CN1033074A - 对人t淋巴细胞lfa-1抗原上新的抗原决定基特异的单克隆抗体 - Google Patents

对人t淋巴细胞lfa-1抗原上新的抗原决定基特异的单克隆抗体 Download PDF

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Abstract

一种优先与人CD8淋巴细胞群体的一个亚类 结合的单克隆抗体，其可用于肯定而精确地区分 CD8细胞群体中细胞毒性效应和抑制效应细胞。该 单克隆抗体可借助它能与表达其表面抗原上一新的 抗原决定基的CD8细胞结合而识别LFA-1抗原的 该抗原决定基。该抗体优先结合的CD8亚类细胞 群体是CD8细胞毒性效应细胞群。单克隆抗体的 这一选择性可使其用于进行细胞分选，诊断和积极的 治疗。

Description

本发明涉及单克隆抗体，特别是涉及对淋巴细胞功能相关抗原（LFA-1）上一新的抗原决定基特异的单克隆抗体，它能够区分人T8淋巴细胞群体中的杀伤效应和抑制效应细胞。
杂交瘤技术的发展已为更好地了解人类免疫反应系统功能作出了贡献。将抗原导入人体内刺激免疫反应系统。从而使淋巴细胞合成能与抗原上决定基结合的抗体分子。在抗血清中产生的抗体组合物，其组成上复杂可变，而且当给予不同的接受体时能表现出不同的效应。杂交瘤技术使杂交细胞系能再生有预定之特异性的单克隆抗体（Kohler    and    Milstein，Nature    256，495-597，1975）。已将使用这一技术生产的单克隆抗体用于研究T和B淋巴细胞在调节人体免疫反应中的功能。通过这一研究，已更好地认识了人T淋巴细胞亚群的功能。
人T淋巴细胞能够识别特异性抗原，发挥诱导和抑制功能并调节实际上所有细胞和体液免疫反应的类型和强度。基于个别细胞所表达的细胞表面糖蛋白，已将具有独特调节和效应功能的两个人类主要T细胞亚类鉴定为T4和T8亚类。T4亚类显示可提供诱导/辅助功能，而T8亚类显示有一定抑制功能。另外，还发展了能够将T细胞划分为功能上不同的T4和T8群体的单克隆抗体，其也显示可分别优先识别不同类别的抗原（Morimoto等，J.Immunol.134∶1508-1515，1985）。
用单克隆抗体所作研究表明，T4细胞可识别主组织相容性复合物（MHC）Ⅱ类抗原，而T8细胞则识别Ⅰ类MHC抗原（Meuer等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，79∶4395-4399，1982）。已经测知，T4和T8细胞亚类内存在相当大的功能及表型异质性。虽然T8+（CDB+）群体含有前细胞毒性、前抑制和抑制效应T细胞，但这些差异仍有待基于使用功能检测法进行大量检测。Clement等人（J.Immunol.，133∶2461-2468，1984）试图使用单克隆抗体来限定免疫系统杀伤细胞的CD8+前体。以前试图提供一种肯定而精确的区分表型的工具（即一种单克隆抗体），以将CD8类细胞辨别为细胞毒性效应和抑制效应细胞的努力均未获成功，或都没有很容易地分辨出来。Takeuchi等人（Cellular    Immunol.待出版）证明CD8+CD11（T8+Mol-）亚类含有抑制性和细胞毒性效应细胞，而T8+Mol+亚类含有NK细胞。因此可见，见于T8+Mol-亚类中的抑制作用具有一般抑制系统的特性，该系统中需要有一种抑制作用诱导物，即T4+2H4+。抑制细胞中的T8+Mol+（CD11）亚类则不需要抑制性诱导细胞，而更象有NK细胞的功能。为此，Takeuchi等人认为T8+CD11-亚类包括抑制和效应细胞。这一研究结果表明还没有能用于将CD11-亚类确切地分为抑制效应细胞和细胞毒性效应细胞的单克隆抗体。
在研究细胞毒性T淋巴细胞介导的杀伤时，发现淋巴细胞功能相关抗原（LFA-1）是很重要的（Sanchez-Madrid等，J.Exp.Med.158∶1758-1803，1983）。人LFA-1是一种含有非共价连接之α和β多肽链的高分子量表面抗体。已测知α亚单位的分子量为177，000道尔顿，β亚单位的分子量为95，000道尔顿。
LFA-1是一种功能上加强效应细胞和靶细胞之间粘附作用的分子。发现其可与人细胞毒性T淋巴细胞（CTL）中的抗原受体一起发挥杀伤作用。LFA-1分子存在于B和T淋巴细胞上并标记以不同定量表达的亚群。已发展了可识别与人T淋巴细胞介导的细胞毒性有关之三种不同抗原的单克隆抗体，从而揭示了了解有关抗原识别、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）与靶细胞的粘附以及中靶细胞的溶解等过程的复杂性。这些抗原被鉴定为LFA-1、LFA-2和LFA-3（Sanchez-Madrid等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，79∶7498-7493，1982）。Hildreth等（Eur.J.Immunol.，13∶202-208，1982）还讨论了人LFA-1参予细胞介导的淋巴细胞溶解问题。可见，CD8+细胞内功能性群体之间存在着更为精细的表型差异。
