CN103430659A - 一种测定荷花花粉活力的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种花粉活力测定方法，尤其涉及一种荷花花粉活力的测定方法，属于植物技术领域。本发明公开了一种离体萌发法测定荷花品种花粉活力的方法，可有效的测定荷花花粉活力。所用的花粉离体萌发液体培养基，以蒸馏水为溶剂，组分为250g/L蔗糖、10mg/L H3BO3、部分ME3和100g/L PEG1500。将培养液滴于载玻片上，用毛笔将少量花粉蘸到培养基中，不盖盖玻片，播种后将载玻片置于垫有湿润滤纸的培养皿内培养。培养条件为25℃和黑暗条件下，4h后用光学显微镜观察花粉萌发和花粉管生长情况。本方法简单，完全定量，数据可靠，可操作性强，具有较高的实际应用价值，对提高荷花育种效率具有重要意义。

Description

一种测定荷花花粉活力的方法
技术领域
本发明涉及一种花粉活力测定方法，尤其涉及一种荷花花粉活力的测定方法，属于植物技术领域。
背景技术
荷花(Nelumbo nucifera)为睡莲科莲属多年生挺水花卉。我国拥有灿烂的荷文化及悠久的栽培史，作为我国十大名花的荷花，其品种繁多，花型奇特，清香远溢，盛开于炎炎夏日，是我国园林配置水景的主要水生植物。目前，花粉萌发需要一定的条件：水分、温度、糖类、pH值、矿质元素、维生素等，其中糖类、矿质元素为主导因素。蔗糖不仅可调节花粉的渗透势，使其不会过分吸水胀破，还可用作呼吸底物和合成淀粉原料，促进花粉管的生长。当蔗糖浓度大于30%时，不利于花粉的萌高浓度的蔗糖能改变花粉管的透性，导致代谢物和离子泄露在培养基里，反而对萌发不利。因此，蔗糖在花粉萌发中，不仅作为渗透压调节剂，还参与其它代谢功能；硼是维管植物生长的必需微量元素，也是花粉萌发及花粉管生长必不可少的元素，它在绝大多数显花植物柱头及花柱组织里普遍存在(胡适宜，1982)。硼对花粉的作用有三个方面，第一，促进糖的吸收与代谢；第二，增加氧的吸收；第三，参与果胶质的合成，有利于花粉管在生长中壁的建造。因此，花期给植株喷硼能促进花粉的萌发和花粉管的伸长，但用量单位不宜过高；黄静，曹秋芬，孟玉平(2004)研究认为花粉萌发对钙的要求并不高，但在培养基中加入钙能促进花粉萌发，并在一定程度上提高花粉的萌发率，并对花粉管的伸长有明显的促进作用。在有些情况下，外源Ca2+对花粉的萌发和花粉管生长并非必需，自身释放的Ca2+已满足需要。何金环，李巧枝，任梅(2006)研究认为：某些植物花粉萌发和花粉管生长仍然需要细胞外Ca2+的调节。
目前，关于荷花花粉离体萌发的培养基和培养条件还未见报道，本发明的公布，可以为荷花品种提供最适的花粉离体萌发培养体系，为花粉活力测定提供一个高效、快速、简便的方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题是针对现有技术存在的缺陷，提出一种测定荷花花粉活力的方法，可以高效快速地测定荷花的花粉活力。
本发明通过以下技术方案解决技术问题，一种测定荷花花粉活力的方法，包括以下步骤：
步骤一、采用蒸馏水配制液体培养基，所述液体培养基含有250g/L蔗糖、10mg/L H3BO3、2.2g/L的ME3培养基、100g/L PEG-1500；
步骤二、采集花粉，于早晨10:00采集盛开的荷花花粉，将所述花粉装入离心管中，避光保存；
步骤三、培养花粉，将所述液体培养基滴在载波片上，用毛笔蘸取所述花粉至液体培养基，直接将载波片置于垫有湿润滤纸的培养皿内培养4小时；
步骤四、显微镜观察计算花粉活力，培养完毕后，将载波片置于光学显微镜下观察发芽状况，以花粉管长度大于花粉直径视为花粉萌发，随机观察10个视野进行记录，实验重复3次。
上述方法中，所述步骤一中，ME3培养基由370mg/L MgSO4·7H2O、950mg/L KNO3、880mg/L CaCl2·2H2O、0.025mg/L FeSO4·7H2O和0.83mg/L KI组成。所述液体培养基的pH值为5.8。
所述步骤二中，采集花粉前，在开花前一天对所采集的花序进行人工套袋隔离。
所述步骤三中，培养的条件是黑暗、保持25℃。培养时，每隔1小时在显微镜下检测花粉萌发情况，当花粉萌发无变化时即可进行步骤四。
所述步骤四中，花粉生活力=每个视野萌发花粉数/每个视野总花粉数×100%。
本发明的测定方法科学合理：1.首先，蔗糖、硼酸和钙对于花粉萌发和花粉管伸长是必需的，是花粉离体萌发培养基的主要成分。蔗糖在花粉萌发中主要起提供能源和调节渗透压作用，一定量的硼酸和钙离子能使花粉管长得较直且粗，不致过长。其次，PEG能使花粉内膜结构发生变化，改变膜表面电荷，使膜的柔软程度和通透性提高，从而促进花粉萌发和花粉管生长。2.本方法对荷花花粉离体培养和活力检测，具有播种花粉多且均匀、检测方法简单和可操作性强等特点，数据科学可靠，并可完全定量，对于提高荷花育种效率具有较高的实际应用价值。
具体实施方式
实施例
本实施例按以下方法测定荷花花粉的活力：
步骤一、采用蒸馏水配制液体培养基，所述液体培养基含有250g/L蔗糖、10mg/L H3BO3、ME3培养基（370mg/L MgSO4·7H2O、950mg/L KNO3、880mg/L CaCl2·2H2O、0.025mg/L FeSO4·7H2O和0.83mg/L KI）、100g/L PEG-1500；
步骤二、采集花粉，7月下旬当荷花品种‘友谊红’（可由南京艺莲苑花卉有限公司购买）开花时节，采集花粉前，在开花前一天对所采集的花序进行人工套袋隔离，于早晨8：00左右采集盛开的荷花花粉，将采集的花粉装入离心管中，避光保存；
步骤三、培养花粉，将液体培养基滴3滴在载波片上，用毛笔蘸取所述花粉至液体培养基，直接将载波片置于垫有湿润滤纸的培养皿内在黑暗条件下25℃培养4小时；培养时，每隔1小时在显微镜下检测花粉萌发情况，当花粉萌发无变化时即可进行步骤四。
步骤四、显微镜观察计算花粉活力，培养完毕后，将载波片置于光学显微镜下观察发芽状况，以花粉管长度大于花粉直径视为花粉萌发，随机观察10个视野进行记录，实验重复3次，花粉生活力=每个视野萌发花粉数/每个视野总花粉数×100%。
结果见表1，
表1 不同培养时间‘友谊红’的花粉活力
培养时间（h） 花粉活力
4 42±2.1%
6 43±1.8%
8 43±0.9%
如表1所示，荷花花粉萌发的最佳观察时间为培养后4h，即使再培养几个小时，花粉活力的变化不大，不具有活力的花粉未发生大的变化，因此培养后4h是观察的最佳时间。
表2 不同培养基条件下对‘友谊红’花粉萌发率的影响
如表2所示，本实施例采用的液体培养基可有效提高荷花花粉的萌发率。
除上述实施外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。

