CN103379913A - 用于治疗癌症的肽 - Google Patents

用于治疗癌症的肽 Download PDF

Info

Publication number
CN103379913A
CN103379913A CN2011800681110A CN201180068111A CN103379913A CN 103379913 A CN103379913 A CN 103379913A CN 2011800681110 A CN2011800681110 A CN 2011800681110A CN 201180068111 A CN201180068111 A CN 201180068111A CN 103379913 A CN103379913 A CN 103379913A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
peptide
aminoacid
motif
phosphorylation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2011800681110A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103379913B (zh
Inventor
S·阿尔-玛穆德
S·科兰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Gene Signal International SA
Original Assignee
Gene Signal International SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US12/974,958 external-priority patent/US8383591B2/en
Priority claimed from EP10196278A external-priority patent/EP2468288A1/en
Application filed by Gene Signal International SA filed Critical Gene Signal International SA
Publication of CN103379913A publication Critical patent/CN103379913A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103379913B publication Critical patent/CN103379913B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及4-50个氨基酸的肽，所述肽包含磷酸化pYX1X2X1基序(SEQ ID NO:1),其中每个X1独立地是M或Nle，并且X2是任何氨基酸，包含所述肽的药物组合物及其用于治疗癌症的用途。

Description

用于治疗癌症的肽
技术领域
本发明涉及肽，包含所述肽的组合物及其用于治疗癌症的用途。
背景技术
许多生长因子和激素诸如神经生长因子(NGF),血小板衍生生长因子(PDGF),表皮生长因子(EGF)和胰岛素通过与细胞表面酪氨酸激酶受体的相互作用来介导它们的信号。由配体结合起始的细胞外信号的跨膜转导导致多个信号传导事件的传播，最终控制细胞内的目标生物化学通路。
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)代表了异二聚体脂质激酶的一个普遍存在的家族，发现其与激素和生长因子受体的胞质结构域和癌基因产物缔合。PI3K充当这些受体的下游效应器，在受体刺激时被其被招募，并且通过产生肌醇的磷酸化衍生物来介导第二信使信号传导通路的激活(Fry,Biochim.Biophys.Acta.,1994,1226:237-268)。
I类PI3K由含Src同源区-2结构域的85kDa调控亚基(p85)和110-kDa催化亚基(p110)构成,该催化亚基在肌醇环的D3位置处催化磷脂酰肌醇的磷酸化(Cantley,Science296:1655-1657(2002);Carpenter和Cantley,Curr.Opin.Cell Biol.,8:153-8(1996))。
PI3K在宽范围的生物学效应中具有核心地位，包括生长因子介导的细胞转化、有丝分裂发生、蛋白质运输、细胞存活和增殖、DNA合成、凋亡、轴突生长、和胰岛素刺激的葡萄糖运输(由Fry综述，Biochim.Biophys.Acta.,1994,1226,237-268)。其显而易见地参与那么多不同的信号传导通路提示其可能提供更广泛的、促进性的信号传导功能，诸如靶向活性复合体，而不是直接控制这些众多事件。
已经提示将参与PI3K信号传导的蛋白质的抑制剂作为治疗剂。所述抑制剂的例子包括渥曼青霉素(wortmannin)、去甲氧绿胶霉素(demethoxyviridin)、槲皮素(quercetin)和LY294002。这些抑制剂主要靶向p110亚基并且表现出毒性和短的半衰期，这些限制了它们在临床试验中的应用。
对这些抑制剂的替代方式已经用来通过RNA干扰特异性地抑制重要通路蛋白的表达,诸如通过siRNA对p85表达的特异性抑制。
本发明的目的是发现PI3K信号传导的抑制剂。优选地，所述抑制剂将呈现下列的优点：高稳定性、比siRNA更好的细胞渗透/扩散、和比siRNA更好的半衰期。
本发明出人意料地观察到具有如下面所定义的磷酸化YX1X2X1基序的肽能够在体内减小肿瘤尺寸。
具有在基序YMXM的情形下的磷酸酪氨酸残基的序列已知能够结合SH2结构域。p85被认为拥有两个SH2结构域并且这些SH2结构域与在基序YMXM的情形下的磷酸酪氨酸残基的结合被认为激活p85和p110，导致催化磷脂酰肌醇(PdtIns)的磷酸化，产生PtdIns(3)、PtdIns(3,4)P2和PtdIns(3,4,5)P3。
在本领域中已知包含磷酸化YMXM基序的合成肽在体外激活PI3K(White等人1994The Journal of Biological Chemistry269(7):1-4)。由于PI3K信号传导的激活已知与癌症发展有关，因此不会促使本领域技术人员使用激活PI3K信号传导的肽用于治疗癌症。
发明内容
本发明的一个目的是包含磷酸化pYX1X2X1基序(SEQ ID NO:1)的肽,其中每个X1独立地是M或Nle并且X2是任何氨基酸，
其中所述肽包含4-50个氨基酸,并且
其中所述肽不是SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32。
在一个实施方案中，本发明的肽不是SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64。
在本发明的一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸，并且包含磷酸化GpYX1FX1S基序(SEQ ID NO:15),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化EpYX1NX1D基序(SEQ ID NO:19),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化GpYX1PX1S基序(SEQ ID NO:14),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化DpYX1FX1S基序(SEQ ID NO:16),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化GpYX1MX1S基序(SEQ ID NO:17),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化DpYX1NX1S基序(SEQ ID NO:18),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化DpYX1TX1Q基序(SEQ ID NO:20),其中每个X1独立地是M或Nle。
本发明的另一个目的是包含4-50个氨基酸的肽的药物组合物，所述肽包含磷酸化pYX1X2X1基序(SEQ ID NO:1),其中每个X1独立地是M或Nle并且X2是任何氨基酸。
在本发明的一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化GpYX1X2X1S基序(SEQ ID NO:33),其中每个X1独立地是M或Nle并且X2是P、F或M。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化DpYX1X2X1S基序(SEQ ID NO:34),其中每个X1独立地是M或Nle并且X2是P或N。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化EpYX1NX1D基序(SEQ ID NO:35),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化DpYX1TX1Q基序(SEQ ID NO:36),其中每个X1独立地是M或Nle。
本发明的另一个目的是如上面所述的药物组合物，其用于治疗癌症。
本发明的另一个目的是如上面所述的药物组合物，其用于治疗血管发生相关疾病。
本发明的另一个目的是如上面所述的药物组合物，其还包含至少一种细胞毒素剂、化学治疗剂或抗癌剂。
具体实施方式
定义
当在本文中使用时，术语“肽”是指2个氨基酸至50个氨基酸的氨基酸序列。优选地，肽包含3个氨基酸至45个氨基酸，更优选3-40个氨基酸，甚至更优选4-30个氨基酸。特别优选的实施方案包括包含4-20个氨基酸，诸如5-15个氨基酸或5-10个氨基酸的肽。“分离的”肽是指已经从其天然环境中移出的肽或由本领域技术人员设计的肽。当在本文中使用时，“氨基酸”由如本领域中所熟知的其全称、其三个字母代码或其一个字母代码表示。肽中的氨基酸残基缩写如下：苯丙氨酸是Phe或F;亮氨酸是Leu或L;异亮氨酸是Ile或I;甲硫氨酸是Met或M;缬氨酸是VaI或V;丝氨酸是Ser或S;脯氨酸是Pro或P;苏氨酸是Thr或T;丙氨酸是Ala或A;酪氨酸是Tyr或Y;组氨酸是His或H;谷氨酰胺是Gln或Q;天冬酰胺是Asn或N;赖氨酸是Lys或K;天冬氨酸是Asp或D;谷氨酸是Glu或E;半胱氨酸是Cys或C;色氨酸是Trp或W;精氨酸是Arg或R;以及甘氨酸是Gly或G。术语“氨基酸”包括天然和合成氨基酸两者，以及D和L氨基酸两者。“标准氨基酸”或“天然氨基酸”是指天然存在的肽中普遍存在的20种标准L-氨基酸中的任一种。“非标准氨基酸残基”是指不同于标准氨基酸的任何氨基酸，无论其是否通过合成制备或由天然来源得到。例如，萘基丙氨酸(naphtlylalanine)可以替代色氨酸以促进合成。可以替代的其他合成氨基酸包括，但不限于，L-羟基丙基、L-3,4-二羟基苯基丙氨酰基，α-氨基酸诸如L-α-羟基赖氨酰基和D-α-甲基丙氨酰基、L-α-甲基丙氨酰基、β-氨基酸、和异喹啉基。