虽然现阶段生产杂交瘤和单克隆抗体的一般程序是已知的，但在分离和维持培养的杂交瘤细胞时尚须特别小心。因为由不同细胞产生的抗体可与同一分子上不同的抗原决定基反应，所以可知产生抗主题抗原之抗体的、分离的克隆彼此之间也是不同的。为此有必要对所得抗体或含抗体的培养基、血清或腹水液进行足够的试验，对每个克隆产生的抗体进行定性，以确切了解由其产生的、用于诊断和治疗目的的各种单克隆抗体的复杂性质。
在开发一种所需的单克隆抗体时，必须鉴定和定位将诱导一与之结合之特异性抗体的抗原决定基。反过来则要在所完成的融合中建立几百个杂交瘤克隆并彻底地筛选抗正常和异常组织及不同抗原的克隆，从而鉴别和限定产生有预期结合特异性之抗体的克隆。本发明的目的在于生产一种可与人T8（CD8）细胞表面上表达的特定抗原决定基结合的单克隆抗体，从而使该T细胞群体内这样的功能亚群能被检测出来。所提供的单克隆抗体可以更为精确地鉴定CD8类细胞的表型，以致于能够明确地区分该类细胞内的细胞毒性效应和抑制效应细胞。
因此，本发明将提供一种能区分CD8淋巴细胞群体中杀伤效应和抑制效应细胞的单克隆抗体。对单克隆抗体特异的表面抗原或决定基是由180，000道尔顿和95，000道尔顿糖蛋白组成的。该抗原被定名为“S6    F1”，而且单克隆抗体似乎亦可识别LFA-1抗原上的一个新的抗原决定基。
S6    F1抗原优先在淋巴细胞的T8+亚群上表达，但在一次对未筛分T细胞和T4+淋巴细胞所作的研究中，其只在很小程度上被单克隆抗体识别。基于S6    F1抗原的这种特异性，使单克隆抗体能够用于再细分人外周血淋巴细胞样品中的T8+群体，从而确定这些细胞的功能异质性。利用单克隆抗体限定LFA-1抗原及其在产生细胞毒性过程中的功能是以前不知道的。
图1A和1B显示本发明的单克隆抗体与某些T淋巴细胞之反应活性的荧光扫描图。
图2A和2B为涉及鉴定淋巴细胞亚群的实验的图群说明，其中分出细胞毒性效应细胞类。
图3A和3B显示抑制效应活性与携带S6    F1抗原之T8细胞群之间的关系。
图4显示对S6    F1和LFA-1抗原免疫沉淀分析结果。
单克隆抗体制备
使用标准的杂交瘤制备方法用细胞系1670免疫Balb/c小鼠（该细胞系是得自用Herpesvirus Saimiri感染之白唇
Figure 881075078_IMG2
的持久生存的脾细胞群体）。收获小鼠脾细胞并在聚乙二醇中与P3/NS1/1-AG4-1骨髓瘤细胞融合。在HAT培养基中培养该细胞群体以得到克隆化的杂交瘤细胞，检测单克隆抗体产生，并就所产生的单克隆抗体进行筛选和特异性选择。
使用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法由健康供血者的血液样品中分离外周血淋巴细胞。按照Meuer等人（前述文献）所述的方法，使用羊红血球以E玫瑰花形成法将淋巴细胞分离成T和非T细胞群。首先根据与T细胞的反应活性筛选单克隆抗体，以辨别任何特异性细胞结合特征。分别用T4单隆抗体和T8抗体，通过补体介导的细胞溶解得到T4和T8淋巴细胞，然后使用购自Coulter公司（Hialeah，Florida）的EPICS 装置，以细胞分类方法（cell sorting procedures）分析与单克隆抗体的反应活性。分析之后检测本发明的单克隆抗体与未筛分的T、T4和T8细胞的反应活性，并根据与T8细胞反应及对“S6 F1”抗原的特异性结合来对其进行定性。单克隆抗体，即抗-S6 F1，可以区分T8淋巴细胞群体中的杀伤效应和抑制效应细胞。其限定了由180，000道尔顿和95，000道尔顿分子量糖蛋白组成的细胞表面结构。正如将要进一步讨论的，经过连续的免疫沉淀研究和双向凝胶电泳分析，结果表明S6 F1单克隆抗体可识别LEA-1抗原上的一个新的抗原决定基。
参见图1A和1B，数据进一步证实了S6 F1单克隆抗体与某些T淋巴细胞的反应活性。图1A代表了对得自10个正常供血者血液的未筛分的T淋巴细胞、CD4+淋巴细胞和CD8+淋巴细胞的一次细胞荧光扫描图象分析。在购自Coulter公司（Hialeah，Florida）EPICS
Figure 881075078_IMG4
