CN103235074A - 一种高效液相色谱在线分析方法及应用 - Google Patents
一种高效液相色谱在线分析方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103235074A CN103235074A CN2013101074756A CN201310107475A CN103235074A CN 103235074 A CN103235074 A CN 103235074A CN 2013101074756 A CN2013101074756 A CN 2013101074756A CN 201310107475 A CN201310107475 A CN 201310107475A CN 103235074 A CN103235074 A CN 103235074A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- high performance
- liquid phase
- performance liquid
- pretreatment system
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 88
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 59
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 75
- 238000010926 purge Methods 0.000 claims description 23
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 9
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 8
- 238000013523 data management Methods 0.000 claims description 7
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 5
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 claims description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 4
- 238000012882 sequential analysis Methods 0.000 claims description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 21
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 abstract description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 103
- WLYGSPLCNKYESI-RSUQVHIMSA-N Carthamin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1[C@@]1(O)C(O)=C(C(=O)\C=C\C=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)C(\C=C\2C([C@](O)([C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C(O)=C(C(=O)\C=C\C=3C=CC(O)=CC=3)C/2=O)=O)=C1O WLYGSPLCNKYESI-RSUQVHIMSA-N 0.000 description 11
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 10
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 7
- DYQVDISPPLTLLR-HJQYTNQXSA-N Carthamin Natural products CC[C@H]1O[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O)[C@]2(O)C(=C(C=C/3C(=O)C(=C(O)[C@](O)([C@@H]4O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]4O)C3=O)C(=O)C=Cc5ccc(O)cc5)C(=O)C(=C2O)C(=O)C=Cc6ccc(O)cc6)O DYQVDISPPLTLLR-HJQYTNQXSA-N 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 241000208809 Carthamus Species 0.000 description 5
