CN103341160A - 一种含有干扰素的药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含有干扰素的药物组合物及其应用。所述药物组合物的药理活性成分为干扰素和牛磺酸，且所述干扰素的活性单位含量为10IU/mL～1×10⁶IU/mL，牛磺酸的含量为0.05mg/mL～0.5mg/mL。由本发明提供的含有干扰素的药物组合物具有抗水疱性口炎病毒和抗鼠脑心肌炎病毒活性和细胞保护作用。尤其是，本发明提供的鼻腔喷雾剂，在每支仅含α-2b型重组人干扰素50000IU及牛磺酸1mg下，就可实现特异性抗病毒活性达9.15×10⁵IU/支～2.8×10⁶IU/支，呈现出显著的协同作用，对提高患者的顺应性和降低用药成本具有重要意义，能满足临床对干扰素的用药需求。

Description

一种含有干扰素的药物组合物及其应用

技术领域

本发明涉及一种含有干扰素的药物组合物及其应用，属于药物制剂技术领域。

背景技术

干扰素(IFN)是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质(主要是糖蛋白)，是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。给药方式多采用皮下注射、肌注、脑脊髓腔内或腹腔内、局部灌注给药。一般剂量多用一次1～3×10⁶单位，皮下注射或肌注，每周3次，可连用数月或更长。可根据病情逐渐增减剂量。该药有时间依赖性且副作用较为明显。临床研究表明，干扰素类药物在长期使用中可使得机体产生干扰素抗体的机率大于40％，使其治愈率和有效率均有降低。

中国专利申请CN03159223.6公开了采用干扰素α-2b与香菇多糖或干扰素α-2a与甘露聚糖肽的复方组合物及其制剂，但未提供相应的协同作用数据。

发明内容

针对现有技术所存在的上述缺陷问题，本发明的目的是提供一种具有显著协同作用的含有干扰素的药物组合物及其应用，以提高干扰素的疗效，并降低其由于长期给药带来的依赖性等不良反应，满足临床对干扰素的用药需求。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种含有干扰素的药物组合物，其药理活性成分为干扰素和牛磺酸，且所述干扰素的活性单位含量为10IU/mL～1×10⁶IU/mL，牛磺酸的含量为0.05mg/mL～0.5mg/mL。

作为一种优选方案，所述干扰素为重组人干扰素，且所述重组人干扰素的活性单位含量为1×10²IU/mL～1×10⁵IU/mL。

作为进一步优选方案，所述干扰素为α型重组人干扰素，且所述α型重组人干扰素的活性单位含量为5×10²IU/mL～5×10⁴IU/mL。

作为更进一步优选方案，所述干扰素为α-2b型重组人干扰素，且所述α-2b型重组人干扰素的活性单位含量为1×10³IU/mL～1×10⁴IU/mL。

上述药物组合物的一种应用，是用于制备治疗或预防病毒感染的药物制剂。

进一步说，上述药物组合物的一种应用，是用于制备治疗或预防流感病毒或急性呼吸道病毒感染的药物制剂。

上述的药物制剂可以是任何可药用的剂型，包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂等；优选喷雾剂；进一步优选为鼻腔喷雾剂。

所述鼻腔喷雾剂以每支10.5毫升计，其最佳配方为：

余量为注射用水。

上述鼻腔喷雾剂的制备方法，包括如下步骤：

首先精确称取配方量牛磺酸、EDTA二钠、葡聚糖4000、氯化钠、氯化钾和磷酸二氢钾，加入80000mL注射用水使其完全溶解；然后加入配方量的甘油、吐温80和薄荷油，并加注射用水定容至105000mL，搅拌使混合均匀；再取上述混合溶液104329mL与671mLα-2b型重组人干扰素原液混合均匀；最后按10.5mL每支进行分装，即得10000支所述的鼻腔喷雾剂。

与现有技术相比，由本发明提供的含有干扰素的药物组合物具有抗水疱性口炎病毒和抗鼠脑心肌炎病毒活性和细胞保护作用。尤其是，本发明提供的鼻腔喷雾剂，在每支仅含α-2b型重组人干扰素50000IU及牛磺酸1mg下，就可实现特异性抗病毒活性达9.15×10⁵IU/支～2.8×10⁶IU/支，呈现出显著的协同作用，可实现较低干扰素用量就能达到显著疗效，可降低干扰素的长期给药产生的依赖性及副作用，对提高患者的顺应性和降低用药成本具有重要意义，能满足临床对干扰素的用药需求，具有显著性进步和实用价值。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明；实施例中所用的α-2b型重组人干扰素原液的活性单位含量为7.45×10⁵IU/mL。

