CN103275728B

CN103275728B - 一种土壤重金属生物固定剂及其应用方法

Info

Publication number: CN103275728B
Application number: CN201310251933.3A
Authority: CN
Inventors: 张新雄; 兰玲峰; 毛光平; 张东升; 彭锋
Original assignee: DONGGUAN BAODE BIOLOGICAL ENGINEERING Co Ltd
Current assignee: DONGGUAN BAODE BIOLOGICAL ENGINEERING Co Ltd
Priority date: 2013-06-24
Filing date: 2013-06-24
Publication date: 2015-06-03
Anticipated expiration: 2033-06-24
Also published as: CN103275728A

Abstract

本发明涉及土壤调节剂技术领域，特别涉及一种土壤重金属生物固定剂及其应用方法，该土壤重金属生物固定剂的配方及其配方量为：每千克有机肥中添加纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂2-10g(10⁹CFU/g)、胶质芽孢杆菌固体发酵制剂2-10g(10⁹CFU/g)、巨大芽孢杆固体发酵制剂菌2-6g(10⁹CFU/g)和康氏木霉菌固体发酵制剂4-10g(10¹⁰CFU/g)；其中，生物有机肥的主要成分为：有机质＞40%、有效活菌数＞0.2亿/克、总养分＞5%。本发明的土壤重金属生物固定剂，不但成本低廉、环境风险小，能显著降低农作物对重金属的吸收，提高土壤肥力，且能有效防治土传病害，提高农作物的经济效益。

Description

一种土壤重金属生物固定剂及其应用方法

技术领域

本发明涉及土壤调节剂技术领域，特别涉及一种土壤重金属生物固定剂及其应用方法。

背景技术

目前的物理、化学重金属修复方法存在技术要求高或者经济成本高昂，而且还会破坏土壤微生物区系。而现有的一些生物修复方法存在修复过程需要停耕，或者只具有重金属修复的单一功能而不具备其他功能。

进入土壤中的重金属不能被微生物降解，可以在土壤中不断累积，被生物富集并最终通过食物链进入人体，危害人类的健康。但是研究结果表明，土壤中重金属总量并不能很好地反应重金属的向农作物富集的趋势，只有一部分形态的重金属具有生物有效性。因此，可以通过改变重金属的形态，降低重金属的生物有效性，降低其向农作物的富集，从而降低其对人体健康带来的风险。向土壤中加入某些制剂可以改变重金属的形态，降低重金属的生物有效性，到达降低重金属危害的目的，成为重金属固定技术，特别适用于具有中低重金属污染程度农田的修复。

微生物修复技术具有环境友好、成本低廉、来源广泛、不产生次级污染等优点。微生物对重金属的生物积累主要有胞外络合作用、胞外沉淀作用以及胞内积累作用三种形式。微生物通过带电荷的细胞表面吸附重金属离子，或通过向外界分泌有机酸、氨基酸等与重金属络合形成沉淀，或者通过摄取必要的营养元素主动吸收重金属离子，将重金属离子富集在细胞表面或内部。因此微生物制剂可以替代传统的化学制剂对土壤中的重金属进行固定。

中国专利申请号为200910071159.1的发明专利，公开了一种修复土壤重金属污染的生物复合制剂，其配方包括为诺沃肥20g/kg、腐殖酸20g/kg和枯草芽孢杆菌（B. subtilis）20ml/kg（10¹⁰ CFU/ml）。然而，该对比文件所采用的诺沃肥碱性比较强，为了确保微生物菌种的繁殖，必须加入一定量的腐殖酸调节pH，添加腐殖酸则会导致生产成本增加。另外，使用诺沃肥后农田肥力升高，病原菌的生长繁殖越快，容易引发土传病害。

发明内容

本发明目的在于针对现有技术存在的问题，提供一种土壤重金属生物固定剂，其不但成本低廉、环境风险小，能显著降低农作物对重金属的吸收，提高土壤肥力，且能有效防治土传病害，提高农作物的经济效益。

本发明的目的通过以下技术方案实现的。

一种土壤重金属生物固定剂，该土壤重金属生物固定剂的配方如下，所用原料有：纳豆芽孢杆菌（B. natto）、胶质芽孢杆菌（B.mucilaginosus）、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)、康氏木霉菌(Trichoderma koningii)的固体发酵制剂以及生物有机肥，其配方量为：每千克生物有机肥中添加纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂2-10g(10⁹ CFU/g)、胶质芽孢杆菌固体发酵制剂2-10g(10⁹ CFU/g)、巨大芽孢杆菌固体发酵制剂2-6g(10⁹ CFU/g)和康氏木霉菌固体发酵制剂4-10g(10¹⁰ CFU/g)；

