CN103265472A

CN103265472A - 加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法

Info

Publication number: CN103265472A
Application number: CN2013101807085A
Authority: CN
Inventors: 蒲尚饶; 李伟; 蒲擎宇; 杨郎生
Original assignee: CHENGDU DUJIANGYAN FANGHUA GARDEN Co Ltd
Current assignee: CHENGDU DUJIANGYAN FANGHUA GARDEN Co Ltd
Priority date: 2013-05-16
Filing date: 2013-05-16
Publication date: 2013-08-28

Abstract

本发明公开了一种加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法，包括以下步骤：向减压浓缩至粘稠状的加纳籽提取物结晶母液，加入硅胶，继续减压浓缩至干，得母液拌料；将母液拌料加入到装有硅胶的层析柱中，用质量分数80～95%的乙醇水溶液洗涤和洗脱，收集洗脱液，将收集的洗脱液减压浓缩后，放置结晶，过滤后的晶体用蒸馏水重结晶，即得5-羟基色氨酸。本发明的方法首次解决了从加纳籽提取物结晶母液中分离5-羟基色氨酸的问题，提取的5-羟基色氨酸产品的纯度可达99%以上；本分离方法简便，吸附剂和洗脱剂均可重复使用，溶剂使用量小，生产成本低，适于工业化大规模生产。

Description

加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法

技术领域

本发明属于天然药物提取技术领域，具体涉及一种加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法。

背景技术

加纳籽是热带豆科灌木植物加纳谷物（Griffonia simplicifolia）的干燥种子。自古以来，西非地区的人们就有把加纳籽作为治疗疾病的历史，例如利用其叶子以及其汁来治疗伤口和肾病，也可用作灌肠剂和壮阳药；利用捣碎的加纳树皮做成药膏治疗软下疳等。研究发现，加纳籽的主要活性物质为5-羟基色氨酸，其含量可达到10%以上。5-羟基色氨酸的化学结构式如图1所示。现代药学研究表明，5-羟基色氨酸还具有多种药理作用，如：调节情绪，治疗抑郁症，减弱患者攻击性；缩短入睡时间，改善睡眠质量；减弱食欲，治疗肥胖；治疗纤维性肌痛综合症；缓解慢性头痛症状等。另外，5-羟基色氨酸在医药和保健品行业也得到了广泛的应用。

虽然5-羟基色氨酸在加纳籽中含量高达10%左右，但长期以来其提取分离的收率较低（60～70%）。其原因是提取分离后的母液中还含有大量的5-羟基色氨酸（加纳籽5-羟基色氨酸的30～40%）不能分离出产品。由于有关5-羟基色氨酸制备方法的文献极少，至今也未见以加纳籽提取物结晶母液工业化生产5-羟基色氨酸单体的方法。

ZL200410067198.1公开了一种以加纳籽为原料制备高纯度5-羟基色氨酸的方法。该方法使用了超临界萃取和膜分离技术，使提取的5-羟基色氨酸的纯度达到99%以上。专利认为：该方法具有工艺简单、生产周期短、成本低，适宜于进行大规模工业化生产等优点。然而，上述专利所公开的制备方法是以加纳籽为原料，其产品的最终回收率为60～70%，结晶母液中仍然含有较大量的5-羟基色氨酸没被分离出来，未分离出的5-羟基色氨酸占整个5-羟基色氨酸的30～40%。

5-羟基色氨酸在碱性条件下不稳定，采用离子交换树脂虽也分离出了产品，但产品收率较低；同时，树脂处理、再生很难达到环保要求。

发明内容

针对现有技术中加纳籽结晶母液中还含有大量未被提取的5-羟基色氨酸，本发明提供一种加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法，该方法采用硅胶作为吸附剂，乙醇水溶液作为洗脱剂，从加纳籽结晶母液中分离出5-羟基色氨酸。

