CN103293253B - 生物技术药物高效纯化分析系统及其药物分离检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种生物技术药物高效纯化分析系统及分离检测方法，包括控制系统、分析检测单元和检测接口；所述控制系统包括在线检测液体管线内液体理化参数的检测装置；所述检测接口用于执行进样操作；所述分析检测单元用于对检测接口的进样进行分析，包括若干独立设置的分析型仪器；待检测液体进入系统后至少分为两个管路，其中一个支路流经检测装置，并获取液体的理化参数，控制系统根据检测装置检测到的液体的理化参数依据判定规则将液体识别为样品或废液，并控制检测接口对识别为样品的液体取样，并将取得的样品选择性的送入分析检测单元内的分析型仪器中。该仪器可以确保分离得到的组分及时进行快速分析，避免被环境污染或者污染环境。

Description

生物技术药物高效纯化分析系统及其药物分离检测方法

技术领域

本发明涉及生物技术药物的分离和检测仪器，具体涉及制备后样品快速纯化系统。

背景技术

色谱是现代化学工程和生物化工分离工艺中经常用到的单元操作。对于成分复杂的生物技术药物（如细胞因子、纤溶酶原激活剂、重组血浆因子、生长因子、融合蛋白、受体、疫苗和单抗等），分离其中有效成分难度大，工艺复杂，耗时多，分辨率差，效率低。在纯化得到的产物通常要及时进行分子量、纯度、活性等的检测，从而优化提纯的条件。由于现阶段并不存在制备液相色谱仪和分析型液相色谱仪（PrepHPLC-HPLC）等仪器的联用装置，因此在分离药物组分时，仍使用传统的制备液相色谱仪。在常规的操作中，制备液相色谱仪纯化组分需要收集后，再进行分析检测，在此过程中需要进行人工的收集、进样，造成分析检测速度慢，操作繁琐复杂，并且样品暴露在空气中，容易造成污染和活性损失对于某些稳定性较差的化合物而言，甚至会给出错误的指导信息；对于某些生物技术药物，如病毒提取的蛋白，还可能造成环境的污染，严重地甚至对公共安全构成威胁。

将Prep-HPLC或者其他制备色谱和HPLC要克服如下问题，一般的制备色谱均有独立的溶剂泵、检测器、控制系统，将其与外部的分析系统结合到一起很困难，该集成操作要涉及到试样液体的分流、试样组分的确定、检测器的选择以及进样等，除开这些仪器方面的因素，还必须要考虑试样的稳定性以及防止试样受污染和试样对外界的污染等问题。

近年来国内外提出了一些色谱纯化或分析仪器，这些系统可以概括为三类：

1）并联色谱仪器，在色谱仪器上并联多根色谱柱，所有色谱柱同时工作，但进行的是相同的操作，如中国专利CN201161989所公开的，这类系统只能提高色谱分离或者检测的处理量；

2）串联色谱仪器，色谱柱之间通过多通道切换阀直接进行切换，即组分从一根色谱柱直接通过多通道切换阀注入另一根色谱柱，如中国专利CN10161471所公开的，每根色谱柱只能依次按顺序进行操作，并且在同一时间只有一根色谱柱在工作，这类系统通常只能连接二到三根制备色谱柱，能采用的色谱模式有限；

3）串联/并联组合仪器，色谱柱之间通过一条或者多条总干道管路进行连接，如中国专利CN102190704A所公开的，多根色谱柱通过切换能进行并联、串联和混联操作，其可以有效的提高制备效率，可以有效的从动植物、微生物以及基因工程发酵物中获得蛋白药物、酶、抗体和疫苗等。