其中，生物有机肥的主要成分为：有机质＞40%、有效活菌数＞0.2亿/克、总养分＞5%。

其中，上述四种菌种都是采用固体发酵制剂制得；生物有机肥的主要成分为：有机质（以干基计）＞40%、有效活菌数（CFU）＞0.2亿/克、总养分（N+P₂O₅+K₂O以干基计）＞5%。

微生物通过带电荷的细胞表面吸附重金属离子，或通过向外界分泌有机酸、氨基酸等与重金属络合形成沉淀，将重金属离子富集在细胞表面。本发明的主体思路是利用四种微生物菌种的代谢，将污染土壤中的重金属离子固定，从而降低农作物对重金属离子的吸收，实现降低农产品中重金属离子含量的目的。

其中，所述生物有机肥为东莞市保得生物工程有限公司生产的生物有机肥（简称保得生物有机肥），保得生物有机肥的主要成分为：有机质（以干基计）为45-55%、侧孢芽孢杆菌有效活菌数（CFU）为0.4-0.6亿/克、总养分（N+P₂O₅+K₂O以干基计）为6-8%。

保得生物有机肥的高含量有机质为四种微生物菌剂在土壤环境中的生长繁殖提供良好保障从而提高微生物对重金属的固定效率。

生物有机肥是有机固体废物（包括有机垃圾、秸秆、畜禽粪便、饼粕、农副产品和食品加工产生的固体废物）经生物肥菌种发酵、除臭和完全腐熟后加工而成的有机肥料。能够调理土壤、激活土壤中微生物活跃率、克服土壤板结、增加土壤空气通透性。提高土壤肥力，使粮食作物、经济作物、蔬菜类、瓜果类大幅度增产。本发明除了可以采用保得生物有机肥还可以采用西安德龙生物有限公司经营的生物有机肥或其他厂家生产的生物有机肥，只要其满足有机质（以干基计）＞40%、有效活菌（CFU）＞0.2亿/克、总养分（N+P₂O₅+K₂O以干基计）＞5%即可。

优选的，所述土壤重金属生物固定剂的各原料配方量为，每千克有机肥中添加纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂2-8g(10⁹ CFU/g)、胶质芽孢杆菌固体发酵制剂2-8g(10⁹ CFU/g)、巨大芽孢杆菌固体发酵制剂2-5g(10⁹ CFU/g)以及康氏木霉菌固体发酵制剂4-9g(10¹⁰ CFU/g)。

更优选的，所述土壤重金属生物固定剂的各原料配方量为，每千克有机肥中添加纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂2-5g(10⁹ CFU/g)、胶质芽孢杆菌固体发酵制剂2-5g(10⁹ CFU/g)、巨大芽孢杆菌固体发酵制剂2-4g(10⁹ CFU/g)以及康氏木霉菌固体发酵制剂4-6g(10¹⁰ CFU/g)。

其中，所述纳豆芽孢杆菌的保藏号为CICCNO.20644,胶质芽孢杆菌的保藏号为CICCNO.23575,巨大芽孢杆菌的保藏号为CICCNO.20665，康氏木霉菌的保藏号为ACCCNO.11089。

纳豆芽孢杆菌，购于中国工业微生物菌种保藏中心，其保藏号为CICCNO.20644；胶质芽孢杆菌，购于中国工业微生物菌种保藏中心，其保藏号为CICCNO.23575；巨大芽孢杆菌，购于中国工业微生物菌种保藏中心，其保藏号为CICCNO.20665；康氏木霉菌，购于中国农业微生物菌种保藏中心，其保藏号为ACCCNO.11089。

其中，所述纳豆芽孢杆菌的固体发酵培养基配方和培养方法为，豆粕150~250g/Kg、玉米粉50~150g/Kg、麸皮540~740g/Kg、CaCO₃50g/Kg、石灰与总配方的质量比为1.0%、葡萄糖2.5~7.5g/Kg、硫酸铵2~6g/Kg、酵母粉2~7g/Kg、味精5~15g/Kg、料水质量比为1:1、初始pH9.0，121℃灭菌90min，5%接种量，37℃恒温培养3d，制得纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂。优选配方为：豆粕200g/Kg、玉米粉100g/Kg、麸皮640g/Kg、CaCO₃50g/Kg、石灰与总配方的质量比为1.0%、葡萄糖5g/Kg、硫酸铵4g/Kg、酵母粉10g/Kg、味精10g/Kg。

