JPH03501804A

JPH03501804A - ヒトｔリンパ球のｌｆａ‐１抗原の新規なエピトープに特異的なモノクローナル抗体

Info

Publication number: JPH03501804A
Application number: JP1500131A
Authority: JP
Inventors: シュロースマン　スチュアート　エフ; モリモト　チカオ
Original assignee: ダナ‐ファーバー　キャンサー　インスティチュート
Priority date: 1987-11-02
Filing date: 1988-10-14
Publication date: 1991-04-25
Anticipated expiration: 2016-04-23
Also published as: ZA887771B; IE62056B1; DE3855201D1; EP0387286A1; EP0387286B1; EP0387286A4; CN1033074A; AR240175A1; IE883062L; US5002869A; DE3855201T2; IL88160A0; AU618563B2; ES2017806A6; WO1989004175A1; JP3158119B2; AU2611488A; CA1305928C

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】６、５６Ｆ１抗原がＣＤ８リンパ球サブセットの表面に位置し、さらに前記抗原が分子量１８０，０００　ドルトンおよび９５，０００ダルトンの糖タンパク質からなる細胞表面構造を決定する特性を有する請求項１記載の細胞系。

７、　前記細胞系のものと同一のハイブリドーマ細胞がアメリカ合衆国メリーランド州ロックビル所在のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションにエイティシーシー）ＩＢ９５７９という受託番号で寄託されている請求項１記載の細胞系。

８、ＣＤ８細胞障害性エフエクター細胞においては検出できかつＣＤ８サプレツサーエフエクター細胞においては木質的に検出できない特性を有する抗原に、ヒトの血液中の１９７８球集団のサブセットの表面において特異的に結合するモノクローナル抗体。

９、前記抗原が分子量ｉｓｏ、　ｏｏｏ　ドルトンおよび９５．０００ドルトンの糟タンパク質からなる細胞表面構造を決定する特性を有する請求項８記載のモノクローナル抗体。

１０、　ＬＦＡ−１抗原におけるエピトープと結合する請求項８記載のモノクローナル抗体。

１１．アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションにエイティシーシーＨＢ９５７９という受託番号で寄託されている試料の零゛質的特性を有する細胞系によって産生され、マウスイソタイプＩｇＧ１を有する請求項８記載のモノクローナル抗体。

１２、ヒト末梢血中のＴリンパ球のＬＦＡ−１抗原におけるエピトープに特異的に結合し、さらに末梢血リンパ球中のＴ８細胞障害性エフェクター細胞およびＴ８細胞障害性サプレッサー細胞の集団中のＴ８細胞障害性エフェクター細胞に優先的に結合する特性を有するモノクローナル抗体。

１３、５Ｆ６１抗原と結合する請求項１２記載のモノクローナル抗体。

１４、ヒトＣＤ８リンバ球集団の試料中の細胞障害性エフェクター細胞とサプレッサーエフェクター細胞とを区別するに当り、前記試料と５６Ｆ１モノクローナル抗体とを、該５５Ｆ１モノクローナル抗体とＣＤ８細胞障害性エフエクター細胞との間に免疫複合体が形成するのに十分な条件下に前記免疫複合体が形成するのに十分な時間の間接触させ、次いで前記モノクローナル抗体と前記試料中の細胞との間の前記接触によって生成する前記免疫複合体を検出し、前記モノクローナル抗体と複合体を形成する前記試料中の細胞をＣＤ８細胞障害性エフエクター細胞とすることを特徴とするヒ）　ＣＤ８リンパ球集団の試料中の細胞を区別する方法。

１５、前記モノクローナル抗体を検出可能な化合物によって標識し、この際前記免疫複合体が前記検出可能な化合物によって標識されるようにする請求項１４記載の方法。

１６、検出された免疫複合体を細胞選別フローサイトメトリー法によって分離する請求項１４記載の方法。

１７、前記検出可能な化合物が蛍光化合物である請求項１４記載の方法。

１８、前記検出可能な化合物が該化合物を産生ずる酵素である請求項１４記載の方法。

１９、５６Ｆ１抗原に特異的なマウスＩｇＧ１イソタイプのネズミ属モノクローナル抗体。

２０、５６Ｆ１抗原が末梢血リンパ球中のＣＤ８細胞障害性エフエクター細胞の表面から選定したものである請求項１９記載のモノクローナル抗体。

２１、検出できるように標識した形態である請求項１９記載のモノクローナル抗体。

２２、前記標識が色素、蛍光化合物、放射性元素および電子密度の大きい元素からなる群から選定されている請求項２１記載のモノクローナル抗体。

２３、前記標識が化学治療剤、光活性化毒物または放射性物質である請求項１９記載のモノクローナル抗体。

２４、　ＣＤ８細胞障害性リンパ球のサブセットの液状生体試料中の５６Ｆ１抗原を検出および測定するに当り、モノクローナル抗体を、蛍光化合物、放射性元素または基質反応を検出できる化合物を産生できる酸素から選定した検出物質グループと共役させて使用することを特徴とする５６Ｆ１抗原の検出および測定方法。

２５、前記共役モノクローナル抗体によって結合させたＣＤ８細胞２６゜ヒトにおける進行中の同種異系型移植片拒絶を治療するに当り、５６Ｆ１モノクローナル抗体を使用して末梢血リンパ球中のＣＤ８細胞障害性エフエクター細胞を選択的に同定し、次いで供給された前記エフェクター細胞を除去して、ＣＤ８サプレツサー細胞集団の作用によって同種異系型移植片拒絶を消失させることができるようにすることを特徴とする進行中の同種異系型移植片拒絶を治療する明　細　書ヒトＴリンパ球のしＦＡ−１抗原の新規なエピトープに特異的なモノクローナル抗体（技術分野）本発明はモノクローナル抗体、特にヒトＴ８リンパ球集団中のキラーエフェクター細胞とサプレッサーエフエフター細胞とを区別することができるリンパ球作用関連抗原（ＬＦＡ−１）における新規なエピトープに特異的なモノクローナル抗体に関するものである。

