CN103262817B - 一种中国对虾半同胞家系高效构建方法 - Google Patents
一种中国对虾半同胞家系高效构建方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种中国对虾半同胞家系高效构建方法，包括1、家系对虾营养强化培育；2、家系个体标记配种；3、环境条件调控三个步骤。本发明的方法操作简单，使半同胞家系构建成功率显著提高，该方法能满足后续的大规模中国对虾家系选育要求。
Description
所属技术领域
本发明属于中国对虾家系选育技术，是一种在选择育种过程中利用人工调控中国对虾定向交尾来有效地进行家系间配种和提高半同胞家系构建成功率的方法。
背景技术
上世纪90年代，世界上一些国家开始采用大规模家系选育技术进行对虾的遗传改良，并取得了一些有应用价值的良种。如美国夏威夷海洋研究所通过构建凡纳滨对虾家系并采用综合指数选育法，培育出生长快和抗桃拉病毒的品系；法国海洋开发研究院通过家系选育的方法选育出抗传染性皮下与造血组织坏死病毒的蓝对虾品系；澳大利亚联邦科学和工业研究院利用家系选育技术进行日本对虾的遗传改良，选育系的生长速度明显优于未选育系，取得了良好的选育结果。国内中国对虾的选育研究起步较晚，家系选育也是近几年来才应用到中国对虾的遗传改良上来，而运用大规模家系选育，构建半同胞家系是必不可少的，因为遗传力、育种值等遗传参数都要通过半同胞家系进行精确估计，且半同胞家系数量越多，遗传参数估计的准确性就越高。目前，由于用于定向配种的自然交尾技术没有获得突破，中国对虾半同胞家系构建通常采用人工授精方法，但此方法需要将雄虾杀死解剖获得精荚或输精管，且人工授精的成功率和受精率均较低，导致雄性亲本不能重复利用及半同胞家系构建效率不高等突出问题。
已经发表的论文“中国对虾四种人工授精方法的比较分析”公开了人工授精的方法，采用该文献的方法，人工授精的平均受精率较低，范围为46.8-66.8％，并且人工授精方法需杀死雄虾，且授精成功率受限(53.3-80.8％)，即使授精成功率最高的完整精荚移植方法(80.8％)，由于一尾雄虾的两个精荚移植到2尾雌虾中，有一尾受精失败就不能构建半同胞家系，实际的半同胞构建成功率低于30％。
另一论文“定向交尾技术在中国对虾家系构建中的初步研究”，该论文中的方法获得了5-16.9％的交尾率。
然而，现有技术的交尾率和受精率都难以达到高效构建中国对虾半同胞家系的目的。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种中国对虾半同胞家系高效构建方法，该方法操作简单，使半同胞家系构建成功率显著提高，该方法能满足后续的大规模中国对虾家系选育要求。
本发明的构建方法至少包括：1、家系对虾营养强化培育；2、家系个体标记配种；3、环境条件调控三个步骤，具体而言：
(1)家系对虾营养强化培育：
1)、投饵：9月上旬，通过投喂经检测不含白斑综合症病毒的鲜贝肉和活沙蚕对中国对虾家系对虾进行营养强化培育；日投饵量控制在对虾体重的8％-10％，分3次投喂，为雌虾交尾前的生殖蜕皮储备充足能量；
2)、水温：保持自然水温，20-25℃；
3)、水质控制：在培育过程中，保持连续充气和定期换水；每日换水一次，换水量20-40％，换水时彻底清除池底残饵及粪便；为了保持充足的溶解氧，昼夜连续充气；
4)、密度控制：每个家系独立养殖在室外2-4m3玻璃钢圆缸内，每缸养殖对虾15-25尾；
(2)家系个体标记配种：
家系对虾营养强化1个月后，进行留种家系留种个体的选择，每个留种家系选取体重在25g以上个体进行留种，并采用眼柄标记法对各家系雌雄亲本进行个体标记；
