CN103263361A

CN103263361A - 紫菜多糖在制备抗紫外线损伤护肤品中的应用

Info

Publication number: CN103263361A
Application number: CN2013102265962A
Authority: CN
Inventors: 王一飞; 叶翠芳; 杨珂; 童辉玲
Original assignee: Guangzhou Jinan Biomedicine Research and Development Base Co Ltd
Current assignee: Guangzhou Jinan Biomedicine Research and Development Base Co Ltd
Priority date: 2013-06-08
Filing date: 2013-06-08
Publication date: 2013-08-28

Abstract

本发明公开了一种紫菜多糖在制备抗紫外线损伤护肤品中的应用。试验表明，紫菜多糖能明显提高因UVA辐射损伤的成纤维细胞的存活率，对紫外辐射损伤的成纤维细胞具有明显的修复作用，防紫外线作用效果显著。本发明的紫菜多糖应用于护肤品中，可以制成霜剂、乳剂、面膜、爽肤水、护肤水、软膏、油剂、凝胶、气雾剂、溶液剂、或涂膜剂等各类剂型。

Description

紫菜多糖在制备抗紫外线损伤护肤品中的应用

技术领域

本发明涉及紫菜多糖的新用途，具体涉及一种紫菜多糖在制备抗紫外线损伤护肤品中的应用。

背景技术

紫菜属海产红藻，含有丰富的蛋白质、多糖、多种维生素、矿物质等成分，具有较高的营养价值，而且具有多种明显的生物学功能，在食品、药品、化妆品及营养等方面的应用前景甚好。紫菜多糖是紫菜的主要成分之一，是从紫菜中提取的一种部分硫酸化的天然线型多糖，具有多种活性，如抗氧化、抗癌、增强细胞免疫等功效。

紫外线辐射有人工源和自然源两种，太阳是紫外线辐射的唯一自然源。适量的紫外线照射对人体是有益的，但是过度的照射带来的危害却十分严重，紫外线辐射会损伤皮肤，还会损伤眼组织，导致结膜炎，损害角膜和晶状体；UVB波段的紫外辐射可引起皮肤的光损伤，出现皮肤红肿、水泡、炎症、老化等症状；UVA波段的紫外辐射可直达皮肤真皮层甚至更深处，引起皮肤的黑色素沉着，产生黑斑效应。紫外线辐射对人体皮肤的伤害是缓慢的、可长期积累，却又容易被忽视的。

成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，是真皮层的结构基础，由成纤维细胞合成的弹力纤维、胶原纤维与氨基多糖、蛋白多糖一起构成了真皮的基质成分，同时也是紫外线辐射的重要靶位之一。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。

目前国内外对紫菜多糖的研究主要集中在紫菜多糖的提取、化学成分测定及生物活性能方面，如专利200610047907.9公开了一种在制备预防和治疗神经系统疾病药物中的应用；专利201110321923.3公开了一种紫菜多糖及其制备方法和在烟草中的应用。但对紫菜多糖在紫外防护方面的报导较少。天然植物源紫外防护剂不仅有防护紫外线的能力，而且还有清除氧自由基的功效，能够修复皮肤、延缓皮肤老化，并且安全性能很好，无毒无刺激，含有天然植物源的美容护肤产品必将会带来巨大的市场效应。

发明内容

本发明目的在于提供一种紫菜多糖在制备抗紫外线损伤护肤品中的应用。

本发明所述的紫菜多糖可以通过下述制备方法得到，其包括以下步骤：

1）将干紫菜加入50～100倍量的水，超声破碎提取70~100min，过滤，收集滤液；

2）滤液用25～90%饱和度的硫酸铵沉淀后，离心收集上清液，将上清液脱盐处理，冷冻干燥后得到紫菜多糖。

本发明应用中所述的抗紫外线损伤护肤品是在护肤品中添加可接受量的紫菜多糖，可以为任何适用于皮肤的剂型，如可以制成霜剂、乳剂、面膜、爽肤水、护肤水、软膏、油剂、凝胶、气雾剂、溶液剂、或涂膜剂等各类剂型。上述各种类型的化妆品可以按照化妆品领域的常规方法制备。

