CN103333824B - 一种微生物有机肥及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种微生物有机肥及其制备方法，包括菌种培养、复合及液体深层发酵工艺，属于农业集约化生产技术。采用胶冻样芽孢杆菌15～20%、巨大芽孢杆菌15～18%、褐球固氮菌15～18%、酿酒酵母10～13%、产朊假丝酵母10～13%、植物乳杆菌15～18%、放线菌10～13%。以上菌种分别经过一、二级菌种培养，三级液体深层发酵，使发酵液中菌数达到10～15×108个/mL，即得微生物有机肥（707（Y））。本发明采用先进的液体深层发酵技术，经过多年从自然界中筛选获得的稳定性和功能性很强的菌种，种类多，使用方法便捷，能促进作物生长、改善果实品质、促早熟、增加产量，提高肥料利用率，改良土壤生态环境，并且有一定的防病抗病功效。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生物有机肥及其制备方法，具体地说，涉及不同菌种之间通过协同作用进行有效复合所生产的一种富含作物生长所的需营养成分的一种微生物有机肥（707（Y）），属于农业集约化生产技术。
背景技术
生物肥料是含有特定微生物活体的制品，应用与农业生产，通过其所含微生物的生命活动，增加植物养分的供应量或促进植物生长，提高产量，改善农产品品质及农业生态环境。随着科技的发展，传统的化肥产业深陷困局，新型肥料由于其采用新的科学技术及新的施肥理念，使其在当今农业领域有了更广阔的发展空间。
微生物肥料是利用微生物与营养物质复合而成，能够提供、保持或改善植物营养，提高农产品产量或改善农产品品质的活体微生物制品。近年来，国内外迅速产生了一些利用微生物发酵生产的肥料，主要是利用微生物的某一特性来分解土壤中不能被作物直接利用的某一特定的营养成分。但这些产品使用菌种单一，作用也单一。
目前，大部分产品都是按照农用微生物菌剂行业标准执行，有效活菌数大于2亿个/ml，活菌数量高的微生物产品不仅能够提高产品的使用效果，还可提高产品的市场竞争力。然而要提高微生物肥料中的有效活菌数，必须要有稳定性强，不易老化的优质菌种作为源头，配以高技术的生产发酵技术。
发明内容
本发明所要解决的问题是采用多种菌种制备复合微生物有机肥，该系列菌种特点主要是在自然界中提取出来的适应性强，稳定性好，不易老化等特点，并合理利用微生物间的相互作用，配备高技术的生产发酵技术生产出优质的产品。该微生物有机肥能刺激植物生长、缓解土地板结、改良土壤生态环境、防病抗病等作用，从而达到增产、高产的目的。
本发明的技术解决方案如下：一种微生物有机肥采用胶冻样芽孢杆菌（Bacillusmucilaginosus）CICC No.21699、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）ACCC No.11011、褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）CICC No.20025、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）ACCCNo.20034、产朊假丝酵母（Candida utilis）ATCC No.22023、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ATCC No.8014、放线菌（Dactylosporangium sp.）ACCC No.40661作为制备菌种；所述菌种的质量百分比如下：胶冻样芽孢杆菌15～20%、巨大芽孢杆菌15～18%、褐球固氮菌15～18%、酿酒酵母10～13%、产朊假丝酵母10～13%、植物乳杆菌15～18%、放线菌10～13%。
所述的微生物有机肥的制备方法步骤如下：
1）接种：配制各菌种的固体培养基，灭菌后严格进行无菌操作，从斜面转接至平板，温度30℃下培养2～3天；
2）一级培养：将长好的平板挑取单菌落转接至装有一级液体培养基的50mL锥形瓶中，无菌操作，30℃、130r/min培养24～48h；
3）二级发酵：将一级培养菌种接种于盛有二级液体培养基的500mL锥形瓶中，无菌操作，30℃、130r/min培养24～48h。
4）将各菌种按所述菌种的质量百分比混合，将混合后的菌液接种于盛有发酵培养基的发酵罐中，发酵培养基：蜂蜜10～50g/L、蔗糖20～100g/L、蛋白胨1～5g/L、KH2PO41～5g/L、尿素1～5g/L、K2HPO45～20g/L、MgSO4·7H2O5～20g/L、Nacl5～20g/L、(NH4)2SO45～20g/L，其余为蒸馏水；pH6.0～8.0，接种量为1～5%，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到10～15×108个/mL，即得到所述微生物有机肥。