Claims (7)

1.一种测定荷花花粉活力的方法，包括以下步骤：
步骤一、采用蒸馏水配制液体培养基，所述液体培养基含有250g/L蔗糖、10mg/L H3BO3、2.2g/L的ME3培养基、100g/LPEG-1500；
步骤二、采集花粉，于早晨10:00采集盛开的荷花花粉，将所述花粉装入离心管中，避光保存；
步骤三、培养花粉，将所述液体培养基滴在载波片上，用毛笔蘸取所述花粉至液体培养基，直接将载波片置于垫有湿润滤纸的培养皿内培养4小时；
步骤四、显微镜观察计算花粉活力，培养完毕后，将载波片置于光学显微镜下观察发芽状况，以花粉管长度大于花粉直径视为花粉萌发，随机观察10个视野进行记录，实验重复3次。
2.根据权利要求1所述测定荷花花粉活力的方法，其特征在于：所述步骤一中，ME3培养基由370mg/L MgSO4·7H2O、950mg/LKNO3、880mg/L CaCl2·2H2O、0.025mg/L FeSO4·7H2O和0.83mg/LKI组成。
3.根据权利要求1所述测定荷花花粉活力的方法，其特征在于：所述液体培养基的pH值为5.8。
4.根据权利要求1所述测定荷花花粉活力的方法，其特征在于：所述步骤二中，采集花粉前，在开花前一天对所采集的花序进行人工套袋隔离。
5.根据权利要求1所述测定荷花花粉活力的方法，其特征在于：所述步骤三中，培养的条件是黑暗、保持25℃。
6.根据权利要求5所述测定荷花花粉活力的方法，其特征在于：培养时，每隔1小时在显微镜下检测花粉萌发情况，当花粉萌发无变化时即可进行步骤四。
7.根据权利要求1所述测定荷花花粉活力的方法，其特征在于：所述步骤四中，花粉生活力=每个视野萌发花粉数/每个视野总花粉数×100%。
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