美国专利US6485642B（其国内公开号为CN1327152A）公开了一种液相色谱仪，其可以实现对于低浓度的试样浓缩后进行分析的装置，其包括浓缩柱和分析柱，其实现了制备洗脱液并且导入定性分析仪器，但是其仅仅是对进样的浓度的改变，所制备获得的试样溶液仍然是具有多种组分的溶液，对其分析只可以缩短分析所用时间，而不能够改善实际药物制备时分离的效果。虽然其中公开了稀释液管路上带有去除杂质柱，但是其仅仅是去除稀释液中的杂质，并不能够算上制备色谱，其和要解决的制备色谱成分快速分析存在着巨大的差异。

中国专利CN102369434A提供了一种可以抑制注射端口处试料残留的液相色谱仪，其公开了一种可以使得试样自动准确的进入一个色谱系统内的进样装置，该装置的发明点在于进样时流动相的送样流量低于分析条件的流量，从而试样难以残留在针和针的密封组件之间的空隙中，但是该进样装置不能够使试样进入多个色谱装置内进行检测，该装置为属于对进样方式的改进，有助于获得比较准确的分析结果。

中国专利CN1301964A公开了一种智能集成的自动液相色谱系统，可以实现高效、高纯度、低成本的分离鸡蛋抗体，其可以适用于简单系统的分离，比如选择一个合适的紫外波长，当流出液体的检测值高于阈值时，收集溶液。但是当其应用于复杂体系时，比如该体系包含多种组分时，由于其仅仅检测紫外吸收的值，从而其应用受到了限制。

中国专利申请CN1520330A公开了一种通过位移台使多个色谱柱相对分析仪移动，从而可以实现选择性进样的装置和进样方法，该装置虽然可以实现选择性进样，但是其进样的组分来自于多个色谱柱，对于药物分离使用的制备色谱柱并不适用。

中国专利申请CN102879498A提供了一种二维式的色谱柱层析装置，可以实现三根色谱柱的联通式连接，前一根色谱柱可以为后一根色谱柱补充填料，保证后续色谱柱的分离能力，延长色谱柱的使用寿命，进而可以提高制备效率的装置。

中国专利申请CN102187197A提供了一种自动进样器，其可以提供一种内容积小的且容易制造的同时能够实现较高耐压性的试样注入口。

中国专利CN201876442提供了一种用于牛奶抗生素在线监测的无缝连接的装置，可以实现LC和MS的无缝连接，实验回收率好，操作时间短而且重现性良好，其属于无预处理情况下快速在线机械化分析牛奶中抗生素的装置，但是其也不适用于含有复杂组分的药物制备及分析。

中国专利CN101196497A提供了一种自动取样器清洗结构，其可以在输送清洗液的时候，不耗费时间的维持输液，是一种全量注入方式的自动取样清洗机构。

中国专利CN1834642A提供了一种液相色谱分析装置和方法，该装置包括和清洗操作相关的宏储存部分，执行储存宏的宏执行部分以及溶剂数据库，其可以实现根据管路的长度、管路直径和流路数量完成自动清洗操作。

中国专利CN1240936A提供了一种液体色谱仪，可以使得更换液体色谱仪中的流动相自动化而不增加成本费用。

上述几类仪器仅仅都是对色谱纯化步骤或者分析的改进，而不是对后续自动分析步骤的改进，和本发明要解决的技术问题属于不同的领域，其都无法实现通过制备色谱纯化得到的组分同时进行色谱分析的功能。

发明内容

鉴于传统色谱仪器无法对生物技术药物制备色谱纯化得到的组份进行快速高通量的分析检测，从而提供一种生物技术药物高效分析系统，该仪器与制备液相色谱仪串联，通过控制系统将制备色谱分离得到的组分不需要手工取样，而是通过流路切换进入多台分析型高效液相色谱仪进行不同色谱分析方法的检测，并且其兼具任务多样化、分离过程高通量化、分析过程快速的特点。

