CN103393577A - 一种含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，所述水果提取物混合物为桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物中的至少两种的混合物，这几种水果的提取物的混合物具有很好的美白、保湿、抗衰老的功效，可用于化妆品、保健食品和医药领域，尤其是可应用于化妆品中。
Description
技术领域
本发明属于天然产物化学领域，尤其涉及一种含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物。
背景技术
近年来，人们开始热衷于植物化妆品及回归自然的美容方法。随着人们生活水平和审美标准的提高，越来越多的人追求、渴望白皙及洁润的肌肤。因此，具有防止由太阳光线及其它原因引起的色斑、色素沉着作用的美白类化妆品以及皮肤美白制剂的研究与开发，正日益受到各国化妆品生产商和研究者的重视，美白化妆品已成为护肤类化妆品的主流品种之一。
造成皮肤黑色素生成的原因主要包括遗传因素、紫外线、废气、活性氧等环境因素；体内氧化与抗氧化平衡失调；内分泌失调；微生态失衡；代谢紊乱；机体微量元素含量异常等。祖国医学则认为色素沉着的主要病因是：①肝气郁结；②肾阴不足；③气血淤阻；④劳伤脾土。在治疗上，全身疗法以疏肝、补肾、活血、益气健脾为主，外用以中药面膜和霜、膏剂居多。但此类资料多以临床报道为主，缺乏严密的科研设计、实验室研究和统计学处理。至今为止，也尚末发现开发出治疗“黄褐斑”中药搽剂的文献报道。因此，寻找高效且对人体无副作用或副作用小的美白祛斑制剂已成为目前药学及化妆品领域的一个研究热点。
美白剂的作用机理之一是通过抑制酪氨酸酶活性或者阻断酪氨酸生成黑色素的氧化途径，从而减少黑色素生成达到美白皮肤的效果。皮肤美白剂就是作用于皮肤黑色素生成、代谢过程中，抑制黑色素生成且符合规范的物质。目前要求的皮肤美白剂应该符合两个标准：一是对酪氨酸酶活性有较高的抑制率，能显著的减少黑色素的生成；二是有较高的安全性，以人体皮肤无毒无刺激。熊果苷、VC及其衍生物和曲酸是目前国内外美白化妆品中较常使用的美白成分。为了开发符合“回归大自然”要求的化妆品，特别是安全，无副作用的美白产品，一些具有很好美白效果的中草药目前越来越受到消费者的青睐。在国际上化妆品发展最有代表性的国家如美国、日本、法国和德国等国家中，中草药因其天然药效温和且不良作用少而被广泛认同，从中了解到近年来崇尚自然，远离化学污染的理念。特别是从日本化妆品工业的发展趋势看，各化妆品公司使用的中草药已达200余种，目前，在日本含天然中草药的化妆品已占整个化妆品市场的50％以上。因此，寻找开发高效且对人体无副作用或副作用小的天然中草药皮肤美白祛斑制剂已成为目前化妆品领域的一个较被重视的课题。
桂圆(Dimocarpus longgana Lour.)是无患子科(Sapindaceae)桂圆属(Dimocarpus)常绿果树、乔木，为药食两用植物，自古以来被视为珍贵补品。桂圆在我国已有2000多年的栽培历史，其主产区为福建、广东、广西及台湾等省，是我国南亚热带名贵特产，历史上南方“桂圆”北“人参”之称。桂圆果实富含营养，自古受人们喜爱，更视为珍贵补品，其滋补功能显而易见。明李时珍曾有“资益以桂圆为良”的评价。桂圆可谓全身都是宝，桂圆肉营养丰富，具有补心益脾，养血安神，强魄健体之功效，临床上多用于气血不足，心悸怔忡，健忘失眠，血虚萎黄等；桂圆核具有止血、定痛、理气化湿和降血糖作用，常用于创伤出血、疝气、狐臭的治疗；桂圆壳可治心虚头晕，并具散邪祛风、聪耳明目的作用，研细可治疗烫伤。桂圆主要含有三萜类、酚类、甾体类以及脂类等，现代药理研究表明桂圆具有显著的抗菌、抗癌、降血糖以及增强免疫力等活性。桂圆化学成分多样，药理活性显著。
山竹(Garcinia mangostana)是一种产于热带亚热带的水果，具有非常高的营养价值，又名莽吉柿、山竺、山竹子，产于南洋热带地区，有“热带果后”之称。我国的台湾、广东、福建和云南等地区也多有引种，人们称其为“果中之后”和“上帝之果”。山竹所以称为“热带果后”，除了本身味道甜美之外，另一个主要原因是在古时东南亚医药中所担当的角色，传统上，山竹被人用来控制发烧的温度及防止各种皮肤感染。山竹的果皮或外皮都蕴含丰富的Xanthone，有助增进免疫系统健康，令人身心舒畅。
山竹营养丰富，味道甜中带酸，鲜美异常，富含黄酮类、多酚、蛋白质和脂类。传统医学认为其果肉性寒，有清凉解热之功效，主治口渴口干、烧伤、烫伤、湿疹等。一直以来，山竹在热带、亚热带地区常作为消炎、美容的植物药，可内服，也可外敷使用，但过量服用会对线粒体功能有毒害作用，损害呼吸作用，造成乳酸中毒。山竹果皮中挥发油的提取率为0.14％，鉴定出22种化学物质，占总成分的92.68％；果肉中挥发油的提取率为0.21％，鉴定出11种化学物质，占总成分的69.11％。山竹果皮挥发油中主要含有烯类、萘类和酸类，果肉挥发油中主要含有醇类、烯类及烷烃类；果皮与果肉主成分为α一荜澄茄烯，含量分别为32.41％与41.38％。研究表明，山竹提取物具有良好的抗炎效果，对组胺、5-羟色胺及地诺前列酮等致炎介质均有较好的抑制作用。同时，山竹提取物对自然界多种致病的微生物具有较强的抑制作用，山竹提取物能够抑制皮肤科常见病菌如金黄色葡萄球菌的生长，其中一些成分还对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌也具有抑制作用，其中尤以A-倒捻子素活性最强。
杨桃(Averrhoa carambola)是一种产于热带亚热带的水果，具有非常高的营养价值，又名五敛子、杨桃、洋桃、三廉子。杨桃果实如拳头，颜色青黄润绿，形状有些怪，皮肉脆软，初食时味酸而后味才甜美。每年五月、十月成熟两次；一树可结果很多，果肉汁多，叶酸甜，可治风热，生津止渴。《本草纲目》记载：“五敛子，出岭南及闽中，其大如拳，其色青黄润绿，形甚诡异，状如田家碌碡，上有五棱如刻，起作剑脊形，皮肉脆软，其味初酸久甘，其核如柰，五月熟，一树可得数石，十月再熟；以蜜渍之，甘酢而美，俗亦晒干以充果食，又有三廉子，盖亦此类也。”杨桃果实含挥发性成分，从中已检出178种化合物，具有免疫调节剂、抗肿瘤、降血糖、降血脂等作用。