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 235000012206 bottled water Nutrition 0.000 description 1
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000012372 quality testing Methods 0.000 description 1
- 238000010223 real-time analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002352 surface water Substances 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明提供一种高效液相色谱在线分析方法，设计由样品预处理系统、高效液相色谱仪、可编程逻辑控制器、触摸屏、交换机构成的高效液相在线分析系统，通过液相色谱在线分析系统可实现样品预处理、液相色谱自动进样分析以及液相色谱分析结果的实时处理与显示。本发明具有自动化程度高、操作简单、样品自动预处理和分析、分析结果实时显示、系统可自动清洗等优点，可用于生产过程样品含量及组分比例的在线检测。
Description
技术领域
本发明属于色谱分析技术领域，具体涉及一种高效液相色谱在线分析方法及其在中药生产过程在线分析中应用。
背景技术
中药生产过程质量检测近来受到了生产企业的极大重视，近红外光谱技术也因其快速、无损等优点广泛地应用于中药生产过程在线检测中。但是近红外光谱技术有着明显的局限性：第一，近红外光谱分析的灵敏度相对较低，其检测限仅为千分之一；第二，近红外光谱分析技术属于二级分析方法，需要较大的前期投入来建立稳健的近红外校正模型，且其准确性与模型建立的质量和模型的合理使用有很大关系。中药生产过程中有很多情况质控指标含量小于0.1%或者需要更为精确的定量，此时，近红外光谱技术的应用则受到了限制，因此需要寻找其他合适的在线分析方法。
高效液相色谱技术（HPLC）作为一种传统的分析技术具有分辨率高、重复性好、色谱柱可反复使用等优点，目前广泛应用于中药有效成分的测定。常见的高效液相色谱分析方法均为离线分析，即分析人员在现场取样后拿到实验室进行样品预处理后使用液相色谱进行分析。这样的分析效率较低，分析人员工作量大，对于挥发性样品还会有较大的分析误差，最重要的是对生产过程质控指标无法实现实时监测和反馈。高效液相色谱样品处理复杂、操作繁琐并且分析周期长的缺陷限制了其作为在线分析技术的应用。近年来，超高效液相色谱的发展是分离技术的巨大进步，峰容量、分析效率、灵敏度和分辨率较常规HPLC有了很大的提高，这便为使液相色谱成为一种新的在线分析技术提供了可能。但是由于液相色谱复杂的预处理及进样方式等问题仍然限制了其作为在线分析技术的应用。目前，已有液相色谱介质的预处理系统的相关研究并在不断完善，例如张以民等发明的在线色谱分析的液相介质预处理装置（专利号ZL 200720074371.X），该装置除了可以实现液相介质预处理外还可达到流量大、防堵及基本消除气泡的目的。另外，也有液相色谱在线脱盐、富集与质谱在线联用系统（专利号ZL 200610134981.4）以及固相萃取—液相色谱在线联用分析水中痕量有机物的方法（专利号ZL 200610023536.0）的相关报道。但是，这些研究都具有相应的局限性和不全面性。张以民等的发明仅提供了在线液相色谱分析的预处理装置，并未将其与液相色谱仪真正连成一个在线分析系统，并不能真正实时得到分析结果，没有真正意义上实现在线分析。张丽华等发明的液相色谱与质谱在线联用系统强调的也不是利用液相色谱实现在线分析，而仅仅将双分流纳升级HPLC用于脱盐、富集并与质谱联用，并未实现液相色谱的在线分析。陈玲等采用固相萃取—液相色谱在线联用分析水中痕量有机物，该在线联用系统仅适合于饮用水、地表水及其他低粘度液体中痕量有机污染物的富集和分析，且不能真正实现在线取样和在线分析，也不适用于大流量样品，用途较为局限。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效液相色谱在线分析方法，可实现高效液相样品自动预处理及自动进样分析，同时可实现分析结果的实时监测。
本发明是通过以下技术方案实现：
1.设计高效液相在线分析系统，该系统主要由样品预处理系统（1）、高效液相色谱仪（2）、远程电脑（3）、可编程逻辑控制器（4）及触摸屏（5）、交换机（6）构成，样品预处理系统（1）与高效液相色谱仪（2）内的六通阀（24）相连，可实现样品自动取样进样；高效液相色谱仪（2）和触摸屏（5）通过交换机（6）与远程电脑（3）相连；可编程逻辑控制器（4）和触摸屏（5）通过网线（7）连接，样品预处理系统（1）由清洗罐（8）、两通电磁阀（9）、清洗罐三通电磁阀（10）、回收三通电磁阀（16）、进液比例电磁阀（13）、回收比例电磁阀（17）、进液流量变送器（14）、回收流量电磁阀（18）、初滤过滤器（11）、精密过滤器（15）、单向阀（19）、进液口（20）、出液口（21）、液相回收口（22）和预处理系统回收口（23）组成，进液口（20）通过两通电磁阀（9）连接清洗罐三通电磁阀（10），清洗罐三通电磁阀（10）的一个通路连接清洗罐（8），另一个通路连接初滤过滤器（11），初滤过滤器（11）连接蠕动泵（12），蠕动泵（12）的一条支路通过进液比例电磁阀（13）串连接流量变送器（14）、精密过滤器（15）和回收三通电磁阀（16），回收三通电磁阀（16）另外两个支路分别连接单向阀（19）及出液口（21），单向阀（19）的一个支路连接预处理系统回收口（23），另一支路连接比例电磁阀（17）及流量变送器（18），在单向阀（19）与回收三通电磁阀（16）之间连接液相回收口（22），样品预处理系统的出液口（21）和液相回收口（22）连接高效液相色谱仪（2）内的六通阀（24）。预处理系统的出液口（21）连接六通阀（24）的e端口，a端口和d端口连接定量环g，b端口连接高效液相色谱的泵，c端口连接色谱柱，f为废液端口，f连接液相回收口（22）。远程电脑（3）上安装色谱工作站和液相数据管理软件。