从不同家系中分别挑选雌雄亲虾，采用1雄配6雌的方法构建父系半同胞家系，记录个体眼柄标记号信息；未参与交配搭配的虾雌雄分开，继续养殖，留作备用；
(3)环境条件调控：
10月上旬，按照配种设计，将6尾雌虾和1尾雄虾放入9m2长条形水泥池中，一日三餐全部投喂鲜活沙蚕，当水温下降至18℃时，为刺激雌虾进行生殖蜕壳，每日换水量增加至40-60％以上；定期观察雌虾交尾情况，将已交尾雌虾捞出，并相应补充该家系雌虾；
11月上旬，自然水温为10-15℃时，检查最终交尾情况，将已交尾的雌虾挑出，记录眼柄标记信息，并补充该家系的备份雌虾；将水温按1℃/天增加，由10-15℃逐步升至17-19℃，稳定3天后，将水温按2℃/天下降，由17-19℃降至13-15℃，后水温稳定在13-15℃，每日换水一次，换水量45-55％；15天后，再次检查交尾情况，挑出参与交尾的雌雄虾，并记录眼柄标记信息；
交尾雌虾挑选完毕后，水温按0.5℃/天下降，由13-15℃降至8-10℃，所有亲虾降温至8-10℃进行越冬培育，每天投喂沙蚕2次，日投喂量为对虾体重的5％，每天换水清污一次，换水量为20-40％。
在本发明的一个优选实施方式中，所述的构建方法是在中国山东境内完成，优选的，是在山东青岛完成。
本发明与已有技术相比，其特点：
1、本发明适用于中国对虾家系构建，通过获得自然交尾虾，相对于人工授精，大大提高了受精率和孵化率，使家系构建成功率显著提高；
2、本发明操作简单，可根据需要进行不同家系间一雄配多雌的搭配，中国对虾半同胞家系构建成功率显著提高，且雄虾亲本可在来年以人工授精方式继续参与半同胞家系的构建，更进一步提高了半同胞家系的构建效率，为下一步的遗传参数精确估计奠定了基础；
3、本发明适用于中国对虾遗传育种，通过该方法，可获得交尾雌雄亲本的准确信息，为家系系谱的构建提供了保证，在制定配种方案时可根据亲缘关系进行搭配从而有效避免近交，克服了大量雌雄虾混合自然交尾法无法识别父母本带来的不足。
具体实施方式
下面通过实施例详细叙述本发明的技术内容：
本发明在中国水产科学研究院黄海水产研究所水产遗传育种中心进行了实施应用，本发明其技术方法包括：1、家系对虾营养强化培育；2、家系个体标记配种；3、环境条件调控。
1、家系对虾营养强化培育：
1)、投饵：从9月10日开始，通过投喂鲜贝肉和活沙蚕对中国对虾家系对虾进行营养强化培育，每批鲜贝肉和活沙蚕在投喂前均需进行病毒检测，经检测不含白斑综合症病毒后方可投喂；日投饵量控制在对虾体重的8％-10％，分3次投喂，根据对虾夜间摄食多的习性，早晨、下午和晚上按2∶2∶3的比例投饲。通过营养强化，为对虾的生殖蜕壳积累足够能量。
2)、水温：保持自然水温，营养强化期自然水温变化范围为20-25℃。
3)、水质控制：在培育过程中，保持连续充气和定期换水。每日换水一次，换水量30％，换水时彻底清除池底残饵及粪便；为了保持充足的溶解氧，昼夜连续充气。
4)、密度控制：每个家系独立养殖在室外3m3玻璃钢圆缸内，每缸养殖对虾20尾。
2、家系个体标记配种：
家系对虾营养强化1个月后，根据性状测试结果选择留种家系50个，每个留种家系选取体重在25g以上个体进行个体留种，其中每个家系雄虾留取4尾，雌虾留取8尾；采用眼柄标记法对各家系雌雄亲本进行个体标记，将标有字母及数字序号的小塑料环(直径3mm)，套入对虾的眼柄，标记个体。
根据家系血缘系谱制定配种方案，选取无亲缘关系的家系进行配种。10月15日，采用一雄配多雌的方式，将1个家系的1尾雄虾和与之搭配的6个家系的6尾雌虾放入9m2长条形水泥池内，共搭配50组，并记录个体眼柄标记号信息。未参与交配搭配的虾雌雄分开，继续养殖，留作备用。
3、环境条件调控：
10月15日至11月15日，当水温随自然气温下降至18℃时，采取加大换水量的方式促使对虾交尾，每日换水量50％以上，同时一日三餐全部投喂无特定病原的沙蚕进行营养补充，使对虾积累足够营养和力量进行蜕壳。
