CN103382485B - ChNRRa蛋白或其编码基因在调节植物开花时间中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种ChNRRa蛋白或其编码基因在调节植物开花时间中的应用。本发明提供的应用，所述ChNRRa蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列4。本发明的实验证明，通过改变植物中NRR(<u>n</u>utrition？<u>r</u>esponse？and？<u>r</u>oof？growth)基因（水稻中OsNRRa基因及其他单子叶植物中的直系同源基因，菊花中ChNRRa基因及其他双子叶植物中的直系同源基因）的表达水平，调节植物花期。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种ChNRRa蛋白或其编码基因在调节植物开花时间中的应用。
背景技术
植物开花受体内和环境众多因素的影响，例如发育阶段、激素、光照和温度等。在观赏花卉的培养过程中，通常采用人工光周期、人工控温和喷洒植物激素等手段来调节开花，消耗大量的场地、能量和人力成本。
发明内容
本发明的一个目的是提供ChNRRa蛋白或其编码基因的应用。
本发明提供了ChNRRa蛋白或其编码基因在调节植物开花时间中的应用；
所述ChNRRa蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列4。
上述应用中，所述ChNRRa的编码基因为如下a）-c）中任一一种：
a）由序列表中序列1所示的核苷酸序列组成的DNA分子；
b）由序列表中序列1自5’末端第47-895位核苷酸组成的DNA分子；
c）由序列表中序列1自5’末端第42-954位核苷酸组成的DNA分子。
上述应用中，所述调节植物开花时间为加快植物开花时间或滞后植物开花时间。
上述应用中，所述ChNRRa蛋白或其编码基因在滞后植物开花时间中的应用为将所述ChNRRa的编码基因导入目的植物中，得到开花时间晚于所述目的植物的转基因植物A；
所述ChNRRa蛋白或其编码基因在加快植物开花时间中的应用为抑制或失活目的植物中ChNRRa编码基因的表达，得到开花时间早于所述目的植物的转基因植物B。
上述应用中，所述ChNRRa编码基因通过重组载体A导入目的植物；
所述重组载体A为将所述ChNRRa编码基因插入植物表达载体pCambia1300-MCS的XbaI酶切位点中，得到表达所述ChNRRa编码基因的载体；
所述抑制或失活所述目的植物中的所述ChNRRa编码基因的表达通过将重组载体B导入所述目的植物中实现；
所述重组载体B为将DNA分子插入植物表达载体IPK的EcoRI/XbaI位点间，得到抑制或失活所述目的植物中的所述ChNRRa编码基因的表达；
所述DNA分子为如下1）或2）：
1）序列表中的序列2所示的DNA分子；
2）序列表中的序列3所示的DNA分子。
上述重组载体B具体为如下1）或2）：
1）为将序列表中序列2插入IPK的EcoRI/XbaI位点间，得到抑制或失活所述目的植物中的所述ChNRRa编码基因的表达；
2）为将序列表中序列3插入IPK的EcoRI/XbaI位点间，得到抑制或失活所述目的植物中的所述ChNRRa编码基因的表达。
上述应用中，所述目的植物为双子叶植物或单子叶植物；所述双子叶植物进一步具体为菊花。
本发明的第二个目的是提供一种培育转基因植物A的方法。
本发明提供的方法，包括如下步骤：将上述的应用中的所述ChNRRa的编码基因导入目的植物中，得到开花时间晚于所述目的植物的转基因植物A。
上述方法中，所述ChNRRa的编码基因通过上述的应用中的所述重组载体A导入目的植物；
本发明的第三个目的是提供一种培育转基因植物B的方法。
本发明提供的方法，包括如下步骤：抑制或失活目的植物中的所述ChNRRa编码基因的表达，得到开花时间早于所述目的植物的转基因植物B。
上述方法中，所述抑制或失活目的植物中的所述ChNRRa编码基因的表达通过将上述的应用中的所述重组载体B导入所述目的植物实现；
所述目的植物为单子叶植物或双子叶植物，所述双子叶植物具体为菊花。
本发明的第四个目的还提供了如下重组载体A或重组载体B或DNA分子。
