CN103304043B - 池塘健康养殖用微生态净水剂 - Google Patents

Abstract

一种池塘健康养殖用微生态净水剂，是以枯草芽孢杆菌、侧胞芽孢杆菌、异常汉逊酵母和皱状假丝酵母为发酵菌种，在合适的碳氮比和外界条件下固体发酵后低温干燥，添加保护剂和净水促进剂，得到一种对水体环境无公害、安全、储存期长的池塘养殖用微生态净水剂。可以有效降低池塘养殖水体中的有机污染物、氨态氮和COD的含量，并具有较强的硝化、反硝化能力和降解饲料残渣的能力，从而改善淡水养殖水体环境。本发明的产品可较好地解决了现有技术产品存在的净水效果不稳定、活菌数低、生产成本高等缺点，本产品的生产工艺简单、无三废排放、设备投资小，对淡水健康养殖和水产的持续发展具有重要的意义。

Description

池塘健康养殖用微生态净水剂

技术领域

本发明属于淡水养殖中的生物技术领域，具体涉及一种池塘健康养殖用微生态净水剂。

背景技术

改革开放以来，我国推行“以养为主”的渔业发展方针，淡水养殖业有了长足的发展，淡水池塘养殖面积达3700万亩，产量已超过1600万吨，产值近3000亿元。虽然我国淡水池塘养殖取得了巨大的成绩，但也面临一系列问题及发展瓶颈：养殖生产片面追求经济效益，养殖水域超容量开发，盲目扩大养殖规模，忽略了对水域生态环境的保护。在水产养殖活动中，养殖鱼类仅能消化吸收投喂饲料中20%-25%的蛋白质，剩余的以氨氮、残饵和粪便的形式存在于养殖水环境中，再加之池塘老化淤积严重，导致池塘内源性污染加重，对养殖水体造成污染，危害养殖对象的健康生长。由于我国传统的池塘水产养殖方式基本上都是开放型的，养殖水域养殖布局和容量控制缺乏科学依据和有效方法，对于养殖水体中的氨氮、残饵和粪便，处理方法是换水，而这样会消耗大量的水资源。养殖废水大量排放到周围环境中，对养殖周围环境造成了很大的压力。

池塘养殖内、外环境的恶化导致养殖产品病害频发，用药物防治水产病害只是暂时性手段，广谱抗生素杀死或抑制了敏感细菌而保留了耐药的致病菌，破坏或干扰了水体原有的正常微生物区系的生态平衡，更增加了养殖动物感染病菌的机会；抗生素在生物体内的残留，最终会对人体产生危害，特别是一些养殖水体，水质恶化，常年pH值居高不下，水体蓝、绿藻水华大量产生，不仅污染水质，而且养殖鱼、虾生长缓慢，品质下降，已经是水产养殖面临和必须解决的重大问题。因此，池塘养殖的环境问题以成为制约中国淡水养殖发展的重要因素之一，池塘养殖环境生态修复技术的研究日益受到重视。

对于水产微生态制剂的研究与应用，国内外已进行了大量的研究工作，概括起来主要集中在光合细菌、芽孢杆菌、酵母菌、假单胞菌、乳酸杆菌、硝化细菌和反硝化细菌等作为单一菌剂或复合菌剂在水产养殖水质改良中应用最广泛，产品剂型主要有液体制剂和固体制剂。中国专利有些还公开了用于水产养殖水体净化、修复养殖水环境、净化水质的复合微生态制剂及制备方法，虽然这些专利方法产品可以降低养殖水体中的有机污染物、氨氮、硝酸盐、COD、BOD含量，但存在生产工艺复杂、能耗和生产成本高、活菌数含量低、货架期短、使用效果不稳定等问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种池塘健康养殖用微生态净水剂，其具有生产工艺简单、成本和能耗低、有效活菌数高、货架期长、适应性强、易于批量生产的特点，解决了目前市场上水产用微生态制剂存在的产品质量不稳定、使用效果不理想、有效活菌数存活率低及生产成本高等问题。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种池塘健康养殖用微生态净水剂，该净水剂由下述重量配比的原料混合均匀而成：枯草芽孢杆菌菌粉3-5份、侧胞芽孢杆菌菌粉3-5份、异常汉逊酵母菌粉2-4份、皱状假丝酵母菌粉6-10份及净水促进剂50-80份，其中该净水促进剂为聚合硫酸铁、聚合氯化铝或腐植酸钠中的一种或几种。