为实现上述目的，本发明提供了一种生物技术药物高效纯化分析系统，所述的系统包括控制系统、分析检测单元和检测接口；所述控制系统包括在线检测液体管线内液体理化参数的检测装置；所述检测接口用于执行进样操作；所述分析检测单元用于对检测接口的进样进行分析，，包括若干独立设置的分析性仪器。待检测液体进入系统后至少分为两个管路，其中一个支路流经检测装置，并获取液体的理化参数，控制系统根据检测装置检测到的液体的理化参数依据判定规则将液体识别为样品或废液，并控制检测接口对识别为样品的液体取样，并将取得的样品选择性的送入分析检测单元内的分析型仪器中。

所述控制系统包括在线检测液体管线内液体理化参数的检测装置；所述检测装置用于检测液体的各种理化参数，所述检测装置设置的检测器包括紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光、蒸发光散射等参数中的一种或者多种，配备多种检测器可以根据不同的需要来实现不同的功能，当待分离的药物蒸发光散射较强而紫外较弱，杂质的蒸发光散射较强的时候，可配置蒸发光散射检测器和紫外吸收检测器的组合；当待分离的药物涉及手性时，可以配置手性检测器。

控制系统对纯化后溶液进行识别的方法包括依据检测规则、时间规则或者两者结合后的规则来识别样品；

所述检测规则为：

1）判定规则为依据一个检测器来区分样品和非样品，检测器在线检测液体的参数，并将检测到的参数经处理后得到相应的处理后数据，当该处理后数据达到阈值时，将其标记为一个样品；当处理后数据低于阈值时，将其标记为非样品（或废液）；

2）当规则仅包括依据多个检测器来区分样品和非样品时，检测器在线检测液体的多个参数，并将检测到的多个参数经处理后得到相应的处理后数据，当这些处理后数据至少有一个数据达到阈值时，将其标记为一个样品，并记录达到阈值的数据类型为样品数据类型；当至少有一个处理后数据达到阈值，且达到阈值的数据类型相对样品数据类型有变化时，将其标记为另一个样品，并记录液体的参数；当所有处理后数据均低于相应阈值时，将其标记为非样品。

此处的规则可以是简单的规则，比如仅仅通过判断紫外吸收是否高于一定值，高于此值的即判定为样品，低于此值的即视为废溶剂，此时阈值即为设置的紫外值，测量得到的紫外吸收值即为处理后数据；也可以根据其他复杂的规则来判断，比如根据得到的紫外峰形来判断样品，此处峰形即为处理后的数据，阈值即相应于是否为根据峰形处理样品的峰形值。

利用规则实现对样品的识别可以有效的减少分析仪器的工作量，提高分析效率，并且由于是选择性进样，对于具有相同特征的样品只进行一类测试，大大减少了高效液相色谱的过载问题；对于具有不同特征的样品，保证了不会丢失分析任务。用户可以根据自己需要设定自己的规则。

所述时间规则包括定时取样，比如每隔5min将其标记为一个样品。

所述检测接口用于执行进样操作。优选的，所述检测接口由第一多通道切换阀、若干精密计量泵、第二多通道切换阀和第三多通道切换阀构成。优选的，所述检测接口包括第一多通道切换阀、若干精密计量泵、第二多通道切换阀和第三多通道切换阀；所述第一多通道切换阀和精密计量泵连接，实现液体管线内液体分流，精密计量泵和由第二多通道切换阀和第三多通道切换阀组成的进样通道连接，所述进样通道独立选择性将待进样送至目标分析型液相色谱内，完成进样过程。

