CN103446090A - Incarviatone A在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 - Google Patents
Incarviatone A在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103446090A CN103446090A CN2013104321952A CN201310432195A CN103446090A CN 103446090 A CN103446090 A CN 103446090A CN 2013104321952 A CN2013104321952 A CN 2013104321952A CN 201310432195 A CN201310432195 A CN 201310432195A CN 103446090 A CN103446090 A CN 103446090A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- incarviatone
- liver
- fibroblast proliferation
- cell
- proliferation inhibiting
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 title claims abstract description 24
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 title claims abstract description 15
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title abstract description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 6
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 description 12
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 11
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 7
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 7
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 7
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 6
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 210000004024 hepatic stellate cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241001121991 Incarvillea delavayi Species 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002300 anti-fibrosis Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000012 chronic liver injury Toxicity 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 210000000630 fibrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了Incarviatone A在制备治疗肝纤维化药物的用途。药理试验证明，Incarviatone A可以明显抑制肝纤维化的发生和发展，可用于制备抗肝纤维化、防治肝硬化的药物。本发明涉及的Incarviatone A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于肝脏成纤维细胞增殖抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于抗肝脏成纤维细胞增殖显然具有显著的进步。
Description
技术领域
本发明涉及化合物经药理试验证明可显著抑制肝纤维化的发生和发展，更具体指化合物Incarviatone A，它可在制备抗肝纤维化药物中应用。
背景技术
肝纤维化是慢性肝损伤向肝硬化发展的动态过程，表现为细胞外基质（ECM）大量合成、分泌，而降解绝对或相对不足，使ECM在肝脏内弥漫沉积。其起始于肝细胞（HC）坏死，随之是炎症反应、纤维生成介质释放，肝星状细胞（FSC）激活，最终以肝脏结缔组织成分的合成与降解明显失去平衡。肝纤维化是多种慢性肝病共同的病理过程，是影响预后的重要因素。
过去的20年间，肝纤维化的研究取得了长足进展，证实肝纤维化与一定程度的肝硬化都是可逆的。近年来陆续出现了一些抗肝纤维化治疗方法，包括化学药、生物制剂、中药与基因疗法等，但是理想的临床治疗手段仍然缺乏（刘平.加强抗肝纤维化作用机制的研究.中华肝病杂志，2005,8（13）：561）。目前防治肝纤维的关键是针对与肝星状细胞激活相关的环节，主要是：减轻肝损伤；抑制星状细胞激活，减少细胞外基质产生；调节细胞因子紊乱，促进活化肝星状细胞凋亡。
本发明涉及的化合物Incarviatone A是一个2012年发表（Shen,Y.H.et al.,2012.Incarviatone A,a structurally unique natural product hybrid with a new carbon skeleton from Incarvillea delavayi,and its absolute configuration via calculated electronic circular dichroic spectra.RSC Advances2,4175–4180.）的新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前没有关于该化合物活性方面的报道，对于本发明涉及的Incarviatone A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于肝脏成纤维细胞增殖抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于抗肝脏成纤维细胞增殖显然具有显著的进步。
发明内容
化合物Incarviatone A经药理试验证明其能抗肝纤维化。
本发明Incarviatone A的结构式如式（Ⅰ）所示：
本发明对Incarviatone A抑制肝脏成纤维细胞增殖作用进行了药理试验。
成纤维细胞增殖并合成大量细胞外基质（ECM），是肝纤维化发生的重要环节。活化的肝星状细胞（HSC）具有成纤维细胞特征，NIH/3T3细胞是研究药物抗肝纤维化活性常用的细胞模型。本研究以NIH/3T3成纤维细胞为靶细胞，观察发明药物对其增殖的影响。用MTT法检测的抑制细胞增殖的试验结果表明，本发明药物对NIH/3T3的细胞增殖有显著的抑制活性。
根据药理试验结果证明Incarviatone A具有抗肝纤维化作用。
本发明涉及的Incarviatone A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于肝脏成纤维细胞增殖抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于抗肝脏成纤维细胞增殖显然具有显著的进步。