上述提及的各菌粉，无论是枯草芽孢杆菌菌粉，还是侧胞芽孢杆菌菌粉、异常汉逊酵母菌粉或是皱状假丝酵母菌粉皆是将各自对应的种子培养液按15-20%接种重量接于固体培养基中，充分混合，置于消毒的发酵浅盘中，于28-37℃在无菌发酵室中发酵3-5d，再加入为接种前固体培养基重量3%-5%的保护剂，混匀后于55-65℃干燥3-4h，粉碎，制得。

上述提及的各种子培养液的制备如下：将枯草芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体扩大肉汤营养培养基中，在30℃-37℃，180r/min-220r/min条件下，摇床振荡培养16-24h，使该种子培养液中菌体浓度达到1.8×10⁹-6.7×10⁹cfu/mL；将侧胞芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体扩大肉汤营养培养基中，35℃-37℃，180r/min-220r/min条件下，摇床振荡培养24-36h，使该种子培养液中菌体浓度达到3.2×10⁹-9.5×10⁹cfu/mL；将异常汉逊酵母1株接种一环斜面菌种细胞于麦芽汁液体培养基中，在26℃-28℃，180r/min-220r/min条件下，摇床振荡培养20-30h，使该种子培养液中菌体浓度达到4.1×10⁷-2.5×10⁸cfu/mL；将皱状假丝酵母1株接种一环斜面菌种细胞于麦芽汁液体培养基中，在28℃-30℃，180r/min-220r/min条件下，摇床振荡培养24-36h，使该种子培养液中菌体浓度达到7.2×10⁸-1.6×10⁹cfu/mL。上述提及的各菌株的种子培养液的制备皆为现有技术，本发明只是例举了其中的一种。

本发明中用到的菌种均为现有技术，保藏号分别为：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）：ACCC11062、CGMCC2548、或CGMCC1222；侧胞芽孢杆菌（Bacillus lateraporus）：CGMCC1755或CGMCC9701；异常汉逊酵母（Hansenulaanomala）：CICC32871、ACCC20193或ACCC21129；皱状假丝酵母（Candidaversatilis）：ACCC20318或DSMZ6956。

上述提及的固体培养基是按重量百分比取麦麸70%-75%、沸石粉21%-27%、葡萄糖1%-2%、（NH₄）₂SO₄1.5%-2%、KH₂PO₄0.1%-0.3%、及MgSO₄·7H₂O0.05%-0.15%混合均匀，调节含水重量为50%-55%，于121℃-125℃条件下灭菌45min-60min，冷却至室温，得到。

上述保护剂为海藻提取物，为市购产品。

上述制得的枯草芽孢杆菌菌粉的活菌数含量为1×10¹¹-3×10¹¹cfu/g，侧胞芽孢杆菌菌粉的活菌数含量为1×10¹¹-4.5×10¹¹cfu/g，异常汉逊酵母菌粉的活菌数含量为1×10⁹-2.7×10⁹cfu/g，皱状假丝酵母菌粉的活菌数含量为1×10⁹-5.5×10⁹cfu/g。上述制得的净水剂中有效活菌数含量为2.5×10¹⁰-3.0×10¹⁰cfu/g。

本发明的净水剂产品利用异常汉逊酵母和皱状假丝酵母能同化硝酸盐的特性，以降解水体中的硝酸盐，同时利用枯草芽孢杆菌和侧胞芽孢杆菌强有力的有机质、氨氮的降解能力，以降低养殖水体中的有机物和氨氮，加上在制剂中加入聚合硫酸铁、聚合氯化铝和腐植酸钠等净水促进剂，利用其本身的絮凝作用和对硝酸盐、亚硝酸盐的降解作用，从而达到快速净化养殖水体的目的。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、本发明产品中所用的微生物菌种，都是通过筛选的高效菌株，净水效果稳定且显著。

2、本发明所用菌种抗热保护剂，具有原料易得，成本低廉的特点。

3、本发明使用的净水促进剂—聚合硫酸铁、聚合氯化铝或腐植酸钠，可以有效的去除养殖水体中各种悬浮物、COD和BOD等，有利于微生物对养殖水体的快速净化和有益藻类的生长。