本项目的进样操作互相独立，一个样品进样不影响另外一个样品进样。当所有的样品运行类似的测试程序，且这些程序运行时间相等时，可以同时进样。

所述进样操作包括：第二多通道切换阀切换到其中的一个精密计量泵，由精密计量泵抽取部分样品保存在精密计量泵内；当系统内有空闲的分析型仪器（比如分析型高效液相色谱仪）时，控制系统会控制第二多通道切换阀所对应的该精密计量泵的通道，并控制第三多通道切换阀对应分析仪器的通道，将保存在该精密计量泵内的样品通过第二多通道切换阀、第三多通道切换阀以及连接的液体管路，送入对应的分析型仪器中。此处，精密计量泵抽取的量一般不超过1mL，也可以根据实际需要变更，比如抽样0.1mL，由于只将部分样品进入分析仪器中分析，解决了样品体积过大而造成分析型仪器过载的问题，同时不影响正常的组分收集，正常的纯化组分收集后，可以进行后续的实验研究，例如毒理药理实验等。当向分析仪器进样的时候，进样量根据需要仪器的需要确定，比如10微升。

所述分析检测单元用于对进样进行分析。优选的，所述分析检测单元包括大于2台的分析型仪器，由于医药领域的特殊性，所述的分析型仪器优选分析型液相色谱仪，所述的分析型液相色谱仪运行相同或者不同的分析程序。当运行相同分析程序时，可以实现对制备得到的样品快速分析，从而确定其组成。当运行不同分析程序时，可以满足对同一样品进行多种类型的分析需求，可以同时对不同样品进行并行分析。此处的所需的进样操作为用户设定的操作，比如对于不具备紫外吸收的试样只进行HPLC-ELSD检测，而对于具备紫外吸收的试样进行HPLC-UV检测；也可以指的是所有可用的分析操作。优选的，所述高效液相色谱装备离子交换分析柱、疏水分析柱、亲和分析柱、凝胶过滤分析柱或/和反相分析柱。

优选的，所述系统和离子交换制备色谱柱、疏水制备色谱柱、亲和制备色谱柱、凝胶过滤制备色谱柱或/和反相制备色谱柱连接。制备色谱的洗脱液，即待检测液体进入液体管线后至少分为两个管路，其中一个支路流经检测装置，并获取液体的理化参数。优选的，待检测液体为液相制备色谱分离产物，液体管线和液相制备色谱的流出管路连接，并且分为第一管路和第二管路，其中第一管路流出纯化后的纯化后溶液，该溶液可以被收集或者用作别的用途，第二管路和液体管线连接，用于对纯化后溶液提供分析。控制系统根据检测装置检测到的液体的理化参数依据判定规则对液体进行识别分类，并控制检测接口对液体管线内取样并完成进样操作。

可选的，该分析系统还可以执行自动清洗操作和序列化操作。

第一多通道切换阀和精密计量泵连接的管路中有三通阀，用于切换来自第一多通道切换阀的液体或者清洗液。所述自动清洗操作为在精密计量泵内的液体完成了所需的进样操作，即进样完成后，通过第一多通道切换阀和精密计量泵连接管路中的三通阀，切换至第四多通道切换阀的清洗液，并完成对精密计量泵、第二多通道切换阀、第三多通道切换阀以及连接的液体管路的清洗。

所述序列操作包括：当分析检测系统内部没有空闲的分析色谱时，将样品缓存，并在液相色谱完成分析工作以后将样品送入，将样品储存在精密计量泵内可以有效的避免样品变质，从而提供准确的分析结果。

优选的，所述分析系统包括至少两台分析型液相色谱；所述多通道切换阀和液体管路连接，精密计量泵通过第一多通道切换阀与之对应的通道，从制备液相色谱仪分离得到的纯化组分抽取部分并保存，作为待分析样品第二多通道切换阀和3个或者多个精密计量泵连接，从而可以实现液体的分流；精密计量泵和由第二多通道切换阀和第三多通道切换阀组成的进样通路连接，待分析样品可以通过第二多通道切换阀与精密计量泵对应的通道，再通过第三多通道切换阀与分析型高效液相色谱仪对应的通道，按一定比例分配进入至少一台分析型高效液相色谱仪进行分析检测。