其中，所述胶质芽孢杆菌的固体发酵培养基配方和培养方法为，草灰400~500g/Kg、玉米粉50~150g/Kg、麸皮200~400g/Kg、CaCO₃50g/Kg、石灰28.5g/Kg、蔗糖3~10g/Kg、(NH₄)₂SO₄1.5~4.5g/Kg、MgSO₄·7H₂O0.5~4.5g/Kg、料水质量比为1:1、初始pH8，121℃灭菌90min，6%接种量，36℃恒温培养3d，制得胶质芽孢杆菌固体发酵制剂。优选配方为：草灰600g/K、玉米粉100g/K、麸皮300g/K、CaCO₃50g/K、石灰28.5g/K、蔗糖6g/K、(NH₄)₂SO₄2.5g/K、MgSO₄·7H₂O2g/K。

其中，所述巨大芽孢杆菌的固体发酵培养基配方和培养方法为，豆粕400~600g/Kg、玉米粉40~140g/Kg、麸皮200~500g/Kg、CaCO₃50g/Kg、石灰与总配方的质量比为1.0%、MgSO₄·7H₂O1.0~3.0g/Kg、MnSO₄·H₂O0.05~1.5g/Kg、料水质量比为1:0.8、初始pH10，121℃灭菌90min，5%接种量，37℃恒温培养3d，制得巨大芽孢杆菌固体发酵制剂。优选配方为：豆粕500g/Kg、玉米粉140g/Kg、麸皮300g/Kg、CaCO₃50g/Kg、石灰与总配方的质量比为1.0%、MgSO₄·7H₂O2.5g/Kg、MnSO₄·H₂O0.5g/Kg、蔗糖10g/Kg。

其中，所述康氏木霉菌的固体发酵培养基配方和培养方法为，谷壳500~700g/Kg、麸皮300~500g/Kg、(NH₄)₂SO₄5~15g/Kg、MgSO₄·7H₂O0.1~1.5g/Kg、CaCl₂0.5~2.5g/Kg、料水质量比为1:1.4，121℃灭菌90min，5%接种量，28℃恒温培养3d，制得康氏木霉菌固体发酵制剂。优选配方为：谷壳600g/Kg、麸皮400g/Kg、(NH₄)₂SO₄10g/Kg、MgSO₄·7H₂O0.5g/Kg、CaCl₂1g/Kg。

一种土壤重金属生物固定剂的应用方法，按配方量分别称取四种微生物固体发酵制剂并混合均匀，然后将混合好的菌剂与所述生物有机肥混合制得所述重金属固定剂，将该重金属固定剂作为基肥直接施用于污染土壤，施用量为40-90Kg/亩。优选地，其施用量为60-75Kg/亩。

本发明的有益效果为：

（1）使用本发明的土壤重金属生物固定剂进行土壤重金属修复具有成本低廉、环境风险小、无需停耕的优点。

（2）本发明的土壤重金属生物固定剂不仅对土壤中重金属具有高效的固定作用，同时还能提高土壤肥力、防治土传病害如幼苗立枯病、枯萎病、疫霉病等，提高农作物的经济效益。

（3）本发明所使用的有机肥不需要额外添加其它酸碱调节剂，原料成本低。

（4）本发明仅对土壤中的镉、锌、铜、铅等重金属具有显著的固定效果，对土壤重金属污染有着高效的修复能力，重金属固定效果为47~92%；而且能够使土壤中速效磷含量提高65~95%、速效钾含量提高30~55%、作物产量提高20~25%以及使作物发病率降低15~30%。

（5）本发明的保得有机肥有机质含量以及总养分（N、P、K）含量高，在提高土壤有机质和作物养分供给上更有优势，可以提高土壤中有机质含量，改变土壤性质；将其作为微生物修复的复合配方，一方面可以为农作物的生长提供养料达到增产目的，另一方面可以改善微生物的生存环境，强化微生物的代谢，增强微生物对土壤中重金属的固定效率。

