)且平行试验形式（paral l e l-group)的临床试验设计。

本案医药组合物在临床使用时的给药途径是采注射方式，因其水溶性高，因此可以水为溶剂。可使用的注射溶剂包括但不限于灭菌水、以灭菌水为溶剂的生理食盐水或葡萄糖水溶液等，此外亦不排除其他油性溶剂。在一较佳实施例中，是使用等张的生理食盐水（normal sal i ne)作为溶剂。本案医药组合物是配制为单位剂量的形式以便于施用及剂量的均一化。每单位剂量包含了定量的活性成分，该活性成分与一医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载体混合时，可提供预期的治疗效果。

本案医药组合物的活性成分在水中的溶解度大于 400 mg/ml，因此 160 mg 本案医药组合物的活性成分可完全溶解于 0. 4 ml水中。在一较佳实施例中，每一剂药物中是包含 215 mg本案医药组合物的活性成分及 1ml 的生理食盐水，混和溶解后的浓度为 200 mg/ml，从中取 0. 8 ml进行注射，等同于本案医药组合物的活性成分含量为 160 mg。

临床试验所使用的疗效及安全分析群体（eff i cacy / safety populat i on) 为意图治疗（Intent-to-treat , ITT)分析群体，意图治疗分析群体的定义为所有具试验资格且经随机分派的受试者均列入分析，然而未服用任何一剂试验用药或在随机分派后未具有任何纪录者则被排除于分析之外。

前述人体临床试验是将 172名接受过肝脏切除手术的肝癌患者随机分为三组，一组为未投药的无临床处置对照组（58 人），一组为每日投予剂量为 160mg本案医药组合物活性成分的试验组（57人），另一组为每日投予剂量为 250mg本案医药组合物活性成分的试验组（57人）。试验组的受试者在接受肝脏切除手术后的 4到 6周开始接受投药，投药以 4周为一个循环，在每个循环的前 3周当中，每周连续 4天以皮下注射方式给药，每个循环的第 4周则不投药。连续进行 9 个循环（共 36 周）后，接着 12 周的追踪期（fol low-up peri od) o 两组试验组的受试者在 36周的投药期间，每隔 4周进行例行的检査与追踪，在后续 12周的追踪期间则每隔 6周检査一次。对照组的受试者不投予对照药物或安慰剂，且对照组的受试者在总计 48周的受试期间内，固定每隔 6周进行一次例行检査与追踪。

在每个循环开始前，受试者须进行医病史的确认、理学检査（phys i cal examinat i on) ^ 合并用药 (concomi tant medi cat i on)情形确认，以及包括 α 胎儿蛋白（ a -fe toprote in , AFP)在内的例行实验检査。每月对所有受试者进行腹部超音波检测。在第 4个循环及第 7个循环的首日进行腹部断层扫瞄，另外若受试者被怀疑有肝癌复发的情况时亦须进行腹部断层扫瞄。胸部 X光检査、骨骼扫描及脑部断层扫描亦于第 4个循环及第 7个循环的首日进行以监测肝脏夕卜的肿瘤复发情形（extra— hepat i c tumor recurrence)。

血清中的 α 胎儿蛋白及腹部超音波检査是例行地作为肝脏内肿瘤复发的初步评估依据。当 α 胎儿蛋白浓度升高或腹部超音波检査结果显示可能有新的肝肿瘤形成时，则须进行腹部断层扫瞄检査复发肿瘤的血管结构。一旦该肿瘤在断层扫瞄显影的动脉期（arterial phase)显示出典型的多血管性 (hypervascular) , 且显影剂 (contrast medium)于静脉其月 (venous phase)快速地被冲洗掉时，则该病灶即被定义为肝癌的复发（HCC recurrence)。若受试者的病灶已接受过组织切片检査或外科切除手术，则肝癌的复发亦可透过组织学检査来确认。

前述人体临床试验的主要疗效试验指标（primary eff i cacy endpoint) 为试验终止时肝癌的未复发率（non-recurrence rate of HCC)。而次要疗效试验指标 (secondary eff i cacy endpoi nt)为首次复发所需时间 (t ime to f irst recurrence) , 首次复发所需时间的计算是从随机分派之日起，至透过计算机断层扫瞄或组织学检査确认肿瘤复发之日止。

试验结果的数据如下，对照组 58人中共 58人为可纳入资料分析的意图治疗分析群体，其中 26人于试验结束时已复发肝癌，约占 45%，其中 29人于试验结束时未复发肝癌，约占 50%，其中 3人于试验中途退出（dropout) , 约占 5%。投予剂量为每日 160mg本案医药组合物活性成分的试验组 57人中共 56人为可纳入资料分析的意图治疗分析群体，其中 16人于试验结束时已复发肝癌，约占 29%，其中 35人于试验结束时未复发肝癌，约占 63%，其中 5人于试验中途退出（dropout)，约占 9%。投予剂量为每日 250mg本案医药组合物活性成分的试验组 57人中共 54人为可纳入资料分析的意图治疗分析群体，其中 21人于试验结束时已复发肝癌，约占 39%，其中 22人于试验结束时未复发肝癌，约占 41%，其中 1 1人于试验中途退出（dropout) , 约占 20%。