当在本文中使用时，“氨基酸”也涵盖化学修饰的氨基酸，包括但不限于盐、氨基酸衍生物(诸如酰胺)、和取代的氨基酸。包含在本发明的肽内的氨基酸，并且特别是在羧基-或氨基-末端处的氨基酸可以通过甲基化、酰胺化、乙酰化或用可以改变所述肽的循环半衰期而不负面影响其活性的其他化学基团取代来修饰。另外，在本发明的肽内可以存在或不存在二硫键。
本发明的肽可以包含天然的标准氨基酸或非标准氨基酸。肽模拟物包括具有下列修饰的肽：i)其中一个或多个肽基-C(O)NR-连接(键)已经被非肽基连接诸如-CH2-氨基甲酸酯键(-CH2OC(O)NR-)、膦酸酯键、-CH2-磺酰胺(-CH2-S(O)2NR-)键、脲(-NHC(O)NH-)键、-CH2-仲胺键替换，或用烷基化的肽键(-C(O)NR-)替换的肽，其中R是C1-C4烷基;ii)其中N-末端衍生为-NRR1基团、衍生为-NRC(O)R基团、衍生为-NRC(O)OR基团、衍生为-NRS(O)2R基团、衍生为-NHC(O)NHR基团的肽，其中R和R1是氢或C1-C4烷基，条件是R和R1不都是氢;iii)其中C末端衍生为-C(O)R2的肽，其中R2选自C1-C4烷氧基和-NR3R4，其中R3和R4独立地选自氢和C1-C4烷基。
当在本文中使用时，术语“保守氨基酸置换”在本文中被定义为在下列5组中之一内互换的氨基酸：
I.小的脂肪族、非极性或稍有极性的残基：Ala、Ser、Thr、Pro、Gly;
II.极性的、带负电荷的残基和它们的酰胺：Asp、Asn、Glu、Gln;
III.极性的、带正电荷的残基：His、Arg、Lys;
IV.大的脂肪族、非极性残基：Met、Leu、Ile、Val、Cys
V.大的芳香族残基：Phe、Tyr、Trp。
当在本文中使用时，术语“治疗”包括预防特定的病症或状况，或减轻与特定的病症或状况相关的症状和/或预防或消除所述症状。“预防性”治疗是向没有表现出疾病的体征或仅表现出所述疾病的早期体征的受试者施用的用于减少发生与所述疾病相关的病理学的风险的目的的治疗。“治疗性”治疗是向表现出病理学体征的受试者施用的用于减少或消除这些体征的目的的治疗。化合物的“治疗有效量”是足以为施用所述化合物的受试者提供有益效果的化合物量。
本发明
本发明的一个目的是包含磷酸化pYX1X2X1基序(SEQ ID NO:1)的肽。
根据本发明，酪氨酸Y是磷酸化的(pY)。
根据本发明，磷酸化pYX1X2X1基序中的每个氨基酸X1独立地对应于M(甲硫氨酸)或Nle(正亮氨酸)。本发明的肽因此包含磷酸化pYMX2M基序、pYMX2Nle基序、pYNleX2M基序或pYNleX2Nle基序。优选地，在Y+1位置处的X1独立地是M或Nle并且Y+3位置处的X1是M。
根据本发明，磷酸化pYX1X2X1基序中的氨基酸X2对应于任何氨基酸，优选任何天然氨基酸。优选地，X2选自包含P、M、N、T、K和F的组。更优选地，X2选自包含F、N和T的组。
在本发明的一个实施方案中，所述肽不是DDGpYMPMSPGV(SEQ ID NO:2)、NGDpYMPMSPGV(SEQ ID NO:3)、PNGpYMMMSPSG(SEQ ID NO:4)、TGDpYMNMSPVG(SEQ ID NO:5)、SEEpYMNMDLGP(SEQ ID NO:6)、KKHTDDGpYMPMSPGVA(SEQ ID NO:7)、RKGNGDGpYMPMSPKSV(SEQID NO:8)、KKRVDPNGpYMMMSPSGS(SEQ ID NO:9)、KKKLPATGDpYMNMSPVGD(SEQ ID NO:10)、KKGSEEpYMNMDLGPGR(SEQ ID NO:11)、KKSRGDpYMTMQIG(SEQ ID NO:12)、KKSRGNpYMTMQIG(SEQ ID NO:13)、EEEYMpPMEDLY(SEQ ID NO:29)、DGGpYMDMSKDE(SEQ ID NO:30)、KKKEEEEEEpYMPMEDL(SEQ ID NO:31)、KKSRGDpYNleTMQIG(SEQ ID NO:32)、TDDGpYMPMSPGV(SEQ IDNO:41)、DPNGpYMMMSPSG(SEQ ID NO:43)、GNGDpYMPMSPKS(SEQ IDNO:44)、RENEpYMPMAPQIH(SEQ ID NO:45)、EEEEpYMPMEDLYL(SEQID NO:46)、TDDGpYMPMSPGVA(SEQ ID NO:47)、GNGDpYMPMSPKSV(SEQ ID NO:48)、SDGGpYMDMSKDES(SEQ ID NO:49)、RDGpYMTMQIG(SEQ ID NO:50)、IDVpYMIMVK(SEQ ID NO:51)、DGGpYMDMSKDE(SEQID NO:52)、HSDpYMNMTPR(SEQ ID NO:53)、NGDpYMPMSPKS(SEQ IDNO:54)、GDpYMPMSPKS(SEQ ID NO:55)、DpYMPMSPKS(SEQ ID NO:56)、pYMPMSPKS(SEQ ID NO:57)、pYMPMSP(SEQ ID NO:58)、pYMPMS(SEQ ID NO:59)、pYMPM(SEQ ID NO:60)、pYMPMSPAS(SEQ ID NO:61)、pYMPMSAKS(SEQ ID NO:62)、pYMPMAPKS(SEQ ID NO:63)或pYMAMSPKS SEQ ID NO:64。
在本发明的一个实施方案中，所述肽不是GNGDpYMPMDPKS(SEQ IDNO:42)。
在本发明的一个实施方案中，所述肽包含4-50个氨基酸。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含4-40个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含4-30个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-25个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-20个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-18个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-15个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-14个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-13个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-12个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-11个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-10个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-9个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-8个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含5-7个氨基酸。在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6个氨基酸。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽由或基本上由5-50个氨基酸、5-40个氨基酸、5-30个氨基酸、5-25个氨基酸、5-20个氨基酸、5-18个氨基酸、5-15个氨基酸、5-14个氨基酸、5-13个氨基酸、5-12个氨基酸、5-11个氨基酸、5-10个氨基酸、5-9个氨基酸、5-8个氨基酸、5-7个氨基酸、6个氨基酸组成。
在本发明的一个实施方案中，所述肽具有50、40、30、20个氨基酸的长度，19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6个氨基酸的长度，并且包含磷酸化GpYX1PX1S基序(SEQ ID NO:14)，其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽具有50、40、30、20个氨基酸的长度，19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6个氨基酸的长度，并且包含磷酸化GpYX1FX1S基序(SEQ ID NO:15),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽具有50、40、30、20个氨基酸的长度，19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6个氨基酸的长度，并且包含磷酸化DpYX1PX1S基序(SEQ ID NO:16),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽具有50、40、30、20个氨基酸的长度,19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6个氨基酸的长度，并且包含磷酸化GpYX1MX1S基序(SEQ ID NO:17),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽具有50、40、30、20个氨基酸的长度，19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6氨基酸的长度，并且包含磷酸化DpYX1NX1S基序(SEQ ID NO:18),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽具有50、40、30、20个氨基酸的长度,19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6个氨基酸的长度，并且包含磷酸化EpYX1NX1D基序(SEQ ID NO:19),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽具有50、40、30、20个氨基酸的长度,19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6个氨基酸的长度，并且包含磷酸化DpYX1TX1Q基序(SEQ ID NO:20),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的一个实施方案中，所述肽是PDSSTLHTDDGpYX1PX1SPGVAPVPSGRKGSG(SEQ ID NO:21)或包含磷酸化pYX1PX1基序的20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7或6个氨基酸的片段，其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽是PDSSTLHTDDGpYX1FX1SPGVAPVPSGRKGSG(SEQ ID NO:22)或包含磷酸化pYX1FX1基序的20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7或6个氨基酸的片段，其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽是PVPSGRKGSGDpYX1PX1SPKSVSAPQQIINPI(SEQ ID NO:23)或包含磷酸化pYX1PX1基序的20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7或6个氨基酸的片段，其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽是RRHPQRVDPNGpYX1MX1SPSGGCSPDIGGGPS(SEQ ID NO:24)或包含磷酸化pYX1MX1基序的20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7或6个氨基酸的片段，其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽是SGGKLLPCTGDpYX1NX1SPVGDSNTSSPSDCY(SEQ ID NO:25)或包含磷酸化pYX1NX1基序的20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7或6个氨基酸的片段，其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽是PREEETGTEEpYX1KX1DLGPGRRAAWQESTGV(SEQ ID NO:26)或包含磷酸化pYX1KX1基序的20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7或6个氨基酸的片段，其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽是PREEETGTEEpYX1NX1DLGPGRRAAWQESTGV(SEQ ID NO:27)或包含磷酸化pYX1NX1基序的20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7或6个氨基酸的片段，其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽是AVPSSRGDpYX1TX1QMSCPRQSYVDTSPAAPV(SEQ ID NO:28)或包含磷酸化pYX1TX1基序的20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7或6个氨基酸的片段，其中每个X1独立地是M或Nle。
本文所述的肽可以通过本领域中所熟知的化学合成或酶促合成而合成产生。备选地，编码本发明的肽的核苷酸序列可以引入至蛋白表达载体中并且在合适的宿主生物体(例如，细菌、昆虫细胞等)中制备，然后纯化。其上可以添加附加的多肽("标签")用于纯化或鉴定或纯化所述肽的目的。蛋白标签使诸如以下的事宜成为可能：使多肽能以高亲和性被吸附至基质上，并使基质随后能在严格条件下用合适的缓冲液洗涤，而不使复合体以任何显著的程度被洗脱，并使被吸附的复合体能随后被选择性地洗脱。本领域技术人员已知的蛋白标签的例子是(His)6标签、Myc标签、FLAG标签、血细胞凝集素标签、谷胱甘肽转移酶(GST)标签、具有亲和性壳多糖结合标签的内含肽或麦芽糖结合蛋白(MBP)标签。这些蛋白标签可以位于N-末端、C-末端和/或内部。
本发明的一个目的是如上文所述的肽，所述肽是被修饰的。
本文提供的肽可以通过本领域中熟知的方式修饰。
例如，肽可以通过添加一个或多个官能团诸如磷酸酯、乙酸酯或各种脂质和碳水化合物而被修饰。本发明的肽也可以作为肽衍生物存在。术语“肽衍生物”是指具有氨基(--NH--)，和更特别地，肽键的化合物。肽可以被视为取代的酰胺。类似酰胺基团，肽键显示出高度的共振稳定化。肽连接中的C--N单键具有典型的约40%的双键性质且C=O双键具有约40%的单键性质。“保护基”是防止涉及未受保护的官能团的不合乎需要的反应(诸如蛋白水解)的那些基团。氨基保护基的具体实例包括甲酰基；三氟乙酰基；苄氧基羰基；取代的苄氧基羰基诸如(邻-或对-)氯苄氧基羰基和(邻-或对-)溴苄氧基羰基；和脂肪族氧基羰基诸如叔丁氧基羰基和叔戊氧基(t-amiloxy)羰基。氨基酸的羰基可以通过转化成酯基被保护。酯基包括苄酯，取代的苄酯诸如甲氧基苄酯；烷基酯诸如环己酯、环庚酯或叔丁酯。胍基部分可以被硝基；或芳基磺酰基诸如对甲苯磺酰基、甲氧基苯磺酰基或三甲基苯磺酰基保护，即使其不需要保护基。咪唑的保护基包括对甲苯磺酰基、苄基和二硝基苯基。色氨酸的吲哚基可以被甲酰基保护或可以不受保护。
对肽的修饰的目的尤其是改善它们在体内的寿命。一种类型的修饰作用是向肽的N或C末端添加聚乙二醇(PEG)。本领域技术人员已知PEG具有许多使得其成为肽的理想载体的性质，诸如高水溶性、在溶液中的高流动性和低免疫原性。这种修饰作用也保护肽免受外肽酶的作用并且因此增加其在体内的整体稳定性。用来防止肽被内肽酶或外肽酶降解的其他修饰作用包括N-末端修饰诸如乙酰化或糖基化，C-末端修饰诸如在肽内的特定位点处的酰胺化和使用非天然氨基酸(β-氨基酸和α-三氟甲基氨基酸)。增加肽分子大小的另一备选方式是肽与人γ免疫球蛋白的Fc结构域的基因融合或肽与白蛋白的融合。
本发明的另一个目的是包含如上面所述的至少一种肽和药学上可接受的赋形剂的药物组合物，其中所述肽包含磷酸化pYX1X2X1基序(SEQ ID NO:1),其中每个X1独立地是M或Nle且X2是任何氨基酸,优选任何天然氨基酸。
术语“药学上可接受的”是指可以施用于哺乳动物而没有过度毒性的化合物和组合物。因此，“药学上可接受的赋形剂”是指当施用于动物，优选人时不产生有害反应、变态反应或其他不良反应的赋形剂。其包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂，等。对于人施用，制剂应当满足FDA管理局的生物制品标准所要求的无菌性(sterility)、致热原性、通用安全性(general safety)和纯度标准。
合适的赋形剂包括水，盐水，林格氏溶液，右旋糖溶液，以及乙醇、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖、甘露糖、甘露醇、山梨醇、聚乙二醇(PEG)、磷酸盐、醋酸盐、明胶、胶原蛋白、
Figure BDA0000369750760000131
、植物油的溶液，等。可以另外地包括合适的防腐剂、稳定剂、抗氧化剂、抗微生物剂、和缓冲剂，诸如，例如，BHA、BHT、柠檬酸、抗血坏酸、四环素，等。
可以在本发明的组合物中使用的药学上可接受的赋形剂的其他实例包括，但不限于，离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白诸如人血清白蛋白，缓冲物质诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾，饱和的植物脂肪酸的偏甘油酯混合物，水，盐，或电解质诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物、聚乙二醇和羊毛脂。
在一个实施方案中，本发明的组合物可以包含一些赋形剂，诸如，例如，表面活性剂(例如，羟丙基纤维素);合适的载体，诸如，例如，包含例如下列的溶剂和分散介质：水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、和液体聚乙二醇，等),其合适的混合物，以及植物油，诸如，例如，花生油和芝麻油；等渗剂，诸如,例如，糖类或氯化钠；包衣剂，诸如,例如，卵磷脂；延缓吸收剂，诸如,例如，单硬脂酸铝和明胶；防腐剂，诸如,例如，苯扎氯铵、苄索氯铵、三氯叔丁醇、硫柳汞等；缓冲剂，诸如,例如，硼酸、碳酸氢钠和碳酸氢钾、硼酸钠和硼酸钾、碳酸钠和碳酸钾、醋酸钠、磷酸二氢钠，等；张度剂，诸如,例如，葡聚糖40、葡聚糖70、右旋糖、甘油、氯化钾、丙二醇、氯化钠；抗氧化剂和稳定剂，诸如,例如，亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代亚硫酸钠、硫脲，等；非离子湿润或澄清剂，诸如,例如,聚山梨醇酯(polysorbate)80、聚山梨醇酯20、泊洛沙姆(poloxamer)282和泰洛沙泊(tyloxapol)；粘度改性剂，诸如，例如葡聚糖40、葡聚糖70、明胶、甘油、羟乙基纤维素、羟甲基丙基纤维素、羊毛脂、甲基纤维素、凡士林、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素；等等。
在一个实施方案中，该组合物可以包含所述肽的药学上可接受的盐。