（背景技術）ハイブリドーマ技術の発達はヒトの免疫応答系の作用の仕方を一層良く理解するのに貢献している。人体に導入された抗原は免疫応答系を刺激し、これによりリンパ球細胞は抗原における抗原決定基に結合することができる抗体分子を合成する。抗体のカクテルが抗血清中に生成する。抗血清は複雑であり、組成が変わりやすく、受溶菌に投与した際に異なる作用を行うことができる。ハイブリドーマ技術は予め決定された特異性を有するモノクローナル抗体を再生することができる雑種細胞系を製造することを可能にした（コーラ−（ｋｏｈｌｅｒ）およびミルステイア　（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）、「ネーチ＋−Ｊ　２５６　、４９５〜５９７　（１９７５））。

この技術によって製造されたモノクローナル抗体はヒトにおける免疫応答の調節におけるＴリンパ球およびＢリンパ球の作用を研究するのに使用されている。この研究において、ヒトＴリンパ球の副集団（ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）の作用が一層良く認識された。

ヒトＴリンパ球は特異的抗原を認識することができ、インデューサー作用およびサプレッサー作用を行い、実際上すべての細胞および体液の免疫応答のクイ１および強さを調節する。独特な調節作用およびエフェクター作用を有する２種のヒトの主Ｔ細胞サブセットが、これらのサブセットによって発現される個々の細胞表面の糖タンパク質に基づいてＴ４サブセットおよびＴ８サブセットとして同定されている。Ｔ４サブセットはインデューサー／ヘルパー作用を行い、Ｔ８サブセットは抑制モード作用をすることが明らかにされている。また、Ｔ細胞を作用の異なるＴ４集団とＴ８集団とに分けることができるモノクローナル抗体も得られている。また、Ｔ４集団およびＴ８集団はそれぞれクラスの異なる抗原を優先的に認識する。森本等「ジャーナル・オブ・イムノロシイ（Ｊ、　Ｉｒｎｍｕｎｏｌ、）　」１３４：１５０８〜１５１５（１９８５）。

モノクローナル抗体を使用して行った研究の結果、Ｔ４細胞は主要な組織適合性複合体（ＭＢＣ）のクラス■抗原を認識し、Ｔ８細胞はクラスＩＭＨＣ抗原を認識することが明らかになった。ミュア−（Ｍｅｕｅｒ）等「プロシーティンゲス・オブ・ナショナル・アカデミイ・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイト・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ）　Ｊ　７９　：　４３９５〜４３９９　（１９８２）。Ｔ４細胞およびＴ８細胞のサブセット内にかなり゛大きい作用上ならびに表現型上の不均一性が存在することが分かっている。Ｔ８＋（ＣＤ８＋　）集団はブリシトトキシック（ｐｒｅｃｙ　ｔｏ　ｔ。

×ｉｃ）、ブリサプレッサーおよびサプレッサーエフェクターＴ細胞を含んでいるが、このような差異は作用についてのアッセイ（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ａｓｓａいを使用して行った多数の測定に基づくものである。クレメント（Ｏｌｅｍｅｎｔ）等「ジャーナル・オブ・イムノロシイＪ　１３３：２４６１〜２４６８　（１９８４）はモノクローナル抗体を使用して免疫系のキラー細胞のＣＤａ÷ の前駆体を明らかにしようとする試みに関するものである。積極的で有用に正確であるフェノタイピング（ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）手段、すなわちモノクローナル抗体をとサプレッサーエフェクター細胞とを区別する従来の試みは成功していないか、あるいは区別を容易に行うことは不可能であった。竹内等「セルラー・イムノロジ４　（Ｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）」（印刷中）には、ＣＤ８＋ＣＤ１１　（Ｔ８＋Ｍｏ１−）サブセットはサプレッサーエフェクター細胞および細胞障害エフェクター細胞の両方を含んでいるが、Ｔ８＋Ｍｏｌ＋サブセットはＮＫ細胞を含んでいることが示されている。従って、Ｔ８＋Ｍｏ１− サブセットに認められる抑制は、抑制のインジューサーすなわちＴ４＋２Ｈ４＋を必要とするという従来のサプレッサー系の特性を有する。抑制作用を行うＴ８＋Ｍｏｌ＋　（ＣＤＩＩ）サブセット細胞はサプレッサーインデューサーｉ胞を必要とせず、ＮＫ細胞として作用する。従って、竹内等は、Ｔ８＋ＣＤ１１−サブセットをサプレッサー細胞およびエフェクター細胞の両方を含んでいることを示している。この研究から、ＣＤ８＋ＣＤｌｌ−サブセットがサプレッサーエフェクター細胞および細胞障害性エフェクター細胞に正確に分けるために使用できるモノクローナル抗体が存在しないことが明らかである。

細胞溶解性のＴリンパ球性キリング（Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｍｅｄｉａｔｅｄｋｉｌｌｉｎｇ）の研究において、リンパ球作用関連抗原（ＬＦＡ−１）が重要であることが見出された。サンチェズーマドリッド（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ）等「ジャーナル・オブ・イクスペリメンタル・メディシン（Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、）１５８：１７５８〜１８０３（１９８３）。ヒトＬＦＡ−１は非共有結合しているαおよびβポリペプチド鎖を有する高分子量表面抗原である。αユニットは分子量１７７．０００　ドルトンであり、βユニットは分子１９５，０００ドルトンであることが測定されている。

ＬＦＡ−１はエフェクター細胞と標的細胞との間の接着を強化する作用を行う分子である。ＬＦＡ−１はヒト細胞溶解性のＴリンパ球（ＣＴＬ）性（ｍｅｄ　ｉａ　ｔｅｄ）キリングにおいて抗原セプターと一緒になって作用することが見出されている。ＬＦＡ−１分子はＢリンパ球およびＴリンパ球の両方に存在し、定量的発現の異なる副集団を特徴づける。ヒトＴリンパ球性（ｍｅｄｉａｔｅｄ）細胞溶解と関連する３種の異なる抗原を認識して、抗原認識および標的細胞に対する細胞溶解性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の接着を包含するプロセスを理解する際の複雑さを示唆し、標的となった細胞を溶解させるために、モノクローナル抗体が開発された。これらの抗原はＬＦＡ−１，ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３として同定されている。サンチェズ・マドリッド等「ブローシーティンゲス・オブ・ナショナル・アカデミイ・オプ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイト・オブ・アメリカ、　７９　：　７４８９３７４９３（１９８２）。また、細胞性（ｃｏｌｌ　ｍｅｄｉａｔｅｄ）リンパ球溶解におけるヒトＬＦＡ−１の関与に関する議論について述べているヒルドレス（Ｈｔｌｄｒｅｔｈ）　等ｒユーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロシイ（Ｅｕｒ、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　Ｊ１３　：　２０２〜２０８（１９８２）を参照されたい、　ＣＤＳ＋細胞内の作用集団間において一層正確な区別が望ましいのは明らかである。