C流式细胞计算器上以间接免疫荧光法对每个T淋巴细胞群的各1×106个细胞进行它们与S6 F1单克隆抗体之反应活性的分析（以1∶1000的比例）。细胞制备和染色方法均为本领域内已知的常规方法。各柱形图中纵座标或Y轴显示细胞的数目，相对横座标或其X轴显示荧光强度。
在这个有代表性的研究中，显示了在所标明的T淋巴细胞上表达S6    F1抗原的荧光扫描图，结果表明17%未筛分的T细胞、14%CD4+淋巴细胞和58%CD+8细胞与S6    F1抗体有反应性。因此，在CD8+淋巴细胞群体上优先表达S6    F1抗原。S6    F1抗体与被检的70%以上的无表面标志细胞、粒性白细胞和T细胞系HSB反应。然而它只与得自其他试验的巨噬细胞、B细胞、B细胞系即Raji、Ramos、Nalms-1、EB病毒转化的细胞系、血生成细胞系U-937、K-562、KG-1或T细胞系Molt4、CEM和JM群体中之10%的细胞反应。
图1B代表了正常供体之CD4和CD8淋巴细胞与各种不同稀释度识别LFA-1抗原之已知单克隆抗体2 F12的反应活性。使用EPICS
Figure 881075078_IMG5
C细胞分类器（cell sorter）以间接免疫荧光法进行分析。各柱形图展示了细胞数-荧光强度关系曲线。在使用抗LFA-1抗体（1∶100稀释）的柱形图a和d中，得到98%的细胞反应活性。在使用单克隆抗体（1∶1000稀释）的柱形图b和e中，得到98%的细胞反应活性。在使用抗体（1∶1000稀释）的柱形图c和f中，得到52%的CD4细胞反应活性和58%的CD8细胞反应活性。这一分析反映了CD4和CD8淋巴细胞群对LFA-1抗原特异性单克隆抗体2 F12之染色图形的变异，而S6 F1单克隆抗体则显示可优先与CD8+淋巴细胞结合。
因为发现S6    F1抗体可与CD8+淋巴细胞的一相当大的群体反应，故可利用该抗体进一步区分外周血淋巴细胞的CD8+群体，以确定这些细胞的功能异质性。提供一种方法以研究是否可用S6    F1单克隆抗体从CD8+抑制细胞中分离出呈同种反应性的细胞毒性T淋巴细胞，即前体或效应细胞。为了确定是否同种抗原特异性细胞毒性T细胞的前体属于CD8+细胞的S6    F1+或S6    F1-群体，检测了由CD8+细胞亚类的特异性细胞介导的淋巴细胞溶胞作用（CML）。
使用已知方法分离新鲜的CD8+细胞，用S6 F1抗体标记并用结合了荧光素的F（ab′）2羊抗小鼠F（ab′）2（Tago）显色。依照Morimoto等人（J.Immunol.134∶1508-1515，1985）的方法使用EPICS C细胞分类器将标记的CD8细胞分为CD8+S6 F1+和CD8+S6 F1-细胞群。然后加入经过补体介导的溶胞作用所得到的1×106/mlCD4+细胞，以在该系统中产生杀伤诱导功能;37℃下于含5%CO2的湿空气环境中，在等数目经照射的同种刺激细胞即E-细胞存在下在多小井培养板内与1×106/ml未筛分的CD8+、筛分的CD8+S6 F1+或CD8+S6 F1-细胞一起培养。培养6天后，通过补体介导的CD4+细胞溶解由培养物中除去CD4细胞。细胞培养4小时后，按Meuer等人（Proc.Natl.Acad，Sci，USA79∶4395-4399，1982）所述的方法，检测CD8细胞亚类的51Cr标记释放细胞介导的淋巴细胞溶解。
参见图2A，图中纵座标显示%比溶胞作用，横座标为效/靶比例。图2A中显示一成对实验的结果。其表明抗特异性靶细胞的大多数细胞毒性T细胞存在于CD8+S6    F1-亚类中，而只有小部分见于CD8+S6    F1+亚类中。
参见图2B，所给数据进一步证实细胞毒性效应T细胞属于混合淋巴细胞反应（MLR）激活的CD8+S6 F1+细胞，而不是CD8+S6 F1-细胞。进行这一检测的方法如下：在25cm2培养瓶中，含有4mML-谷氨酰胺、25mM Hepes缓冲液（Microbiological Associates）、0.5%碳酸氢钠和10%青霉素-链霉素的最终RPMI1640培养基（10%储备的人AB型血清-Pel Freeze）内，于含5%CO2的湿空气环境下用等数目经照射的（5000 Rad）同种（E-）刺激细胞致敏1×106个/ml未筛分的T细胞6天。借助EPICS C细胞分类器将用同种E细胞致敏的未筛分T细胞分成CD8+S6 F1+和CD8+S6 F1-亚类。用对51Cr标记的靶细胞的细胞介导的淋巴溶胞试验分析未筛分的和筛分的CD8+细胞，方法包括融溶冷冻保存的同种（E-）细胞，培养约10-12小时并在0.2ml铬酸钠（溶于盐溶液，1m Ci/ml，Eew England Nuclear）中37℃保温1小时。洗涤靶细胞（即51Cr标记的细胞）并重新悬浮谧钪张嘌校?05个/ml）。使用有V形底小井的培养板进行标准4细胞毒性试验。图2B中给出了一对实验的结果。