本发明提供的重组载体A为将所述ChNRRa编码基因插入植物表达载体pCambia1300-MCS的Xba I酶切位点中，得到表达所述ChNRRa编码基因的载体；
本发明提供的重组载体B为将上述的应用中所述DNA分子插入植物表达载体IPK中，得到抑制或失活所述目的植物中的所述ChNRRa编码基因的表达；
本发明提供的DNA分子为如下1）或2）：
1）序列表中的序列2所示的DNA分子；
2）序列表中的序列3所示的DNA分子。
本发明的实验证明，通过改变植物中NRR(nutrition response and root growth)基因（菊花中ChNRRa基因）的表达水平，调节植物花期，本研究在重要双子叶观赏植物菊花上验证了单独调节ChNRRa基因的表达水平就可以调节植物花期，过表达后的转基因植物花期滞后，抑制ChNRRa基因表达的转基因植物的花期提前；可以推测该基因在其它植物中也有同样的作用。因此本发明提供了一个简单有效的调节植物开花的新方法，在花卉生产中将具有重大应用潜力。
附图说明
图1为从菊花(Chrysanthemums Morifolirum)中分离并克隆ChNRRa cDNA片段
(A)采用简并引物PCR扩增产物的电泳分析；(B)分别是从5'RACE和3'RACE实验中获得的PCR产物。
图2为转基因菊花的DNA-PCR检测分析
图3为转基因菊花的realtime-PCR检测分析
图4为ChNRRa-OX及ChNRRa-RNAi转基因菊花的开花时间对比及其分子检测分析
(A)ChNRRa-OX及ChNRRa-RNAi的载体构建示意图，其中ChNRRa-OX由CaMV 35S启动子驱动ChNRRa的表达，ChNRRa-RNAi是通过长片段发卡结构的RNAi方法构建的载体；(B)ChNRRa-RNAi植株(右)与非转基因菊花（左)的开花表型；(C)ChNRRa-OX植株(右)和非转基因菊花(左)的开花表型；(D)ChNRRa-RNAi Northern-blot分析。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
表1为下面实施例中所用的引物序列
实施例1、ChNRRa基因在调节菊花开花时间中的应用
一、过表达载体和RNA干扰载体的构建
1、ChNRRa基因的cDNA片段的获得
根据水稻ChNRRa及其同源基因的保守核苷酸和推测氨基酸序列，分别设计了4个简并引物：正向JuS1,JuS2；反向JuR1,JuR2(表1)。采用TRIZOL(Invitrogen Cat.No.15596-018)方法，从夏黄（菊花的品种）的幼嫩叶片中提取总RNA，并按照TURBODNA-freeTM Kit(Applied Biosystems,AM1907)用TURBO DNase处理后，采用Invitrogen superscriptTM III first strand synthesis system(Cat.No.18080-051)反转录合成cDNA，并以此作为简并PCR反应的模板。采用4种引物组合(a)JuS1+JuR1;(b)JuS1+JuR2;(c)JuS2+JuR2;和(d)JuS2+JuR1分别进行了PCR扩增，PCR反应体系中用LA Taq DNA聚合酶(Takara,Cat.No.DRR02BG)。PCR运行程序为94°C，4min对模板变性之后；94°C,1min/50°C,1min10sec/72°C,2min运行30个循环；然后72°C，10min后，在4°C保存。
结果如图1A所示，引物JuS2和JuR1配对扩增得到ChNRRa cDNA的部分片段(630bp)。
将扩增到的630bp DNA片段经过胶回收纯化后，克隆到pGEM-T载体(Promega,Cat.No.A3600)进行测序分析，结果证明为菊花ChNRRa基因的cDNA片段。
根据简并PCR扩增获得的cDNA序列，进一步设计了用于5'RACE实验的两个特异引物：Ju-5race-outp和Ju-5race-innp（表1）以及用于3'RACE的两个特异引物：3race-ju2和3race-ju3（表1)。采用FirstChoice RLM-RACE试剂盒(Ambion,AM1700)进行了5'RACE实验。3'RACE实验的具体步骤参照文献(Yuman et al.,2012)操作,首先用引物oligo(18)dT-adapter-1对菊花叶片总RNA进行反转录成单链cDNA，继而用引物对3race-adapter2/3race-ju2和3race-adapter3/3race-ju3进行了两次PCR扩增,将第二次的PCR产物克隆到载体pGEM-T进行序列确认。