所述胶冻样芽孢杆菌采用的固体培养基为蔗糖10.0g，CaSO4·2H2O0.1g，K2HPO40.2g，CaCO35.0g，MgSO4·7H2O0.2g，NaCl0.2g，琼脂14.0g，蒸馏水定容至1.0L；一级液体培养基为蔗糖10.0g，CaSO4·2H2O0.1g，K2HPO40.2g，CaCO35.0g，MgSO4·7H2O0.2g，NaCl0.2g，蒸馏水定容至1.0L；二级液体培养基为蔗糖10.0g，CaSO4·2H2O0.1g，K2HPO40.2g，CaCO35.0g，MgSO4·7H2O0.2g，NaCl0.2g，蒸馏水定容至1.0L。
所述巨大芽孢杆菌采用的固体培养基为蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.0；一级液体培养基为蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.0；二级液体培养基为蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.0。
所述褐球固氮菌采用的固体培养基为酵母提取物0.5g，甘露醇20.0g，KH2PO40.2g，K2HPO40.8g，MgSO4.7H2O0.2g，CaSO4·2H2O0.1g，FeCl3微量，Na2MoO4·2H2O微量，琼脂15.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.2；一级液体培养基为酵母提取物0.5g，甘露醇20.0g，KH2PO40.2g，K2HPO40.8g，MgSO4.7H2O0.2g，CaSO4·2H2O0.1g，FeCl3微量，Na2MoO4·2H2O微量，蒸馏水定容至1.0L，pH7.2；二级液体培养基为酵母提取物0.5g，甘露醇20.0g，KH2PO40.2g，K2HPO40.8g，MgSO4.7H2O0.2g，CaSO4·2H2O0.1g，FeCl3微量，Na2MoO4·2H2O微量，蒸馏水定容至1.0L，pH7.2。
所述酿酒酵母采用的固体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH；一级液体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH；二级液体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH。
所述产朊假丝酵母采用的固体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH；一级液体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH；二级液体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH。
所述植物乳杆菌采用的固体培养基为5°Bé'麦芽汁1.0L，酵母膏5.0g，灭菌碳酸钙6.0g，琼脂15g，自然pH；一级液体培养基为5°Bé'麦芽汁1.0L，酵母膏5.0g，灭菌碳酸钙6.0g，自然pH；二级液体培养基为5°Bé'麦芽汁1.0L，酵母膏5.0g，灭菌碳酸钙6.0g，自然pH。
所述放线菌采用的固体培养基为蔗糖30.0g，KCl0.5g，FeSO40.01g，NaNO32.0g，K2HPO41.0g，MgSO40.5g，琼脂20.0g，蒸馏水1.0L，pH7.2～7.4；一级液体培养基为蔗糖30.0g，KCl0.5g，FeSO40.01g，NaNO32.0g，K2HPO41.0g，MgSO40.5g，蒸馏水1.0L，pH7.2～7.4；二级液体培养基为蔗糖30.0g，KCl0.5g，FeSO40.01g，NaNO32.0g，K2HPO41.0g，MgSO40.5g，蒸馏水1.0L，pH7.2～7.4。
本发明微生物有机肥的有益效果是：这种微生物有机肥采用胶冻样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、褐球固氮菌、酿酒酵母、产朊假丝酵母、植物乳杆菌、放线菌作为制备菌种。分别经过一级菌种培养，二、三级发酵，使发酵液中菌数达到10～15×108个/mL，即得微生物有机肥（707（Y））。本产品经长期实地验证，配方合理，功效稳定，能促进作物生长、改善果实品质、促早熟、增加产量，提高肥料利用率，改良土壤生态环境，并且有一定的防病抗病功效。
具体实施方式