与图2A中所示的数据相反，该实验证明CD8+S6    F1+淋巴细胞群与未分选的CD8+群体有更大的同种特异性杀伤效应活性。在CD8+S6    F1-淋巴细胞群中实际上未观察到杀伤效应活性。由这些实验得到的其他数据（未示出）表明S6    F1单克隆抗体并不阻断效应功能，但抗MHC    Ⅰ类和抗LFA-1单克隆抗体可阻断杀伤效应功能（参见Meuer等，上述文献;Sanchez-Madrid等，J.Exp.Med.158∶1785-1803，1983;Sanchez    Madrid等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，79∶7489-7493，1982）。这一资料表明杀伤前体T细胞是见于细胞的CD8+S6    F1-亚类中，但杀伤效应活性却属于CD8+S6    F1+亚类。
由这些试验所获得的数据表明，在初级MLR反应期间S6    F1抗原可不断地在S6    F1阴性CD8+细胞群体上得以表达。初级MLR是使用CD8+S6    F1-淋巴细胞联合CD4+细胞一起发动的，以估计T淋巴细胞对S6    F1抗原的表达。根据三次实验的结果，可见在MLR活化后有45-55%CD8+S6    F1-细胞的表面上表达了S6    F1抗原。这些结果表明在CD8+细胞的S6    F1阴性群体上诱导了S6    F1抗原表达。
图3A中所示的数据，旨在确定CD8+细胞的哪一个亚类被激活而变为抑制效应细胞。使用前面已讨论过的技术和EPICS
Figure 881075078_IMG7
C细胞分类器将所制备的末筛分T细胞分成CD8+S6 F1+和CD8+S6 F1-亚类。在圆底、多小井微量培养板中，向用Pockweed促分裂素（PWM）刺激的5×104个B细胞和2×104个CD4+细胞内加入不同数目的CD8细胞，并于培养7天后测定培养物中的总IgG免疫球蛋白产量。按Meuer等人（前述文献）所述的放射免疫检测法检测培养物上清液中的IgG分泌量。
如图3A中所示，当增加所加入之未筛分CD8+细胞的数目时，将以一种剂量依赖方式抑制PWM刺激的B细胞IgG分泌。当增加加入到CD4+和B细胞中的CD8+S6    F1-细胞数目时，可观察到对IgG分泌的更大程度的抑制。相反，向B和CD4+细胞的混合物内加入CD8+S6    F1+细胞，则IgG分泌只稍有降低。这些结果表明CD8抑制细胞的前体属于CD8+S6    F1-亚类。
在一同种抗原刺激的IgG合成系统中，于MLR激活后检测CD8+细胞各亚类的抑制功能，以根据结果确定CD8+S6 F1+群体中是否可见有T细胞抑制活性。在抗同种抗原的MLR中使已制备的T细胞被激活6天，并在EPICS
Figure 881075078_IMG8
C细胞分类器上将同种激活的T细胞分为CD8+S6 F1+和CD8+S6 F1-细胞。在用于MLR的经照射的同种抗原存在下，向自体外周血淋巴细胞（PBL）内加入未分离的CD8和CD8+细胞的亚类，并估计同种抗原驱动IgG合成的效果。按下列公式计算IgG合成的百分抑制：
%抑制＝1- (检测到的IgG)/(非调节细胞中的IgG) ×100
如图3B中所示，同种激活的未筛分CD8+细胞以一种剂量依赖方式抑制了同种抗原驱动的IgG合成。用同种抗原激活的CD8+S6    F1细胞群在该系统中显示比未筛分的CD8+细胞有更大的抑制活性。但同种抗原激活的CD8+S6    F1+淋巴细胞只有当以很大数目加入到这些培养物中时才表现出很小的抑制活性。这些结果表明，抑制性前体细胞和抑制效应细胞均属于CD8+S6    F1-淋巴细胞群体。特别重要的是，上述结果暗示抑制作用大概不是细胞毒性的唯一表现。
考虑到S6    F1抗原在鉴定细胞毒性效应T细胞中的效能，使用抗2F12对S6    F1和LFA-1抗原的免疫沉淀分析了抗原结构。分析数据示于图4A、4B和4C中。
用伴刀豆球蛋白A（ConA）（20μg/ml）激活富集T细胞后得到的细胞（95%E+细胞），3天后借助乳过氧化物酶催化的碘化作用（Per Hubbard等，Biochemical Analysis of Membrane，Ed.Maddy，AH，p427-501，Chapman and Hall，1976）用125I标记、洗涤、然后溶解在溶胞缓冲液（1%W/V Nonidet p-40，溶于含150mM Nacl、1mM EDTA和1mM苯基甲基（sulphony）氟的20mM Tris-HCl缓冲液pH8.0）中。使溶胞产物（相当5×107个细胞）与5μl个别抗体的腹水液于4℃保温过夜，然后用50μl的10%（W/V）蛋白A：Sepharose沉淀之。