上述根据已获得的cDNA序列设计引物，进一步通过5'RACE实验获得了542bp的cDNA片段(图1B),发现ChNRRa的转录起始位点（transcription start site，TSS)位于ATG翻译起始密码子上游46bp(序列1，第1位核苷酸)。此外，还通过3'RACE实验获得了约300bp的扩增产物(图1B)，发现ChNRRa cDNA的3'末端终止于4个不同的位置(序列1，第1095,1105,1118,1126位点的核苷酸)。
根据从5'RACE和3'RACE实验所获得的ChNRRa cDNA的5'和3'端序列设计了分别位于5'和3'UTR区域的两个特异引物JU-P5和JU-P3（表1），以夏黄cDNA为底物，扩增得到1074bp片段，将其PCR产物克隆到pGEM-T载体进行测序分析，获得夏黄ChNRRa cDNA序列，其核苷酸序列为序列表中的序列1自5’末端第43-1116位核苷酸，其编码区为序列1自5’末端第47-895位核苷酸，其编码的蛋白命名为ChNRRa，氨基酸序列为序列表中的序列4，其编码的蛋白质与水稻ChNRRa编码的蛋白质的氨基酸序列的相似性为40.2%。
2、ChNRRa过表达载体p130-ChNRRa（ChNRRa-OX）的构建
ChNRRa过表达载体的构建：以含有全长ChNRRa cDNA的序列1为模板，分别设计引物JuOX5-xba和JuOX3-xba（表1），通过RT-PCR扩增得到914bp含完整ORF的ChNRRa cDNA片段，经过测序该片段具有序列1自5’末端第42-954bp核苷酸，并在基因片段的5'和3'端分别引入了XbaI酶切位点（TCTAGA）。
将上述PCR产物用XbaI酶切，将其克隆到同样酶切的植物表达载体pCambia1300-MCS（章俊丽,杨鵾,张玉满,颜永胜,赵志强,方荣祥,孙宗修,傅亚萍,陈晓英.(2009)水稻OsCIPK10基因的克隆和功能分析.生物工程学报,25(9):1394-1401.公众可从中国科学院微生物研究所获得。）上，获得了ChNRRa过表达的植物表达载体p130-ChNRRa（图4A上图）,其中ChNRRa的表达由CaMV35S驱动，经过测序p130-ChNRRa为将序列1自5’末端第42-954位核苷酸插入pCambia1300-MCS的XbaI酶切位点间得到的载体。
3、ChNRRa基因沉默载体pChNRR1ab-RNAi（ChNRRa1-RNAi）和pChNRR2ab-RNAi（ChNRRa2-RNAi）的构建
针对ChNRRa cDNA 5'和3'端两个靶标序列(393bp,序列1:第43-435bp;395bp，序列1:第717-1111bp)设计引物，JU-1antS-EcoI/JU-1antR-Kpn和JU-2antS-EcoI/JU-2antR-Kpn；以及引物对JU-1antS-Xba/JU-1antR-Bam和JU-2antS-Xba/JU-2antR-Bam（表1）。
以序列1为模板，分别以JU-1antS-EcoI/JU-1antR-Kpn和JU-2antS-EcoI/JU-2antR-Kpn为引物对，扩增得到393bp正向片段1和395bp的正向片段2。
以序列1为模板，分别以JU-1antS-Xba/JU-1antR-Bam和JU-2antS-Xba/JU-2antR-Bam为引物对，扩增得到393bp反向片段1和395bp的反向片段2。
将正向片段1和反向片段1分别通过EcoRI/KpnI和XbaI/BamHI双酶切后插入到用相应酶切过植物表达载体IPK（章俊丽,杨鵾,张玉满,颜永胜,赵志强,方荣祥,孙宗修,傅亚萍,陈晓英.(2009)水稻OsCIPK10基因的克隆和功能分析.生物工程学报,25(9):1394-1401.公众可从中国科学院微生物研究所获得。）上，获得了植物表达载体pChNRR1ab-RNAi；
将正向片段2和反向片段2分别通过EcoRI/KpnI和XbaI/BamHI双酶切后插入到用相应酶切过植物表达载体IPK上，获得了植物表达载体pChNRR2ab-RNAi；