具体实施方式
本发明所涉及化合物Incarviatone A的制备方法参见文献（Shen,Y.H.et al.,2012.Incarviatone A,a structurally unique natural product hybrid with a new carbon skeleton from Incarvillea delavayi,and its absolute configuration via calculated electronic circular dichroic spectra.RSC Advances2,4175–4180.）。
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
实施例1：本发明所涉及化合物Incarviatone A片剂的制备：
取20克化合物Incarviatone A，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。
实施例2：本发明所涉及化合物Incarviatone A胶囊剂的制备：
取20克化合物Incarviatone A，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。
下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
实验例1：本发明药物对成纤维细胞NIH/3T3增殖的抑制作用
一、实验方法：
NIH/3T3细胞株购自引自ATCC（American Type Culture Collection）的中科院上海细胞所细胞库。
将对数生长期的亚融合的NIH/3T3细胞用0.25%胰酶消化，洗涤，离心后，用DMEM培养液（含10%FCS）制成1×104cell/ml的细胞悬液，台盼蓝染色鉴定存活率大于95%，按每孔100ul加入96孔板中，在37℃、5%CO2培养24h同步处理后，弃上清，加入含有不同稀释浓度药物的DMEM培养液（含10%FCS）200ul，培养48h，每孔加入MTT溶液孵育4h。弃去培养液，加入150ulDMSO，振荡10分钟，使结晶溶解，酶标仪490nm处读取OD值，结果以OD490表示。
二、实验结果：
1、形态学观察
NIH/3T3在用药前伸展良好，折光性较弱，有方向性，呈放射状，细胞增殖的速度快；而加药物24h后，成纤维细胞数目减少，形状变得不规则，突起变短，细胞排列混乱，细胞内代谢产物增多。
MTT法检测本发明药物对NIH/3T3细胞增殖的抑制作用
表1：MTT法检测本发明药物对NIH/3T3增殖的抑制作用
注：*，与细胞阴性对照P<0.05；**，与细胞阴性对照P<0.01
结果：本发明药物在10ug/ml-40ug/ml的浓度范围内对成纤维细胞NIH/3T3在10%小牛血清的刺激下的细胞增殖有显著的抑制作用。表明本发明药物体外对纤维细胞的增殖有显著抑制作用。
实验例2：本发明药物对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的成纤维细胞增殖的抑制作用
TGF-β1是促进细胞增殖和胶原生成的强活性因子，在细胞中加入TGF-β110ng/ml刺激细胞增殖，在检测药物对TGF-β1诱导的细胞增殖的抑制作用，以分析判断本发明药物的作用机理。
表2：MTT法检测本发明药物对TGF诱导NIH/3T3增殖的抑制作用
注：*，与细胞+TGF对照P<0.05；**，与细胞+TGF对照P<0.01
结果：本发明药物在10-40ug/ml两个浓度区间内对成纤维细胞NIH/3T3在TGF-β1的诱导下的细胞增殖有显著的抑制作用。表明本发明药物体外对纤维细胞增殖的抑制作用可能是通过干预TGF信号通路实现的。
结论：Incarviatone A对成纤维细胞NIH/3T3在10%小牛血清的刺激下的细胞增殖有显著的抑制作用；Incarviatone A对成纤维细胞NIH/3T3在TGF-β1的诱导下的细胞增殖有显著的抑制作用。Incarviatone A可以用来制备抗肝纤维化药物。
Claims (1)
1.Incarviatone A在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用，所述化合物Incarviatone A结构如式（Ⅰ）所示：
式（Ⅰ）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310432195.2A CN103446090B (zh) | 2013-09-22 | 2013-09-22 | Incarviatone A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310432195.2A CN103446090B (zh) | 2013-09-22 | 2013-09-22 | Incarviatone A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103446090A true CN103446090A (zh) | 2013-12-18 |
| CN103446090B CN103446090B (zh) | 2015-12-02 |
Family
ID=49729212
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310432195.2A Expired - Fee Related CN103446090B (zh) | 2013-09-22 | 2013-09-22 | Incarviatone A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103446090B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005021496A2 (en) * | 2003-08-27 | 2005-03-10 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Synthesis of derivatives of ginkgolide c |
| EP1939166A1 (en) * | 2006-12-19 | 2008-07-02 | InterMed Discovery GmbH | Plants extracts for use in brain modulation |
-
2013
- 2013-09-22 CN CN201310432195.2A patent/CN103446090B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005021496A2 (en) * | 2003-08-27 | 2005-03-10 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Synthesis of derivatives of ginkgolide c |
| EP1939166A1 (en) * | 2006-12-19 | 2008-07-02 | InterMed Discovery GmbH | Plants extracts for use in brain modulation |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SHEN,Y.H.ET AL.,: "ncarviatone A,a structurally unique natural product hybrid with a new carbon skeleton from Incarvillea delavayi,and its absolute configuration via calculated electronic circular dichroic spectra", 《RSC ADVANCES2》, 31 December 2012 (2012-12-31), pages 4175 - 4180 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103446090B (zh) | 2015-12-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104095859A (zh) | 闭花木酮Cleistanone的O-(哌啶基)乙基衍生物在制备抗肝纤维化药物中的应用 | |