此处，精密计量泵的数量可以根据需要增加和减少。

作为上述技术方案的一种改进，所述系统内与色谱流动相接触的部件和仪器的管路均由聚醚醚酮(PEEK)、钛合金和/或聚四氟乙烯生物相容性耐腐蚀材料制造。比如制备液相色谱仪、第一多通道切换阀、精密计量泵、第二多通道切换阀、第三多通道切换阀、分析型高效液相色谱仪中所有与色谱流动相接触的部件和仪器的管路均由聚醚醚酮(PEEK)、钛合金和/或聚四氟乙烯生物相容性耐腐蚀材料制造。

作为上述技术方案的又一种改进，其特征在于，所述的制备液相色谱仪、第一多通道切换阀、精密计量泵、第二多通道切换阀、第三多通道切换阀、分析型高效液相色谱仪均由计算机控制，实现纯化分析过程的全自动切换和运行。

作为上述技术方案的一种选择，其特征在于，所述的制备液相色谱仪可安装离子交换制备色谱柱、疏水制备色谱柱、亲和制备色谱柱、凝胶过滤制备色谱柱或/和反相制备色谱柱，进行生物技术药物的纯化。

作为上述技术方案的又一种选择，其特征在于，所述的分析型高效液相色谱仪可装备离子交换分析柱、疏水分析柱、亲和分析柱、凝胶过滤分析柱或/和反相分析柱，对制备液相色谱仪1纯化得到的组分进行分析。

本申请的生物技术药物高效纯化分析系统，通过精密计量泵抽取制备液相色谱仪的纯化组分作为待测样品，并按一定比例，分别分配到若干分析型高效液相色谱仪中进行分析，其中分析型液相色谱仪可装备离子交换、疏水、亲和、凝胶过滤或反相中的多种分析柱，分别采取离子交换、疏水、亲和、凝胶过滤或反相色谱中的多种分析方式进行检测，对制备液相色谱仪纯化组分的电荷、疏水、亲和能力、分子大小、极性特征进行分析，得到纯化组分的纯度、质量回收率、活性收率和/或纯化倍数的结果。

本发明通过制备液相色谱仪和分析型高效液相色谱仪的联用，实现了对多种纯化组分同时进行色谱检测，并且对每种纯化组分可以进行多种方式的检测。

本发明利用精密计量泵，将制备液相色谱仪分离得到的生物技术药物纯化组分从出口管路抽取，只将部分样品进入分析型高效液相色谱仪分析，解决了样品体积过大而造成分析型高效液相色谱仪过载的问题，同时得到的纯化组分收集后，可以进行后续的实验研究，例如毒理药理实验等。

本发明同时通过多通道切换阀，将制备液相色谱仪分离得到的不同纯化组分分别保存到不同的精密计量泵中作为待测样品，实现对多种样品的检测。

本发明还通过第二多通道切换阀和第三多通道切换阀，将精密计量泵抽取的待测样品按比例分配到装备有不同分析柱的分析型高效液相色谱仪进行分析，实现对同一样品不同性质的检测。

作为对上述技术方案的一种进一步改进，在第一多通道切换阀和精密计量泵连接的管路中有三通阀，可以切换来自第一多通道切换阀的纯化组分或者第四多通道切换阀的清洗液。所述的精密计量泵通过第一多通道切换阀对应的通道，抽取清洗液，再通过第二多通道切换阀和第三多通道切换阀，按一定比例分配进入至少一台分析型高效液相色谱仪进行清洗。

本发明的创新点在于：

1.全封闭操作，将液体管线和制备色谱柱后管线连接，在取样时，样品直接进入精密计量泵，避免了样品的污染；

2.利用精密计量泵，将制备液相色谱仪分离得到的生物技术药物纯化组分从出口管路抽取，只将部分样品进入分析型高效液相色谱仪分析，解决了样品体积过大而造成分析型高效液相色谱仪过载的问题，同时得到的纯化组分收集后，可以进行后续的实验研究，例如毒理药理实验等。