但是，目前尚未见有关于水果，尤其是桂圆、山竹和杨桃在美容护肤方面的研究和应用。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，旨在将多种水果中的活性提取物应用于皮肤外用剂中，以起到美容护肤的作用。
本发明的目的是这样实现的：
一种含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，含有桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物中的至少两种提取物的混合物作为有效成分。
其中，当所述水果提取物混合物为桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物中的任意两种的混合物时，这两种提取物间的重量比为1-10∶1-10；当所述水果提取物混合物为桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物的混合物时，这三种提取物间的重量比为1-10∶1-10∶1-10。
所述的桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物通过分别将桂圆、山竹和杨桃原料浸渍有机溶剂并提取后进行过滤、减压及浓缩后获得，再将其中的两种或三种提取物按一定比例混合，分别进行抗衰老作用、美白作用和保湿作用的实验研究。
所述有机溶剂是指含有羟基或羰基等极性基团的有机溶剂，例如但不限于：水、甲酰胺、二甲基甲酰胺、三乙胺、三丁胺、乙酸、乙腈、甲酸甲酯、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、二甲亚砜、丙酮、甲乙酮、二氧六环、吡啶、四氢呋喃、甲醇、乙醇、三氯甲烷、丙三醇、丙二醇、丙烯二醇、异丙醇、正丁醇和乙醚等，中的一种或几种，其中优选乙醇水溶液。
在以乙醇水溶液为有机溶剂时，乙醇的浓度选用0-95％，优选70％。
根据试验可知，桂圆、山竹和杨桃的任意两种或三种活性提取物的混合物在美白、保湿、抗衰老方面都具有很好的功效，可以作为活性成分添加到化妆品配方中，这里所指的活性成分在某些情况下可以提供一种或一种以上的功效。
本发明中所述的活性成分还可以为泛醇、甘草酸二钾、尿囊素、烟酰胺、抗坏血酸磷酸酯钠、三色堇提取物、透明质酸钠、生育酚乙酸酯、十一碳烯酰基苯并氨酸等。此外，此类描述是为了便于理解，并不是使成分限于具体指出的应用或者所列出的应用。
桂圆、山竹和杨桃活性提取物的混合物可应用于皮肤外用剂、保健食品和医药，尤其是可应用于化妆品中，根据制剂的不同类型添加不同的用量。
所述皮肤外用剂组合物是通常用于皮肤外部的所有成分的统称概念，例如可以是化妆料组合物或药学组合物。所述化妆料组合物中可以是基础化妆料、面部妆容化妆料、身体用化妆料等，对其剂型无特殊限制，根据不同目的可合理选择。
所述化妆料组合物中根据剂型和目的的不同还含有不同的化妆品学层面允许的介质或基质赋形剂。
可以用于本发明皮肤外用剂组合物的化妆品、皮肤病学或药学上可接受的赋形剂包括，但不限于一种或多种含水系统、甘油、C1-4醇类、脂肪醇类、脂肪醚类、脂肪脂类、多元醇类、二元醇类、植物油、矿物油、脂质体、层状脂质物质、硅油、水或其任意组合。
在本发明中，赋形剂可以为水相、油相、凝胶、水包蜡型乳液、水包油型乳液或油包水型乳液的形式。水相为一种或多种水溶性或分散性组分的混合物，其在室温(25℃)下可以为液体、半固体或固体。赋形剂包括或可以为在水或水-醇赋形剂中的混悬液、分散液或溶液的形式，其可以含有增稠剂或凝胶剂。本领域技术人员可以基于本领域技术人员掌握的知识选择合适的产品形式，其中包含的组分。
所述的组合物可以包括水相，该水相可以含有水或水与至少一种亲水性有机溶剂的混合物，所述的亲水性有机溶剂诸如醇，尤其是含有2-5个碳原子的直链或支链低级一元醇，如乙醇或丙醇；多元醇，如丙二醇、山梨醇、甘油、泛醇或聚乙二醇及其混合物。
当发明的组合物为乳液形式时，该组合物还可以任选包含表面活性剂。
所述的组合物还可以包含成膜聚合物，如聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸均聚物或共聚物、聚酯、基于烃的树脂和/或硅氧烷树脂。可以将聚合物溶于或分散于化妆品可接受的赋形剂。
本发明的组合物还可以包含油相，所述的油相含有在室温(25℃)下为液体的油溶性或油分散性组分和/或在室温下为油状或蜡状的物质，如蜡、半固体、树胶及其混合物。该油相还可以含有有机溶剂。
通常在室温下为液体，合适的油性物质包括：来源于动物的基于烃的油，如全氢化角鲨烯；基于烃的植物油，如液体的C4-10脂肪酸的甘油三酯类，例如庚酸或辛酸甘油三酯类，或油，例如向日葵油、玉米油、大豆油、葡萄籽油、蓖麻油、鳄梨油、辛酸/癸酸甘油三酯类、霍霍巴油；矿物或合成来源的直链或支链烃类，例如液体石蜡及其衍生物、凡士林；合成酯类和醚类，特别是脂肪醇的酯类，例如肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸2-乙基己酯、硬脂酸2-辛基十二烷基酯、异硬脂酸异硬脂醇酯；羟基化酯类，例如乳酸异硬脂醇酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛基十二烷基酯、脂肪醇的庚酸酯类、辛酸酯类和癸酸脂类；多元醇酯类，例如丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二庚酸酯、二甘醇二异壬酸酯和季戊四醇酯类；含有C12-26的脂肪醇类，例如辛基十二烷醇、2-丁基辛醇、2-己基癸醇、2-十一烷基十五烷醇、油醇；基于部分烃的氟油和/或氟硅油，硅油，在室温下为液体或半固体的挥发性或非挥发性的直链或环状聚甲基硅氧烷，例如环状聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷，其任选包含苯基，例如苯基三甲基硅氧烷、硅氧烷及其混合物。