将免疫沉淀物在含0.1%（W/V）SDS的溶胞缓冲液中洗涤一次并单用溶胞缓冲液洗两次。然后按Laemmli（Nature London）227∶680-684，1970）所述的SDS-PAGE电泳法进行分析。用TSI/18抗体经四次免疫沉淀预清净得自标记之外周血淋巴细胞的溶胞产物，然后用S6 F1抗体沉淀。按已述方法标记并制备溶胞产物，然后于50℃下在等电聚焦样品缓冲液（9.2M尿素、2%Nanidet p-40、2%两性电解质pH2-11）（Serva）中保温30分钟而由小珠上洗脱免疫复合物。按前面已述及的方法（O′Farrell等，Cell 12∶1133-1142，1977;Rudd等，J.Biol.Chem.200∶1927-1936，1985）进行双向NEGPHE/SDS-PAGE电泳分析。
图4显示了用S6    F1单克隆抗体和2    F12单克隆抗体（其可识别来自ConA激活之T细胞的LFA-1抗原）沉淀后之多肽的电泳分析图形。图4A部分中所示的泳道1和2分别与S6    F1和2    F12单克隆抗体有关。泳道1显示用S6    F1抗体沉淀后分离的分子量分别为180，000道尔顿和95，000道尔顿的两条主要带。泳道2显示用2    F12沉淀后得到的似乎分别相当于LFA-1抗原之α和β亚单位的电泳图形。
图4B部分显示经连续免疫耗竭（immuno-depletion）和双向不平衡凝胶电泳分析（NEPHGE/SDS-PAGE）以直接证明S6    F1抗原之特性而得到的数据。泳道1与S6    F1抗体有关，泳道2与2    F12抗体有关。部分B显示抗LFA-1抗原的2    F12抗体完全除掉了可与S6    F1反应的材料。应注意的是，已显示单克隆抗体TS1/18可与LFA-1抗原的β亚单位反应（见Sanchez-Madrid等，前述文献）。
C栏给出了对S6    F1和LFA-1抗体作2-DNEPHGE/SDS-PAGE分析所获得的结果。结果显示抗S6    F1和LFA-1抗原的抗体沉淀分子量分别为180，000道尔顿和95，000道尔顿、等电点分别为pH5.3和5.7的两种多肽。C栏内的电泳数据支持S6    F1单克隆抗体结合LFA-1抗原这一观察结果。
虽然S6    F1和2    F12单克隆抗体免疫沉淀同样结构的抗原，但它们与功能上不同之细胞亚类的反应性似乎是不同的。图1A和1B中图解显示的数据表明，S6    F1单克隆抗体优先着染CD8+淋巴细胞，而2    F12抗体则表现还可与CD4+淋巴细胞反应。据信CD8+淋巴细胞与S6    F1抗体的反应性并不能简单地反映抗体对LFA-1抗原结构本身的低亲和力。
我们根据用S6    F1单克隆抗体所作分析确定，该抗体识别的真正抗原决定基似乎不参予细胞毒性过程，因为抗体不能够阻断这一功能。然而其他抗LFA-1抗原的已知单克隆抗体却能有效地阻断这一细胞毒性过程（见Sanchez-Madrid等，上述文献）。另外还确定了S6    F1抗原主要是在CD8+细胞、无表面标志细胞和小部分巨噬细胞以及B细胞上表达。这些资料表明，由S6    F1抗体识别的LFA-1抗原上的抗原决定基，可能是通过在参予对靶细胞之粘附功能的LFA-1抗原上发展结合位点而在抗原分子上形成的。
因此，S6    F1单克隆抗体可通过识别LFA-1抗原上一新的抗原决定基而将细胞毒性效应和抑制效应细胞区分开。S6    F1抗原的这一独有的特征可用于诊断和限定CD8细胞毒性效应细胞，以主要借助流式细胞计数技术及其他已知的检测技术将其与抑制效应细胞区分开。例如，已知CD8细胞毒性效应细胞在人类移植物排斥（如对肾和其他移植物的排斥）中起着重要作用。抗CD8+S6    F1细胞毒性效应细胞的S6    F1抗体能够选择性地鉴别这些效应细胞，从而在逆转同种异体移植物排斥作用中使抑制细胞群发挥功能而起到治疗作用。因此S6    F1单克隆抗体的特异性可能在治疗不断发展的移植物排斥中是有用的。
CD8类细胞内S6    F1单克隆抗体的这种特异性是非常独特的，并就其作为一种前所未有的抗体它是很有用的，其可为区分CD8类淋巴细胞内的抑制效应和细胞毒性效应细胞提供一种肯定的而且更为精确的表型检测工具。Clement等人（J.Immunol.133∶2461-2468，1984）讨论了限定人类免疫系统中细胞毒性细胞之CD8前体的单克隆抗体，但并没有获得本发明用S6    F1单克隆抗体所得到的结果。
寄存
生产本发明S6    F1单克隆抗体的细胞系已在提交本申请之前，于1987年10月30日寄存在美国典型培养物保藏中心（ATCC，Rockville，Md.20852）。细胞系的ATCC登记号为HB9579。