3.取样灵活方便，只需要设定好规则，选择好检测器就可以实现样品的识别，并且可以根据需要识别出不同的样品；

4.分析程序灵活，可以根据待测样品的性质选择不同的分析程序；

5．自动化程度高，全封闭进样，节省人力的同时也防止了试剂和药物的污染。

本发明具有如下的有益效果：

本发明生物技术药物高效纯化分析系统通过组合多种分流、切换的技术，并通过计算机自动控制和切换，克服了现有的仪器无法同时进行纯化，并对纯化得到的样品进行高效液相色谱分析的难点。并可配置清洗旁路，对分析的流路进行清洗。本发明的优点在于，该生物技术药物高效纯化分析系统无需进行人工的收集、进样，可同时制备得到样品并对样品进行多种模式的快速高通量检测，避免了样品的污染和活性损失，减少特殊样品对环境造成污染的可能性。

附图说明

图1为本发明的生物技术药物高效纯化分析系统的示意图；

图2为增加了清洗液流路的本发明的生物技术药物高效纯化分析系统的示意图；

图3本发明的生物技术药物高效纯化分析系统简化后的示意图。

具体实施方式

下面将参考附图对本发明的实施例进行详细的介绍。

本实施例为一种生物技术药物高效纯化分析系统，所述的系统包括控制系统、分析检测单元和检测接口；所述控制系统包括在线检测液体管线内液体理化参数的检测装置；所述检测接口用于执行进样操作；所述分析检测单元用于对检测接口的进样进行分析，包括若干独立设置的分析型仪器（3台高效液相色谱）。检测接口包括第一多通道切换阀、若干精密计量泵（本实施例为3个）、第二多通道切换阀和第三多通道切换阀；所述第一多通道切换阀和精密计量泵连接，实现液体管线内液体分流，精密计量泵和由第二多通道切换阀和第三多通道切换阀组成的进样通道连接，所述进样通道独立选择性将待进样送至分析检测单元内的分析仪器内，完成进样过程。在第一多通道切换阀和精密计量泵连接的管路中有三通阀，该三通阀和第四多孔道切换阀（与清洗液连接与清洗液连接）连接，用于切换来自第一多通道切换阀的液体或者清洗液。

如图1所示，待检测液体进入系统后至少分为两个管路，其中一个支路流经检测装置，并获取液体的理化参数，控制系统根据检测装置检测到的液体的理化参数依据判定规则将液体识别为样品或废液，并控制检测接口对识别为样品的液体取样，并将取得的样品选择性的送入分析检测单元内的分析型仪器中。

该系统和制备色谱连接，系统内与色谱流动相接触的部件和仪器的管路均由聚醚醚酮、钛合金和/或聚四氟乙烯生物相容性耐腐蚀材料制造，高效液相色谱使用反相分析柱。

控制系统：控制系统包括可在线检测液体管线内液体理化参数的检测装置，并根据检测器检测到的理化参数依据判定规则对液体进行识别分类，并控制检测接口对液体管线内取样并完成进样操作。

控制系统内可以设置的检测器包括紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光、蒸发光散射等参数中的一种或者多种，配备多种检测器可以根据不同的需要来实现不同的功能，当待分离的药物蒸发光散射较强而紫外较弱，杂质的蒸发光散射较强的时候，可配置蒸发光散射检测器和紫外吸收检测器的组合；当待分离的药物涉及手性时，可以配置手性检测器。在本实施例中，控制系统内包括手性检测器、紫外和蒸发光散射检测器。

控制系统对纯化后溶液进行识别，识别过程包括依据检测规则、时间规则或者两者结合后的规则来识别样品：

所述检测规则包括：

1）判定规则为依据一个检测器来区分样品和非样品，检测器在线检测液体的参数，并将检测到的参数经处理后得到相应的处理后数据，当该处理后数据达到阈值时，将其标记为一个样品；当处理后数据低于阈值时，将其标记为非样品；