2. 将在线样品管线连接样品预处理系统（1）的进液口（20），打开高效液相色谱仪（2）及色谱工作站并使用相应流动相平衡系统，选择进样方式为进样器程序，设置进样器程序：阀旁路——等待0.2 min——进样；选择序列进样，以实现多次进样分析，设置序列和序列参数。
3. 当高效液相色谱仪流动相平衡30 min后压力达到平衡时打开样品预处理系统电源，点击触摸屏（5）进入控制界面，进行运行、清洗和停止预处理，通过样品预处理系统（1）预处理后的样品经蠕动泵由出液口连接高效液相色谱的六通阀（24）的e端口，此时六通阀（24）处于load（取样）状态（图2 B），预处理后的样品连续经过定量环g，多余样品经f端口排出回收。
4. 预处理系统运行10 min达到稳定后在液相色谱仪（2）上开始进样：此时高效液相色谱（2）按照进样器程序进样分析，六通阀（24）切换至inject（进样）状态（图2A），高效液相色谱的泵将流动相连同定量环（g）中样品泵入色谱柱进行分析，而预处理系统处理后的样品从六通阀（f）端口直接连接样品预处理系统液相回收口（22）进行回收。
5. 在开始液相进样分析时打开液相数据管理软件并设置液相数据保存的文件位置及相应色谱参数，启动液相数据管理软件。色谱参数设置包括所需色谱峰的保留时间，采集范围及采集周期。其中，采集范围表示在所设置保留时间前后采集范围内找寻所需的色谱峰，常规设置为30秒，可根据所需分析的不同样品性质差异略作调整；采集周期表示软件读取液相分析结果的时间间隔，常规设置为20秒。软件启动后即可实时读取液相分析结果并做相应处理，然后将处理后结果传输至远程电脑（3）上并显示分析结果及含量曲线，该结果还可同步至触摸屏上实时显示。分析结果除可以实时显示外还可在远程电脑（3）上通过液相数据管理软件按照时间查询历史结果。
6. 当高效液相色谱序列分析结束时，在触摸屏（5）控制界面点击“停止”以停止运行样品预处理系统，关闭液相数据管理系统软件。
7. 另外，分析结束后预处理系统需要清洗，点击触摸屏控制界面上“清洗”按钮可实现系统自动清洗。此时，清洗罐三通电磁阀（10）切换至清洗罐，回收三通电磁阀（16）切换至废液通路。
高效液相色谱仪（2）由色谱工作站控制进样分析以及生成积分结果。液相数据处理软件读取液相积分结果并进行处理，处理后分析结果可在远程电脑上进行实时显示，同时传输到触摸屏上进行同步显示。
本发明的另一个目的是提供所述方法在中药生产过程在线分析中应用。尤其在中药生产过程中有效成分含量或比例的在线分析中的应用。
本发明提供的液相样品预处理系统将液相样品预处理、自动进样以及液相分析结果自动处理和显示三部分集成为液相在线分析系统，能够真正实现在线实时分析。另外，相比上述关于液相在线分析的研究，本发明还具有以下优势：首先，液相预处理系统采用两级过滤并通过比例电磁阀可调节进样流量，可以达到液相色谱样品分析的精度及流速要求，保证了液相色谱分析的稳定性，同时，通过PLC及触摸屏程控系统可以实现液相预处理系统的自动化控制，减少人工取样和预处理的工作量，可以真正实现在线取样、预处理及进样分析，而且优化的人机界面方便进行参数更改设置；第二，本发明通过液相色谱仪本身的进样程序控制自动进样器的六通阀自动切换从而实现进样，无需额外增加六通阀或进样装置；第三，本发明提供开发了液相数据管理系统，可实现液相分析结果的实时读取和分析并存储至远程数据库，同时可实现远程电脑与触摸屏上实时同步显示处理后的含量结果及趋势图等信息。
本发明提供的高效液相在线分析系统可用于中药生产过程的实时质量监测，对保证中药产品质量安全、提高中药质量标准具有极大的促进作用。
本发明具有自动化程度高、操作简单、样品自动预处理和分析、分析结果实时显示、系统可自动清洗等优点，可用于生产过程样品含量及组分比例的在线检测。
附图说明
图1是本发明的结构示意图。
图2是样品预处理系统与高效液相色谱六通阀连接图。
图3是灯盏花乙素标准品液相色谱图。
图4是灯盏花素大孔树脂洗脱过程洗脱液样品液相色谱图。
图5是灯盏花素大孔树脂洗脱过程流出液中灯盏花乙素含量变化曲线。
图6是羟基红花黄色素A对照品液相色谱图。
图7是红花浸提过程提取液样品液相色谱图。
图8是红花浸提过程羟基红花黄色素A含量变化曲线。
具体实施方式
本发明结合附图和实施例作进一步的说明。
实施例1