（6）本发明采用的纳豆芽孢杆菌可以通过其胞外荚膜中的聚阴离子（聚谷氨酸）与重金属相互作用，对重金属进行固定。胶质芽孢杆菌可以通过其胞外荚膜中的含羧基和羟基等极性功能团与重金属相互作用，对重金属进行固定。有很多研究表明，巨大芽孢杆菌、康氏木霉菌可以通过代谢对重金属进行吸附固定。胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌通过它们的代谢不仅能达到固定重金属的作用，同时还能提高土壤肥力。康氏木霉菌在固定土壤中重金属的同时还能够防治土传病害。

（7）本发明采用的四种微生物菌种均通过特殊的培养基配方经过固体发酵制成四种微生物固体发酵制剂，制备工艺简单成熟，原料来源广，有效降低土壤重金属生物固定剂的原料成本，且便于大规模推广应用。

具体实施方式

下面结合实施例1~5对本发明作进一步的说明。

实施例1。

一种土壤重金属生物固定剂，该土壤重金属生物固定剂的配方及配方量如下：每千克保得生物有机肥中添加纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂2g(10⁹ CFU/g)、胶质芽孢杆菌固体发酵制剂2g(10⁹ CFU/g)、巨大芽孢杆菌固体发酵制剂2g(10⁹ CFU/g)以及康氏木霉菌固体发酵制剂4g(10¹⁰ CFU/g)；其中，生物有机肥的主要成分为：有机质（以干基计）为45%、侧孢芽孢杆菌有效活菌数（CFU）为0.4亿/克、总养分（N+P₂O₅+K₂O以干基计）为8%。

本发明的土壤重金属生物固定剂的应用方法为：按上述配方量分别称取四种微生物固体发酵制剂并混合均匀，然后将混合好的菌剂与上述生物有机肥混合制得所述重金属固定剂，将该重金属固定剂作为基肥直接施用于污染土壤，施用量为40Kg/亩。

以受重金属污染土壤为研究对象，此土壤的重金属含量处于劣III类标准，施用本发明的土壤重金属生物固定剂后，土壤的重金属含量达到II标准。

实施例2。

一种土壤重金属生物固定剂，该土壤重金属生物固定剂的配方及配方量如下：每千克西安德龙生物有机肥中添加纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂4g(10⁹ CFU/g)、胶质芽孢杆菌固体发酵制剂3g(10⁹ CFU/g)、巨大芽孢杆菌固体发酵制剂3g(10⁹ CFU/g)以及康氏木霉菌固体发酵制剂5g(10¹⁰ CFU/g)；其中，生物有机肥的主要成分为：有机质（以干基计）为48%、有效活菌数（CFU）为0.5亿/克、总养分（N+P₂O₅+K₂O以干基计）为7.5%。

本发明的土壤重金属生物固定剂的应用方法为：按上述配方量分别称取四种微生物固体发酵制剂并混合均匀，然后将混合好的菌剂与上述生物有机肥混合制得所述重金属固定剂，将该重金属固定剂作为基肥直接施用于污染土壤，施用量为50Kg/亩。

以受重金属污染土壤为研究对象，此土壤的重金属含量处于劣III类标准，施用本发明的土壤重金属生物固定剂后，土壤的重金属含量达到III标准。

实施例3。

一种土壤重金属生物固定剂，该土壤重金属生物固定剂的配方及配方量如下：每千克保得生物有机肥中添加纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂6g(10⁹ CFU/g)、胶质芽孢杆菌固体发酵制剂5g(10⁹ CFU/g)、巨大芽孢杆菌固体发酵制剂4g(10⁹ CFU/g)以及康氏木霉菌固体发酵制剂6g(10¹⁰ CFU/g)；其中，生物有机肥的主要成分为：有机质（以干基计）为50%、侧孢芽孢杆菌有效活菌数（CFU）为0.5亿/克、总养分（N+P₂O₅+K₂O以干基计）为7%。

本发明的土壤重金属生物固定剂的应用方法为：按上述配方量分别称取四种微生物固体发酵制剂并混合均匀，然后将混合好的菌剂与上述生物有机肥混合制得所述重金属固定剂，将该重金属固定剂作为基肥直接施用于污染土壤，施用量为65Kg/亩。

以受重金属污染土壤为研究对象，此土壤的重金属含量处于劣II类标准，施用本发明的土壤重金属生物固定剂后，土壤的重金属含量达到II标准。

实施例4。

一种土壤重金属生物固定剂，该土壤重金属生物固定剂的配方及配方量如下：每千克保得生物有机肥中添加纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂8g(10⁹ CFU/g)、胶质芽孢杆菌固体发酵制剂7g(10⁹ CFU/g)、巨大芽孢杆菌固体发酵制剂5g(10⁹ CFU/g)以及康氏木霉菌固体发酵制剂8g(10¹⁰ CFU/g)；其中，生物有机肥的主要成分为：有机质（以干基计）为52%、侧孢芽孢杆菌有效活菌数（CFU）为0.6亿/克、总养分（N+P₂O₅+K₂O以干基计）为6.5%。