本发明微生物有机肥（707（Y））采用胶冻样芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）、褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）、酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）、产朊假丝酵母（Candida utilis）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、放线菌（Dactylosporangium sp.）作为制备菌种；所述菌种的质量百分比如下：胶冻样芽孢杆菌15～20%、巨大芽孢杆菌15～18%、褐球固氮菌15～18%、酿酒酵母10～13%、产朊假丝酵母10～13%、植物乳杆菌15～18%、放线菌10～13%。
实施例1：胶冻样芽孢杆菌培养
1）接种：配制该菌种的最适培养基平板，灭菌后严格进行无菌操作，从斜面转接至平板，最适温度30℃下培养2～3天。固体培养基：蔗糖10.0g，CaSO4·2H2O0.1g，K2HPO40.2g，CaCO35.0g，MgSO4·7H2O0.2g，NaCl0.2g，琼脂14.0g，蒸馏水定容至1.0L。
2）一级培养：将长好的平板挑取单菌落转接至装有最适液体培养基的50mL锥形瓶中中（严格无菌操作），30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：蔗糖10.0g，CaSO4·2H2O0.1g，K2HPO40.2g，CaCO35.0g，MgSO4·7H2O0.2g，NaCl0.2g，蒸馏水定容至1.0L。
3）二级发酵：将一级培养菌种接种于盛有液体培养基的500mL锥形瓶中，30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：蔗糖10.0g，CaSO4·2H2O0.1g，K2HPO40.2g，CaCO35.0g，MgSO4·7H2O0.2g，NaCl0.2g，蒸馏水定容至1.0L。
实施例2：巨大芽孢杆菌培养
1）接种：配制该菌种的最适培养基平板，灭菌后严格进行无菌操作，从斜面转接至平板，最适温度30℃下培养2～3天。固体培养基：蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.0。
2）一级培养：将长好的平板挑取单菌落转接至装有最适液体培养基的50mL锥形瓶中中（严格无菌操作），30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.0。
3）二级发酵：将一级培养菌种接种于盛有液体培养基的500mL锥形瓶中，30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.0。
实施例3：褐球固氮菌
1）接种：配制该菌种的最适培养基平板，灭菌后严格进行无菌操作，从斜面转接至平板，最适温度30℃下培养2～3天。固体培养基：酵母提取物0.5g，甘露醇20.0g，KH2PO40.2g，K2HPO40.8g，MgSO4.7H2O0.2g，CaSO4·2H2O0.1g，FeCl3微量，Na2MoO4·2H2O微量，琼脂15.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.2。
2）一级培养：将长好的平板挑取单菌落转接至装有最适液体培养基的50mL锥形瓶中中（严格无菌操作），30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：酵母提取物0.5g，甘露醇20.0g，KH2PO40.2g，K2HPO40.8g，MgSO4.7H2O0.2g，CaSO4·2H2O0.1g，FeCl3微量，Na2MoO4·2H2O微量，蒸馏水定容至1.0L，pH7.2。
3）二级发酵：将一级培养菌种接种于盛有液体培养基的500mL锥形瓶中，30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：酵母提取物0.5g，甘露醇20.0g，KH2PO40.2g，K2HPO40.8g，MgSO4.7H2O0.2g，CaSO4·2H2O0.1g，FeCl3微量，Na2MoO4·2H2O微量，蒸馏水定容至1.0L，pH7.2。
实施例4：酿酒酵母
1）接种：配制该菌种的最适培养基平板，灭菌后严格进行无菌操作，从斜面转接至平板，最适温度30℃下培养2～3天。固体培养基：5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH。
2）一级培养：将长好的平板挑取单菌落转接至装有最适液体培养基的50mL锥形瓶中中（严格无菌操作），30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH。