本发明的组合物可以进一步包含常用于化妆品领域中的任何组分。这些组分包括防腐剂、水相增稠剂(多糖生物聚合物、合成聚合物)和脂肪相增稠剂、芳香剂、亲水性和亲脂性活性剂及其混合物。
本发明的组合物还可以包含另外的颗粒相，所述的颗粒相可以为化妆品组合物中使用的颜料和/或珠光剂和/或填充剂。
颜料可以存在于组合物中，合适的无机颜料包括氧化钛、氧化锆和氧化铈以及氧化锌、氧化铁和铁蓝；合适的有机颜料包括钡、锶、钙和铝色淀和碳黑。
珠光剂可以存在于组合物中，合适的珠光剂包括涂覆了氧化钛、氧化铁或天然颜料的云母。
填充剂可以存在于组合物中，合适的填充剂包括滑石粉、二氧化硅、硬脂酸锌、云母、高岭土、尼龙粉末、聚乙烯粉末、特氟龙、淀粉、一氮化硼、共聚物微球，例如硅氧烷树脂微珠。
本发明组合物的油相可以包含一种或多种蜡、树胶或其混合物。蜡包括基于烃的蜡、氟蜡和/或硅氧烷蜡，并且可以来源于植物、矿物、动物和/或合成来源。合适的蜡包括蜂蜡、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、石蜡、微晶蜡、地蜡；合成蜡包括聚乙烯蜡、含有C16-45的硅氧烷蜡。树胶一般为聚二甲基硅氧烷或羧甲基纤维素钠或多糖类，并且半固体物质一般为基于烃的化合物，如羊毛脂及其衍生物。
可以将本发明的组合物配制成任何合适的产品形式。这类产品形式包括，但不限于气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、固体、液体、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉剂、贴剂、润发油、溶液、手按泵型喷雾剂、棒状物、面膜和湿纸巾。可以将本发明的组合物通过本领域众所周知的各种方法便利地用于制备或作为化妆品、皮肤病学或药物局部施用产品。
本发明的皮肤外用剂组合物可以包括一种或多种下列成分：抗过敏剂、抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、着色剂去色素剂、润肤剂、乳化剂、表皮脱落剂、成膜剂、香料、保湿剂、昆虫驱避剂、润滑剂、药物活性剂、增湿剂、耐光剂、防腐剂、护肤剂、皮肤渗透增强剂、防晒剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂、维生素或其任意组合。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：水果提取物的制备
桂圆果实干燥粉碎后的粉末50g，室温下以70％乙醇500m1冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，滤液合并，减压回收溶剂至干，得桂圆提取物。
山竹果实干燥粉碎后的粉末50g，室温下以70％乙醇500ml冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，滤液合并，减压回收溶剂至干，得山竹提取物。
杨桃果实干燥粉碎后的粉末50g，室温下以70％乙醇500m1冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，滤液合并，减压回收溶剂至干，得杨桃提取物。
实施例2：水果提取物的混合物的制备
取桂圆提取物和山竹提取物，分别按照重量比例10∶1、5∶1、1∶1、1∶5和1∶10进行配比混合，配制成溶液，用于相应功效测试。
取桂圆提取物和杨桃提取物，分别按照重量比例10∶1、5∶1、1∶1、1∶5和1∶10进行配比混合，配制成溶液，用于相应功效测试。
取山竹提取物和杨桃提取物，分别按照重量比例10∶1、5∶1、1∶1、1∶5和1∶10进行配比混合，配制成溶液，用于相应功效测试。
取桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物，分别按照重量比例10∶1∶1、5∶1∶1、1∶1∶1、1∶5∶5和1∶10∶10进行配比混合，配制成溶液，用于相应功效测试。
实施例3：水果提取物组合的抗衰老作用研究
1)、自由基清除作用研究
原理：根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性，当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析，来检测自由基清除情况，从而判断样品是否具有抗氧化能力。其能力用清除率来表示，清除率越大，则表明其抗氧化能力越强。
试验方法：将不同稀释度、不同配比的待测样品溶液2ml加入试管中，再加入2ml76μmol/LDPPH乙醇溶液，混匀，室温下避光在黑暗处反应30min，在525nm处测定吸光度Abs；每个浓度重复三次，取平均值作为拟合数据，以保证实验结果的准确性。
清除率I(％)＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％
式中：T0：2ml水或二甲亚砜(DMSO)加2mlDPPH溶液的吸光度；
T：2ml样品液加2mlDPPH溶液的吸光度；
C0：2ml水或二甲亚砜(DMSO)加2ml95％乙醇的吸光度；
C：2ml样品液加2ml95％乙醇的吸光度。
按照上面公式计算清除率。试验结果如表1所示：
表1
| 序号 | 样品 | 浓度(ug/ml) | 清除率(％) |
| 1 | 桂圆+山竹(10∶1) | 5 | 15 |
| 2 | 桂圆+山竹(10∶1) | 10 | 31 |
| 3 | 桂圆+山竹(10∶1) | 25 | 58 |
| 4 | 桂圆+山竹(10∶1) | 50 | 74 |
| 5 | 桂圆+山竹(5∶1) | 50 | 58 |