本发明的土壤重金属生物固定剂的应用方法为：按上述配方量分别称取四种微生物固体发酵制剂并混合均匀，然后将混合好的菌剂与上述生物有机肥混合制得所述重金属固定剂，将该重金属固定剂作为基肥直接施用于污染土壤，施用量为80Kg/亩。

实施例5。

一种土壤重金属生物固定剂，该土壤重金属生物固定剂的配方及配方量如下：每千克保得生物有机肥中添加纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂10g(10⁹ CFU/g)、胶质芽孢杆菌固体发酵制剂9g(10⁹ CFU/g)、巨大芽孢杆菌固体发酵制剂6g(10⁹ CFU/g)以及康氏木霉菌固体发酵制剂10g(10¹⁰ CFU/g)；其中，生物有机肥的主要成分为：有机质（以干基计）为55%、侧孢芽孢杆菌有效活菌数（CFU）为0.6亿/克、总养分（N+P₂O₅+K₂O以干基计）为6%。

本发明的土壤重金属生物固定剂的应用方法为：按上述配方量分别称取四种微生物固体发酵制剂并混合均匀，然后将混合好的菌剂与上述生物有机肥混合制得所述重金属固定剂，将该重金属固定剂作为基肥直接施用于污染土壤，施用量为90Kg/亩。

以受重金属污染土壤为研究对象，此土壤的重金属含量处于劣II类标准，施用本发明的土壤重金属生物固定剂后，土壤的重金属含量达到I标准。

应用例1。

将本发明的土壤重金属生物固定剂应用于盆栽实验及田间现场实验，结果表明，该土壤重金属生物固定剂对土壤重金属污染有着高效的修复能力，作物重金属固定效果为47%；同时该土壤重金属生物固定剂能够明显的提高土壤中速效磷（94.1%）、速效钾（27.8%）、作物产量（20.4%）以及降低作物发病率（15.6%），见表1。

表1土壤重金属生物固定剂处理下油菜种植效果

	对照组	实验组
			Cd含量（%）	80.5	42
速效磷（mg/Kg）	17	33.0
			速效钾（mg/Kg）	79	101.0
相对生物量（%）	100	120.4
			发病率（%）	23.5	7.9

应用例2。

将本发明的土壤重金属生物固定剂应用于盆栽实验及田间现场实验，结果表明，该土壤重金属生物固定剂对土壤重金属污染有着高效的修复能力，作物重金属固定效果为91.3%；同时该土壤重金属生物固定剂能够明显的提高土壤中速效磷（64.7%）、速效钾（50.7%）、作物产量（25.0%）以及降低作物发病率（22.1%），见表2。

表2土壤重金属生物固定剂处理下油麦菜种植效果

	对照组	实验组
			Cd含量（%）	40.3	3.5
速效磷（mg/Kg）	17	28.0
			速效钾（mg/Kg）	75	113.0
相对生物量（%）	100	125.0
			发病率（%）	28.8	6.7

应用例3。

将本发明的土壤重金属生物固定剂应用于盆栽实验及田间现场实验，结果表明，该土壤重金属生物固定剂对土壤重金属污染有着高效的修复能力，作物重金属固定效果为56.5%；同时该土壤重金属生物固定剂能够明显的提高土壤中速效磷（78.3%）、速效钾（52.6%）、作物产量（19.0%）以及降低作物发病率（30.1%），见表3。

表3土壤重金属生物固定剂处理下胡萝卜种植效果

	对照组	实验组
			Cd含量（%）	62.6	27.2
速效磷（mg/Kg）	23	41.0
			速效钾（mg/Kg）	78	119.0
相对生物量（%）	100	119.0
			发病率（%）	35.6	5.5

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.一种土壤重金属生物固定剂，其特征在于：该土壤重金属生物固定剂的配方如下，所用原料有：纳豆芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、康氏木霉菌的固体发酵制剂以及生物有机肥，其配方量为：每千克生物有机肥中添加菌落密度为10⁹ CFU/g的纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂2-10g、菌落密度为10⁹ CFU/g的胶质芽孢杆菌固体发酵制剂2-10g、菌落密度为10⁹ CFU/g的巨大芽孢杆菌固体发酵制剂2-6g以及菌落密度为10¹⁰ CFU/g的康氏木霉菌固体发酵制剂4-10g；