药学上可接受的盐的实例包括与无机碱的盐、与有机碱的盐、与无机酸的盐、与有机酸的盐、与碱性或酸性氨基酸的盐，等。与无机碱的盐的实例包括碱金属盐，诸如钠盐和钾盐；碱土金属盐诸如钙盐和镁盐；铝盐；和铵盐。与有机碱的盐的实例包括与三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环己胺、二环己胺和N,N'-二苄基乙二胺的盐。与无机酸的盐的实例包括与盐酸、硼酸、硝酸、硫酸和磷酸的盐。与有机酸的盐的实例包括与甲酸、乙酸、三氟乙酸、苯二甲酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、甲磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸的盐。与碱性氨基酸的盐的实例包括与精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸的盐。与酸性氨基酸的盐的实例包括与天冬氨酸和谷氨酸的盐。合适的盐的列表公开在雷明顿药学(Remington's Pharmaceutical Sciences),第17版，Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1418页,1985中，该书的全部公开内容通过引用结合于本文中。
在本发明的一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化GpYX1X2X1S基序(SEQ ID NO:33)，其中每个X1独立地是M或Nle且X2是P、F或M。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化DpYX1X2X1S基序(SEQ ID NO:34),其中每个X1独立地是M或Nle且X2是P或N。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化EpYX1NX1D基序(SEQ ID NO:35),其中每个X1独立地是M或Nle。
在本发明的另一个实施方案中，所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化DpYX1TX1Q基序(SEQ ID NO:36),其中每个X1独立地是M或Nle。
本发明的另一个目的是用于治疗癌症或在治疗癌症中使用的如上所述的肽或如上所述的药物组合物。
本发明的另一个目的是用于治疗癌症的方法，所述方法包括向需要所述治疗的受试者施用治疗有效量的本发明的至少一种肽。
根据本发明，所述受试者可以是任何哺乳动物，优选是人。
“治疗有效剂量或量”是指足以诱发所需的生物学结果的剂量水平。该结果可以是体征、症状或病因的减轻，或生物系统的任何其他所需的改变。优选地，此剂量或量将足以通过杀死癌细胞减轻癌性病症，也足以获得导致癌症的生长和/或转移的抑制的效应。
可以通过本发明的肽、组合物和方法治疗的癌症包括，但不限于：
心脏：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；
肺：非小细胞肺癌、支气管癌（鳞状细胞癌、未分化小细胞癌、未分化大细胞癌、腺癌）、肺泡癌(细支气管癌)、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨错构瘤，间皮瘤;
胃肠道：食管(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)，胃（癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤），胰腺(导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌肿瘤、血管活性肠肽瘤)，小肠（腺癌、淋巴瘤、类癌肿瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤），大肠（腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤），结肠癌，结直肠癌，直肠癌；
泌尿生殖道：肾(腺癌、Wihn肿瘤[肾母细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)，膀胱和尿道（鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌），前列腺（腺癌、肉瘤），睾丸（精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜膜癌、肉瘤、间质细胞癌，纤维瘤，纤维腺瘤，腺瘤样瘤、脂肪瘤）；
肝：肝细胞瘤(肝细胞癌),胆管癌，肝母细胞瘤，血管肉瘤，肝细胞腺瘤，血管瘤;
骨:成骨性肉瘤(骨肉瘤)，纤维肉瘤，恶性纤维组织细胞瘤，软骨肉瘤，尤文氏肉瘤，恶性淋巴瘤（网状细胞肉瘤），多发性骨髓瘤，恶性骨巨细胞脊索瘤，骨软骨瘤（骨软骨外生骨疣），良性软骨瘤，软骨母细胞瘤，软骨粘液纤维瘤(chondromyxofibroma)，骨样骨瘤和巨细胞瘤;
神经系统:头骨（骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄瘤、畸形性骨炎），脑膜（脑膜瘤，脑膜肉瘤、胶质瘤病），大脑（星形细胞瘤、髓母细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤[松果体瘤]、多形性胶质母细胞瘤、少突胶质细胞瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤），脊髓神经纤维瘤，脑膜瘤，胶质瘤，肉瘤）；
妇科:子宫（子宫内膜癌），宫颈（宫颈癌、肿瘤前期宫颈非典型增生），卵巢（卵巢癌[浆液囊腺癌、粘液囊腺癌、非分类癌]、颗粒细胞-泡膜细胞瘤、支持-间质细胞瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤），外阴（鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤），阴道（透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤[胚胎型横纹肌肉瘤]、输卵管[癌]）；
血液学:血液(髓细胞白血病[急性和慢性]、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症),霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；
皮肤：恶性黑色素瘤，基底细胞癌，鳞状细胞癌，卡波西氏肉瘤，痣发育异常痣,脂肪瘤，血管瘤，皮肤纤维瘤，瘢痕疙瘩，银屑病；和
肾上腺：神经母细胞瘤。
可以由本发明的肽、组合物和方法治疗的癌症包括但不限于:乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、脑癌、睾丸癌、胃癌、胰腺癌、皮肤癌、小肠癌、大肠癌、喉癌、头颈部癌、口腔癌、骨癌、肝癌、膀胱癌、肾癌、甲状腺癌和血液癌症。
可以由本发明的肽、组合物和方法治疗的癌症包括：乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、卵巢癌、结直肠癌、肺癌和非小细胞肺癌。
可以由本发明的肽、组合物和方法治疗的癌症包括：乳腺癌、结肠癌(结直肠癌)和肺癌(非小细胞肺癌)。
可以由本发明的肽、组合物和方法治疗的癌症包括：淋巴瘤和白血病。
可以由本发明的肽、组合物和方法治疗的癌症包括血管发生相关的癌症诸如乳腺癌、膀胱癌、结肠癌、口腔肿瘤、晚期肿瘤、多毛细胞白血病、黑色素瘤、晚期头颈部癌症、转移性肾细胞癌、非霍奇金淋巴瘤、转移性乳腺癌、乳腺腺癌、晚期黑色素瘤、胰腺癌、胃癌、胶质母细胞瘤、肺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、肾细胞癌，各种实体瘤、多发性骨髓瘤、转移性前列腺癌、恶性神经胶质瘤、肾癌、淋巴瘤、难治性转移性疾病、难治性多发性骨髓瘤、宫颈癌、卡波西氏肉瘤、复发性间变性胶质瘤(recurrentanaplastic glioma)和转移性结肠癌。
本发明的肽、组合物和方法也意欲预防或减少肿瘤细胞转移。
还包括在本发明的范围内的是治疗或预防其中有血管发生参与的疾病的方法，该方法包括向需要所述治疗的受试者施用治疗有效量的本发明的肽。
血管发生相关疾病包括眼部新生血管性疾病(诸如,例如,缺血性视网膜病变、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病、视网膜静脉闭塞、年龄相关性黄斑变性、角膜新生血管化、新生血管性青光眼)、动脉粥样硬化、关节炎、银屑病、肥胖症和阿尔茨海默病。
还包括在本发明的范围内的是治疗或预防过度增生性疾病(hyperproliferative disorder)诸如再狭窄、炎症、自身免疫疾病和变态反应/哮喘的方法，该方法包括向需要所述治疗的受试者施用治疗有效量的本发明的肽。
根据本发明，本发明的肽可以经口、局部或通过胃肠外方式给药，包括皮下、透皮或肌内注射、植入持续释放长效制剂、静脉内注射、鼻内给药等。
在本发明的一个实施方案中，本发明的肽可以经眼内给药。当在本文中使用时，“经眼内”是指通过眼内给药途径。在一个实施方案中，眼内给药途径是在眼的内部内的给药，优选在眼的后段内，更优选在玻璃体内。优选的眼内途径是玻璃体内注射。当在本文中使用时，“眼的内部”是指位于眼球内的任何区域，包括眼的前段和后段，并且通常包括，但不限于，眼球内存在的任何功能性(例如，用于视力)或结构性组织，或与眼球的内部部分或完全形成层的组织或细胞层。区域的具体实例包括前房、后房、玻璃体腔、脉络膜、黄斑和视网膜，以及血管化或支配眼的后部区域或部位的血管和神经。根据优选的实施方案，眼的内部是指眼的后段，包括后房、玻璃体腔、脉络膜、黄斑和视网膜，以及以及血管化或支配眼的后部区域或部位的血管和神经。
在本发明的一个实施方案中，本发明的肽可以通过局部眼部给药来进行给药，诸如,例如,滴眼剂的给药或通过将眼浸浴在包含本发明的肽或组合物的眼用溶液中。
根据本发明，包含本发明的肽的组合物可以是水溶液、乳液、乳膏、软膏、混悬液、凝胶、脂质体悬液，等。
根据本发明，所述组合物包含本发明的肽的量为约0.0001至500mg肽每毫升或每克组合物，优选约0.001至50mg,更优选0.01至5mg并且甚至更优选0.1至1mg肽每毫升或每克组合物。
根据本发明，所述组合物包含本发明的肽的量为全部组合物的体积的约0.01重量%至90重量%，优选全部组合物的体积的0.1-10重量%，更优选1-5重量%。
在本发明的另一个实施方案中，包含本发明的至少一种肽的组合物可以进一步包含至少一种细胞毒素剂、化疗剂或抗癌剂。
在本发明的另一个实施方案中，包含本发明的至少一种肽的组合物可以与至少一种细胞毒素剂、化疗剂或抗癌剂联合使用。
抗癌剂的实例包括但不限于,烷化剂或具有烷化作用的药剂，诸如,例如,环磷酰胺(CTX;例如
Figure BDA0000369750760000191
)、苯丁酸氮芥(CHL;例如
Figure BDA0000369750760000192
)、顺铂(CisP;例如
Figure BDA0000369750760000193
)、奥沙利铂(例如ELOXATINTM)、白消安(例如