尚未确定本发明的单克隆抗体的全部诊断和可能的治疗应用。鉴于该单克隆抗体的性质，其无论单独使用或与放射性同位素、药物或毒素偶联，在人类器官移植过程中均可能具有治疗价值。

Claims (26)

1、一种用杂交瘤技术制得的细胞系，其可产生与LFA-1抗原上S6 F1抗原决定基特异性结合的单克隆抗体，而且该单克隆抗体能够区分人CD8淋巴细胞群体中的细胞毒性效应细胞和抑制效应细胞。
2、根据权利要求1的细胞系，其中小鼠脾细胞是用得自Herpesvirus Samiri感染的白唇 之永久存活的脾细胞群免疫的。
3、根据权利要求2的细胞系，其可产生抗S6F1抗原的小鼠IgG1同型抗体。
4、根据权利要求1的细胞系，其中所说的单克隆抗体生成细胞得自于鼠属。
5、根据权利要求1的细胞系，其为与小鼠骨髓瘤细胞融合而衍生的。
6、根据权利要求1的细胞系，其中S6  F1抗原是在-CD8淋巴细胞亚类的表面上表达的，而且该抗原的进一步特征在于其为由180，000道尔顿和95，000道尔顿分子量糖蛋白组成的细胞表面结构。
7、根据权利要求1的细胞系，其中杂交瘤细胞系完全相同于寄存在美国典型培养物保藏中心（American  Type  Culture  Collection，Rockville，Maryland）寄记号为HB9579的细胞系。
8、一种可与人血中T淋巴细胞群的一个亚类细胞表面上的抗原特异结合的单克隆抗体，所说的抗原的进一步特征在于其可在CD8细胞毒性效应细胞上被检测到，而在CD8抑制效应细胞上基本上不能检测到。
9、根据权利要求8的单克隆抗体，其中所说的抗原之特征在于其为由180，000道尔顿和95，000道尔顿分子量糖蛋白组成的细胞表面结构。
10、根据权利要求8的单克隆抗体，其中所说的单克隆抗体结合LFA-1抗原上的抗原决定基。
11、根据权利要求8的单克隆抗体，其具有由已寄存于美国典型培养物保藏中心之鉴记号为ATCCHB9579的细胞系所产生的小鼠同型IgG1。
12、一种可与人外周血中T淋巴细胞之LFA-1抗原上的抗原决定基结合的单克隆抗体，且其进一步的特征在于可优先与外周血淋巴细胞中T8细胞毒性效应和T8细胞毒性抑制细胞群体内的T8细胞毒性效应细胞结合。
13、根据权利要求12的单克隆抗体，其可结合SF61抗原。
14、一种区分人CD8淋巴细胞群体的样品中细胞毒性效应细胞和抑制效应细胞的方法，其包括使所说的样品与S6  F1单克隆抗体在足以使所说的S6  F1单克隆抗体与CD8细胞毒性效应细胞之间形成免疫复合物的条件下接触一定时间，然后检测由所说的单克隆抗体和所说的样品中的细胞相接触而产生的免疫复合物，其中与所说的单克隆抗体相复合的细胞是CD8细胞毒性效应细胞。
15、根据权利要求14的方法，其包括用一种可检测的化合物标记所说的单克隆抗体这一步骤，从而用所说可检测的化合物标记所说的复合物。
16、根据权利要求14的方法，其包括用细胞分类流式细胞计数方法分离被检测到的免疫复合物这一步骤。
17、根据权利要求14的方法，其中所说的可检测化合物是一种荧光化合物。
18、根据权利要求14的方法，其中所说的可检测化合物是产生所说化合物的酶。
19、一种小鼠IgG1同型的鼠单克隆抗体，其为对S6  F1抗原特异的。
20、根据权利要求19的单克隆抗体，其中S6  F1是由外周血淋巴细胞中CD8细胞毒性效应细胞之表面上筛选的。
21、根据权利要求19的单克隆抗体，其为可检测之标记形式的。
22、根据权利要求21的单克隆抗体，其中所说的标记选自于染料、荧光化合物、放射活性或电子密集元素。
23、根据权利要求19的单克隆抗体，其中所说的标记是一种化学治疗剂、光活性的毒性剂或放射活性剂。
24、一种检验和测定CD8细胞毒性淋巴细胞亚类之液体生物样品中S6  F1抗原的方法，其包括使用与选自荧光化合物、放射活性元素或能产生底物反应可检测化合物之酶的检测基团结合的S6  F1单克隆抗体。
25、根据权利要求24的方法，其包括对被所说的单克隆抗体结合的CD8细胞毒性淋巴细胞进行流式细胞计数分类这一步骤。
26、一种治疗人体内正在发展中的对同种异体移植物排斥的方法，其包括使用S6  F1单克隆抗体选择性地鉴别外周血淋巴细胞中CD8细胞毒性效应细胞，然后排除所说效应细胞的供应，从而能使CD8抑制细胞群体发挥功能以逆转对同种异体移植物的排斥。
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Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990015076A2 (en) * 1989-06-02 1990-12-13 The Johns Hopkins University School Of Medicine MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST LEUKOCYTE ADHESION RECEPTOR β-CHAIN, METHODS OF PRODUCING THESE ANTIBODIES AND USE THEREFORE