经过测序，pChNRR1ab-RNAi为将序列表中序列2插入IPK的EcoRI/XbaI位点间，由CaMV 35S驱动（图4A下图）；
序列2的自5’末端第7-399位核苷酸为正向片段（为序列1自5’末端第43-435位核苷酸），序列2的自5’末端第1217-1609位核苷酸为反向片段，序列2的自5’末端第400-1216位核苷酸为内含子，且其中正向片段和反向片段的序列为反向互补。
pChNRR2ab-RNAi为将序列表中序列3插入IPK的EcoRI/XbaI位点间，由CaMV 35S驱动（图4A下图）。
序列3的自5’末端第6-400位核苷酸为正向片段（为序列1自5’末端第717-1111位核苷酸），序列3的自5’末端第1218-1610位核苷酸为反向片段，序列3的自5’末端第401-1217位核苷酸为内含子，且其中正向片段和反向片段的序列为反向互补。
二、过表达转基因菊花和ChNRRa基因沉默转基因菊花的获得
1、转基因菊花的获得
将以上构建的植物表达质粒p130-ChNRRa、pChNRR1ab-RNAi和pChNRR2ab-RNAi分别转入农杆菌（Argrobactium tumefaciens）EHA105（章俊丽,杨鵾,张玉满,颜永胜,赵志强,方荣祥,孙宗修,傅亚萍,陈晓英.(2009)水稻OsCIPK10基因的克隆和功能分析.生物工程学报,25(9):1394-1401.公众可从中国科学院微生物研究所获得。），通过农杆菌介导的转化系统转化野生型菊花（切花菊‘夏黄’品种，购自大森林花卉市场）的叶片，分别得到42株T0代ChNRRa-OX菊花（转p130-ChNRRa，过表达）、40株T0代ChNRRa1-RNAi菊花（转pChNRR1ab-RNAi，基因沉默）和31株T0代ChNRRa2-RNAi菊花（转pChNRR2ab-RNAi，基因沉默）；
具体转化方法如下：
将菊花离体叶片接种于分化培养基MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L上预培养2天。然后挑取携带目的基因的农杆菌EHA105新鲜单克隆在LB+50ug/L卡那霉素的液体培养基中振荡培养(28℃/200rpm)约13h后，加入20mg/L乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)继续培养3h后使农杆菌OD 600≈0.8，5000rpm离心10min收集菌体,用1/2MS+AS 20mg/L液体培养基悬浮菌体并侵染预培养过的外植体10min，以未侵染的外植体作阴性对照。侵染后用无菌滤纸将外植体周围的菌液吸干，转接到培养基MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+AS 20mg/L上，黑暗共培养3天后，将叶片先转接到筛选培养基MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+潮霉素（Hyg）10mg/L+羧卞青霉素钠(Carb)500mg/L上，待愈伤组织分化出不定芽后，再将Hyg的浓度升高到20mg/L，每两周转接一次。将分化的长约2cm不定芽转接至生根培养基(1/2MS+Hyg 20mg/L+Carb 500mg/L)上进行生根培养，最后将T0代的生根植株经炼苗后转移至营养土：蛭石(1:1)中,在25℃自然光温室中生长，观察植株的开花时期。
2、DNA-PCR检测转基因菊花
采用CTAB方法（Murray and Thompson,1980）分别从T0代ChNRRa-OX菊花、T0代ChNRRa1-RNAi菊花和T0代ChNRRa2-RNAi菊花的叶片中提取基因组DNA，用引物Hyg-S和Hyg-R（表1，引物根据载体上的潮霉素抗性基因序列设计）进行PCR检测。
结果如图2，(A)-(B)是检测T0代ChNRRa-OX菊花；(C)-(D)是检测T0代ChNRRa1-RNAi菊花；(E)是T0代ChNRRa2-RNAi菊花的检测分析，H2O为PCR阴性对照，CK为以质粒p130-ChNRRa为模板的阳性对照反应，可以看出，能获得700bp PCR产物均为阳性T0代转基因植株。