Figure BDA0000369750760000194
)、美法仑、卡莫司汀(BCNU)、链脲霉素、三乙撑蜜胺(TEM)、丝裂霉素C,等;抗代谢药,诸如,例如,甲氨蝶呤(MTX)、依托泊甙(VP16;例如
Figure BDA0000369750760000195
)、6-巯基嘌呤(6MP)、6-硫代鸟嘌呤(6TG)、阿糖胞苷(Ara-C)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨(例如
Figure BDA0000369750760000196
)、达卡巴嗪(DTIC),等;抗生素,诸如,例如,放线菌素D、多柔比星(DXR;例如
Figure BDA0000369750760000197
)、柔红霉素(道诺霉素)、博来霉素、光辉霉素等；生物碱类，诸如，例如，长春花生物碱类诸如，例如，长春新碱（VCR）、长春碱，等；以及其它的抗肿瘤剂，诸如，例如，紫杉醇（例如
Figure BDA0000369750760000198
）和紫杉醇衍生物，细胞生长抑制剂，糖皮质激素类诸如地塞米松（DEX;例如
Figure BDA0000369750760000199
）和皮质类固醇类诸如，例如，强的松，核苷酶抑制剂诸如，例如，羟基脲，氨基酸消耗酶诸如，例如，天冬酰胺酶、甲酰四氢叶酸、亚叶酸，雷替曲塞，和其他叶酸衍生物，以及类似的、各种各样的抗肿瘤药物。以下药剂也可用作附加的药剂：氨磷汀（例如
Figure BDA00003697507600001910
）、更生霉素、二氯甲基二乙胺（氮芥）、链脲菌素、环磷酰胺、lornustine（CCNU）、多柔比星脂质体（例如
Figure BDA00003697507600001911
）、吉西他滨（例如
Figure BDA00003697507600001912
）、柔红霉素脂质体（例如
Figure BDA00003697507600001913
）、丙卡巴肼，丝裂霉素，多西紫杉醇（例如
Figure BDA00003697507600001914
）、阿地白介素、卡铂、克拉屈滨，喜树碱，10-羟基-7-乙基-喜树碱（SN38）、氟尿苷、氟达拉滨、异环磷酰胺、伊达比星、美司钠、干扰素α、干扰素β、米托蒽醌、拓扑替康、亮丙瑞林、甲地孕酮、美法仑、巯嘌呤、普卡霉素、米托坦、培门冬酶、喷司他丁，哌泊溴烷、普卡霉素、他莫昔芬、替尼泊苷、睾内酯、硫鸟嘌呤、塞替派、尿嘧啶氮芥、长春瑞滨，或苯丁酸氮芥。
上述细胞毒素剂、化疗剂和其他抗癌剂在化疗方案中的使用在癌症治疗领域中通常是被充分了解的，并且在本文中它们的使用列入了用于监测耐受性和有效性并且用于控制给药途径和剂量的相同考虑范围，并作出一些调整。有效的细胞毒素剂的典型用药量可以在由制造商推荐的范围内，并且在由体外反应或在动物模型中的反应所指示的情况下，所述典型用药量可以减少至多约1个量级的浓度或用量。因此，实际用药量将基于原代培养的恶性细胞或组织培养的组织样品的体外反应性，或在适宜的动物模型中观察到的反应，取决于医生的判断、患者的状况、和治疗方法的有效性。
从下面的实验详述中将更好地理解本发明。然而，本领域技术人员将容易地认识到所讨论的具体方法和结果仅说明如此后的权利要求中更充分地描述的本发明，并且不应被认为以任何方式限制本发明。
附图说明
图1:体外血管发生测定的代表性图像(图像在孵育后18h时拍摄)。
图2:酪氨酸磷酸化和未磷酸化的肽对通过IRS-1招募酶PI-3K的调控亚基(p85)的影响。
图3:(A)GS-0和GS-1对mTor的激活的影响。(B)GS-0和GS-2对mTor的激活的影响。
图4:用载体、8mg/kg GS-0或8mg/kg GS-1治疗的荷NCI-H460肿瘤的小鼠的平均肿瘤体积曲线。
图5:用载体、8mg/kg GS-0或8mg/kg GS-2治疗的荷NCI-H460肿瘤的小鼠的平均肿瘤体积曲线。
实施例
实施例1
材料和方法
材料
培养基EGM-2MV来自Lonza(Verviers,Belgium)。无钙镁PBS、胰蛋白酶-EDTA(Versene)购自Eurobio(Les Ulis,France)。基质胶购自Becton Dickinson(Le Pont de Claix,France)。细菌培养基LB、Thermoscript和高保真铂HIFI酶获自Invitrogen(Cergy Pontoise,France)。Rneasy mini kit、Qiaquick和Qiaprepminiprep获自Qiagen(Courtaboeuf,France)、Roche Applied Science。肽由GeneCust化学合成，以N-末端乙酰化和C-末端酰胺化作为化学修饰。所有肽经历HPLC-纯化步骤并且作为纯度为至少95%的冻干粉末供应。
方法
血管发生测定
人微血管内皮细胞(HMEC)的血管发生使用由Al-Mahmood等人(2009,JPET,2009;58:933)所述的基质胶(Matrigel)测定在体外诱导。此方法基于内皮细胞分化在基质胶基质上形成毛细血管结构。从Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)小鼠肿瘤制备基质胶，其代表基底膜蛋白(包括IV型胶原蛋白、巢蛋白、蛋白-硫酸乙酰肝素和其他生长因子)的复杂混合物。
简言之，250μl基质胶被转移至24孔培养板的每个孔中，并在37℃孵育30min以使基质溶液固化。通过胰蛋白酶收获在完全生长培养基EGM-2MV中生长的HMEC,将其悬浮在相同的生长培养基中并在存在或不存在肽的情况下将含70000个细胞的500μl加至每孔中固化的基质胶的上面。将细胞保持在含有5%CO2的湿化气氛空气中在37℃18-24小时。在倒置光学显微镜下观察到内皮管形成并拍照。
增殖测定
5000个HMEC(5000个细胞/ml生长培养基)接种在96孔细胞培养级微量板(100μl/孔)并且与指定的肽在指定的终浓度下在37℃孵育42小时，使用溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)方法测量细胞增殖。简言之，MTT(Sigma)以5mg/ml溶解在PBS中，将溶液过滤(0.22μm)，将10μl加入至96孔微量板的每孔中。在37℃，5%CO2湿化气氛孵育3小时后，将微量板以220x g离心10min,弃去上清液，并通过向每孔添加100μl DMSO溶解晶体。然后使用与KC4(Bio-Tek,ColmarFrance)软件相连的μQuant微量板读数仪测量570nm处的光密度(OD)。通过减去空白孔OD值校正OD(获自没有细胞的孔的OD值),并且测量相对于对照的细胞增殖的抑制(从具有未处理的HUVEC的孔获得的OD表示最大增殖反应，即，100%)。
蛋白定量
去血清培养的HMEC与不同浓度的肽孵育24h，在37℃，5%CO2下6h。用冰冷的PBS洗涤3次后，细胞用蛋白提取缓冲液(PEB)(20mM Tris-HCl pH7.5,150mM NaCl,1mM EDTA,1mM EGTA,1%Triton,25mM焦磷酸钠,1mMβ-甘油-磷酸盐,1mM Na3Vo4,1μg/ml亮抑酶肽,1μM PMSF)悬浮。通过Bradford测量蛋白含量。
细胞处理和免疫沉淀
生长在EGM-2MV中的人EC(80%汇合)与本发明的肽或载体孵育以指定的时间，在冷PBS中洗涤3次，并且在2ml冰冷的裂解缓冲液(10mM Tris pH7.5,150mM NaCl,1mM PMSF,0.5μg/ml亮抑酶肽,1μg/ml胃酶抑素A,和1μg/ml抑肽酶)中通过在4℃孵育30min被直接裂解。细胞溶胞产物以104g离心10min,弃去不溶物质，并且调整通过对上清液的Bradford测定测量的蛋白含量。细胞溶胞产物(1ml)用25μl蛋白G-plus琼脂糖珠(Santa Cruz)预先澄清30min，然后通过添加2μg指定的抗体将蛋白免疫沉淀并孵育1h。用蛋白G-plus琼脂糖珠沉降免疫复合物，并用裂解缓冲液洗涤珠子三次。免疫沉淀物通过
Figure BDA0000369750760000231
4-12%Bis-Tris凝胶电泳在还原条件下分离，转移至PVDF膜(Novex System,Invitrogen),并用在含有0.1%v/v Tween-20的TBS中的5%(w/v)脱脂奶封闭膜1hr。将膜与指定的一级抗体孵育2hr,洗涤三次，并与适宜的HRP-缀合的二级抗体孵育，并通过增强化学发光,ECL plus(GE Healthcare,Velizy,France)显影。
结果
测试下列的肽：
·GpYMFMS     GS-1(SEQ ID NO:37)
·EpYMNMD     GS-2(SEQ ID NO:38)
·DpYMTMQ     GS-3(SEQ ID NO:39)
·NYICMG      GS-0(酪氨酸未磷酸化的肽用作对照)(SEQ ID NO:40).
根据本发明的具有磷酸化pYX1X2X1基序的肽对体外血管发生的影响
测试设计的酪氨酸磷酸化和未磷酸化的肽对体外血管发生的影响。体外血管发生测定的结果呈现在图1中，使用HMEC和每种肽的500μg/ml终浓度。这些结果显示用作对照的酪氨酸未磷酸化的肽GS-0没有和/或具有可忽略不计的体外血管发生抑制活性(图1)。在同一张图中呈现的结果还显示酪氨酸磷酸化小肽GS-1、GS-2和GS-3具有体外血管发生抑制活性。
肽对p85与IRS-1的缔合的影响
由于公认IRS-1的酪氨酸磷酸化导致其与酶PI-3K的调控亚基(p85)的缔合，并且此事件导致此后酶活性的显著增加，因此我们研究了酪氨酸磷酸化和未磷酸化的肽对通过IRS-1对酶PI-3K的调控亚基(p85)的招募的影响。为此，人微血管内皮细胞(HMEC)与酪氨酸磷酸化和未磷酸化的肽(肽的终浓度为500μg/ml)孵育，然后进行细胞裂解和对蛋白IRS-1的免疫沉淀。然后在SDS-PAGE中分辨免疫沉淀物，将蛋白转移至膜，并且用抗-p85PI3K单克隆抗体对膜进行免疫印迹。
图2中呈现的结果显示用作对照的酪氨酸未磷酸化的肽GS-0对通过IRS-1对酶PI-3K的调控亚基(p85)的招募没有影响和/或具有可忽略不计的影响。在同一张图中呈现的结果还显示酪氨酸磷酸化的肽GS-2对通过IRS-1对酶PI-3K的调控亚基(p85)的招募具有中度的抑制作用，酪氨酸磷酸化的肽GS-1对通过IRS-1对酶PI-3K的调控亚基(p85)的招募具有非常强的抑制作用。
肽对HMEC中的mTOR的影响
研究了在与肽GS-0和GS-1孵育后HMEC中mTOR的状态。结果显示HMEC(载体)具有显著水平的mTOR(图3A和B,抗-mTor抗体,Ozyme,2971(Ser2448))。与肽GS-0孵育的HMEC细胞系具有和与载体孵育的细胞相当的量的mTOR。相比，与GS-1或GS-2孵育的HMEC细胞系相对于与载体孵育或与GS-0孵育的HMEC具有少得多的量的mTOR，表明肽GS-1抑制mTOR激活。