US5100378A (en) * 1989-06-09 1992-03-31 Neorx Corporation Enhancement of target cell localization of lymphoid cells
NZ236792A (en) * 1990-01-19 1993-05-26 Merck & Co Inc Recombinant human anti-cd18 antibody, murine 1b4 heavy or light chain variable region, dna, vectors, mammalian host and pharmaceutical compositions
US5273738A (en) * 1990-03-03 1993-12-28 Fred Hutchinson Cancer Research Center Radiation delivery to lymphoid and marrow tissues
US5277892A (en) * 1990-08-08 1994-01-11 Rhomed Incorporated In vivo lymphocyte tagging
US5223241A (en) * 1990-10-01 1993-06-29 The General Hospital Corporation Method for early detection of allograft rejection
US5643549A (en) * 1992-02-20 1997-07-01 Rhomed Incorporated Leukostimulatory agent for in vivo leukocyte tagging
DE69315847T2 (de) * 1992-08-21 1998-06-25 Genentech Inc Verfahren zur behandlung einer durch lfa-1 vermittelten störung
FR2700471B1 (fr) * 1993-01-21 1995-04-07 Pasteur Merieux Serums Vacc Utilisation d'anticorps monoclonaux anti-LFA-1 pour la préparation d'un médicament destiné à prévenir le rejet des greffes d'organes solides et médicaments obtenus.
ATE408418T1 (de) * 1993-03-19 2008-10-15 D Allen Allen Methoden zur inhibition von hiv-assoziierten krankheiten mittels monoklonaler antikörper gegen sich selbstgerichtete zytotoxische t-zellen
US6534057B2 (en) 1993-03-19 2003-03-18 Allen D. Allen Method increasing the delayed-type hypersensitivity response by infusing LFA-1-specific antibodies
US5651970A (en) * 1993-03-19 1997-07-29 Allen; Allen D. Method for inhibiting disease associated with the human immunodeficiency virus through the use of monoclonal antibodies directed against anti-self cytotoxic T-lymphocytes or their lytics
AU6256796A (en) * 1995-06-06 1996-12-24 D. Allen Allen Method for treating molluscum contagiosum resulting from hiv infection