获得了42株PCR阳性T0代ChNRRa-OX菊花；40株PCR阳性T0代ChNRRa1-RNAi菊花；31株PCR阳性T0代ChNRRa2-RNAi菊花。
3、Real-time PCR检测转基因菊花
在Real-time PCR中，采用Green Real-time PCR Master Mix(TOYOBO,QPK-201)，分别设计了特异引物对JU-S770/JU-R920（表1）分析ChNRRa在阳性T0代ChNRRa-OX菊花（ChNRRa-OX）、阳性T0代ChNRRa1-RNAi菊花（ChNRRa1-RNAi）、阳性T0代ChNRRa2-RNAi菊花（ChNRRa2-RNAi）和野生型菊花（CK）的叶片、茎、根、小花、花托、花苞、花蕾及嫩花茎等不同组织中的表达水平，以及转基因植株中ChNRRa的变化。用菊花ACTIN基因(GenBank:AB205087.1)的特异引物JUactin-F和JUactin-R（表1）扩增的116bp片段做内参照。
结果为图3，与野生型菊花（CK）相对比，ChNRRa的表达水平在ChNRRa-OX过量表达植株中的第3、4号植株高于对照，而ChNRRa-RNAi植株中其表达水平相应降低，其中ChNRRa1-RNAi的1、2号，ChNRRa2-RNAi的1号明显低于对照植株。
采用同样的方法将空载体pCambia1300-MCS和IPK分别转入野生型菊花中，分别得到T0代转pCambia1300-MCS菊花和T0代转IPK菊花，分别提取RNA，反转录得到cDNA,用引物JuOX5-xba和JuOX3-xba进行RT-PCR，以野生型菊花为对照，上述T0代转pCambia1300-MCS菊花和T0代转IPK菊花中的目的基因表达量与野生型菊花无显著差役。
三、ChNRRa在调节菊花花期的应用
1、菊花的花期
将上述得到的阳性T0代ChNRRa-OX菊花、阳性T0代ChNRRa1-RNAi菊花、阳性T0代ChNRRa2-RNAi菊花、野生型菊花、T0代转pCambia1300-MCS菊花和T0代转IPK菊花分别移植在营养土：蛭石(1:1)中,在25℃自然光温室中生长，观察植株的开花时期。
在移植后第177天拍照结果如图4B和4C所示，从4B中看出，与野生型菊花（CK）相对比，在阳性T0代ChNRRa1-RNAi菊花（ChNRRa-RNAi，左边第三棵）和阳性T0代ChNRRa2-RNAi（ChNRRa-RNAi，左边第四棵）开花均早，与此相反，在阳性T0代ChNRRa-OX菊花中过量表达ChNRRa的转基因植株表现明显的晚花。
野生型菊花、T0代转pCambia1300-MCS菊花和T0代转IPK菊花结果无显著差异。
按照上述方法培养40株阳性T0代ChNRRa1-RNAi菊花、31株阳性T0代ChNRRa2-RNAi菊花、42株阳性T0代ChNRRa-OX菊花、7株野生型菊花、7株T0代转pCambia1300-MCS菊花和7株T0代转IPK菊花，观察开花时间，结果如下：
野生型菊花的开花时间均为移植后第216天；
40株阳性T0代ChNRRa1-RNAi菊花中有9株开花时间分别为移植后第152、152、169、169、169、169、169、169、176天；
31株阳性T0代ChNRRa2-RNAi菊花中有10株开花时间分别为移植后第169、169、169、169、169、169、169、169、169、176天；
42株阳性T0代ChNRRa-OX菊花中有7株开花时间均滞后于野生型菊花，分别为移植后第236、236、236、236、240、233、236天；
野生型菊花、T0代转pCambia1300-MCS菊花和T0代转IPK菊花结果无显著差异。
可以看出其中40株阳性T0代ChNRRa1-RNAi菊花和31株阳性T0代ChNRRa2-RNAi菊花中分别有22.5%(9株/40株)和32.26%(10株/31株)植株的开花时间提前了40-64天。42株阳性T0代ChNRRa-OX菊花中7株比野生型菊花（CK）开花时间晚。
通过扦插繁殖的T1和T2代转基因植株的开花时间与其对照相对比，同样观察到与T0代植株的表型一致的花期变化。证明通过改变ChNRRa基因的表达水平影响开花时间的有效性及改良花期性状的遗传稳定性。
2、Northern-blot分子杂交检测转基因菊花