实施例2
方法
细胞培养：
H460细胞系与人非小细胞肺癌(NSCL)在细胞学上是一致的。细胞在含有10%FCS的MEM培养基中在37℃,5%CO2湿化气氛生长。通过使用PCR支原体属检测试剂盒(Takara)确认不存在支原体。
裸鼠中的肿瘤异种移植物和治疗：
所有实验由Genopole伦理实验动物管理和使用委员会(Genopole'sinstitutional animal care and use committee)评审并根据伦理实验动物管理指南(institutional guidelines for animal care)进行。雌性BALB/c nu/nu小鼠(n=30)在5–6周龄时使用。将动物在空气层流箱中在无病原体条件下圈养，采用12h光照/12h黑暗时间表，并且饲以经高压灭菌的标准饲粮且不限制饮水。NCI-H460人NSCL细胞系获自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(ATCC)，细胞生长在补充有1μM丙酮酸钠的RPMI1640培养基中。将肿瘤细胞(107细胞在200μl HBSS中)经皮下注射至小鼠的右胁腹中。移植物植入后，通过游标卡尺测量肿瘤体积,并如Balsari A等人(Balsari A等人(2004)Eur JCancer40:1275–1281)中所述计算。在肿瘤体积为约150mm3时，将动物随机化，并分至5只动物为一组的5组中。对照小鼠(第1组)腹膜内注射载体(缓冲盐水中的10%DMSO)每天一次。GS-0溶解在载体中，并腹膜内注射(第2组)每天一次(12次注射)。GS-1溶解在载体中，并腹膜内注射(第3组)每天一次(12次注射)。在治疗期(12天)内每隔一天测量肿瘤体积和体重。
肽制剂和稀释液
GS-1以及对照肽GS-0溶解在DMSO中，并将得到的溶液用磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释10倍以获得1mg肽/ml的PBS中的10%DMSO的浓度。在此浓度下，所有肽在10%DMSO中均是可溶的。
结果
荷NCI-H40小鼠的平均体重和毒性问题
体重监测和毒性的结果显示在表1中。载体没有影响：小鼠行为和体重增加均是正常的，并且没有动物过早死亡。在用测试物质GS-0和GS-1以8mg/kg的剂量治疗的过程期间没有观察到毒性和体重减轻。
表1:用载体、8mg/kg GS-0和8mg/kg GS-1治疗的荷NCI-H40肿瘤的小鼠的平均体重
Figure BDA0000369750760000271
体内肿瘤生长
平均肿瘤体积的结果显示在图4和表2中。对于用载体、GS-0和GS-1治疗的小鼠，平均肿瘤体积随时间的发展显示在整个治疗期(12天)内在三组动物之间不存在统计学上显著的差异。在治疗结束时，载体和GS-0治疗组的平均肿瘤体积分别为1165.64+769.22(n=5);和1114.83+534.50(n=5)mm3，两者相互之间没有统计学差异(p>0.05),表明肽GS-0对肿瘤NCI-H460的体内生长没有显著影响(p>0.05)。
平均肿瘤体积随时间的发展还显示在整个治疗期(12天)内，用GS-1治疗的小鼠的平均肿瘤体积与用载体和GS-0治疗的小鼠在统计学上有差异(图4和表2)。与第1组载体治疗的动物(1165.64+769.22mm3;n=5)相比，在来自用GS-1治疗的组的动物中观察到平均肿瘤体积的大量减小(234.98+69.22mm3;n=5)。载体治疗组和GS-1治疗组之间的差异达到统计学显著性(p=0.0004)，并且用GS-1治疗的组(234.98+69.22mm3;n=5)和用GS-0治疗的组(1114.83+534.50mm3;n=5)之间的差异也是统计学上有差异的(p<0.05),表明肽GS-1对肿瘤NCI-H460的体内生长具有高度显著的和强效的影响(p=0.0004)。事实上，对肽GS-1的强效体内抗肿瘤活性的认识表明以8mg/kg每天注射一次GS-1持续连续12天导致对体内肿瘤生长的约80%抑制。
表2:用载体、8mg/kg GS-0和8mg/kg GS-1治疗的荷NCI-H460肿瘤的小鼠的平均肿瘤体积。结果表示为平均体重(g)+标准差。
Figure BDA0000369750760000281
结论是，肽GS-1显示统计学显著的和强效的针对NCI-H460的体内抗肿瘤活性。
实施例3
方法
细胞培养：
H460细胞系与人非小细胞肺癌(NSCL)在细胞学上是一致的。细胞在含有10%FCS的MEM培养基中在37℃,5%CO2湿化气氛生长。通过使用PCR支原体属检测试剂盒(Takara)确认不存在支原体。
裸鼠中的肿瘤异种移植物和治疗：
所有实验由Genopole伦理实验动物管理和使用委员会评审并根据伦理实验动物管理指南进行。雌性BALB/c nu/nu小鼠(n=30)在5–6周龄时使用。将动物在空气层流箱中在无病原体条件下圈养，采用12h光照/12h黑暗时间表，并且饲以经高压灭菌的标准饲粮且不限制饮水。NCI-H460人NSCL细胞系获自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(ATCC)，细胞生长在补充有1μM丙酮酸钠的RPMI1640培养基中。将肿瘤细胞(107细胞在200μlHBSS中)经皮下注射至小鼠的右胁腹中。移植物植入后，通过游标卡尺测量肿瘤体积,并如Balsari A等人(Balsari A等人(2004)Eur J Cancer40:1275–1281)中所述计算。在肿瘤体积为约150mm3时，将动物随机化，并分至5只动物为一组的5组中。对照小鼠(第1组)腹膜内注射载体(缓冲盐水中的10%DMSO)每天一次。GS-0溶解在载体中，并腹膜内注射(第2组)每天一次(12次注射)。GS-2溶解在载体中，并腹膜内注射(第3组)每天一次(12次注射)。在治疗期(12天)内每隔一天测量肿瘤体积和体重。
肽制剂和稀释液
GS-2以及对照肽GS-0溶解在DMSO中，并将得到的溶液用磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释10倍以获得1mg肽/ml的PBS中的10%DMSO的浓度。在此浓度下，所有肽在10%DMSO中均是可溶的。
结果
荷NCI-H40小鼠的平均体重和毒性问题
体重监测和毒性的结果显示在表3中。载体没有影响：小鼠行为和体重增加均是正常的，并且没有动物过早死亡。在用测试物质GS-0和GS-2以8mg/kg的剂量治疗的过程期间没有观察到毒性和体重减轻。
表3:用载体、8mg/kg GS-0和8mg/kg GS-2治疗的荷NCI-H40肿瘤的小鼠的平均体重
Figure BDA0000369750760000301
体内肿瘤生长
平均肿瘤体积的结果显示在图5和表4中。对于用载体、GS-0和GS-2治疗的小鼠，平均肿瘤体积随时间的发展显示在整个治疗期(12天)内在三组动物之间不存在统计学上显著的差异。在治疗结束时，载体和GS-0治疗组的平均肿瘤体积分别为1165.64+769.22(n=5);和1114.83+534.50(n=5)mm3，两者相互之间没有统计学差异(p>0.05),表明肽GS-0对肿瘤NCI-H460的体内生长没有显著影响(p>0.05)。
平均肿瘤体积随时间的发展还显示在整个治疗期(12天)内，用GS-2治疗的小鼠的平均肿瘤体积与用载体和GS-0治疗的小鼠在统计学上有差异(图4和表2)。与第1组载体治疗的动物(1165.64+769.22mm3;n=5)相比，在来自用GS-2治疗的组的动物中观察到平均肿瘤体积的大量减小(297.28+142.67mm3;n=5)。载体治疗组和GS-1治疗组之间的差异达到统计学显著性(p=0.0065)。用GS-2治疗的组(297.28+142.67mm3;n=5)和用GS-0治疗的组(1114.83+534.50mm3;n=5)之间的差异也是统计学上有差异的(p<0.05),表明肽GS-2对肿瘤NCI-H460的体内生长具有高度显著的和强效的影响(p=0.0065)。事实上，对肽GS-1的强效体内抗肿瘤活性的认识表明以8mg/kg每天注射一次GS-2持续连续12天导致对体内肿瘤生长的约80%抑制。
表4:用载体、8mg/kg GS-0和8mg/kg GS-2治疗的荷NCI-H460肿瘤的小鼠的平均肿瘤体积。结果表示为平均体重(g)+标准差。
Figure BDA0000369750760000311
结论是，肽GS-2显示统计学显著的和强效的针对NCI-H460的体内抗肿瘤活性。
Figure IDA0000369750800000011
Figure IDA0000369750800000031
Figure IDA0000369750800000041
Figure IDA0000369750800000051
Figure IDA0000369750800000061
Figure IDA0000369750800000071
Figure IDA0000369750800000081
Figure IDA0000369750800000091
Figure IDA0000369750800000101
Figure IDA0000369750800000111
Figure IDA0000369750800000121
Figure IDA0000369750800000131
Figure IDA0000369750800000161
Figure IDA0000369750800000171
Figure IDA0000369750800000181
Figure IDA0000369750800000201
Figure IDA0000369750800000211
Figure IDA0000369750800000221
Figure IDA0000369750800000231
Figure IDA0000369750800000241
Figure IDA0000369750800000251
Figure IDA0000369750800000261
Figure IDA0000369750800000271
Figure IDA0000369750800000281
Figure IDA0000369750800000291
Figure IDA0000369750800000301
Figure IDA0000369750800000321
Figure IDA0000369750800000331
Figure IDA0000369750800000341
Figure IDA0000369750800000351
Figure IDA0000369750800000371