ハイブリドーマおよびモノクローナル抗体の産生の一般的体系はこの実行段階においてよく知られているが、培養においてハイブリドーマ細胞を分離および維持する際に多大の注意を払う必要がある。分離されたクローンはクローンによって異なる問題の抗原（ｓｕｂｊｅｃｔ　ａｎｔｉ（Ｈｅｎ）に対する抗体を産生ずること、およびこれは異なる細胞によって産生される抗体が同一分子における異なる抗原決定基と反応することができるからであることが知られている。生成した抗体あるいは抗体を含有する媒質、血清または腹水（ａｓｃｉｔｉｃ　ｆｌｕｉｄ）について適当な試験を行うことが不可欠である。診断用および治療用の両方に利用することができるモノクローナル抗体を産生ずる際の複雑さの原因になる各クローンの抗体を特徴づけることが必要である。

所要のモノクローナル抗体を開発するに当たっては、特異的抗体を顕在化する抗原決定基を同定し、位置決めして特異的抗体と結合させる必要がある。あるいは、これとは反対に、融合を行って数百のハイブリドーマクローンを作り出し、かつ所望の結合特異性を有する抗体を産生ずるクローンを同定および決定する際に正常組織、非正常組織および異なる抗原に対してハイブリドーマクローンを徹底的に選別する必要がある。

本発明の目的はヒトＴ８　（ＣＤ８）細胞の表面において発現されている特定の抗原決定基に結合し、このＴ細胞集団内においてこのような作用集団を決定することができるモノクローナル抗体を産生ずることにある。ＣＤ８クラスの細胞を一層精密にフェノタイピング（ｐｈｅｎｏｔｐｉｎｇ）することにより前記細胞クラス内において細胞障害性エフェクター細胞とサプレッサーエフェクター細胞とを区別することができる抗体が提供される。

（発明の開示）本発明においては、ＣＤ８リンパ球集団においてキラーエフェクター細胞とサプレッサーエフェクター細胞とを区別することができるモノクローナル抗体が開発された。このモノクローナル抗体が特異的である表面抗原すなわち抗原決定基は１８０．０００ドルトンおよび９５．０００ドルトンの垢タンパク質からなる。

この抗原をｒ　５６ＦＩ　Ｊと称する。このモノクローナル抗体がＬＦＡ−１抗原における新規なエピトープを認識することが明らかにされた。

５６Ｆ１抗原はリンパ球の１８＋副集団において優先的に発現されるが、未分画のＴ細胞およびＴ４＋リンパ球の研究の際にモノクローナル抗体によって極めて小さい程度認識された。５６Ｆ１抗原に対するこのような特異性は、モノクローナル抗体を使用してヒト末梢血リンパ球（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）試料におけるＴ８＋集団をさらに細分し、これらの細胞の作用上の不均一性を評価することを可能にする。従来知られていない細胞毒性プロセスにおいて、このモノクローナル抗体を使用してＬＦＡ−１抗原およびその作用を決めることができる。

（図面の簡単な説明）第１八図および第１Ｂ図は本発明のモノクローナル抗体の一例と、あるＴリンパ球との反応性を示す螢光グラフである。

第２Ａ図および第２Ｂ図は細胞障害性エフェクター細胞が分類されるリンパ球副集団を同定するために作られたグラフである。

第３Ａ図および第３Ｂ図はサブレーサーエフェクター活性と５６Ｆ１抗原を有するＴ８細胞集団との関係を示すために作られたグラフである。

第４図は５６Ｆ１抗原およびＬＦＡ−１抗原の免疫沈降分析データを示すために作られたグラフである。

（発明を実施する最良の方法）モノクローナル抗体の生成ヘルペスウィルス・サイミリ（）ｌｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ　ｓａｉｍｉｒｉ）を感染させた唇の白いタマリンから、標準ハイブリドーマ法を使用して得た不死化肺臓細胞（ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ　５ｐｌｅｎｏｃｙｔｅ）集団である細胞系１６７０を使用してパルプ（Ｂａｌｂ）／Ｃマウスに免疫を付与した。マウスの肺臓を採取し、ポリエチレングリコール中でＰ３／ＮＳｌ／１−ＡＣ３−１骨髄腫細胞と融合させた。前記細胞集団をＨＡＴ培地で培養してハイブリドーマ細胞を得、この細胞をクローン化し、モノクローナル抗体産生のためにアッセイを行い、モノクローナル抗体を産生させ、スクリーニングおよび特異性の選定を行った。

、健康な提供者から得た血液試料から、フィコールハイバック（Ｆｉｃｏｌｌ− Ｈｙｐａｑｕｅ）密度勾配遠心分離法によって末梢血液リンパ球を分離した。このリンパ球をミュア−（Ｍｅｕｅｒ）等の前記刊行物に記載されているヒツジの赤血球にょるＥロゼント形成によりＴ細胞集団と非Ｔ細胞集団とに分離した。最初に、モノクロ台パターンを識別した。Ｔ４リンパ球細胞および７８９２８球細胞はそれぞれ、Ｔ４モノクローナル抗体およびＴ８モノクローナル抗体による補体性（ｃｏｍｐｌｅｍｅｍｔ−ｍｅｄｉａｔｅｄ）溶解を行い、次いでモノクローナル抗体との反応性を米国フロリダ州ヒアリア（Ｈｉａｌｅａｈ）所在のクールタ（Ｃｏｕ　ｌ　ｔｅｒ）社によって市販されている機器エピシス■（ＥＰＩＣ３，商品名）を使用して細胞選別法により分析することより得た。本発明のモノクローナル抗体の一例は、未分画のＴ細胞、Ｔ４細胞およびＴ８細胞との反応性について解析した後に確かめられ、Ｔ８細胞と優先的に反応しがっここにｒ　５６ＦＩ　Ｊとして同定されている抗原に特異的に結合するとして特徴づけられた。モノクローナル抗体すなわち５６Ｆ１抗体は７８９２８球集団においてキラーエフェクター細胞とサプレッサーエフェクター細胞とを区別することができる。モノクローナル抗体は分子量１８０、０００　ドルトンおよび９５，０００ドルトンの糖タンパク質からなる細胞表面構造を決定する。次の免疫沈降研究および二次元ゲル分析は、十分に説明するように、５６Ｆ１モノクローナル抗体がＬＦＡ−１抗原における新規なエピトープをｉｎｌすることを示す。