| 6 | 桂圆+山竹(1∶1) | 50 | 40 |
| 7 | 桂圆+山竹(1∶5) | 50 | 37 |
| 8 | 桂圆+山竹(1∶10) | 50 | 29 |
| 9 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 5 | 13 |
| 10 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 10 | 48 |
| 11 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 25 | 69 |
| 12 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 50 | 89 |
| 13 | 桂圆+杨桃(5∶1) | 50 | 71 |
| 14 | 桂圆+杨桃(1∶1) | 50 | 64 |
| 15 | 桂圆+杨桃(1∶5) | 50 | 49 |
| 16 | 桂圆+杨桃(1∶10) | 50 | 33 |
| 17 | 山竹+杨桃(10∶1) | 5 | 44 |
| 18 | 山竹+杨桃(10∶1) | 10 | 56 |
| 19 | 山竹+杨桃(10∶1) | 25 | 71 |
| 20 | 山竹+杨桃(10∶1) | 50 | 85 |
| 21 | 山竹+杨桃(5∶1) | 50 | 74 |
| 22 | 山竹+杨桃(1∶1) | 50 | 62 |
| 23 | 山竹+杨桃(1∶5) | 50 | 60 |
| 24 | 山竹+杨桃(1∶10) | 50 | 54 |
| 25 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 5 | 60 |
| 26 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 10 | 72 |
| 27 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 25 | 81 |
| 28 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 50 | 95 |
| 29 | 桂圆+山竹+杨桃(5∶1∶1) | 50 | 81 |
| 30 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶1∶1) | 50 | 74 |
| 31 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶5∶5) | 50 | 66 |
| 32 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶10∶10) | 50 | 58 |
由上表可见，上述三种水果提取物的任意组合不同比例下的混合对自由基均具有很好的清除作用。
2)、弹性蛋白酶抑制作用研究
试验方法按照文献(Am.J.Pharmacol.Toxicol.，2009，4，127-129)中的方法进行，步骤为：在96孔板中加入10uL样品溶液和130uL含有1.015mM反应底物Succ-Ala-Ala-Ala-p-硝基酰替苯胺的0.1M Tris-Cl缓冲溶液(PH＝8.0)，在25℃下温育5分钟，加入15uL弹性蛋白酶溶液(0.5U/ml)，继续在25℃下温育30min，然后用酶标仪测定410nm波长的吸光度(A410)。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液，测定吸光度，通过与对照组的比较得到样品组的相对抑制率。试验结果见表2：
表2
| 序号 | 样品 | 浓度(ug/ml) | 抑制率(％) |
| 1 | 桂圆+山竹(10∶1) | 50 | 11 |
| 2 | 桂圆+山竹(10∶1) | 100 | 18 |
| 3 | 桂圆+山竹(10∶1) | 250 | 34 |
| 4 | 桂圆+山竹(10∶1) | 500 | 51 |
| 5 | 桂圆+山竹(5∶1) | 500 | 47 |
| 6 | 桂圆+山竹(1∶1) | 500 | 34 |
| 7 | 桂圆+山竹(1∶5) | 500 | 21 |
| 8 | 桂圆+山竹(1∶10) | 500 | 16 |
| 9 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 50 | 22 |
| 10 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 100 | 31 |
| 11 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 250 | 50 |
| 12 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 500 | 61 |
| 13 | 桂圆+杨桃(5∶1) | 500 | 54 |
| 14 | 桂圆+杨桃(1∶1) | 500 | 32 |
| 15 | 桂圆+杨桃(1∶5) | 500 | 29 |
| 16 | 桂圆+杨桃(1∶10) | 500 | 27 |
| 17 | 山竹+杨桃(10∶1) | 50 | 38 |
| 18 | 山竹+杨桃(10∶1) | 100 | 43 |
| 19 | 山竹+杨桃(10∶1) | 250 | 51 |
| 20 | 山竹+杨桃(10∶1) | 500 | 86 |
| 21 | 山竹+杨桃(5∶1) | 500 | 74 |
| 22 | 山竹+杨桃(1∶1) | 500 | 60 |
| 23 | 山竹+杨桃(1∶5) | 500 | 55 |
| 24 | 山竹+杨桃(1∶10) | 500 | 31 |