Claims (16)

1.包含磷酸化pYX1X2X1基序(SEQ ID NO:1)的肽,
其中每个X1独立地是M或Nle并且X2是任何氨基酸,
其中所述肽包含4-50个氨基酸,并且
其中所述肽不是SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ IDNO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:63或SEQ ID NO:64。
2.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化GpYX1FX1S基序(SEQ ID NO:15),其中每个X1独立地是M或Nle。
3.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化EpYX1NX1D基序(SEQ ID NO:19),其中每个X1独立地是M或Nle。
4.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化GpYX1PX1S基序(SEQ ID NO:14),其中每个X1独立地是M或Nle。
5.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化DpYX1FX1S基序(SEQ ID NO:16),其中每个X1独立地是M或Nle。
6.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化GpYX1MX1S基序(SEQ ID NO:17),其中每个X1独立地是M或Nle。
7.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化DpYX1NX1S基序(SEQ ID NO:18),其中每个X1独立地是M或Nle。
8.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽包含6-20个氨基酸并且包含磷酸化DpYX1TX1Q基序(SEQ ID NO:20),其中每个X1独立地是M或Nle。
9.包含4-50个氨基酸的肽的药物组合物，所述肽包含磷酸化pYX1X2X1基序(SEQ ID NO:1),其中每个X1独立地是M或Nle并且X2是任何氨基酸。
10.根据权利要求9所述的药物组合物,其中所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化GpYX1X2X1S基序(SEQ ID NO:33),其中每个X1独立地是M或Nle并且X2是P、F或M。
11.根据权利要求9所述的药物组合物,其中所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化DpYX1X2X1S基序(SEQ ID NO:34),其中每个X1独立地是M或Nle并且X2是P或N。
12.根据权利要求9所述的药物组合物,其中所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化EpYX1NX1D基序(SEQ ID NO:35),其中每个X1独立地是M或Nle。
13.根据权利要求9所述的药物组合物,其中所述肽包含6-20个氨基酸和磷酸化DpYX1TX1Q基序(SEQ ID NO:36),其中每个X1独立地是M或Nle。
14.根据权利要求9-13中任一项所述的药物组合物，其用于治疗癌症。
15.根据权利要求9-13中任一项所述的药物组合物，其用于治疗与血管发生相关的疾病。
16.根据权利要求14所述的药物组合物，其进一步包含至少一种细胞毒素剂、化疗剂或抗癌剂。
CN201180068111.0A 2010-12-21 2011-12-21 用于治疗癌症的肽 Expired - Fee Related CN103379913B (zh)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12/974,958 US8383591B2 (en) 2010-12-21 2010-12-21 Peptides for treating cancer
EP101962785 2010-12-21
US12/974,958 2010-12-21
EP10196278A EP2468288A1 (en) 2010-12-21 2010-12-21 Peptides for treating cancer
EP10196278.5 2010-12-21
PCT/EP2011/073606 WO2012085096A1 (en) 2010-12-21 2011-12-21 Peptides for treating cancer