图 2是试验终止时，对照组、投予剂量为每日 160mg本案医药组合物活性成分的试验组及投予剂量为每日 250mg本案医药组合物活性成分的试验组受试者群体中，未复发肝癌人数及中途退出试验人数所占的比率。参阅图 2，投予剂量为每日 160mg本案医药组合物活性成分的试验组，其未复发肝癌的比率为 63%，而未投药的对照组其未复发肝癌的比率为 50%，依统计方法判断为具有差异（P = 0. 07)，亦即本案医药组合物在活性成分剂量为每日 160mg 以皮下注射方式对接受过肝脏切除手术的肝癌患者进行周期性投药，能够降低患者的肝癌复发率。

前述试验结果亦显示，投予剂量为每日 250mg本案医药组合物活性成分的试验组，其与未投药的对照组相较之下，并无显著降低患者肝癌复发率的效果。

图 3是比较对照组与投予剂量为每日 160mg本案医药组合物活性成分的试验组，随试验的进行（0至 48周），未复发肝癌人数占该组受试总人数比率的变化情形，其中虚线是表示两组受试者群体从试验开始至达到 70%受试者未复肝癌所需的时间。参阅图 3，对照组的受试者群体自试验开始至达到 70% 受试者未复肝癌所需时间为 27周；而每日投予剂量为 160mg本案医药组合物活性成分的试验组受试者群体，其自试验开始至达到 70%受试者未复肝癌所需时间为 48周。前述结果显示，在本实施例中，本案医药组合物在活性成分剂量为每日 160mg以皮下注射方式对接受过肝脏切除手术的肝癌患者进行周期性投药，能够显著延长患者肝癌复发所需的时间。

此外，另有临床实验数据显示，每日投予剂量为 80mg 本案医药组合物活性成分予受试者时，仍有抑制肿瘤变大的效果。而当每日投予剂量为 315mg 本案医药组合物活性成分予受试者时，可能产生严重血小板低下（severe thrombocytopenia)的情形。

以上所提仅是本案的较佳实施例方式，并不是用于限定本案的实施范围；任何本领域技术人员，在不脱离本案的精神与范围下所作的诸般变化与修饰，都不脱如附权利要求所欲保护者。

Claims

权利要求

1.一种用于抑制肝癌复发、恶化或转移的医药组合物，其包含一治疗有效量的至少一通式（I)化合物及一医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载体；

其中该通式（I)化合物的 n为 0至 3的整数，且有 3n+6或 3n+7个 R代表 S0₃H，其余 R皆代表 H。 R

2.如权利要求 1所述的医药组合物，其中有 3n+7个 R代表 S0₃H者为主 H要组分。 1/

3.如权利要求 1所述的医药组合物，其中 n为 2或 3且有 3n+7个 R代表 S0₃H 者为主要组分。

4.如权利要求 1所述的医药组合物，其中 n为 3且有 3n+7个 R代表 S0₃H 者的相对含量为最高。

5.如权利要求 1至 4任一所述的医药组合物，其中该治疗有效量是介于每日 80mg至每日 315mg间。

7.如权利要求 6所述的医药组合物，其可与至少一治疗方式合并用于抑制肝癌的复发、恶化或转移，该治疗方式包括栓塞治疗、标靶药物治疗、化学治疗、放射治疗及肝脏切除手术。

8.如权利要求 7所述的医药组合物，其是用于降低肝癌患者的术后复发率或延长肝癌患者术后复发所需的时间。

9.一种使用如权利要求 1中所述的通式（I)化合物制备供抑制肝癌复发、恶化或转移的药物的方法，包括将一治疗有效量的该通式（I)化合物与一医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载体相结合，其中该通式（I)化合物的 n为 0至 3的整数，且有 3n+6或 3n+7个 R代表 S0₃H，其余 R皆代表 H。

10. 如权利要求 9所述的方法，其中有 3n+7个 R代表 S0₃H者为主要组分。

11. 如权利要求 9所述的方法，其中 n为 2或 3且有 3n+7个 R代表 S0₃H 者为主要组分。

12. 如权利要求 9所述的方法，其中 n为 3且有 3n+7个 R代表 S0₃H者的相对含量为最高。

13. 如权利要求 9至 12任一所述的方法，该医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载体为水或以水为溶剂的溶液。 14. 如权利要求 13所述的方法，该医药上可接受的稀释剂、赋形剂或载体为生理食盐水或葡萄糖水溶液。