| 25 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 50 | 31 |
| 26 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 100 | 49 |
| 27 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 250 | 63 |
| 28 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 500 | 78 |
| 29 | 桂圆+山竹+杨桃(5∶1∶1) | 500 | 65 |
| 30 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶1∶1) | 500 | 48 |
| 31 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶5∶5) | 500 | 34 |
| 32 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶10∶10) | 500 | 30 |
由上表可见，上述三种水果提取物的任意组合不同比例下的混合对弹性蛋白酶均具有很好的抑制作用。
3)、成纤维细胞增殖作用研究
试验方法：将制备好的细胞悬液接种于96孔板内，待细胞贴壁后，除空白对照组外，其他组每孔加入20ul相应浓度的样品，置于孵箱中培养24h，然后加入MTT液20ul，继续在孵箱中培养4h。取出酶标板后，吸去每孔内的培养液，加DMSO混合均匀。用酶联免疫检测仪测定光密度(570nm)，通过与对照组的比较得到样品组的相对增殖率。成纤维细胞增殖越快，抗衰老能力越强。试验结果见表3：
表3
| 序号 | 样品 | 浓度(ug/ml) | 增殖率(％) |
| 1 | 桂圆+山竹(10∶1) | 50 | 8 |
| 2 | 桂圆+山竹(10∶1) | 100 | 17 |
| 3 | 桂圆+山竹(10∶1) | 250 | 29 |
| 4 | 桂圆+山竹(10∶1) | 500 | 57 |
| 5 | 桂圆+山竹(5∶1) | 500 | 32 |
| 6 | 桂圆+山竹(1∶1) | 500 | 17 |
| 7 | 桂圆+山竹(1∶5) | 500 | 11 |
| 8 | 桂圆+山竹(1∶10) | 500 | 12 |
| 9 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 50 | 20 |
| 10 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 100 | 33 |
| 11 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 250 | 41 |
| 12 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 500 | 58 |
| 13 | 桂圆+杨桃(5∶1) | 500 | 54 |
| 14 | 桂圆+杨桃(1∶1) | 500 | 31 |
| 15 | 桂圆+杨桃(1∶5) | 500 | 18 |
| 16 | 桂圆+杨桃(1∶10) | 500 | 14 |
| 17 | 山竹+杨桃(10∶1) | 50 | 21 |
| 18 | 山竹+杨桃(10∶1) | 100 | 35 |
| 19 | 山竹+杨桃(10∶1) | 250 | 49 |
| 20 | 山竹+杨桃(10∶1) | 500 | 62 |
| 21 | 山竹+杨桃(5∶1) | 500 | 60 |
| 22 | 山竹+杨桃(1∶1) | 500 | 34 |
| 23 | 山竹+杨桃(1∶5) | 500 | 22 |
| 24 | 山竹+杨桃(1∶10) | 500 | 14 |
| 25 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 50 | 9 |
| 26 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 100 | 21 |
| 27 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 250 | 46 |
| 28 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 500 | 77 |
| 29 | 桂圆+山竹+杨桃(5∶1∶1) | 500 | 62 |
| 30 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶1∶1) | 500 | 38 |
| 31 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶5∶5) | 500 | 26 |
| 32 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶10∶10) | 500 | 13 |
由上表可见，上述三种水果提取物的任意组合不同比例下的混合对成纤维细胞均具有很好的增殖作用。
实施例4：水果提取物组合的美白作用研究
1)、酪氨酸酶抑制作用研究
试验方法：在样品管和样品对照管中各加入1ml不同浓度的样品溶液，阳性和阴性对照管以磷酸缓冲液代替。在样品管和阳性对照管中加入0.5ml酪氨酸酶溶液(酶活单位125u/ml)，样品对照和阴性对照管以0.5ml磷酸缓冲液(pH＝6.8)代替，振摇所有试管，使样品和酪氨酸酶充分混匀，37℃水槽孵育10分钟，加入2ml的0.03wt％酪氨酸溶液，反应10分钟，即刻在475nm处测定吸光度。
抑制率I(％)＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％