2）当规则仅包括依据多个检测器来区分样品和非样品时，检测器在线检测液体的多个参数，并将检测到的多个参数经处理后得到相应的处理后数据，当这些处理后数据至少有一个数据达到阈值时，将其标记为一个样品，并记录达到阈值的数据类型为样品数据类型；当至少有一个处理后数据达到阈值，且达到阈值的数据类型相对样品数据类型有变化时，将其标记为另一个样品，并记录液体的参数；当所有处理后数据均低于相应阈值时，将其标记为非样品。

此处的规则可以是简单的规则，比如仅仅通过判断紫外吸收是否高于一定值，高于此值的即判定为样品，低于此值的即视为废溶剂，此时阈值即为设置的紫外值，测量得到的紫外吸收值即为处理后数据；也可以根据其他复杂的规则来判断，比如根据得到的紫外峰形来判断样品，此处峰形即为处理后的数据，阈值即相应于是否为根据峰形处理样品的峰形值。

利用规则实现对样品的识别可以有效的减少分析仪器的工作量，提高分析效率，并且由于是选择性进样，对于具有相同特征的样品只进行一类测试，大大减少了分析型高效液相色谱的过载问题；对于具有不同特征的样品，保证了不会丢失分析任务。用户可以根据自己需要设定自己的规则，比如时间规则，定时取样，也可以时间规则和前述规则相结合。

所述时间规则包括定时取样，比如每隔3min将其标记为一个样品。

在本实施例中，应用的规则包括，两个简单规则：紫外吸收大于0.2时和溶剂具有蒸发光散射；一个时间规则，当一个样品持续时间超过3min，间歇取样。

本实施中进样操作互相独立，仅当所有程序都运行时间相同的测试程序可以视为同时进样。进样互相独立有利于缩短分析等待时间。

如图2所示的另一系统，可以执行自动清洗操作和序列化操作。

所述自动清洗操作包括：在精密计量泵内的液体完成了所需的进样操作，即进样完成后，通过第一多通道切换阀和精密计量泵连接管路中的三通阀，切换至第四多通道切换阀的清洗液，并完成对精密计量泵、第一多通道切换阀、第三多通道切换阀以及连接的液体管路的清洗。此处的所需的进样操作为用户设定的操作，比如对于不具备紫外吸收的试样只进行HPLC-ELSD检测，而对于具备紫外吸收的试样进行HPLC-UV检测；也可以指的是所有可用的分析操作。

所述序列操作包括：当分析检测系统内部没有空闲的分析色谱时，将样品缓存，并在液相色谱完成分析工作以后将样品送入，将样品储存在精密计量泵内可以有效的避免样品变质，从而提供准确的分析结果。

本申请的生物技术药物高效纯化分析系统，通过精密计量泵抽取制备液相色谱仪的纯化组分作为待测样品，并按一定比例，分别分配到若干分析型高效液相色谱仪中进行分析，其中分析型液相色谱仪可装备离子交换、疏水、亲和、凝胶过滤或反相中的多种分析柱，分别采取离子交换、疏水、亲和、凝胶过滤或反相色谱中的多种分析方式进行检测，对制备液相色谱仪纯化组分的电荷、疏水、亲和能力、分子大小、极性特征进行分析，得到纯化组分的纯度、质量回收率、活性收率和/或纯化倍数的结果。

本发明通过制备液相色谱仪和分析型高效液相色谱仪的联用，实现了对多种纯化组分同时进行色谱检测，并且对每种纯化组分可以进行多种方式的检测。

本发明利用精密计量泵，将制备液相色谱分离得到的生物技术药物纯化组分从出口管路抽取，只将部分样品进入分析型高效液相色谱仪分析，解决了样品体积过大而造成分析型高效液相色谱仪过载的问题，同时得到的纯化组分收集后，可以进行后续的实验研究，例如毒理药理实验等。