第１Ａ図および第１Ｂ図には、５６Ｆ１モノクローナル抗体と、あるＴリンパ球との反応性を確認するためのデータを示す。第１Ａ図は１０人の提供者からの正常なヒトの血液から得た未分画エリンバ球、ＣＤｄ＋リンパ球およびＣＤＳ＋リンパ球の細胞フルオログラライ−分析結果を示す。各Ｔリンパ球集団の１×１０ｈ個の細胞を１：１０００の比における５６Ｆ１モノクローナル抗体との反応性について、米国フロリダ州ヒアリア所在のクールタ社から市販されって分析した。使用した細胞の調製および染色法は従来のもので、細胞選別技術においてよく知られている。各ヒストグラムは横軸すなわちＸ軸における螢光強度に対して縦軸における細胞数を示す。

上述のＴリンパ球における５６Ｆ１抗原の発現に関する螢光プロフィルを示すこの代表的な研究において、３６Ｆ１抗原は未分画子細胞の１７％、ＣＤ＋４リンパ球の１４％、およびＣＤＳ＋細胞の５８％と反応性を示した。従って、５６Ｆ１抗原はリンパ球のＣＤＳ＋集団において優先的に発現された。この研究において、５６Ｆ１抗原はヌル細胞、顆粒球およびＴ細胞系ＨＳＢの７０％より多くと反応した。しかし、３６Ｆ１抗原は実施した他の試験から得たマクロファージ、Ｂ細胞、Ｂ細胞系、°すなわち、Ｒａｊｉ、　Ｒａｍｏｓ、　Ｎａ１ｍ５−１＋　ＥＢウィルス形質転換細胞系、造血系Ｕ−９３７，Ｘ−５６２またはＴ細胞系Ｍｏ１ｔ４、　ＣＥｌ’ｌおよびＪＭの集団中の細胞の１０％のみと反応した。

第１Ｂ図は正常な提供者からのＣＤ４リンパ球およびＣＤ８リンパ球と、ＬＦＡ −１抗原を認識する種々の希釈度の既知モノクローナル抗体２Ｆ１２との反応性を研究した結果を示す。分析はエピシス。

■Ｃ細胞選別器を使用して間接免疫螢光法によって行った。各ヒストグラムは螢光強度に対する細胞数を示す。１：１００の希釈度において抗−ＬＦＡ−１抗体を使用したヒストグラムａおよびｄでは、細胞の反応性は９８％であった。１：１０００の希釈度において前記モノクローナル抗体を使用したヒストグラムｂおよびｅでは、細胞の反応性は９８％であった。希釈度１：１０００において前記抗体を使用したヒストグラムｅおよびｆでは、ＣＤ４細胞の反応性は５２％であり、ＣＤ８細胞の反応性は５８％であった。この分析結果は、ＬＦＡ−１抗原に特異的なモノクローナル抗体２Ｆ１２によるＣＤ４およびＣＤ８の両方のリンパ球集団の染色パターンにおける変化に反映しており、他方５６Ｆ１モノクローナル抗体はＣＤ８＋リンパ球と優先的に結合することが明らかになった。

５６Ｆ１抗体はＣＤＢ＋リンパ球のかなり大きい集団と反応することが認められたので、この抗体を使用して末梢血リンパ球のＣＤ８＋集団をさらに細分してこれらの細胞の作用上の不均一性を評価した。アロ反応性（ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｅ）の細胞障害性Ｔリンパ球の前駆体またはエフェクター細胞を３６Ｆ１モノクローナル抗体によってＣＤ８＋サプレツサー細胞から分離できるかどうかを研究するために試験計画を実行した。アロ抗原に特異的な細胞障害性Ｔ細胞の前駆体がＣＤＳ＋細胞の３６Ｆ１＋集団または５６Ｆ１−集団のいずれに属するかどうかを決めるために、ＣＤ８＋細胞のサブセットにょ。

って特異的細胞性リンパ球溶解（ＣＭＬ）を調べた。

既知方法を使用してＣＤ８＋細胞を新たに単離し、５６Ｆ１抗体で標識し、フルオレセイン共役（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）Ｆ　（ａｂ　’　）ｚボートアンチマウス輸ｏａｔ　ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ）Ｆ　（ａｂ’　）２（Ｔａｇｏ）を使用してデベロプメントを行った。点本等「ジャーナル・オブ・イムノロシイ」１３４：１５０８〜１５１５（１９８５）　ニ記載されティるように、エピクス■Ｃ細胞選別器を使用して標識ＣＤ８細胞を選別した。次いで、補体性Ｃｍｅｄ　５　ａ　ｔａｄ）溶解によって得たｌＸｌｏｂ個／ｍＪ２のＣＤ４＋細胞を、この系においてキラーインテユーサー作用を生じさせるために添加し、１×１０６個／ｍｌ！、の未分画ＣＤ８＋、選別されたＣＤ８＋５６Ｆ１十細胞またはＣＤ８＋５６Ｆ１−細胞と共に、同数の照射された同種刺激因子（ａｌｌｏｇｅｎｉｃ　ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ）細胞、すなわちＥ細胞の存在下に、３７”Ｃにおいて５％ＣＯ２の湿った雰囲気中で、多数のくぼみ（ｗｅｌｌ）のある培養プレートにおいて培養した。６日間培養した後にＣＤ４＋細胞の補体性溶解を行うことにより培地からＣＤ４細胞を取り出した。ミュア−等「プロシーディンゲス・オブ・ナショナル・アカデミイ・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイト・オブ・アメリカＪ　７９　：　４３９５〜４３９９　（１９８２）に記載されているように、細胞を４時間温置（ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ）　Ｌ／た後に、ＣＤ８細胞のサブセットによる６１（ｒ標識リイリーズ（ｒｅｌｅａｓｅ）細胞性リンパ球溶解を測定した。