1. 参见图1，设计高效液相在线分析系统，该系统主要由样品预处理系统（1）、高效液相色谱仪（2）、远程电脑（3）、可编程逻辑控制器（4）及触摸屏（5）、交换机（6）构成，样品预处理系统（1）直接与生产工艺管线相连接，样品预处理系统（1）与高效液相色谱仪（2）相连，可实现样品自动取样进样；高效液相色谱仪（2）、远程电脑（3）和触摸屏（5）通过交换机（6）相连；可编程逻辑控制器（4）和触摸屏（5）通过网线（7）连接。样品预处理系统（1）由清洗罐（8），两通电磁阀（9）、清洗罐三通电磁阀（10）、回收三通电磁阀（16）、进液比例电磁阀（13）、回收比例电磁阀（17）、进液流量变送器（14）、回收流量电磁阀（18）、初滤过滤器（11）、精密过滤器（15），单向阀（19）以及进液口（20）、出液口（21）、液相回收口（22）、预处理系统回收口（23）组成，可实现样品过滤和流量控制，并可实现系统自动清洗。样品经进液口（20）进入预处理系统（1），通过两通电磁阀（9）连接一个清洗罐三通电磁阀（10），清洗罐三通电磁阀（10）的一个通路连接清洗罐（8），另一个通路连接初滤过滤器（11），初滤过滤器（11）连接蠕动泵（12），蠕动泵（12）的一条支路通过进液比例电磁阀（13）连接流量变送器（14）进行流量控制，接着经过一个精密过滤器（15）后连接回收三通电磁阀（16），回收三通电磁阀（16）另外两个支路分别连接单向阀（19）及出液口（21），单向阀（19）连接预处理系统回收口（23），另一支路连接比例电磁阀（17）及流量变送器（18）后与预处理系统回收口（23）相连。样品预处理系统（1）的出液口（21）与高效液相色谱仪（2）内的六通阀（24）连接。六通阀（24）具体连接方式参见图2。出液口（21）连接六通阀（24）的e端口，a端口和d端口连接定量环g，b端口连接高效液相色谱的泵，c端口连接色谱柱，f为废液端口，f连接液相回收口（22）。远程电脑（3）上安装色谱工作站和液相数据管理软件（软件著作权登记号2012SR098059）。
利用本发明在线检测灯盏花素大孔树脂洗脱过程灯盏花乙素含量变化，从而大致判断灯盏花素洗脱接收起点和接收终点。灯盏花素大孔树脂纯化过程参数如下：柱体积（BV）为1 L，以3 BV/h上样，上样体积为2.5 BV，上样结束后用纯水以3 BV/h的流速洗脱。
2. 将在线样品管线连接样品预处理系统（1）的进液口（20），打开高效液相色谱仪（2）及色谱工作站并使用相应流动相平衡系统，选择进样方式为进样器程序，设置进样器程序：阀旁路——等待0.2 min——进样；选择序列进样，以实现多次进样分析，设置序列和序列参数。序列所用色谱条件为：Diamonsil C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm)；甲醇- 0.4%磷酸溶液（v / v, 35 : 65）为流动相；流速1 mL/min；检测波长335 nm；柱温40 ℃；进样量5 μL，运行时间15 min。
3. 当高效液相色谱仪流动相平衡30 min后压力达到平衡，此时打开样品预处理系统电源，在触摸屏（5）上点击“控制界面”按钮进入控制界面，点击“运行”以启动系统。样品预处理系统启动时两通电磁阀（9）开启，蠕动泵（12）开启，调节进液比例电磁阀（13）和回收比例电磁阀（17）至进液流量变送器（14）流量为0.3 L/h，样品经过初滤过滤器（11）和精密过滤器（15）过滤处理后经过出液口（21）与高效液相色谱（2）内的六通阀（24）e端口连接，此时六通阀处于load（取样）状态（图2 B），即，经样品预处理系统预处理后的样品连续经过定量环（g），多余样品经六通阀（24）f端口连接样品预处理系统（1）的液相回收口（22）回收。
4. 样品预处理系统运行10 min达到稳定后在高效液相色谱（2）上开始进样，此时高效液相色谱（2）按照进样器程序进样分析，六通阀（24）切换至inject（进样）状态（图2 A），高效液相色谱（2）的泵将流动相及定量环（g）中样品泵入色谱柱进行分析，而经过样品预处理系统处理后的样品从六通阀（24）的f端口直接连接样品预处理系统的液相回收口（22）进行回收。
5. 在开始液相进样分析时打开远程电脑（3）上的液相数据管理系统软件并设置液相数据保存的文件位置及相应色谱参数，启动液相数据管理软件。色谱参数设置包括所需色谱峰的保留时间，采集范围及采集周期。其中，采集范围表示在所设置保留时间前后采集范围内找寻所需的色谱峰，常规设置为30 s，可根据所需分析的不同样品性质差异略作调整；采集周期表示软件读取液相分析结果的时间间隔，常规设置为20 s。色谱参数设置：按照步骤2中液相色谱条件灯盏花乙素的保留时间约为12 min，因此设置所需色谱峰的保留时间为12 min，采集范围为30 s，采集周期为20 s。软件启动后即可实时读取液相分析结果并做相应处理，然后将处理后结果传输至远程电脑上并显示分析结果及含量曲线等，该结果还可同步至触摸屏上实时显示。此外，分析结果除可以实时显示外还可在远程电脑（3）上通过液相数据管理软件按照时间查询历史结果。
6. 当高效液相色谱序列分析结束时，在触摸屏（5）的控制界面上点击“停止”以停止运行样品预处理系统，关闭液相数据管理系统软件。
7. 另外，分析结束后预处理系统需要清洗，点击触摸屏（5）控制界面上“清洗”按钮可实现系统自动清洗。此时，清洗罐三通电磁阀（10）切换至清洗罐，回收三通电磁阀（16）可切换至废液通路。清洗约10 min后关闭样品预处理系统。
高效液相色谱仪（2）由色谱工作站控制进样分析以及生成积分结果。液相数据处理软件读取液相积分结果并进行处理，处理后分析结果可在远程电脑上进行实时显示，同时传输到触摸屏上进行同步显示。