3）二级发酵：将一级培养菌种接种于盛有液体培养基的500mL锥形瓶中，30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH。
实施例5：产朊假丝酵母
1）接种：配制该菌种的最适培养基平板，灭菌后严格进行无菌操作，从斜面转接至平板，最适温度30℃下培养2～3天。固体培养基：5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH。
2）一级培养：将长好的平板挑取单菌落转接至装有最适液体培养基的50mL锥形瓶中中（严格无菌操作），30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH。3）二级发酵：将一级培养菌种接种于盛有液体培养基的500mL锥形瓶中，30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH。
实施例6：植物乳杆菌
1）接种：配制该菌种的最适培养基平板，灭菌后严格进行无菌操作，从斜面转接至平板，最适温度30℃下培养2～3天。固体培养基：5°Bé'麦芽汁1.0L，酵母膏5.0g，灭菌碳酸钙6.0g，琼脂15g，自然pH。
2）一级培养：将长好的平板挑取单菌落转接至装有最适液体培养基的50mL锥形瓶中中（严格无菌操作），30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：5°Bé'麦芽汁1.0L，酵母膏5.0g，灭菌碳酸钙6.0g，自然pH。
3）二级发酵：将一级培养菌种接种于盛有液体培养基的500mL锥形瓶中，30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：5°Bé'麦芽汁1.0L，酵母膏5.0g，灭菌碳酸钙6.0g，自然pH。
实施例7：放线菌
1）接种：配制该菌种的最适培养基平板，灭菌后严格进行无菌操作，从斜面转接至平板，最适温度30℃下培养2～3天。固体培养基：蔗糖30.0g，KCl0.5g，FeSO40.01g，NaNO32.0g，K2HPO41.0g，MgSO40.5g，琼脂20.0g，蒸馏水1.0L，pH7.2～7.4。
2）一级培养：将长好的平板挑取单菌落转接至装有最适液体培养基的50mL锥形瓶中中（严格无菌操作），30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：蔗糖30.0g，KCl0.5g，FeSO40.01g，NaNO32.0g，K2HPO41.0g，MgSO40.5g，蒸馏水1.0L，pH7.2～7.4。
3）二级发酵：将一级培养菌种接种于盛有液体培养基的500mL锥形瓶中，30℃、130r/min培养24～48h。液体培养基：蔗糖30.0g，KCl0.5g，FeSO40.01g，NaNO32.0g，K2HPO41.0g，MgSO40.5g，蒸馏水1.0L，pH7.2～7.4。
实施例8：菌种复合及液体深层发酵
将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；将混合后的菌液接种于盛有发酵培养基的发酵罐中，发酵培养基：蜂蜜10～50g/L、蔗糖20～100g/L、蛋白胨1～5g/L、KH2PO41～5g/L、尿素1～5g/L、K2HPO45～20g/L、MgSO4·7H2O5～20g/L、Nacl5～20g/L、(NH4)2SO45～20g/L，其余为蒸馏水。pH6.0～8.0，接种量为1～5%，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到10～15×108个/mL，即得到所述微生物有机肥。
实施例9：微生物有机肥田间应用效果
微生物有机肥707（Y）在大豆、番茄、玉米作物上的应用效果，结果见表1、表2、表3.
表1.微生物有机肥707（Y）对番茄作物形状及产量影响
注：对照为常规施肥，试验按产品使用方法使用。
从表1可以看出，试验区秧苗墩实，叶片大而厚，茎粗状，根系发达，果实大，着色好，无畸形果，口味甘甜；该试验区作物耐旱，抗早衰，抗早疫病和晚疫病强。
表2.微生物有机肥707（Y）对大豆作物形状及产量影响
注：对照为常规施肥，试验按产品使用方法使用。
表3.微生物有机肥707（Y）对玉米作物形状及产量影响
注：对照为常规施肥，试验按产品使用方法使用。
从表2、表3可以看出，微生物有机肥707（Y）对大豆、玉米的农艺性状和产量均有影响，
结果表明：该产品对大豆作物的株高、节数、荚数、粒数等都有明显作用，可使大豆增产15.9%；
对玉米的粒行数、行粒数、轴长和百粒重等作用效果显著，可使玉米增产16.5%。
本发明微生物有机肥（707（Y））与现有产品相比，具有如下特点：
1）菌种多，施用针对性强