为了达到上述的技术效果，本发明采取以下技术方案：

一种加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法，包括以下步骤：

步骤一：向减压浓缩至粘稠状的加纳籽提取物结晶母液中，加入硅胶，继续减压浓缩至干，得母液拌料；

步骤二：将母液拌料加入到装有硅胶的层析柱中，用质量分数80～95%的乙醇水溶液洗涤和洗脱，收集洗脱液，将收集的洗脱液减压浓缩后，放置结晶，过滤后的晶体用蒸馏水重结晶，即得5-羟基色氨酸。

为了检测步骤二中收集的洗脱液是否合格，步骤二中收集洗脱液时采用薄层色谱检测，所述薄层色谱检测的展开剂为乙醇水溶液，显色剂为茚三酮乙醇溶液。

进一步的技术方案是：步骤二中所述的减压浓缩过程中收集乙醇水溶液，即在步骤二将收集的洗脱液进行减压浓缩时收集乙醇水溶液，收集的乙醇水溶液可回收再次利用。

作为本发明实施例的优选实施例，在上述的方法中，优选的是：步骤一中所述硅胶的用量为加纳籽提取物结晶母液质量的1倍。

作为本发明实施例的优选实施例，在上述的方法中，优选的是：步骤二中所述层析柱中硅胶的用量为母液拌料质量的0.5倍。

进一步的技术方案是：步骤二中所述的硅胶再生采用硅胶活化炉，再生后硅胶可重复使用。

进一步的技术方案是：步骤二中所述的过滤采用真空抽滤或离心机甩滤。

本发明与现有技术相比，具有以下的有益效果：

（1）采用硅胶与加纳籽提取物结晶母液混合得母液拌料，可以解决在洗脱过程中5-羟基色氨酸在高浓度乙醇溶液中的溶解性差的问题。

（2）层析柱中装入硅胶作为吸附剂，可吸附母液拌料中影响5-羟基色氨酸结晶的杂质，将杂质有效的去除，收集的洗脱液易于结晶，结晶的产品5-羟基色氨酸纯度可达99%以上。

（3）母液拌料洗脱和洗涤后收集的洗脱液采用减压浓缩结晶，并可收集乙醇水溶液重复使用，循环使用可节约成本，并且更加环保。

（4）层析柱的硅胶可采用硅胶活化炉活化再生，硅胶可重复利用，更加的安全环保。

（5）本发明的方法首次解决了从加纳籽提取物结晶母液中分离5-羟基色氨酸的问题，提取的5-羟基色氨酸产品的纯度可达99%以上；本提取方法简便，吸附剂和洗脱剂均可重复使用，溶剂使用量小，生产成本低，适于工业化大规模生产。

附图说明

图1为5-羟基色氨酸的分子结构式；

图2为本发明实施例加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的工艺流程图。

具体实施方式

下面结合本发明的实施例对本发明作进一步的阐述和说明。

实施例1：

以加纳籽为原料一次分离高纯度5-羟基色氨酸后获得加纳籽提取物结晶母液，具体步骤如下：

取加纳籽100kg，粉碎成粗粉，在多功能提取罐中，加入80%甲醇加热回流提取3次，第一次120分钟，第二、三次各90分钟，合并提取液，减压回收甲醇溶剂，将浓缩水液加入4～6倍原料重量体积的60～70℃左右的热水中，搅拌保温10～20分钟，静置12小时，氯仿萃取三次，每次加入10L氯仿，分出水液，减压浓缩至适量，放置结晶，真空抽滤，晶体用蒸馏水重结晶一次即得5-羟基色氨酸单体680g，收率6.8%，产品中5-羟基色氨酸含量99.2%。结晶母液与重结晶母液合并浓缩至粘稠状，即为加纳籽提取物结晶母液。

加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法如下：

工艺流程如图2所示：取上述减压浓缩至粘稠状的加纳籽结晶母液5kg，加入5kg硅胶，混匀，减压浓缩干得母液拌料，将母液拌料通过装有硅胶的层析柱进行色谱柱层析（硅胶为100～200目的粗孔硅胶，层析柱规格为

，层析柱中预先装入5kg硅胶，母液拌料加在硅胶上面），用乙醇水溶液（质量分数为80～95%）洗涤与洗脱，定量收集，收集的洗脱液采用薄层色谱检测（展开剂为乙醇水溶液（乙醇：水=100：9（体积比）），显色剂为质量分数2%的印三酮乙醇液，加热显色），收集合并合格洗脱液，减压浓缩洗脱液并回收乙醇水溶液（回收的乙醇水溶液调整比例后可重复使用），放置结晶，真空抽滤，晶体用蒸馏水重结晶一次即得5-羟基色氨酸单体310g，收率6.2%，产品中5-羟基色氨酸含量99.2%。

实施例2：

取实施例1中减压浓缩至粘稠状的加纳籽结晶母液10kg，加入10kg硅胶，混匀，减压浓缩干得母液拌料，将母液拌料通过装有硅胶的层析柱进行色谱柱层析（硅胶为100～200目的粗孔硅胶，层析柱规格为

，层析柱中预先装入10kg硅胶，母液拌料加在硅胶上面），用乙醇水溶液（质量分数为80～95%）洗涤与洗脱，定量收集，收集的洗脱液采用薄层色谱检测展开剂为乙醇水溶液（乙醇：水=100：9（体积比）），显色剂为质量分数2%的印三酮乙醇液，加热显色）收集合并合格洗脱液，减压浓缩洗脱液并回收乙醇水溶液（回收的乙醇水溶液调整比例后可重复使用），放置结晶，真空抽滤，晶体用蒸馏水重结晶一次即得5—羟基色氨酸单体650g，收率6.5%，产品中5—羟基色氨酸含量99.1%。

实施例3：

取实施例1中减压浓缩至粘稠状的加纳籽结晶母液50kg，加入50kg硅胶，混匀，减压浓缩干得母液拌料，将母液拌料通过装有硅胶的层析柱进行色谱柱层析（硅胶为100～200目的粗孔硅胶，层析柱规格为

，柱中预先装入50kg硅胶，母液拌料加在硅胶上面），用乙醇水溶液洗涤与洗脱，定量收集，收集的洗脱液采用薄层色谱检测展开剂为乙醇水溶液（乙醇：水=100：9（体积比）），显色剂为质量分数2%的印三酮乙醇液，加热显色）收集合并合格洗脱液，减压浓缩洗脱液并回收乙醇水溶液（回收的乙醇水溶液调整比例后可重复使用），放置结晶，真空抽滤或离心机甩滤，晶体用蒸馏水重结晶一次即得5—羟基色氨酸单体3150g，收率6.3%，产品中5—羟基色氨酸含量99.1%。

尽管这里参照本发明的解释性实施例对本发明进行了描述，上述实施例仅为本发明较佳的实施方式，本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。

Claims

1.一种加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法，其特征在于步骤二中收集洗脱液时采用薄层色谱检测。

3.根据权利要求1所述的加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法，其特征在于步骤二中所述的减压浓缩过程中收集乙醇水溶液。

4.根据权利要求1所述的加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法，其特征在于步骤一中所述硅胶的用量为加纳籽提取物结晶母液质量的1倍。

5.根据权利要求1所述的加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法，其特征在于步骤二中所述层析柱中硅胶的用量为母液拌料质量的0.5倍。

6.根据权利要求1所述的加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法，其特征在于步骤二中所述的硅胶再生采用硅胶活化炉。

7.根据权利要求1所述的加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法，其特征在于步骤二中所述的过滤采用真空抽滤或离心机甩滤。

8.根据权利要求2所述的加纳籽提取物结晶母液分离5-羟基色氨酸的方法，其特征在于所述薄层色谱检测的展开剂为乙醇水溶液，显色剂为茚三酮乙醇溶液。