实施例

制剂配方(鼻腔喷雾剂，按每支10.5毫升，共10000支计)：

精确称取上述配方中牛磺酸、EDTA二钠(乙二胺四乙酸二钠盐)、葡聚糖4000、氯化钠、氯化钾和磷酸二氢钾，加入80000mL注射用水使其完全溶解；然后加入上述配方中的甘油、吐温80和薄荷油，并加注射用水定容至105000mL，搅拌使混合均匀；再取上述混合溶液104329mL与671mLα-2b型重组人干扰素原液混合均匀；最后按10.5mL每支进行分装，即得10000支所述的鼻腔喷雾剂。

抗病毒活性实验

通过细胞病变抑制法(CPE)测定样品的抗病毒活性，具体如下：

1.实验材料

1.1培养基

谷氨酰胺培养基(DMEM)，来自美国Invitrogen公司；

培养液A：为添加有125单位庆大霉素和10％牛血清的DMEM；

培养液B：为添加有125单位庆大霉素和2％牛血清的DMEM。

1.2细胞和病毒

牛肾细胞(MDBK)，来自D.I.Ivanovsky病毒研究所(obtained in the D.I.IvanovskyResearch Institute of Virology)；

猴肾细胞(Vero)，来自D.I.Ivanovsky病毒研究所(obtained in the D.I.Ivanovsky ResearchInstitute of Virology)；

人二倍体成纤维细胞(IMG-1314)，来自俄罗斯医学研究院的医学基因研究所(obtainedin the Research Institute of Medical Genetics of the Russian Academy of Medical Sciences)；

上述各细胞均在37℃、0.5dm³的培养液A中持续生长存活，接种至96孔板，再转接培养液A中生长至浓度达1.6×10⁵细胞/mL，成单层后用于实验。

滤泡性口炎病毒(VSV)：该病毒株自感染MDBK细胞中获得；

鼠脑心肌炎病毒株(EMC)：该病毒株自感染MDBK细胞中获得。

1.3标准品

按国际标准(Interferon alpha-2b，Human，rDNA，E.coli-derived2nd WHO InternationalStandard1999NIBSC Code No.95/566)标准化的rhINFα-2b标准品s.030706，抗病毒活性单位以IU为参考。

1.4样品

本实施例所制备的鼻腔喷雾剂。

2.实验过程

将100μL细胞悬浮液滴入96孔板的所有孔中(浓度为1.6×10⁵细胞/mL)，然后将该板在潮湿空气中(36.5±0.5℃，4％～6％CO₂)培育24小时至形成完整的细胞单层。

将受试样品和标准品用培养液B按2倍依次稀释10个梯度至600～2000IU/mL，包括：

1)通过8通道移液管分别将100μL培养液B滴至第10行；

2)100μL预稀释的受试样品滴至编号1的A～D行，100μL标准品滴至编号1的E～H行；

3)按照上述内容依次梯度稀释，以100μL的移入量至编号1、2～11。

移去培养液，通过8通道移液管按照低至高浓度将受试样品组和标准品组转移走。将培养液B滴入11和12行，作为细胞组和病毒组的对照。

将上述96孔板放入潮湿空气中(36.5±0.5℃，4％～6％CO₂)培育24小时。

在上述的96孔板中除11行(细胞对照组)中分别加入100μL稀释指示病毒(计算量100TCID₅₀/0.1mL)，在11行中加入100μL培养液B，再将96孔板放入潮湿空气中(36.5±0.5℃，4％～6％CO₂)培育至少24小时直至在对照板的对照孔上获得4个加号的细胞病变(相当于90～100％单层细胞受损)。

根据以下公式计算：

效价(Titer)＝2^log2ED50×预稀释倍数(preliminary dilution rate)，其中：

Log₂ED50＝Dmax+d/n(r-n/2)；

Dmax为稀释度(100％)的log₂(Dmax is log₂ofthe dilution below which100％protectiontook place)；

d为稀释度的间隔值(1.0)的log₂(d is log₂interval between dilutions(1.0))；

n为每一剂量的96孔板的编号(4)(n is a number ofsockets for each dose(4))；

r为96孔板于Dmax的保护值及后续的稀释度(r is a number ofsockets giving protection(-)in Dmax and subsequent dilutions)。

特异性抗病毒活性通过以下公式计算：

$A_0=\frac{T_0\·A_{\mathrm{oco}}}{T_{\mathrm{oco}}}\×v,$ 其中：

A₀为每支鼻腔喷雾剂样品的特异性抗病毒活性(IU/支)；

T₀为受试样品的效价；

T_oco为标准品的效价；

A_oco为标准品的活性(IU/mL)；

v为每支鼻腔喷雾剂样品的体积(mL)。

3.实验结果

表1在vero猴肾细胞培养上的抗水疱性口炎病毒活性(on the Vero monkey kidney cells，vesicular stomatitis virus)