本项目采用的液体深层发酵微生物复合菌剂是在纯培养单一菌种的基础上，将酵母菌、乳酸菌、芽孢杆菌、固氮菌等多种微生物菌种进行复合培养发酵。针对农作物的需要复合添加适合菌种，如起到抑制病原菌作用的微生物、适宜禾本科植物的自生固氮菌、促进植物生长的固氮菌等，且这些微生物特别稳定，所代谢的各种酶活性都特别高。这是本发明微生物有机肥（707（Y））区别于以往微生物产品的创新之处。不仅具备其他微生物产品所拥有的功效，同时有目的性、针对性的起到“药效”，防病抗病的同时，形成有益微生物的优势环境，达到以微生物“治”微生物的目的。
2）三级液体深层发酵工艺
在二级种子液发酵过程中，采用微生物纯培养和复合相结合的技术。各菌种的生理活性较高，发酵液中菌体浓度进一步增大。经过微生物技术进行各菌种的复合，保证各菌种能良好生长，代谢水平稳定，达到高密度纯培养并有效复合。将种子液接种于三级深层发酵的发酵罐中，控制发酵适宜条件，从而得到目的产品。
三级液体深层发酵的优势在于，使目的产品的生理活性高、菌液中菌体密度大。同时，经过三级液体深层发酵的微生物复合菌剂，其处于各菌种的互惠共生的环境中，生理活性更为稳定，对环境的适应性更强，受环境因素影响不大。目的产品适应投放区自然环境的能力更强，从而有效的发挥作用。工艺过程中，建立关键检测点，严把质量关。
3）培养基的合理调配
发酵过程中的培养基调配。发酵培养基是供菌种生长、繁殖和合成产物之用。它既要使菌种接种后能迅速生长，达到一定的菌体浓度，又要使长好的菌体能迅速合成产物。因此，发酵培养基的组成除有菌体生长所必需的元素和化合物外，还要有产物所需的特定元素、前体和促进剂等。
本发明微生物有机肥（707（Y））施入土壤后，肥料中的微生物会浸入作物根毛，使植物的根部发生变态反应，长出发达的根部，帮助植物吸收土壤中的不能被植物直接利用的营养物质。本发明微生物有机肥（707（Y））喷施作物叶面上可直接被叶片吸收参与植物代谢活动，较根系吸收无机肥再合成有机质减少了中间环节和运输途径，节约能量，加快作物光合作用强度和光合速率，提高能量的利用率。
本发明微生物有机肥（707（Y））本身所含有的营养元素全面，并且能够提高土壤及空气中氮磷钾等元素的利用率：本发明中的微生物分泌的酶类物质能把亚硝酸离子和空气中的有害气体继续氧化成硝态氮或还原成氨态氮供作物吸收，有效利用尿素和氨在土壤中氧化成亚硝酸的离子，提高氮素的利用率；本发明中的微生物在代谢古城中也会产生酸类物质，使磷酸钙和磷灰石等难溶物质转化成能被植物利用的可溶性的磷酸盐；本发明中微生物能抑制速效钾在土壤中的固定作用，提高钾肥的利用率。
Claims (9)
1.一种微生物有机肥，其特征在于：采用胶冻样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)CICC No.21699、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)ACCC No.11011、褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)CICC No.20025、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ACCC No.20034、产朊假丝酵母(Candida utilis)ATCC No.22023、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ATCC No.8014、放线菌(Dactylosporangium sp.)ACCC No.40661作为制备菌种；所述菌种的质量百分比如下：胶冻样芽孢杆菌15～20％、巨大芽孢杆菌15～18％、褐球固氮菌15～18％、酿酒酵母10～13％、产朊假丝酵母10～13％、植物乳杆菌15～18％、放线菌10～13％。
2.根据权利要求1所述的微生物有机肥的制备方法，其特征在于：所述微生物有机肥的制备步骤如下：
1)接种：配制各菌种的固体培养基，灭菌后严格进行无菌操作，从斜面转接至平板，温度30℃下培养2～3天；
2)一级培养：将长好的平板挑取单菌落转接至装有一级液体培养基的50mL 锥形瓶中，无菌操作，30℃、130r/min培养24～48h；
3)二级发酵：将一级培养菌种接种于盛有二级液体培养基的500mL锥形瓶中，无菌操作，30℃、130r/min培养24～48h；
4)将各菌种按所述菌种的质量百分比混合，将混合后的菌液接种于盛有发酵培养基的发酵罐中，发酵培养基：蜂蜜10～50g/L、蔗糖20～100g/L、蛋白胨1～5g/L、KH2PO4 1～5g/L、尿素1～5g/L、K2HPO4 5～20g/L、MgSO4·7H2O 5～20g/L、NaC l5～20g/L、(NH4)2SO4 5～20g/L，其余为蒸馏水；pH6.0～8.0，接种量为1～5％，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到10～15×108个/mL，即得到所述微生物有机肥。