US6001356A (en) * 1995-09-29 1999-12-14 Rush-Presbyterian-St. Luke's Medical Center Method of inhibiting tissue destruction in autoimmune disease using anti-CD44 antibodies
US20020081294A1 (en) * 1996-01-23 2002-06-27 Genentech, Inc. Co-administration of a thrombolytic and an anti-CD18 antibody in stroke
US5914112A (en) * 1996-01-23 1999-06-22 Genentech, Inc. Anti-CD18 antibodies in stroke
US6582698B1 (en) 1999-03-19 2003-06-24 Genentech, Inc. Treatment method
AU764382B2 (en) 1999-03-19 2003-08-14 Genentech Inc. Treatment of LFA-1 associated disorders with increasing doses of LFA-1 antagonist
US6919077B2 (en) * 2002-09-27 2005-07-19 Aids Research, Llc LFA-1 alpha subunit antibodies and methods of use
WO2005113003A2 (en) * 2004-04-16 2005-12-01 Genentech, Inc. Method for augmenting b cell depletion
BRPI0511305A (pt) * 2004-06-09 2007-12-04 Genentech Inc método de aliviar um granuloma anular ou sarcóide, artigo manufaturado e uso de um antagonista de lfa-1
US7789282B2 (en) * 2007-08-14 2010-09-07 Chervon Limited Nailer device
WO2013040188A1 (en) * 2011-09-15 2013-03-21 Cytodyn, Inc. Anti-cd11a antibodies and uses thereof

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4443427A (en) * 1982-06-21 1984-04-17 Sidney Farber Cancer Institute, Inc. Monoclonal antibody
US4550086A (en) * 1983-02-16 1985-10-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Monoclonal antibodies that recognize human T cells
US4677056A (en) * 1983-08-18 1987-06-30 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Monoclonal antibody subsetting human helper and killer T-cells and method
GB8605316D0 (en) * 1986-03-04 1986-04-09 Royal Free Hosp School Med Immunosuppression
WO1988005592A1 (en) * 1987-01-24 1988-07-28 Dai Nippon Insatsu Kabushiki Kaisha Optical recording medium and production thereof

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Publication number Publication date
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IE62056B1 (en) 1994-12-14

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