按照上述灯盏花素液相色谱条件分析得到的灯盏花素标准品液相色谱图具体参见图3，灯盏花素洗脱过程样品色谱图参见图4。液相自动进样分析得到的灯盏花素大孔树脂洗脱过程灯盏花乙素含量变化曲线参见图5。结果表明，通过高效液相色谱在线分析系统实现了灯盏花素大孔树脂洗脱过程含量的在线分析。从图5中可以看到灯盏花素洗脱过程含量变化趋势，即当洗脱进行60 min时灯盏花素含量基本保持恒定，可以判定洗脱基本完成。
实施例2
液相色谱在线分析系统连接方式同实施例1，利用该系统在线检测红花浸提过程羟基红花黄色素A的含量变化。红花浸提过程参数如下：取1 kg红花，加入10 L纯水，常温下浸泡提取。
采用高效液相色谱在线分析方法对红花浸提过程进行在线检测的操作步骤如下所述：
1. 样品预处理系统（1）的进液口（20）连接软管置于提取罐内实时取样，样品预处理系统的出液口（21）与高效液相色谱仪（2）内的六通阀（24）的e端口相连，液相回收口（22）与六通阀（24）的f端口连接。
2. 打开高效液相色谱仪（2），并使用相应流动相平衡系统；同时，进样设置中选择进样方式为进样器程序，设置进样器程序：阀旁路——等待0.2 min——进样；选择序列进样以实现多次进样分析，根据设置序列和序列参数。序列所用色谱条件为：Diamonsil C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm)；甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（v/v, 26:2:72）为流动相；流速0.7 mL/min；检测波长403 nm；柱温25 ℃；进样量10 μL。
3. 当高效液相色谱仪流动相平衡30 min后压力达到平衡，此时打开样品预处理系统电源，在触摸屏（5）上点击“控制界面”按钮进入控制界面，点击“运行”以启动系统。样品预处理系统启动时两通电磁阀（9）开启，蠕动泵（12）开启，调节进液比例电磁阀（13）和回收比例电磁阀（17）至进液流量变送器（14）流量为0.3 L/h，样品经过初滤过滤器（11）和精密过滤器（15）过滤处理后经过出液口（21）与高效液相色谱（2）内的六通阀（24）连接，此时六通阀处于load（取样）状态（图2 B），即，经样品预处理系统预处理后的样品连续经过定量环g，多余样品经六通阀f端口连接样品预处理系统的液相回收口（22）回收。
4. 样品预处理系统运行10 min达到稳定后在高效液相色谱工作站上开始进样，此时高效液相色谱仪按照进样器程序进样分析，六通阀切换至inject（进样）状态（图2 A），高效液相色谱的泵将流动相及定量环g中样品泵入色谱柱进行分析，而经过样品预处理系统处理后的样品从六通阀f端口直接连接样品预处理系统的液相回收口（22）进行回收。
5. 在开始液相进样分析时打开远程电脑（3）上的液相数据管理系统软件并设置液相数据保存的文件位置及相应色谱参数，启动软件。色谱参数设置：按照（2）中液相色谱条件得到羟基红花黄色素A的保留时间约为8.8 min，因此设置所需色谱峰的保留时间为8.8 min，采集范围为30s，采集周期为20 s。软件启动后即可实时读取液相分析结果并做相应处理，然后将处理后结果传输至远程电脑上并显示分析结果及含量曲线等，该结果还可同步至触摸屏上实时显示。此外，还可在远程电脑（3）上通过液相数据管理软件按照时间查询历史结果。
6. 当高效液相色谱序列分析结束时，在触摸屏（5）的控制界面上点击“停止”以停止运行预处理系统，关闭液相数据管理系统软件。
7. 分析结束后预处理系统需要清洗，点击触摸屏控制界面上“清洗”按钮可实现系统自动清洗。此时，清洗罐三通电磁阀（10）切换至清洗罐，回收三通电磁阀（16）可切换至废液通路。清洗约10 min后关闭样品预处理系统。
按照上述红花色谱条件分析得到的羟基红花黄色素A（羟A）对照品液相色谱图具体参见图6，红花浸提过程样品色谱图参见图7。液相自动进样分析得到的红花浸提过程羟A的含量变化曲线参见图8。结果表明，通过本发明提供的高效液相色谱在线分析方法可以实现红花浸提过程羟基红花黄色素含量的在线分析。
Claims (5)
1.一种高效液相色谱在线分析方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
（1）设计高效液相在线分析系统，该系统主要由样品预处理系统（1）、高效液相色谱仪（2）、远程电脑（3）、可编程逻辑控制器（4）及触摸屏（5）、交换机（6）构成，样品预处理系统（1）与高效液相色谱仪（2）内的六通阀（24）相连，高效液相色谱仪（2）和触摸屏（5）通过交换机（6）与远程电脑（3）相连，可编程逻辑控制器（4）和触摸屏（5）通过网线（7）连接，样品预处理系统（1）由清洗罐（8）、两通电磁阀（9）、清洗罐三通电磁阀（10）、回收三通电磁阀（16）、进液比例电磁阀（13）、回收比例电磁阀（17）、进液流量变送器（14）、回收流量电磁阀（18）、初滤过滤器（11）、精密过滤器（15）、单向阀（19）、进液口（20）、出液口（21）、液相回收口（22）和预处理系统回收口（23）组成，进液口（20）通过两通电磁阀（9）连接清洗罐三通电磁阀（10），清洗罐三通电磁阀（10）的一个通路连接清洗罐（8），另一个通路连接初滤过滤器（11），初滤过滤器（11）连接蠕动泵（12），蠕动泵（12）的一条支路通过进液比例电磁阀（13）串连接流量变送器（14）、精密过滤器（15）和回收三通电磁阀（16），回收三通电磁阀（16）另外两个支路分别连接单向阀（19）及出液口（21），单向阀（19）的一个支路连接预处理系统回收口（23），另一支路连接比例电磁阀（17）及流量变送器（18），在单向阀（19）与回收三通电磁阀（16）之间连接液相回收口（22），样品预处理系统的出液口（21）连接六通阀（24）的e端口，液相回收口（22）连接六通阀（24）的f端口，远程电脑（3）上安装色谱工作站和液相数据管理软件；