3.根据权利要求2所述的微生物有机肥的制备方法，其特征在于：所述胶冻样芽孢杆菌采用的固体培养基为蔗糖10.0g，CaSO4·2H2O 0.1g，K2HPO4 0.2g，CaCO3 5.0g，MgSO4·7H2O 0.2g，NaCl 0.2g，琼脂14.0g，蒸馏水定容至1.0L；一级液体培养基为蔗糖10.0g，CaSO4·2H2O 0.1g，K2HPO4 0.2g，CaCO3 5.0g，MgSO4·7H2O 0.2g，NaCl 0.2g，蒸馏水定容至1.0L；二级液体培养基为蔗糖10.0g，CaSO4·2H2O 0.1g，K2HPO4 0.2g，CaCO3 5.0g，MgSO4·7H2O 0.2g，NaCl 0.2g，蒸馏水定容至1.0L。
4.根据权利要求2所述的微生物有机肥的制备方法，其特征在于：所述巨大芽孢杆菌采用的固体培养基为蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl 5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.0；一级液体培养基为蛋白胨5.0g，牛 肉浸取物3.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.0；二级液体培养基为蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.0。
5.根据权利要求2所述的微生物有机肥的制备方法，其特征在于：所述褐球固氮菌采用的固体培养基为酵母提取物0.5g，甘露醇20.0g，KH2PO4 0.2g，K2HPO4 0.8g，MgSO4.7H2O 0.2g，CaSO4·2H2O 0.1g，FeCl3微量，Na2MoO4·2H2O微量，琼脂15.0g，蒸馏水定容至1.0L，pH7.2；一级液体培养基为酵母提取物0.5g，甘露醇20.0g，KH2PO4 0.2g，K2HPO4 0.8g，MgSO4.7H2O 0.2g，CaSO4·2H2O 0.1g，FeCl3微量，Na2MoO4·2H2O微量，蒸馏水定容至1.0L，pH7.2；二级液体培养基为酵母提取物0.5g，甘露醇20.0g，KH2PO4 0.2g，K2HPO4 0.8g，MgSO4· 7H2O 0.2g，CaSO4·2H2O 0.1g，FeCl3微量，Na2MoO4·2H2O微量，蒸馏水定容至1.0L，pH7.2。
6.根据权利要求2所述的微生物有机肥的制备方法，其特征在于：所述酿酒酵母采用的固体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH；一级液体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH；二级液体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH。
7.根据权利要求2所述的微生物有机肥的制备方法，其特征在于：所述产朊假丝酵母采用的固体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH；一级液体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH；二级液体培养基为5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH。
8.根据权利要求2所述的微生物有机肥的制备方法，其特征在于：所述植物乳杆菌采用的固体培养基为5°Bé'麦芽汁1.0L，酵母膏5.0g，灭菌碳酸钙6.0g，琼脂15g，自然pH；一级液体培养基为5°Bé'麦芽汁1.0L，酵母膏5.0g，灭菌碳酸钙6.0g，自然pH；二级液体培养基为5°Bé'麦芽汁1.0L，酵母膏5.0g，灭菌碳酸钙6.0g，自然pH。
9.根据权利要求2所述的微生物有机肥的制备方法，其特征在于：所述放线菌采用的固体培养基为蔗糖30.0g，KCl 0.5g，FeSO4 0.01g，NaNO3 2.0g，K2HPO4 1.0g，MgSO4 0.5g，琼脂20.0g，蒸馏水1.0L，pH7.2～7.4；一级液体培养基为蔗糖30.0g，KCl 0.5g，FeSO4 0.01g，NaNO3 2.0g，K2HPO41.0g，MgSO4 0.5g，蒸馏水1.0L，pH7.2～7.4；二级液体培养基为蔗糖30.0g，KCl 0.5g，FeSO4 0.01g，NaNO3 2.0g，K2HPO4 1.0g，MgSO4 0.5g，蒸馏水1.0L，pH7.2～7.4。
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