第２Ａ図には、グラフは横軸にとった標的のＥ／Ｔと縦軸にとった特異的溶解％との関係を詳細に示す。１対の実験による試験を第２Ａ図に示すように行った。

特異的標的細胞に対し細胞障害性Ｔ細胞の大部分はＣＤＳ＋５６Ｆ１−サブセットに残るが、ＣＤ８＋５６Ｆ１＋サブセツトには小部分が存在することが明らかになった。

第２Ｂ図において、図示したデータは、細胞障害性エフェクターＴ細胞は混合リンパ球反応（ＭＬＲ）活性化ＣＤ８＋５６Ｆ１＋細胞に属するが、ＣＤＳ＋５６Ｆ１−細胞には属さないことを明瞭に示す。この測定結果を達成するために行った試験計画は次の通りである：ｌＸ１０’個／ｌｅｌ！０）未分画Ｔ細胞を、最終ＰＲＭｒ１６４０培地（１０％のプールされたヒトＡＢ血清−ベルフリーズ（Ｐｅｌ　Ｆｒｅｅｚｅ））　、４ｍＭＬのグルタミン、２５ｍＭのヘペス緩衝剤（微生物協会）　、０．５％の重炭酸ナトリウムおよび１０％のペニシリン−ストレプトマイシン中の同数の照射（５０００ラド）同種（Ｅ−）刺激因子細胞によって、２５ｃ＋ｆｌフラスコ内で、３７°Ｃにおいて５％ＣＯ２で湿らせた雰囲気中で６日間窓作させた。このようにして同種Ｅ細胞によって感作された未分画Ｔ細胞をエビツク■Ｃ細胞選別器によってＣＤ８＋５６Ｆ１＋およびＣＤ８＋３６Ｆ１−の細胞サブセットに分離した。未分画ＣＤ８＋細胞および分画ＣＤ８＋細胞の両方を、細胞性リンパ球溶解において、食塩溶液（１ｍ　Ｃｉ／　ｍｆ、ニューイングランドヌークレア（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）中の０．２　ｍｌ、クロム酸ナトリ゛ウム中で、３７°Ｃにおいて約１０〜１２時間にわたって培養し、１時間温置した同種（Ｅ−）細胞を解凍し低温保存したものである５１Ｃｒ標識標的細胞に対して分析した。標的細胞すなわちＳｌ（、ｒ標的細胞を洗浄し、最終培地中に１０５個／ｍ１．で再懸濁させた。培養プレートの■形底のくぼみを使用して、標準の４回の細胞毒性アッセイを行った。１対の実験を第２Ｂ図に図示するように行った。

第２Ａ図に示すデータとは異なり、ＣＤＳ＋５６Ｆ１＋リンパ球集団は未分画ＣＤ４＋細胞より大きいアロスペシフィック（ａｌｌｏｓｐｅｃｉｆ　ｉｃ）キラーエフェクター活性を示した。実際に、ＣＤ８＋５６Ｆ１−リンパ球集団ではキラーエフェクター活性は認められなかった。これらの実験から得られたがここに記載しなかった他のデータは、ミュア−等「上回」、サンチェズーマドリッド等「ジャーナル・オブ・イクスペリメンタル・メディシンＪ　１５８：１７８５〜１８０３（１９８３）　；サンチェズーマドリンド等「ブロシーテインダス・オブ・ナショナル・アカデミイ・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイト・オプ・アメリカ、　７９８７４８９〜７４９３記載されているように、５６Ｆ１モノクローナル抗体はエフェクター作用を妨害しないが、アンチ−ＭＨＣクラスＩおよびアンチ−ＬＦＡ−１モノクローナル抗体はキラーエフェクター作用を妨害しないことを示した。このデータは、キラー前駆体Ｔ細胞は細胞のＣＤ８＋３６Ｆ１−サブセットに見出されるが、キラーエフェクター活性はＣＤ８＋５６Ｆ１＋サブセツトに属することが分かる。

これらの試験で得たデータは、５６Ｆ１抗原が一次ＭＬＲ反応中に５６Ｆ１ネガテイブＣＤ８＋細胞集団に発現されるようになることができることを示唆する。

５６Ｆ１抗原の発現を評価するために、ＣＤ８＋Ｓ６Ｆ！−とＣ［＋４＋細胞およびＴリンパ球とを併用して一次ＭＬＲを開始させた。３回の別個の実験を行い、これらの実験で得たデータから、？ｌＬＲ活性化後にＣＤ８＋５６Ｆ１−細胞の４４〜５５％がその細胞表面上に５６Ｆ１抗原を発現させることが分かった。

これらの結果は、５６Ｆ１抗原の発現がＣＤＳ＋細胞の５６Ｆ１ネガテイブ集団上に起こることを示す。

ＣＤ８＋細胞のどのサブセットが活性化されてサスプレッサーエフエクター細胞になるかを測定するために、第３図に示すデータを得た。新たに単離した未分画工細胞を、上述の技術およびエピックス■Ｃ細胞選別器を使用して、ＣＤ８＋５６Ｆ１＋サブセツトおよびＣＤ８＋５６Ｆ１−サブセットに分離した。丸底で多数のくぼみを有する微量培養プレートにおいて、ボックウィードマイトジェン（Ｐｏｃｋｗｅｅｄ　ｍｉｔｏｇｅｎ）（ＰＷＭ）で刺激された５Ｘ１０’個のＢ細胞および２Ｘ１０’個のＣＤ４＋細胞に添加数を変えてＣＤ８細胞を添加し、７日培養後に全ＴｇＧ免疫グロブリン産生量を測定した。