（2）将在线样品管线连接样品预处理系统（1）的进液口（20），打开高效液相色谱仪（2）并使用相应流动相平衡系统，选择进样方式为进样器程序，设置进样器程序：阀旁路——等待0.2 min——进样；选择序列进样，设置序列和序列参数；
（3）当高效液相色谱仪流动相平衡30 min后压力达到平衡时打开样品预处理系统电源，点击触摸屏（5）进入控制界面，进行运行、清洗和停止预处理，通过样品预处理系统（1）预处理后的样品经蠕动泵（12）由出液口（21）连接六通阀（24）的（e）端口，此时六通阀（24）处于取样状态，预处理后的样品连续经过定量环（g），多余样品经（f）端口排出回收；
（4）预处理系统（1）运行10 min达到稳定后在液相色谱仪（2）上开始进样，此时高效液相色谱（2）按照进样器程序进样分析，六通阀（24）切换至进样状态，高效液相色谱的泵将流动相连同定量环（g）中样品泵入色谱柱进行分析，而预处理系统处理后的样品从六通阀（f）端口直接连接样品预处理系统液相回收口（22）进行回收；
（5）在开始液相进样分析时打开液相数据管理软件并设置液相数据保存的文件位置及相应色谱参数，启动液相数据管理软件，色谱参数设置包括所需色谱峰的保留时间，采集范围及采集周期，其中，采集范围设置为30 秒，根据所需分析的不同样品性质差异作调整；采集周期设置为20 秒，软件启动后即可实时读取液相分析结果并做相应处理，然后将处理后结果传输至远程电脑（3）上并显示分析结果及含量曲线，该结果还可同步至触摸屏上实时显示；
（6）当高效液相色谱序列分析结束时，在触摸屏（5）控制界面点击“停止”以停止运行样品预处理系统，关闭液相数据管理系统软件。
2.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱在线分析方法，其特征在于，六通阀（24）的（a）端口和（d）端口连接定量环（g），（b）端口连接高效液相色谱的泵，（c）端口连接色谱柱，（f）为废液端口，连接液相回收口（22）。
3.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱在线分析方法，其特征在于，步骤（5）中分析结果除可以实时显示外还可在远程电脑（3）上通过液相数据管理软件按照时间查询历史结果。
4.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱在线分析方法，其特征在于，步骤（6）后，分析结束后预处理系统需要清洗，点击触摸屏控制界面上“清洗”按钮进行系统自动清洗，此时，清洗罐三通电磁阀（10）切换至清洗罐，回收三通电磁阀（16）切换至废液通路。
5.根据权利要求1所述的一种高效液相在线分析方法在中药生产过程中在线分析中的应用，其特征在于，在中药生产过程中有效成分含量或比例的在线分析中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310107475.6A CN103235074B (zh) | 2013-03-30 | 2013-03-30 | 一种高效液相色谱在线分析方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310107475.6A CN103235074B (zh) | 2013-03-30 | 2013-03-30 | 一种高效液相色谱在线分析方法及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103235074A true CN103235074A (zh) | 2013-08-07 |
| CN103235074B CN103235074B (zh) | 2014-10-29 |
Family
ID=48883125
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310107475.6A Expired - Fee Related CN103235074B (zh) | 2013-03-30 | 2013-03-30 | 一种高效液相色谱在线分析方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103235074B (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103558323A (zh) * | 2013-09-29 | 2014-02-05 | 山东百川同创能源有限公司 | 微型流化床裂解反应分析装置及利用其对煤焦油进行裂解反应分析的方法 |