本发明的紫菜多糖能够提高超氧化物歧化酶，减少自由基的产生，通过体外实验发现紫菜多糖能明显提高因UVA辐射损伤的成纤维细胞的存活率，对紫外辐射损伤的成纤维细胞具有明显的修复作用，防紫外线作用效果显著，使得紫菜多糖不仅可以作为理想的抗衰老因子，而且还可以作为护肤品添加剂，从而开拓了紫菜多糖的应用领域，使其具有更广阔的的前景。

附图说明

图1为紫菜多糖对NIH 3T3细胞生长的影响（n=3）。

图2为紫菜多糖对因UVA辐射损伤的NIH3T3细胞的作用（n=3）。

图3为紫菜多糖对因UVA辐射损伤的NIH3T3细胞的细胞周期的影响（n=3）。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。

下述实施例中所用的干紫菜产地福建，为一水紫菜。

实施例1 紫菜多糖的制备

将100 g干紫菜加65倍量的水，超声破碎提取90 min，200目滤布过滤，收集滤液；滤液用60%饱和度的硫酸铵沉淀后，离心收集上清液，上清液用去离子水经Sephadex G-25柱层析脱盐处理，冷冻干燥后得到紫菜多糖样品。

紫菜多糖的分析鉴定

Molish试剂反应：取一定浓度的多糖样品1ml于小试管中，加入两滴а-萘酚试剂，混匀，缓慢加入浓硫酸2ml，静置，观察有无紫色环出现。

紫外光谱：配制成0.1%的水溶液，在200～400nm范围内扫描检测有无特征吸收峰。

红外光谱：取极少量多糖样品和溴化钾一起研磨、压片，置于红外光谱分析仪中，在4000～650cm-1区间扫描。

鉴定结果显示：Molish反应为阳性，多糖溶液出现紫色圆环；

0.1%的多糖水溶液在200～400nm区间无特征吸收峰。

红外图谱显示在3600～3200(3423.56) cm-1处有宽展圆滑强吸收峰；3000～2800(2925.61) cm-1处有1组吸收峰；1200～1000 cm-1处有较强吸收峰，1638.98、1402.04、773.90、618.11cm-1处有弱吸收峰。

实施例2 紫菜多糖的制备

将100 g干紫菜加50倍量的水，超声破碎提取100 min，200目滤布过滤，收集滤液；滤液用40%饱和度的硫酸铵沉淀后，离心收集上清液，上清液用去离子水经Sephadex G-25柱层析脱盐处理，冷冻干燥后得到紫菜多糖样品。

下面通过试验例进一步说明本发明的有益效果。

试验例紫菜多糖在活体外细胞对UVA辐射方面的活性

试验材料：NIH 3T3细胞购自于武汉大学

试验例一、MTT法检测NIH3T3细胞的生长情况

NIH 3T3细胞培养于含10%FBS的DMEM培养基中，于37 ℃、5%CO₂培养箱中常规培养，取对数生长期细胞，按每孔8000个细胞接种于96孔培养板中，待细胞融合度达80%后，弃上清，用无血清的DMEM培养基稀释紫菜多糖，然后加入到细胞共培养，对试验组分别加入六个浓度（105.8μg/mL,52.9μg/mL,26.5μg/mL,13.2μg/mL,6.6μg/mL,3.3μg/mL）的紫菜多糖，以无血清的细胞培养基为空白对照组，加入体积均为100μl/孔，每个浓度各设定4个平行孔，继续培养48h后，加入10μl/孔的MTT溶液，37℃培养4h，弃上清，加入100μl/孔的DMSO，避光震荡15min后，用酶标仪（检测波长570nm，参考波长630nm）测定吸光值，计算细胞存活率，所得结果如表1、图1所示。