ミュア−等「上回」に記載されているように、ＩｇＧ分泌について培養上澄液をラジオイムノア・ンセイによって測定した。

第３Ａ図に示すように、未分画ＣＤ８＋細胞の添加数を増加した場合には、ＰＷＭ刺激ＩｇＧ分泌はＢ細胞によって添加数に従って抑制された。ＣＤ４細胞およびＢ細胞に対するＣＤ８＋３６Ｆ１−細胞の添加数を増加した場合には、一層大きいＴｇＧ分泌抑制度が認められた。これに対し、Ｂ細胞とＣＤＪ＋細胞との混合物にＣＤ８＋５６Ｆ１＋細胞を添加した場合には、ＩｇＧ分泌が僅か減少したにすぎなかった。これらの結果から、ＣＤ８サプレツサー細胞は細胞のＣＤ８＋５６Ｆ１−サブセットに属することが分かる。

アロ抗原刺激ＴｇＧ合成系においてＭＬＲ活性化後にＣＤＳ＋細胞のサブセットのサプレッサー作用を調べることにより、ＣＤ８＋５６Ｆ１＋集団にＴ細胞サプレッサー活性が認められるがどうかを測定するためにデータを得た。調製したＴ細胞をＭＬＲにおいてアロ抗原に対して６日間活性化し、アロ活性化Ｔ細胞をエビックス■細胞選別器でＣＤ８＋５６Ｆ１＋細胞およびＣＤ８＋５６Ｆ１−細胞に分離した。未分離ＣＤ８およびＣＤ８＋細胞のサブセットを、ＭＬＲで使用した照射アロ抗原の存在下に自己由来の末梢血リンパ球（ＰＢＬ）に添加し、アロ抗原刺激１ｇＧ合成の作用をアッセイした。ＩｇＧ合成の抑制率％は次式によって計算した；第３Ｂ図に示すように、アロ活性化未分画ＣＤＢ＋細胞はアロ抗原刺激ＩｇＧ合成を添加数に従って抑制した。アロ抗原で活性化されたＣＤＳ　＋５６Ｆ１−集団はこの系において未分画ＣＤＳ＋細胞より大きいサプレッサー活性を示した。しかし、アロ抗体活性化ＣＤａ十５６Ｆ１＋リンパ球は、極めて多数の細胞をこれらの培地に添加した場合にのみ、最小サプレッサー活性を示した。これらの結果は、サプレッサー前駆体細胞およびサプレッサーエフェクター細胞は両方ともＣＤＳ　＋５６Ｆ１−リンパ球集団に属することを示す。さらに重要なのは、抑制はおそらく細胞毒性の発現にとどまらないことを上述の結果が意味していることである。

細胞障害性エフエフクー子細胞を同定する際における５６Ｆ１抗原の有効性を考慮して、アンチ−２Ｆ１２を使用して５６Ｆ１抗原およびＬＦＡ−１抗原に免疫沈降法を適用することにより、抗原の構造を分析した。分析データを第４Ａ図、第４Ｂ図および第４Ｃ図に示す。

Ｔ細胞富化（ｅｎｒｉｃｈｅｄ　）細胞（Ｅ＋細胞９５％）からの細胞をコンカナバリンＡ　（Ｃｏｎ　Ａ　）　（２０μｇ／ｍＡ）によって３日間活性化し、ラクトペルオキシダーゼ触媒ヨウ素化〔ハバート（Ｈｕｂｂａｒｄ　）等「バイオケミカル・アナリシス・オブ・メンブラン」マディ、ニーエッチ（Ｍａｄｄｙ、　ＡＨ）　ｍ、４２７〜５０１頁〔チャブマン・アンド・ホール（Ｃｈａｐｍａｎ　ａｎｄ　Ｈａｌｌ）　＋　１９７６参照）〕によって＋５Ｉで標識し、洗浄し、次いで溶解（ｌｙｓｉｓ　）緩衝液（ＮａＣβ　１５０ｍＭ、　ＥＤＴ八　１ｍＭおよびフン化フェニルメチルフォニル）を含有する２０ｍＭトリス−ＨＣｌ緩衝液ｐ）１８．　０中の１％−／νのノニデット（Ｎｏｎｉｄｅｔ　）　Ｐ−４０）中で可溶化した。次いで、溶解液（５Ｘ１０’個の細胞に相当する）を、個々の抗体を含有する５マイクロリツトルの腹水と共に４°Ｃにおいて一夜装置し、しかる後に５０マイクロリツトルの１０％Ｈ／ｖのプロティンＡ：セフ７０ース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　、商品名）によって沈降させた。次いで、免疫沈降物を、０．１％（−／ν）のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＯＳ　）を含有する溶解緩衝液中で１回洗浄し、次いで溶解緩衝液のみによって２回洗浄し、しかる後にレエムリ　（Ｌａｅ屈ｍ旨）「ネイチャー」　（ロンドン）２２７：６８０〜６８４　（１９７０）に記載されているように、ＳＯＳ−ＰＡＧＥによって分析した。標識末梢血リンパ球からの溶解液を、４回の免疫沈降のために、ＴＳｌ．／１Ｂ抗体によって予め清澄にし、しかる後に５６Ｆ１抗体で沈降させた。

熔解液を上述のように標識し、調製し、しかる後に等電点泳動試料緩衝液（尿素９．針，ノンディエツトＰ−４０　２％．アンホリン（ａｍ−ｐｈｏＨｎｅ　）　２％，　ｐＨ範囲２〜１１．（セルバ（Ｓｅｒｖａ　、）　）中で５０°Ｃにおいて３０分間温１することによりビーズから免疫複合体（ｉｍｍｕｅ　ｃｏｍｐｌｅｘ　）を溶離させた。二次元ＮＥＧＰＨＥ／ＳＤＳーＰＡＧＥ分析を、既にオー′ファレル（０’　Ｆａｒｒｅｌｌ）等［セル（Ｃｅｌｌ）　Ｊ１２　：　１：１．３３　〜１１４２　（１９７７）　、ランド（Ｒｕｄｄ）等「ジャーナル・オブ・ザ・バイオロジカル・ケミストリイＪ　２００　：　１９２７〜１９３６（１９８５）に記載されているようにして行った。