11月15日，自然水温为12℃，检查交尾情况，把已交尾的雌虾挑出，记录眼柄标记信息，并补充该家系的备份雌虾；将水温按1℃/天增加，由12℃逐步升至18℃，稳定3天后，将水温按2℃/天下降，由18℃降至14℃，后水温稳定在14℃，每日换水一次，换水量50％。11月30日，再次检查交尾情况，挑出参与交尾的雌雄虾，并记录眼柄标记信息。
12月2日，交尾雌虾挑选完毕后，水温按0.5℃/天下降，由14℃降至9℃，所有亲虾降温至9℃进行越冬培育，雌雄亲虾分开培育，每天投喂沙蚕2次，日投喂量为对虾体重的5％，每天换水清污一次，换水量为30％。第二年春天将雌虾进行性腺促熟，然后进行苗种培育。
在搭配的50个交配组合中，46个池中获得了交尾雌虾，共获得交尾雌虾135尾，其中1尾雄虾与多尾雌虾交尾的组合41个。交尾雌虾的越冬成活率92％，共有116尾交尾雌虾成功产卵，受精率、孵化率均在90％以上，平均每尾雌虾能孵化出20万幼体；成功构建1雄配多雌的半同胞家系组32个，半同胞家系构建成功率为78％。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。
Claims (3)
1.一种中国对虾半同胞家系的构建方法，所述构建方法至少包括：1、家系对虾营养强化培育；2、家系个体标记配种；3、环境条件调控三个步骤，其特征在于所述步骤的具体操作为：
(1)家系对虾营养强化培育：
1)、投饵：9月上旬，通过投喂经检测不含白斑综合症病毒的鲜贝肉和活沙蚕对中国对虾家系对虾进行营养强化培育；日投饵量控制在对虾体重的8％-10％，分3次投喂，为雌虾交尾前的生殖蜕皮储备充足能量；
2)、水温：保持自然水温，20-25℃；
3)、水质控制；在培育过程中，保持连续充气和定期换水；每日换水一次，换水量20-40％，换水时彻底清除池底残饵及粪便；为了保持充足的溶解氧，昼夜连续充气；
4)、密度控制：每个家系独立养殖在室外2-4m3玻璃钢圆缸内，每缸养殖对虾15-25尾；
(2)家系个体标记配种：
家系对虾营养强化1个月后，进行留种家系留种个体的选择，每个留种家系选取体重在25g以上个体进行留种，并采用眼柄标记法对各家系雌雄亲本进行个体标记；
从不同家系中分别挑选雌雄亲虾，采用1雄配6雌的方法构建父系半同胞家系，记录个体眼柄标记号信息；未参与交配搭配的虾雌雄分开，继续养殖，留作备用；
(3)环境条件调控：
10月上旬，按照配种设计，将6尾雌虾和1尾雄虾放入9m2长条形水泥池中，一日三餐全部投喂鲜活沙蚕，当水温下降至18℃时，为刺激雌虾进行生殖蜕壳，每日换水量增加至40-60％；定期观察雌虾交尾情况，将已交尾雌虾捞出，并相应补充该家系雌虾；
11月上旬，自然水温为10-15℃时，检查最终交尾情况，将已交尾的雌虾挑出，记录眼柄标记信息，并补充该家系的备份雌虾；将水温按1℃/天增加，由10-15℃逐步升至17-19℃，稳定3天后，将水温按2℃/天下降，由17-19℃降至13-15℃，后水温稳定在13-15℃，每日换水一次，换水量45-55％；15天后，再次检查交尾情况，挑出参与交尾的雌雄虾，并记录眼柄标记信息；
交尾雌虾挑选完毕后，水温按0.5℃/天下降，由13-15℃降至8-10℃，所有亲虾降温至8-10℃进行越冬培育，每天投喂沙蚕2次，日投喂量为对虾体重的5％，每天换水清污一次，换水量为20-40％。
2.根据权利要求1所述的一种中国对虾半同胞家系的构建方法，所述的构建方法是在中国山东境内完成。
3.根据权利要求2所述的方法，所述的构建方法是在山东青岛完成。
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