细胞存活率（%）=试验组的吸光值÷对照组的吸光值×100%。

表1

多糖浓度(μg/mL)	0.0	3.3	6.6	13.3	26.5	52.9	105.8
								细胞存活率(%)	100.0	101.1	105.2	103.5	105.1	118.2	137.9

结果显示：与正常细胞比较，紫菜多糖对NIH3T3细胞无明显的细胞毒性，并且对NIH 3T3细胞有促增殖的作用。

试验例二、紫菜多糖对UVA辐射损伤的NIH3T3细胞的作用

选取对数生长期的NIH 3T3细胞，试验细胞随机分成空白对照组、UVA辐射组、UVA辐射+多糖组。待NIH 3T3细胞融合至80%，除空白对照组外，其余两组试验细胞需用UVA灯管照射，细胞距离辐照光源15cm，辐射强度为540μW/cm2,辐照30min。照射完毕后，弃上清，用无血清的DMEM培养基稀释紫菜多糖至试验浓度，分别加入到各组细胞中共培养，空白对照组和UVA组则加入无血清的DMEM培养基，继续培养48h后，加入10μl/孔的MTT溶液，37℃培养4h，弃上清，加入100μl/孔的DMSO，避光震荡15min后，用酶标仪（检测波长570nm，参考波长630nm）测定吸光值，计算细胞存活率。所得结果如表2、图2所示。

表2

上述结果表明，UVA辐射+多糖组在各浓度下的细胞的存活率明显高于空白对照组和UVA辐射组的细胞存活率，不同浓度的紫菜多糖对UVA辐射损伤的NIH 3T3细胞均有显著的修复作用。

试验例三、流式细胞仪检测NIH3T3细胞的细胞周期

选取对数生长期的NIH 3T3细胞，设定三个组分别是：空白对照组、UVA辐射组、UVA辐射+多糖组。待NIH3T3细胞融合至80%后，用UVA灯管照射各试验组细胞（除空白对照组），细胞距离辐照光源15cm，辐射强度为540μW/cm²,辐照30min。照射完毕后，弃上清，用无血清的DMEM培养基稀释紫菜多糖至试验浓度，分别加入到各组细胞中共培养，空白对照组和UVA组则加入无血清的DMEM培养基，继续培养48h后收集细胞，离心（1500 r/min，10 min），调整细胞密度为1×10⁶/ml，75%预冷乙醇固定过夜，染色后采用流式细胞仪分析细胞周期，所得结果如表3、图3所示。

表3 ：

	G1/G0	S	G2/M
				UVA辐射组	33.7±4.0	56.9±2.5	9.4±1.5
UVA辐射+多糖组	26.2±1.3	45.2±2.4 ^*	28.6±1.1 **

注** P<0.01; * 0.01<P<0.05，与UVA辐射组比较。

流式细胞仪结果显示，紫菜多糖处理受损的NIH 3T3细胞后，与UVA辐射组相比较，处于G0/G1期的细胞减少， G2/M期的细胞增多，S期的细胞减少，说明紫菜多糖促进了受损伤的NIH3T3细胞由G1期向S期、G2/M期的转化。

实施例3 含有紫菜多糖的护肤液的制备

按照护肤品的常规工艺制备本发明护肤液，所得护肤液命名为护肤水#1，其中原料与辅料的配比如下：

羧甲基纤维素钠 1g

紫菜多糖 1g

尿囊素 2g

洋甘菊 10g

烟酰胺 20g

丙二醇 20g

Euxyl K-100 1g

蒸馏水加至1000ml。

Claims

1.紫菜多糖在制备抗紫外线损伤护肤品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述紫菜多糖的制备方法，包括以下步骤：

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗紫外线损伤护肤品为霜剂、乳剂、面膜、爽肤水、护肤水、软膏、油剂、凝胶、气雾剂、溶液剂、或涂膜剂。