第４図のデータはＳ６Ｆ１モノクローナル抗体およびＣｏｎ　Ａ活性化子細胞からＬＦＡ’−１抗原を認識する２Ｆ１２モノクローナル抗体によって沈降させたポリペプチドの複合パターンを示す、第４Ａ図は２個のカラムずなわちレーン（ｌａｎｅ）　１および２を示し、レーン１はＳ６Ｆ１モノクローナル抗体に関するものであり、レーン２は２Ｆ１２モノクローナル抗体に関するものである。レーン１はＳ６Ｆ１抗体が１８０，０００　ドルトン（分子量）および９５，０００ドルトン（分子量）において２個の主バンドを沈降させたことを示す。

レーン２は２Ｆ１２抗体がそれぞれＬＦＡ−１抗原のごサブユニットおよびβサブユニットに相当すると思われるバンドからなるパターンを沈降させたことを示す。

第４Ｂ図のデータは逐次の免疫消耗（ｉｍｍｕｎｏＪｅｐｌｅｔｉｏｎ　）および二次元非平衡ゲル分析（ＮＥＰＨＧＥ／ＳＤＳ−ＰＡＧＥ　）によってなされた３６Ｆ１抗原の同一性の直接的証明に関する実験から得たものである。レーン１はＳ６Ｆ１抗体に関するもので、レーン２は２Ｆ１２抗体に関するものである。第４Ｂ図のデータは、ＬＦＡ−１抗原に対する２Ｆ１２抗体が、５６Ｆ１と反応する物質を完全に消耗させたことを示す。注目すべきは、モノクロナール抗体ＴＳＩ／１．８がＬＦＡ−１抗原のβサブユニットと反応することが分ったことである。サンチェズーマドリフト等の上述の両刊行物を参照のこと。

第４Ｃ図はＳ６Ｆ１抗体およびＬＦＡ−１抗体の２−Ｄ　ＮＥＰＨＧＥ／ＳＤＳ −ＰＡＧＥによる分析から得たデータを示す。このデータは、Ｓ６Ｆ１抗原およびＬＦＡ−１抗原が、それぞれｐ）１５．３および５、７のほぼ等電点において焦点的に分離された１８０．０００　ドルトンおよび９５，０００ドルトンの２種ポリペプチドを沈降させたことを示す。第４Ｃ図のデータはＳ６Ｆ１モノクローナル抗体がＬＦＡ−１抗原と結合するという実験結果を支持する。

Ｓ６Ｆ１モノクローナル抗体および２Ｆ１２モノクローナル抗体は同じ構造のものを免疫沈降させるが、これらのモノクロナール抗体と作用的に異なる細胞サブセットとの反応性は異なると思われる。第１Ａ図および第１Ｂ図に図示したデータは、５６Ｆ１モノクローナル抗体は選択的にＣＤＢ＋リンパ球を優先的に染色（ｓｔａｉｎ）し、他方２Ｆ１２抗体はまたＣＤ４＋リンパ球との反応性を示したことを示す。ＣＤＢ＋リンパ球と５６Ｆ１抗体との反応性はＬＦＡ−１抗原の構造自体に対するこの抗体の低い親和性を単純に反映するものではないと考られる。

本発明者等は５６Ｆ１モノクローナル抗体を使用して行った分析結果から、この抗体によってＬＥ　ｔｘされる実際のエピトープは細胞毒性のプロセスに関与していないと思われると法論した。その理由は、この抗体がこの作用を妨害できなかったからである。

しかし、ＬＦＡ−１抗原に対する他の既知のモノクローナル抗体はこの細胞毒性のプロセスを効果的に妨害することができた。サンチェズーマドリンド等の上記刊行物を参照のこと。さらに、５６Ｆ１抗原は主としてＣＤＳ＋細胞、ヌル細胞、ならびに小画分のマクロファージおよびＢ細胞に発現されることが分った。得られたデータから、５６Ｆ１抗体によって認識されたＬＦＡ−１抗原におけるエピトープは、標的細胞に対する接着作用に関与するＬＦＡ−１抗原における結合位置の生成によって、分子上に遠回りに（ｄｉｓｌａｎｔｌｙ　）形成することが分る。

従って、５６Ｆ１モノクローナル抗体は、ＬＦＡ−１抗原における新規なエピトープを認識することにより、ＣＤ８　リンパ球集団において細胞障害性エフェクター細胞とサプレッサーエフェクター細胞とを区別することができる。５６Ｆ１抗体のこのような独特な特性はＣＤ８細胞障害性エフエクター細胞を診断し、明確にする際に有用であり、この特性はＣＤ８細胞障害性エフエクター細胞をサプレッサーエフェクター細胞から、特にフローシトメトリー法によって、また他の既知アッセイ法によって、区別できることにある。例えば、ＣＤ８細胞障害性エフエクター細胞はヒトにおける移植片拒絶、例えば、腎臓および他の移植片の拒絶において重要な役割を演する。ＣＤ８　＋５６Ｆ１細胞障害性エフエクター細胞に対して５６Ｆ１抗体はこれらのエフェクター細胞を選択的に同定することができ、従って同種異系型移植片拒絶を消失させる点でサプレッサー細胞集団の作用を治療上価値あるものにすることができるようにするのに有用である。従って、５６Ｆ１モノクローナル抗体の特異性が進行中の移植片拒絶を治療する上で有用であることがある。

ＣＤ８細胞クラス内の５６Ｆ１モノクローナル抗体のこのような特異性は、ＣＤ８細胞クラスにおいてサブレーサーエフェクター細胞を細胞障害性エフェクター細胞から区別するためのこのような積極的で一層正確なフェノタイプ手段を提供できる抗体は従来入手できなかったのであるから、特に独特でありかつ有用である。モノクロナール抗体がヒトの免疫系における細胞障害性細胞のＣＤ８前駆体を明確にすることについてはクレメント等「ジャーナル・オブ・イムノロシイＪ　１３３　：　２４６１〜２４６８　（１９８４）に議論されているが、本発明の５６Ｆ１モノクローナル抗体を使用した場合に達成可能な結果は達成されていない。

（寄託）本発明の５６Ｆ１モノクローナル抗体を産生ずる細胞系は、本特許出願の出願前の１９８７年１０月３０日にアメリカ合衆国メリーランド州２０８５２　ロックヴイル所在のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されている。この細胞系の受託番号はエイティシーシーＨＢ９５７９である。