本发明同时通过多通道切换阀，将制备液相色谱仪分离得到的不同纯化组分分别保存到不同的精密计量泵中作为待测样品，实现对多种样品的检测。

本发明还通过第二多通道切换阀和第三多通道切换阀，将精密计量泵抽取的待测样品按比例分配到装备有不同分析柱的分析型高效液相色谱仪进行分析，实现对同一样品不同性质的检测。

图3为一种简化后的系统，该系统中检测接口简化为一个精密计量泵，其可以用于简单的样品的测定。

最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种生物技术药物高效纯化分析系统，其特征在于，所述的系统包括控制系统、分析检测单元和检测接口；所述控制系统包括在线检测液体管线内液体理化参数的检测装置；所述检测接口用于执行进样操作；所述分析检测单元包括若干独立设置的分析型仪器，用于对检测接口的进样进行分析；

待检测液体进入系统后至少分为两个管路，其中一个支路流经检测装置，并获取液体的理化参数，控制系统根据检测装置检测到的液体的理化参数依据判定规则将液体识别为样品或废液，并控制检测接口对识别为样品的液体取样，并将取得的样品选择性的送入分析检测单元内的分析型仪器中。

2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述检测装置设置的检测器包括紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光或蒸发光散射参数中的一种或者多种。

3.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述检测接口包括第一多通道切换阀、若干精密计量泵、第二多通道切换阀和第三多通道切换阀；所述第一多通道切换阀和精密计量泵连接，实现液体管线内液体分流，精密计量泵和由第二多通道切换阀和第三多通道切换阀组成的进样通道连接，所述进样通道独立选择性将待进样送至分析检测单元内的分析仪器内，完成进样过程。

4.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述系统内与色谱流动相接触的部件和仪器的管路均由聚醚醚酮、钛合金和/或聚四氟乙烯生物相容性耐腐蚀材料制造。

5.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述系统和离子交换制备色谱柱、疏水制备色谱柱、亲和制备色谱柱、凝胶过滤制备色谱柱或/和反相制备色谱柱连接。

6.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述分析检测单元包括高效液相色谱，所述高效液相色谱装备离子交换分析柱、疏水分析柱、亲和分析柱、凝胶过滤分析柱或/和反相分析柱。

7.根据权利要求3所述的系统，其特征在于，在第一多通道切换阀和精密计量泵连接的管路中有三通阀，用于切换来自第一多通道切换阀的液体或者清洗液。

8.一种基于权利要求1～7任一所述生物技术药物高效纯化分析系统的生物技术药物分离检测方法，包括以下步骤：

1）待检测液体进入系统内，流经检测装置，并经检测装置内的检测器获取液体的理化参数；

2）控制装置根据液体的理化参数将液体识别为废液和样品，并通过检测接口和检测单元对样品进行进样分析，所述检测单元包括多个分析仪器，且进样操作互相独立；

所述识别过程包括依据检测规则、时间规则或者两者结合后的规则来识别样品；

所述检测规则为控制系统依据一个检测器来区分样品和废液，检测器得到的液体的理化参数经处理后数据达到阈值时，将其标记为一个样品；当处理后数据低于阈值时，将其标记为废液；或

所述系统依据多个检测器来区分样品和非样品，检测器在线检测得到液体的多个理化参数经处理后得到的数据至少有一个数据达到阈值时，将其标记为一个样品，并记录达到阈值的数据类型为样品数据类型；当至少有一个处理后数据达到阈值，且达到阈值的数据类型相对样品数据类型有变化时，将其标记为另一个样品，并记录液体的参数；当所有处理后数据均低于相应阈值时，将其标记为废液。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括：

进样完成后，清洗液进入系统内，对检测接口和分析单元进行清洗。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤2）还包括：当分析检测单元没有空闲的分析仪器时，将样品缓存，并在有空闲的分析仪器后将样品送入。