| CN105707146A (zh) * | 2014-12-01 | 2016-06-29 | 罗国友 | 一种用于改良茄瓜的液体及其制备方法 |
| CN107796895A (zh) * | 2017-09-21 | 2018-03-13 | 广东东阳光药业有限公司 | 鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法及应用 |
| CN108845056A (zh) * | 2018-08-02 | 2018-11-20 | 山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 | 一种基于流路切换的黄曲霉毒素在线自动前处理装置 |
| CN110095549A (zh) * | 2019-06-12 | 2019-08-06 | 吉林省产品质量监督检验院(吉林省农产品认证中心) | 一种谷物及其制品中黄曲霉毒素的检测装置及方法 |
| CN110375646A (zh) * | 2019-07-18 | 2019-10-25 | 北京壬工智能科技有限公司 | 一种对物料进行盘点的系统及方法 |
| CN112630318A (zh) * | 2020-11-23 | 2021-04-09 | 江苏同济分析仪器有限公司 | 一种液相色谱仪的在线清洗泵 |
| CN112630332A (zh) * | 2020-12-14 | 2021-04-09 | 安徽标王农牧有限公司 | 一种基于液相色谱的胚胎蛋分离纯化系统 |
| CN117130297A (zh) * | 2023-10-25 | 2023-11-28 | 北京豪思生物科技股份有限公司 | 一种液相色谱仪的上位机控制方法、装置及设备 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101113974A (zh) * | 2007-09-04 | 2008-01-30 | 上海吴泾化工有限公司 | 在线色谱分析的液相介质预处理装置和使用方法及其应用 |
| US20090150130A1 (en) * | 2007-12-04 | 2009-06-11 | Ludwig Lester F | Software systems for development, control, programming, simulation, and emulation of fixed and reconfigurable lab-on-a-chip devices |
| CN101692094A (zh) * | 2009-08-18 | 2010-04-07 | 刘维甲 | 一种物质分析方法和仪器系统 |
| CN102200507A (zh) * | 2011-04-14 | 2011-09-28 | 浙江大学 | 一种近红外在线检测预处理系统及其应用 |
| CN102252992A (zh) * | 2011-04-28 | 2011-11-23 | 天津红日药业股份有限公司 | 一种对中药提取过程进行近红外在线检测方法 |
| CN202330071U (zh) * | 2011-12-05 | 2012-07-11 | 北京昊诚油气科技有限公司 | 一种高压在线取样系统 |
-
2013
- 2013-03-30 CN CN201310107475.6A patent/CN103235074B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101113974A (zh) * | 2007-09-04 | 2008-01-30 | 上海吴泾化工有限公司 | 在线色谱分析的液相介质预处理装置和使用方法及其应用 |
| US20090150130A1 (en) * | 2007-12-04 | 2009-06-11 | Ludwig Lester F | Software systems for development, control, programming, simulation, and emulation of fixed and reconfigurable lab-on-a-chip devices |
| CN101692094A (zh) * | 2009-08-18 | 2010-04-07 | 刘维甲 | 一种物质分析方法和仪器系统 |
| CN102200507A (zh) * | 2011-04-14 | 2011-09-28 | 浙江大学 | 一种近红外在线检测预处理系统及其应用 |
| CN102252992A (zh) * | 2011-04-28 | 2011-11-23 | 天津红日药业股份有限公司 | 一种对中药提取过程进行近红外在线检测方法 |
| CN202330071U (zh) * | 2011-12-05 | 2012-07-11 | 北京昊诚油气科技有限公司 | 一种高压在线取样系统 |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103558323A (zh) * | 2013-09-29 | 2014-02-05 | 山东百川同创能源有限公司 | 微型流化床裂解反应分析装置及利用其对煤焦油进行裂解反应分析的方法 |