4、本发明所使用的菌种包括了好养菌和兼性厌氧菌，既可降低好氧水体环境中各种有害物质的含量，也可降解如底泥等厌氧环境中残留的饲料及水产动物的粪便，从而改善水质。

5、本发明产品的制备与现有生产工艺相比，具有生产工艺简单、能耗低、产品质量稳定、无三废和易于规模化生产等特点。

具体实施方式

以下实施例仅对本发明作进一步地说明，并非限制本发明。

实施例1

制备种子培养液：将枯草芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体扩大肉汤营养培养基中，在30℃，180r/min条件下，摇床振荡培养20h，使该种子培养液中菌体浓度达到4.1×10⁹cfu/mL；将侧胞芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体扩大肉汤营养培养基中，在35℃，200r/min条件下，摇床振荡培养24h，使该种子培养液中菌体浓度达到3.5×10⁹cfu/mL；将异常汉逊酵母1株接种一环斜面菌种细胞于麦芽汁液体培养基中，在28℃，200r/min条件下，摇床振荡培养24h，使该种子培养液中菌体浓度达到8.3×10⁷cfu/mL；将皱状假丝酵母1株接种一环斜面菌种细胞于麦芽汁液体培养基中，在30℃，220r/min条件下，摇床振荡培养36h，使该种子培养液中菌体浓度达到1.2×10⁹cfu/mL。

制备固体培养基：按重量百分比取麦麸70%、沸石粉26.2%、葡萄糖1.5%、（NH₄）₂SO₄2%、KH₂PO₄0.15%及MgSO₄·7H₂O0.15%混合均匀，调节含水重量为52%，于121℃条件下灭菌60min，冷却至室温。

取上述固体培养基，按15%接种重量接入枯草芽孢杆菌种子培养液，充分混合，置于消毒的发酵浅盘中，于32℃在无菌发酵室发酵4d，再加入为接种前固体培养基重量3%的海藻提取物，充分混匀，于60℃干燥3.5h，粉碎，制得枯草芽孢杆菌菌粉。依此方法，分别制得侧胞芽孢杆菌菌粉、汉逊酵母菌粉及皱状假丝酵母菌粉。

按重量取枯草芽孢杆菌菌粉5份、侧胞芽孢杆菌菌粉4份、异常汉逊酵母菌粉3份、皱状假丝酵母菌粉8份、聚合硫酸铁60份及腐植酸钠20份，充分混合均匀，即得本发明的净水剂。

实施例2

制备种子培养液：将枯草芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体扩大肉汤营养培养基中，在35℃，200r/min条件下，摇床振荡培养18h，使该种子培养液中菌体浓度达到2.3×10⁹cfu/mL；将侧胞芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体扩大肉汤营养培养基中，在37℃，220r/min条件下，摇床振荡培养30h，使该种子培养液中菌体浓度达到6.2×10⁹cfu/mL；将异常汉逊酵母1株接种一环斜面菌种细胞于麦芽汁液体培养基中，在26℃，180r/min条件下，摇床振荡培养30h，使该种子培养液中菌体浓度达到1.8×10⁸cfu/mL；将皱状假丝酵母1株接种一环斜面菌种细胞于麦芽汁液体培养基中，在28℃，180r/min条件下，摇床振荡培养30h，使该种子培养液中菌体浓度达到7.8×10⁸cfu/mL。

制备固体培养基：按重量百分比取麦麸72.8%、沸石粉23%、葡萄糖2%、（NH₄）₂SO₄1.8%、KH₂PO₄0.3%及MgSO₄·7H₂O0.1%混合均匀，调节含水重量为50%，于125℃条件下灭菌45min，冷却至室温。

取上述固体培养基，按20%接种重量接入上述枯草芽孢杆菌种子培养液，充分混合，置于消毒的发酵浅盘中，于37℃在无菌发酵室发酵3d，再加入为接种前固体培养基重量5%的海藻提取物，充分混匀，于55℃干燥4h，粉碎，制得枯草芽孢杆菌菌粉。依此方法，分别制得侧胞芽孢杆菌菌粉、汉逊酵母菌粉及皱状假丝酵母菌粉。

取枯草芽孢杆菌菌粉4份、侧胞芽孢杆菌菌粉5份、异常汉逊酵母菌粉2份、皱状假丝酵母菌粉10份、聚合氯化铝30份及聚合硫酸铁20份，充分混合均匀，即得成品。

实施例3

制备种子培养液：将枯草芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体扩大肉汤营养培养基中，在37℃，220r/min条件下，摇床振荡培养24h，使该种子培养液中菌体浓度达到6.0×10⁹cfu/mL；将侧胞芽孢杆菌1株接种一环斜面菌种细胞于液体扩大肉汤营养培养基中，在36℃，180r/min条件下，摇床振荡培养36h，使该种子培养液中菌体浓度达到8.9×10⁹cfu/mL；将异常汉逊酵母1株接种一环斜面菌种细胞于麦芽汁液体培养基中，在27℃，220r/min条件下，摇床振荡培养20h，使该种子培养液中菌体浓度达到5.5×10⁷cfu/mL；将皱状假丝酵母1株接种一环斜面菌种细胞于麦芽汁液体培养基中，在29℃，200r/min条件下，摇床振荡培养24h，使该种子培养液中菌体浓度达到9.5×10⁸cfu/mL。