式中：T0：样品溶剂对照；
T：样品对照；
C：阳性对照；
C0：阳性对照溶剂对照。
试验结果如表4所示：
表4
| 序号 | 样品 | 浓度(ug/ml) | 抑制率(％) |
| 1 | 熊果苷(对照) | 500 | 47 |
| 2 | 桂圆+山竹(10∶1) | 50 | 4 |
| 3 | 桂圆+山竹(10∶1) | 100 | 37 |
| 4 | 桂圆+山竹(10∶1) | 250 | 44 |
| 5 | 桂圆+山竹(10∶1) | 500 | 62 |
| 6 | 桂圆+山竹(5∶1) | 500 | 37 |
| 7 | 桂圆+山竹(1∶1) | 500 | 29 |
| 8 | 桂圆+山竹(1∶5) | 500 | 24 |
| 9 | 桂圆+山竹(1∶10) | 500 | 9 |
| 10 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 50 | 32 |
| 11 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 100 | 41 |
| 12 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 250 | 48 |
| 13 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 500 | 59 |
| 14 | 桂圆+杨桃(5∶1) | 500 | 55 |
| 15 | 桂圆+杨桃(1∶1) | 500 | 32 |
| 16 | 桂圆+杨桃(1∶5) | 500 | 29 |
| 17 | 桂圆+杨桃(1∶10) | 500 | 11 |
| 18 | 山竹+杨桃(10∶1) | 50 | 30 |
| 19 | 山竹+杨桃(10∶1) | 100 | 42 |
| 20 | 山竹+杨桃(10∶1) | 250 | 63 |
| 21 | 山竹+杨桃(10∶1) | 500 | 81 |
| 22 | 山竹+杨桃(5∶1) | 500 | 74 |
| 23 | 山竹+杨桃(1∶1) | 500 | 59 |
| 24 | 山竹+杨桃(1∶5) | 500 | 34 |
| 25 | 山竹+杨桃(1∶10) | 500 | 28 |
| 26 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 50 | 29 |
| 27 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 100 | 43 |
| 28 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 250 | 64 |
| 29 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 500 | 81 |
| 30 | 桂圆+山竹+杨桃(5∶1∶1) | 500 | 67 |
| 31 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶1∶1) | 500 | 59 |
| 32 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶5∶5) | 500 | 44 |
| 33 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶10∶10) | 500 | 38 |
由上表可见，上述三种水果提取物的任意组合不同比例下的混合对酪氨酸酶均具有很好的抑制作用。
2)、对黑色素抑制作用研究
采用Hosoi等改良方法测定提取物对对黑色素抑制作用。B16黑色素细胞以1×105密度培养在96孔板中，经24h后换液，添加不同浓度的药物，72h后，经PBS洗涤两次，样品经空气干燥，溶于200μl1N NAOH(含1％DMSO)，经加热80℃至1h后冷却，选择475nm波长在酶联免疫检测仪上读取吸光度值。
黑色素含量抑制率＝[1-(药物孔吸光度值/药物孔细胞密度)(对照孔吸光度值/照孔细胞密度)]×100％，试验结果见表5：
表5
| 序号 | 样品 | 浓度(ug/ml) | 抑制率(％) |
| 1 | 桂圆+山竹(10∶1) | 50 | 12.4±1.8 |
| 2 | 桂圆+山竹(10∶1) | 100 | 20.3±3.3 |
| 3 | 桂圆+山竹(10∶1) | 250 | 32.2±3.1 |
| 4 | 桂圆+山竹(10∶1) | 500 | 73.7±8.8 |
| 5 | 桂圆+山竹(5∶1) | 500 | 63.1±2.1 |
| 6 | 桂圆+山竹(1∶1) | 500 | 37.1±2.3 |
| 7 | 桂圆+山竹(1∶5) | 500 | 23.3±3.6 |
| 8 | 桂圆+山竹(1∶10) | 500 | 12.8±4.7 |
| 9 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 50 | 10.8±2.2 |
| 10 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 100 | 21.2±0.9 |
| 11 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 250 | 41.2±6.9 |
| 12 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 500 | 53.3±2.3 |
| 13 | 桂圆+杨桃(5∶1) | 500 | 47.8±2.2 |
| 14 | 桂圆+杨桃(1∶1) | 500 | 23.2±5.7 |