| CN104095857A (zh) | 闭花木酮Cleistanone的二乙胺衍生物在制备抗肝纤维化药物中的应用 | |
| CN103251614A (zh) | Aspeverin在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103446131A (zh) | Lycojaponicumin B在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103446132A (zh) | Lycojaponicumin A在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103446090A (zh) | Incarviatone A在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103356533A (zh) | Sarcaboside A在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103356523A (zh) | Sarcaboside B在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN102885808A (zh) | Aphanamixoid A在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN102861054B (zh) | Houttuynoid D在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103463074B (zh) | Lycojaponicumin C在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN102872114A (zh) | Houttuynoid E在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103393697B (zh) | Chukrasone A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN102872009A (zh) | Eryngiolide A在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN106420706A (zh) | Linderolide H 在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103463011B (zh) | Fluevirosines A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN102872107A (zh) | Houttuynoid A在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103536600B (zh) | Phyllanthoid A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103479647A (zh) | Kadcoccitones A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN102872079A (zh) | Houttuynoid C在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103127149A (zh) | Gypensapogenin B在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103315990A (zh) | Nardoaristolones A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN102872136A (zh) | Houttuynoid B在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103372005A (zh) | Chukrasone B在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 | |
| CN102895240A (zh) | Gypensapogenin A在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Zhang Hongli Inventor before: Jiang Chunping Inventor before: Huang Rong |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20151103 Address after: 325011, building 1112, building A, 209 Wenchang Road, hi tech Zone, Longwan District, Zhejiang, Wenzhou Applicant after: Wenzhou Chengqiao Technology Co.,Ltd. Address before: Metro Technology Building No. 69 Olympic Avenue in Jianye District of Nanjing city in Jiangsu province 210019 01 5 storey buildings Applicant before: Nanjing guangkangxie Biomedical Technology Co.,Ltd. |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20181217 Address after: 409000 Baijiahe Road, Zhengyang Industrial Park, Qianjiang District, Chongqing Patentee after: CHONGQING QIANJIANG APENG TECHNOLOGY ENTERPRISE INCUBATOR CO.,LTD. Address before: 325011 room 1112, building A, 209 Wenchang Road, hi tech Zone, Longwan District, Wenzhou, Zhejiang. Patentee before: Wenzhou Chengqiao Technology Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20151202 Termination date: 20210922 |