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103379913A true CN103379913A (zh) 2013-10-30
CN103379913B CN103379913B (zh) 2015-11-25

Family

ID=45422145

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201180068111.0A Expired - Fee Related CN103379913B (zh) 2010-12-21 2011-12-21 用于治疗癌症的肽

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP2654768B1 (zh)
JP (2) JP6170838B2 (zh)
CN (1) CN103379913B (zh)
AU (1) AU2011347263B2 (zh)
CA (1) CA2822460A1 (zh)
ES (1) ES2555268T3 (zh)
WO (1) WO2012085096A1 (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996010629A1 (en) * 1994-10-03 1996-04-11 Joslin Diabetes Center, Inc. The irs family of genes
WO2000075167A2 (en) * 1999-06-09 2000-12-14 Ljl Biosystems, Inc. Phosphorylation assays
WO2005035003A2 (en) * 2003-09-22 2005-04-21 Dihedron Corporation Compositions and methods for increasing drug efficiency

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5801149A (en) * 1991-06-19 1998-09-01 Joslin D-Abetes Center, Inc. Inhibition of signal transduction molecules
JP2001183366A (ja) * 1999-12-27 2001-07-06 Japan Science & Technology Corp アゴニストのスクリーニング方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996010629A1 (en) * 1994-10-03 1996-04-11 Joslin Diabetes Center, Inc. The irs family of genes
WO2000075167A2 (en) * 1999-06-09 2000-12-14 Ljl Biosystems, Inc. Phosphorylation assays
WO2005035003A2 (en) * 2003-09-22 2005-04-21 Dihedron Corporation Compositions and methods for increasing drug efficiency

Also Published As

Publication number Publication date
AU2011347263A1 (en) 2013-07-11
EP2654768B1 (en) 2015-09-09
AU2011347263B2 (en) 2017-01-05
JP2014501746A (ja) 2014-01-23
CA2822460A1 (en) 2012-06-28
JP2017125027A (ja) 2017-07-20
CN103379913B (zh) 2015-11-25
ES2555268T3 (es) 2015-12-30
EP2654768A1 (en) 2013-10-30
JP6170838B2 (ja) 2017-07-26
WO2012085096A1 (en) 2012-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20200206301A1 (en) JNK Inhibitor Molecules For Treatment Of Various Diseases
CN107405336A (zh) 作为免疫调节剂的1,3,4‑噁二唑和噻二唑化合物
JP2017014234A (ja) Ｈｃ−ｈａ／ｐｔｘ３複合体を含む組成物およびその使用方法
CN101490081A (zh) 用于抑制神经元nmda受体(nmdar)与nmdar相互作用蛋白的相互作用的融合肽
CN107206254A (zh) 白细胞介素‑23受体的口服肽抑制剂以及其治疗炎症性肠病的用途
CN102883736B (zh) 用于促进血管生成的肽及其用途
PT1887016E (pt) Fragmentos de gonadotropina coriónica humana (hcg) como imunorregulador
EP1718325A2 (en) Treatment of bacterial infections
WO2014206564A1 (en) New use for jnk inhibitor molecules for treatment of various diseases
CN109715191A (zh) 将赘生性细胞转化成非赘生性细胞的药物缔合物及其用途
CN109715190A (zh) 将赘生性细胞转化成非赘生性细胞的生长因子受体激动剂和黏附蛋白抑制剂的药物缔合物及其用途
CN103379913B (zh) 用于治疗癌症的肽
Kondoh et al. Tight junction modulators: promising candidates for drug delivery
EP3134428B1 (en) Polypeptide fragments of 168a-t2 and compositions comprising them for use in treating cancer
JP6440107B2 (ja) 細胞シートの製造方法、組成物、細胞培養補助剤、及び細胞培養方法
CN102884073B (zh) 用于促进血管生成的肽及其用途
US9206236B2 (en) Peptides for treating cancer
EP2468288A1 (en) Peptides for treating cancer
Wang Development of protein polymer therapeutics for the eye
Gonzalez-Mariscal et al. Tight Junction Modulation and Its Relationship to Drug Delivery
WO2012067427A9 (ko) Lk8 단백질을 유효성분으로 포함하는 당뇨망막병증 또는 노인성 황반변성의 예방 또는 치료용 약학 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20151125

Termination date: 20201221