2.根据权利要求1所述的一种土壤重金属生物固定剂，其特征在于：所述土壤重金属生物固定剂的各原料配方量为，每千克有机肥中添加菌落密度为10⁹ CFU/g的纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂2-8g、菌落密度为10⁹ CFU/g的胶质芽孢杆菌固体发酵制剂2-8g、菌落密度为10⁹ CFU/g的巨大芽孢杆菌固体发酵制剂2-5g以及菌落密度为10¹⁰ CFU/g的康氏木霉菌固体发酵制剂4-9g。

3.根据权利要求1所述的一种土壤重金属生物固定剂，其特征在于：所述土壤重金属生物固定剂的各原料配方量为，每千克有机肥中添加菌落密度为10⁹ CFU/g的纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂2-5g、菌落密度为10⁹ CFU/g胶质芽孢杆菌固体发酵制剂2-5g、菌落密度为10⁹ CFU/g的巨大芽孢杆菌固体发酵制剂2-4g以及菌落密度为10¹⁰ CFU/g的康氏木霉菌固体发酵制剂4-6g。

4.根据权利要求1所述的一种土壤重金属生物固定剂，其特征在于：所述纳豆芽孢杆菌的保藏号为CICCNO.20644,胶质芽孢杆菌的保藏号为CICCNO.23575,巨大芽孢杆菌的保藏号为CICCNO.20665，康氏木霉菌的保藏号为ACCCNO.11089。

5.根据权利要求4所述的一种土壤重金属生物固定剂，其特征在于：所述纳豆芽孢杆菌的固体发酵培养基配方和培养方法为，豆粕150~250g/Kg、玉米粉50~150g/Kg、麸皮540~740g/Kg、CaCO₃50g/Kg、石灰与总配方的质量比为1.0%、葡萄糖2.5~7.5g/Kg、硫酸铵2~6g/Kg、酵母粉2~7g/Kg、味精5~15g/Kg、料水质量比为1:1、初始pH9.0，121℃灭菌90min，5%接种量，37℃恒温培养3d，制得纳豆芽孢杆菌固体发酵制剂。

6.根据权利要求4所述的一种土壤重金属生物固定剂，其特征在于：所述胶质芽孢杆菌的固体发酵培养基配方和培养方法为，草灰400~500g/Kg、玉米粉50~150g/Kg、麸皮200~400g/Kg、CaCO₃50g/Kg、石灰28.5g/Kg、蔗糖3~10g/Kg、(NH₄)₂SO₄1.5~4.5g/Kg、MgSO₄·7H₂O0.5~4.5g/Kg、料水质量比为1:1、初始pH8，121℃灭菌90min，6%接种量，36℃恒温培养3d，制得胶质芽孢杆菌固体发酵制剂。

7.根据权利要求4所述的一种土壤重金属生物固定剂，其特征在于：所述巨大芽孢杆菌的固体发酵培养基配方和培养方法为，豆粕400~600g/Kg、玉米粉40~140g/Kg、麸皮200~500g/Kg、CaCO₃50g/Kg、石灰与总配方的质量比为1.0%、MgSO₄·7H₂O1.0~3.0g/Kg、MnSO₄·H₂O0.05~1.5g/Kg、料水质量比为1:0.8、初始pH10，121℃灭菌90min，5%接种量，37℃恒温培养3d，制得巨大芽孢杆菌固体发酵制剂。

8. 根据权利要求4所述的一种土壤重金属生物固定剂，其特征在于：所述康氏木霉菌的固体发酵培养基配方和培养方法为，谷壳500~700g/Kg、麸皮300~500g/Kg、(NH₄)₂SO₄5~15g/Kg、MgSO₄·7H₂O0.1~1.5g/Kg、CaCl₂0.5~2.5g/Kg、料水质量比为1:1.4，121℃灭菌90min，5%接种量，28℃恒温培养3d，制得康氏木霉菌固体发酵制剂。

9.权利要求1-8任意一项所述的一种土壤重金属生物固定剂的应用方法，其特征在于：按配方量分别称取四种微生物固体发酵制剂并混合均匀，然后将混合好的菌剂与所述生物有机肥混合制得所述重金属固定剂，将该重金属固定剂作为基肥直接施用于污染土壤，施用量为40-90Kg/亩。