本発明のモノクローナル抗体の完全な診断上の通用および可能な治療上の適用は決められていない。本発明のモノクローナル抗体は単独において、あるいは放射性同位元素、薬剤または毒素と結合させた場合に、本発明のモノクローナル抗体の上述の特性に密接に関係のある治療上の利益をヒトの器官の移植法において得ることができる。

）目大寸螢尤住ａ　オｇ太第４ト尤ダ史力ｔＦＩＧ、　４Ｃ補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成２年５月２日

Claims

【特許請求の範囲】

１．ＬＦＡ−１抗原におけるＳ６Ｆ１エピトープに特異的に結合し、ヒトＣＤ８リンパ球集団における細胞障害性エフェクター細胞とサプレッサーエフェクター細胞との区別を可能にするモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ法によって得た細胞系。
２．ヘルペスウイルス・サイミリイに感染した唇の白いタマリンから得た不死化脾臓細胞集団によってマウス脾臓細胞に免疫が付与されている請求項１記載の細胞系。
３．Ｓ６Ｆ１抗原に対してマウスＩｇＧ１インタイプ抗体を産生する請求項２記載の細胞系。
４．前記モノクローナル抗体を産生する細胞はネズミ属から得る請求項１記載の細胞系。
５．マウス骨髄腫細胞と融合させることによって得た請求項１記載の細胞系。
６．Ｓ６Ｆ１抗原がＣＤ８リンパ球サブセットの表面に位置し、さらに前記抗原が分子量１８０，０００ドルトンおよび９５，０００ダルトンの糖タンパク質からなる細胞表面構造を決定する特性を有する請求項１記載の細胞系。
７．前記細胞系のものと同一のハイブリドーマ細胞がアメリカ合衆国メリーランド州ロックビル所在のアメリカン・タイプカルチャー・コレクションにエイティシーシーＨＢ９５７９という受託番号で寄託されている請求項１記載の細胞系。
８．ＣＤ８細胞障害性エフェクター細胞においては検出できかつＣＤ８サプレッサーエフェクター細胞においては本質的に検出できない特性を有する抗原に、ヒトの血液中のＴリンパ球集団のサブセットの表面において特異的に結合するモノクローナル抗体。
９．前記抗原が分子量１８０，０００ドルトンおよび９５，０００ドルトンの糖タンパク質からなる細胞表面構造を決定する特性を有する請求項８記載のモノクローナル抗体。
１０．ＬＦＡ−１抗原におけるエピトープと結合する請求項８記載のモノクローナル抗体。
１１．アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションにエイティシーシーＨＢ９５７９という受託番号で寄託されている試料の木本質的特性を有する細胞系によって産生され、マウスインタイプＩｇＧ１を有する請求項８記載のモノクローナル抗体。
１２．ヒト末梢血中のＴリンパ球のＬＦＡ−１抗原におけるエビトープに特異的に結合し、さらに末梢血リンパ球中のＴ８細胞障害性エフェクター細胞およびＴ８細胞障害性サプレッサー細胞の集団中のＴ８細胞障害性エフェクター細胞に優先的に結合する特性を有するモノクローナル抗体。
１３．ＳＦ６１抗原と結合する請求項１２記載のモノクローナル抗体。
１４．ヒトＣＤ８リンパ球集団の試料中の細胞障害性エフェクター細胞とサプレッサーエフェクター細胞とを区別するに当り、前記試料とＳ６Ｆ１モノクローナル抗体とを、該Ｓ６Ｆ１モノクローナル抗体とＣＤ８細胞障害性エフェクター細胞との間に免疫複合体が形成するのに十分な条件下に前記免疫複合体が形成するのに十分な時間の間接触させ、次いで前記モノクローナル抗体と前記試料中の細胞との間の前記接触によって生成する前記免疫複合体を検出し、前記モノクローナル抗体と複合体を形成する前記試料中の細胞をＣＤ８細胞障害性エフェクター細胞とすることを特徴とするヒトＣＤ８リンパ球集団の試料中の細胞を区別する方法。
１５．前記モノクローナル抗体を検出可能な化合物によって標識し、この際前記免疫複合体が前記検出可能な化合物によって標識されるようにする請求項１４記載の方法。
１６．検出された免疫複合体を細胞選別フローサイトメトリー法によって分離する請求項１４記載の方法。
１７．前記検出可能な化合物が蛍光化合物である請求項１４記載の方法。
１８．前記検出可能な化合物が該化合物を産生する酵素である請求項１４記載の方法。
１９．Ｓ６Ｆ１抗原に特異的なマウスＩｇＧ１インタイプのネズミ属モノクローナル抗体。
２０．Ｓ６Ｆ１抗原が末梢血リンパ球中のＣＤ８細胞障害性エフェクター細胞の表面から選定したものである請求項１９記載のモノクローナル抗体。
２１．検出できるように標識した形態である請求項１９記載のモノクローナル抗体。
２２．前記標識が色素、蛍光化合物、放射性元素および電子密度の大きい元素からなる群から選定されている請求項２１記載のモノクローナル抗体。
２３．前記標識が化学治療剤、光活性化毒物または放射性物質である請求項１９記載のモノクローナル抗体。
２４．ＣＤ８細胞障害性リンパ球のサブセットの液状生体試料中のＳ６Ｆ１抗原を検出および測定するに当り、モノクローナル抗体を、蛍光化合物、放射性元素または基質反応を検出できる化合物を産生できる酸素から選定した検出物質グループと共役させて使用することを特徴とするＳ６Ｆ１抗原の検出および測定方法。
２５．前記共役モノクローナル抗体によって結合させたＣＤ８細胞障害性リンパ球の細胞選別をフローサイトメトリーにより行う請求項２４記載の方法。
２６．ヒトにおける進行中の同種異系型移植片拒絶を治療するに当り、Ｓ６Ｆ１モノクローナル抗体を使用して末梢血リンパ球中のＣＤ８細胞障害性エフェクター細胞を選択的に同定し、次いで供給された前記エフェクター細胞を除去して、ＣＤ８サプレッサー細胞集団の作用によって同種異系型移植片拒絶を消失させることができるようにすることを特徴とする進行中の同種異系型移植片拒絶を治療する方法。