制备固体培养基：按重量百分比取麦麸75%、沸石粉22.35%、葡萄糖1%、（NH₄）₂SO₄1.5%、KH₂PO₄0.1%及MgSO₄·7H₂O0.05%混合均匀，调节含水重量为55%，于123℃条件下灭菌50min，冷却至室温。

取上述固体培养基，按18%接种重量接入上述枯草芽孢杆菌种子培养液，充分混合，置于消毒的发酵浅盘中，于28℃在无菌发酵室发酵5d，再加入为接种前固体培养基重量4%的海藻提取物，充分混匀，于65℃干燥3h，粉碎，制得枯草芽孢杆菌菌粉。依此方法，分别制得侧胞芽孢杆菌菌粉、汉逊酵母菌粉及皱状假丝酵母菌粉。

取枯草芽孢杆菌发酵料3份、侧胞芽孢杆菌发酵料3份、异常汉逊酵母菌粉4份、皱状假丝酵母6份、聚合氯化铝22份、聚合硫酸铁33份、腐植酸钠15份，充分混合均匀，即得成品。

Claims (8)

1.一种池塘健康养殖用微生态净水剂，其特征在于，该净水剂由下述重量配比的原料组成：枯草芽孢杆菌菌粉3-5份、侧胞芽孢杆菌菌粉3-5份、异常汉逊酵母菌粉2-4份、皱状假丝酵母菌粉6-10份及净水促进剂50-80份，其中，该净水促进剂为聚合硫酸铁、聚合氯化铝或腐植酸钠中的一种或几种。

2.如权利要求1所述的池塘健康养殖用微生态净水剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌菌粉、侧胞芽孢杆菌菌粉、异常汉逊酵母菌粉及皱状假丝酵母菌粉是将枯草芽孢杆菌种子培养液、侧胞芽孢杆菌种子培养液、汉逊酵母种子培养液及皱状假丝酵母种子培养液分别按15-20%接种重量接于固体培养基中，于28-37℃发酵3-5d，再分别加入为接种前固体培养基重量3%-5%的保护剂，混匀后干燥，粉碎，制得各菌粉。

3.如权利要求2所述的池塘健康养殖用微生态净水剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌种子培养液中菌体浓度为1.8×10⁹-6.7×10⁹cfu/mL，该侧胞芽孢杆菌种子培养液中菌体浓度为3.2×10⁹-9.5×10⁹cfu/mL，该异常汉逊酵母种子培养液中菌体浓度为4.1×10⁷-2.5×10⁸cfu/mL，该皱状假丝酵母种子培养液中菌体浓度为7.2×10⁸-1.6×10⁹cfu/mL。

4.如权利要求2所述的池塘健康养殖用微生态净水剂，其特征在于，所述固体培养基是按重量百分比取麦麸70%-75%、沸石粉21%-27%、葡萄糖1%-2%、（NH₄）₂SO₄1.5%-2%、KH₂PO₄0.1%-0.3%、及MgSO₄·7H₂O0.05%-0.15%混合均匀，调节含水重量为50%-55%，制得。

5.如权利要求2所述的的池塘健康养殖用微生态净水剂，其特征在于，所述保护剂为海藻提取物。

6.如权利要求2所述的的池塘健康养殖用微生态净水剂，其特征在于，所述干燥时温度为55-65℃、时间为3-4h。

7.如权利要求1所述的池塘健康养殖用微生态净水剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌菌粉的活菌数含量为1×10¹¹-3×10¹¹cfu/g，侧胞芽孢杆菌菌粉的活菌数含量为1×10¹¹-4.5×10¹¹cfu/g，异常汉逊酵母菌粉的活菌数含量为1×10⁹-2.7×10⁹cfu/g，皱状假丝酵母菌粉的活菌数含量为1×10⁹-5.5×10⁹cfu/g。

8.如权利要求1所述的池塘健康养殖用微生态净水剂，其特征在于，所述净水剂中有效活菌数含量为2.5×10¹⁰-3.0×10¹⁰cfu/g。