采用395bp的ChNRRa cDNA（序列1:717-1111bp）扩增片段作为探针，用阳性T0代ChNRRa1-RNAi菊花和阳性T0代ChNRRa2-RNAi菊花叶片的总RNA(15ug)分别进行Northern-blot杂交，杂交程序按照Sambrook分子克隆手册操作。以野生型菊花为对照。
结果为如图4D所示，可以看出，与野生型菊花（CK）相比，阳性T0代ChNRRa1-RNAi菊花（图中第2-5泳道）和阳性T0代ChNRRa2-RNAi菊花（图中第6-7泳道）中的ChNRRa的表达量均明显下降。
从前面的real-time PCR和Northern-blot检测结果可以看出ChNRRa在转基因植株中的表达水平，数据初步显示ChNRRa的表达水平与花期相关，表达水平越低，植物早花倾向越显著；相反，菊花中ChNRRa的过量表达推迟了菊花的开花时间。
Claims (7)
1.ChNRRa蛋白或其编码基因在调节菊花开花时间中的应用；
所述ChNRRa蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列4；
所述ChNRRa蛋白或其编码基因在滞后菊花开花时间中的应用为将所述ChNRRa的编码基因导入目的菊花中，得到开花时间晚于所述目的菊花的转基因菊花A；
所述ChNRRa蛋白或其编码基因在加快菊花开花时间中的应用为抑制或失活目的菊花中ChNRRa编码基因的表达，得到开花时间早于所述目的菊花的转基因菊花B。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：
所述ChNRRa的编码基因为如下a）-c）中任意一种：
a）由序列表中序列1所示的核苷酸序列组成的DNA分子；
b）由序列表中序列1自5’末端第47-895位核苷酸组成的DNA分子；
c）由序列表中序列1自5’末端第42-954位核苷酸组成的DNA分子。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：
所述ChNRRa编码基因通过重组载体A导入目的菊花；
所述重组载体A为将所述ChNRRa编码基因插入菊花表达载体pCambia1300-MCS中，得到表达所述ChNRRa编码基因的载体；
所述抑制或失活所述目的菊花中的所述ChNRRa编码基因的表达通过将重组载体B导入所述目的菊花中实现；
所述重组载体B为将序列表中的序列2或3所示的DNA分子插入植物表达载体IPK中，得到抑制或失活所述ChNRRa编码基因表达载体。
4.一种培育转基因菊花A的方法，包括如下步骤：将权利要求1-3中任一所述的应用中的所述ChNRRa的编码基因导入目的菊花中，得到开花时间晚于所述目的菊花的转基因菊花A。
5.根据权利要求4中所述的方法，其特征在于：
所述ChNRRa的编码基因通过权利要求3中所述的应用中的所述重组载体A导入目的菊花。
6.一种培育转基因菊花B的方法，包括如下步骤：抑制或失活目的菊花中的所述ChNRRa编码基因的表达，得到开花时间早于所述目的菊花的转基因菊花B；
所述抑制或失活目的菊花中的所述ChNRRa编码基因的表达为将权利要求3中所述的应用中的所述重组载体B导入所述目的菊花；
所述ChNRRa编码基因为如下a）-c）中任意一种：
a）由序列表中序列1所示的核苷酸序列组成的DNA分子；
b）由序列表中序列1自5’末端第47-895位核苷酸组成的DNA分子；
c）由序列表中序列1自5’末端第42-954位核苷酸组成的DNA分子。
7.如下重组载体A或重组载体B：
所述重组载体A为将所述ChNRRa编码基因插入植物表达载体pCambia1300-MCS中，得到表达所述ChNRRa编码基因的载体；
所述重组载体B为将序列表中的序列2或3所示的DNA分子插入植物表达载体IPK中，得到抑制或失活目的植物中的所述ChNRRa编码基因的表达载体；
所述ChNRRa的编码基因为如下a）-c）中任意一种：
a）由序列表中序列1所示的核苷酸序列组成的DNA分子；
b）由序列表中序列1自5’末端第47-895位核苷酸组成的DNA分子；
c）由序列表中序列1自5’末端第42-954位核苷酸组成的DNA分子。
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