| 15 | 桂圆+杨桃(1∶5) | 500 | 19.8±2.0 |
| 16 | 桂圆+杨桃(1∶10) | 500 | 15.3±1.1 |
| 17 | 山竹+杨桃(10∶1) | 50 | 12.7±1.3 |
| 18 | 山竹+杨桃(10∶1) | 100 | 41.1±3.3 |
| 19 | 山竹+杨桃(10∶1) | 250 | 55.6±3.7 |
| 20 | 山竹+杨桃(10∶1) | 500 | 70.1±1.1 |
| 21 | 山竹+杨桃(5∶1) | 500 | 60.8±2.8 |
| 22 | 山竹+杨桃(1∶1) | 500 | 33.8±4.1 |
| 23 | 山竹+杨桃(1∶5) | 500 | 24.1±2.9 |
| 24 | 山竹+杨桃(1∶10) | 500 | 12.3±1.4 |
| 25 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 50 | 21.1±1.5 |
| 26 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 100 | 42.9±5.8 |
| 27 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 250 | 58.0±6.3 |
| 28 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 500 | 80.2±3.6 |
| 29 | 桂圆+山竹+杨桃(5∶1∶1) | 500 | 69.1±6.2 |
| 30 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶1∶1) | 500 | 55.8±5.0 |
| 31 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶5∶5) | 500 | 38.7±4.0 |
| 32 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶10∶10) | 500 | 19.6±3.1 |
由上表可见，上述三种水果提取物的任意组合不同比例下的混合对B16细胞黑色素增殖均具有很好的抑制作用。
实施例5：水果提取物组合的保湿作用研究
将桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物的混合物配成5％(w/v)浓度，甘油配成5％(w/v)浓度的水溶液，选用同一规格的表面血，在上面贴一层医用透气胶带，室温条件下(24℃)吸取200μL，均匀涂敷在透气胶带上，然后将其放入醋酸钾饱和溶液的干燥器内(相对湿度约为50％)，放置5小时后分别称重，计算保湿率。试验结果如表6所示：
表6
| 序号 | 样品 | 浓度(ug/ml) | 保湿率(％) |
| 1 | 甘油(5％，对照) | —— | 5.7±1.2 |
| 2 | 桂圆+山竹(10∶1) | 200 | 1.4±0.5 |
| 3 | 桂圆+山竹(10∶1) | 400 | 2.1±0.1 |
| 4 | 桂圆+山竹(10∶1) | 800 | 2.7±0.7 |
| 5 | 桂圆+山竹(10∶1) | 1000 | 5.9±1.8 |
| 6 | 桂圆+山竹(5∶1) | 1000 | 4.8±0.9 |
| 7 | 桂圆+山竹(1∶1) | 1000 | 3.1±1.5 |
| 8 | 桂圆+山竹(1∶5) | 1000 | 2.2±0.8 |
| 9 | 桂圆+山竹(1∶10) | 1000 | 1.1±0.2 |
| 10 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 200 | 0.9±0.3 |
| 11 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 400 | 1.4±0.4 |
| 12 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 800 | 4.2±0.8 |
| 13 | 桂圆+杨桃(10∶1) | 1000 | 6.6±0.7 |
| 14 | 桂圆+杨桃(5∶1) | 1000 | 5.5±0.5 |
| 15 | 桂圆+杨桃(1∶1) | 1000 | 4.1±0.8 |
| 16 | 桂圆+杨桃(1∶5) | 1000 | 3.8±1.0 |
| 17 | 桂圆+杨桃(1∶10) | 1000 | 2.5±0.7 |
| 18 | 山竹+杨桃(10∶1) | 200 | 1.2±0.1 |
| 19 | 山竹+杨桃(10∶1) | 400 | 3.5±1.2 |
| 20 | 山竹+杨桃(10∶1) | 800 | 4.1±0.9 |
| 21 | 山竹+杨桃(10∶1) | 1000 | 7.3±0.4 |
| 22 | 山竹+杨桃(5∶1) | 1000 | 5.1±0.5 |
| 23 | 山竹+杨桃(1∶1) | 1000 | 4.4±0.9 |
| 24 | 山竹+杨桃(1∶5) | 1000 | 3.6±1.7 |
| 25 | 山竹+杨桃(1∶10) | 1000 | 5.4±0.8 |
| 26 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 200 | 1.1±0.9 |
| 27 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 400 | 2.8±0.3 |
| 28 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 800 | 4.1±0.7 |
| 29 | 桂圆+山竹+杨桃(10∶1∶1) | 1000 | 8.1±0.2 |