To	Toco	Aoco(IU/mL)	A0(IU/支)
				285	3200	3.0×106	2.8×106

表2在vero猴肾细胞培养上的抗鼠脑心肌炎病毒活性(on the Vero monkey kidney cells，mouse encephalocarditis virus，EMC)

To	Toco	Aoco(IU/mL)	A0(IU/支)
				570	6400	3.0×106	2.8×106

表3在牛肾细胞(MDBK)培养上的抗水疱性口炎病毒活性(on MDBK cell，vesicular stomatitis virus)

To	Toco	Aoco(IU/mL)	A0(IU/支)
				14240	480000	3.0×106	9.3×105

表4在牛肾细胞(MDBK)培养上的抗鼠脑心肌炎病毒活性(on MDBK cell，mouse encephalocarditis virus，EMC)

To	Toco	Aoco(IU/mL)	A0(IU/支)
				21360	720000	3.0×106	9.3×105

表5在人二倍体成纤维细胞(IMG-1314)培养上的抗水疱性口炎病毒活性(on human diploid fibroblasts(IMG-1314)，vesicular stomatitis virus)

To	Toco	Aoco(IU/mL)	A0(IU/支)
				1860	64000	3.0×106	9.15×105

表6在人二倍体成纤维细胞(IMG-1314)培养上的抗鼠脑心肌炎病毒活性(on human diploid fibroblasts(IMG-1314)，mouse encephalocarditis virus，EMC)

To	Toco	Aoco(IU/mL)	A0(IU/支)
				2418	83200	3.0×106	9.15×105

由上述实验结果表明，由本发明提供的含有干扰素的药物组合物具有显著的抗水疱性口炎病毒和抗鼠脑心肌炎病毒活性和细胞保护作用。尤其是，本发明提供的鼻腔喷雾剂，在每支仅含α-2b型重组人干扰素50000IU及牛磺酸1mg下，就可实现特异性抗病毒活性达9.15×10⁵IU/支～2.8×10⁶IU/支，呈现出显著的协同作用，可实现较低干扰素用量就能达到显著疗效，可降低干扰素的长期给药产生的依赖性及副作用，对提高患者的顺应性和降低用药成本具有重要意义，能满足临床对干扰素的用药需求，具有显著性进步和实用价值。

最后有必要在此指出的是：以上实施例只用于对本发明技术方案做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种含有干扰素的药物组合物，其特征在于：其药理活性成分为干扰素和牛磺酸，且所述干扰素的活性单位含量为10IU/mL～1×10⁶IU/mL，牛磺酸的含量为0.05mg/mL～0.5mg/mL。

2.根据权利要求1所述的含有干扰素的药物组合物，其特征在于：所述干扰素为重组人干扰素，且所述重组人干扰素的活性单位含量为1×10²IU/mL～1×10⁵IU/mL。

3.根据权利要求2所述的含有干扰素的药物组合物，其特征在于：所述干扰素为α型重组人干扰素，且所述α型重组人干扰素的活性单位含量为5×10²IU/mL～5×10⁴IU/mL。

4.根据权利要求3所述的含有干扰素的药物组合物，其特征在于：所述干扰素为α-2b型重组人干扰素，且所述α-2b型重组人干扰素的活性单位含量为1×10³IU/mL～1×10⁴IU/mL。

5.一种应用权利要求1至4中任一项所述的含有干扰素的药物组合物制备的治疗或预防病毒感染的药物制剂。

6.权利要求5所述的病毒为流感病毒或急性呼吸道病毒。

7.权利要求5所述的药物制剂为喷雾剂。

8.权利要求7所述的喷雾剂为鼻腔喷雾剂。

9.权利要求8所述的鼻腔喷雾剂以每支10.5毫升计，其配方为：

余量为注射用水。

10.权利要求9所述的鼻腔喷雾剂的制备方法，包括如下步骤：

首先精确称取配方量牛磺酸、EDTA二钠、葡聚糖4000、氯化钠、氯化钾和磷酸二氢钾，加入80000mL注射用水使其完全溶解；然后加入配方量的甘油、吐温80和薄荷油，并加注射用水定容至105000mL，搅拌使混合均匀；再取上述混合溶液104329mL与671mLα-2b型重组人干扰素原液混合均匀；最后按10.5mL每支进行分装，即得10000支所述的鼻腔喷雾剂。