| 30 | 桂圆+山竹+杨桃(5∶1∶1) | 1000 | 5.1±1.0 |
| 31 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶1∶1) | 1000 | 3.9±1.4 |
| 32 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶5∶5) | 1000 | 3.8±0.5 |
| 33 | 桂圆+山竹+杨桃(1∶10∶10) | 1000 | 3.1±0.6 |
由上表可见，上述三种水果提取物的任意组合不同比例下的混合均具有良好的保湿作用。
通过以上各种试验，可见桂圆、山竹和杨桃这三种水果提取物的任意组合的混合物具有很好的美白、保湿、抗衰老等美容护肤的功效。
实施例6：含有水果活性成份提取物混合物的皮肤外用剂
取桂圆提取物和山竹提取物，按照1-10∶1-10的重量比进行混合配比，备用。
取桂圆提取物和杨桃提取物，按照1-10∶1-10的重量比进行混合配比，备用。
取山竹提取物和杨桃提取物，按照1-10∶1-10的重量比进行混合配比，备用。
取桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物，按照1-10∶1-10∶1-10的重量比进行混合配比，备用。
其中，任一组合下的水果提取物的混合物在皮肤外用剂中的重量百分比是0.0001-4，优选0.01-2。以下是这三种水果提取物不同组合下的混合物在皮肤外用剂中的具体应用的实施例。以下各表中“-”表示无添加。
实施例7：含有水果提取物混合物的化妆水
取实施例6中配制好的4种不同组合的水果提取物的混合物，分别用于制备具有抗衰老、美白和保湿作用的化妆水，其中，所述化妆水含有的组分如表7所示：
表7
实施例8：含有水果提取物混合物的精华液
取实施例6中配制好的4种不同组合的水果提取物的混合物，分别用于制备具有抗衰老、美白和保湿作用的精华液，其中，所述精华液含有的组分如表8所示：
表8
实施例9：含有水果活性成份提取物混合物的乳液/霜
取实施例6中配制好的4种不同组合的水果提取物的混合物，分别用于制备具有抗衰老、美白和保湿作用的乳液/霜，其中，所述乳液/霜含有的组分如表9和表10所示：
表9
表10
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物含有桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物中的至少两种提取物的混合物作为有效成分。
2.如权利要求1所述的含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述水果提取物的混合物在皮肤外用剂组合物中的重量百分比是0.0001-4。
3.如权利要求2所述的含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述水果提取物的混合物在皮肤外用剂组合物中的重量百分比是0.01-2。
4.如权利要求2所述的含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述的皮肤外用剂组合物为化妆水，化妆水中水果提取物混合物占的重量百分比为0.0001-2。
5.如权利要求2所述的含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述的皮肤外用剂组合物为精华液，精华液中水果提取物混合物占的重量百分比为0.0001-4。
6.如权利要求2所述的含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述的皮肤外用剂组合物为乳液，乳液中水果提取物混合物占的重量百分比为0.01-4。
7.如权利要求2所述的含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述的皮肤外用剂组合物为乳霜，乳霜中水果提取物混合物占的重量百分比为0.01-4。
8.如权利要求1-7任一项所述的含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，其特征在于，当所述水果提取物混合物为桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物中的任意两种的混合物时，这两种提取物间的重量比为1-10∶1-10；当所述水果提取物混合物为桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物的混合物时，这三种提取物间的重量比为1-10∶1-10∶1-10。
9.如权利要求8所述的含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，其特征在于，当所述水果提取物混合物为桂圆提取物和山竹提取物的混合物时，桂圆提取物和山竹提取物的重量比是1-10∶1-5；当所述水果提取物混合物为桂圆提取物和杨桃提取物的混合物时，桂圆提取物和杨桃提取物的重量比是1-10∶1-5；当所述水果提取物混合物为山竹提取物和杨桃提取物的混合物时，山竹提取物和杨桃提取物的重量比是1-10∶1-5；当所述水果提取物混合物为桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物的混合物时，桂圆提取物、山竹提取物和杨桃提取物的重量比是1-10∶1-5∶1-5。
10.如权利要求9所述的含有水果提取物混合物的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述水果提取物的混合物按以下方法制备：将桂圆、山竹和杨桃中的两种或三种的原料分别浸渍有机溶剂并提取后进行过滤、减压及浓缩后获取两种或三种水果的提取物，再将获得的提取物按一定比例混合。
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