| CN105707146A (zh) * | 2014-12-01 | 2016-06-29 | 罗国友 | 一种用于改良茄瓜的液体及其制备方法 |
| CN107796895A (zh) * | 2017-09-21 | 2018-03-13 | 广东东阳光药业有限公司 | 鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法及应用 |
| CN107796895B (zh) * | 2017-09-21 | 2020-12-18 | 东莞市东阳光冬虫夏草研发有限公司 | 鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法及应用 |
| CN108845056A (zh) * | 2018-08-02 | 2018-11-20 | 山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 | 一种基于流路切换的黄曲霉毒素在线自动前处理装置 |
| CN110095549A (zh) * | 2019-06-12 | 2019-08-06 | 吉林省产品质量监督检验院(吉林省农产品认证中心) | 一种谷物及其制品中黄曲霉毒素的检测装置及方法 |
| CN110375646A (zh) * | 2019-07-18 | 2019-10-25 | 北京壬工智能科技有限公司 | 一种对物料进行盘点的系统及方法 |
| CN112630318A (zh) * | 2020-11-23 | 2021-04-09 | 江苏同济分析仪器有限公司 | 一种液相色谱仪的在线清洗泵 |
| CN112630332A (zh) * | 2020-12-14 | 2021-04-09 | 安徽标王农牧有限公司 | 一种基于液相色谱的胚胎蛋分离纯化系统 |
| CN117130297A (zh) * | 2023-10-25 | 2023-11-28 | 北京豪思生物科技股份有限公司 | 一种液相色谱仪的上位机控制方法、装置及设备 |
| CN117130297B (zh) * | 2023-10-25 | 2023-12-29 | 北京豪思生物科技股份有限公司 | 一种液相色谱仪的上位机控制方法、装置及设备 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103235074B (zh) | 2014-10-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103235074B (zh) | 一种高效液相色谱在线分析方法及应用 | |
| CN103940941B (zh) | 自动前处理-超高效液相色谱/质谱在线分析系统 | |
| CN102818871B (zh) | 液相色谱-气相色谱/质谱在线联用接口装置及方法 | |
| CN103822999B (zh) | 一种全自动QuEChERS前处理一体机及前处理方法 | |
| CN102353724B (zh) | 有机油中微量溶解气体在线检测系统及方法 | |
| CN204116276U (zh) | 全自动毛细管电泳仪的液体输送系统 | |
| CN105606753B (zh) | 场辅助萃取-分离富集-色谱分析在线联用设备 | |
| CN203954732U (zh) | 一种多通道固相萃取装置 | |
| CN102262060A (zh) | 重金属元素在线富集原子吸收光谱分析方法及其装置 | |
| CN103505907B (zh) | 一种流动注射在线固相微萃取方法及其装置 | |
| CN101424669B (zh) | 全脱－轻烃自动进样系统 | |
| CN1936572A (zh) | 一种超临界流体萃取－高效液相色谱联用系统 | |
| CN203732518U (zh) | 高压液相反应产物在线气相色谱分析装置 | |
| CN102879257B (zh) | 一种全自动快速溶剂萃取-固相萃取联用仪及其萃取方法 | |
| CN102788722B (zh) | 食品样品有机前处理系统 | |
| Quintana et al. | Online coupling of bead injection lab-on-valve analysis to gas chromatography: application to the determination of trace levels of polychlorinated biphenyls in solid waste leachates | |
| CN109682920A (zh) | 一种离子色谱在线标准曲线制作的系统及方法 | |
| WO2021249347A1 (zh) | 一种与液相色谱仪配套使用的静态进样和流分收集装置 | |
| CN205263037U (zh) | 元素形态在线检测装置 | |
| CN202315405U (zh) | 基于pid控制的药液提取自动控制系统 | |
| CN110261510A (zh) | 一种用于水中挥发性有机物检测的在线自动进样装置 | |
| CN1828290A (zh) | 固相萃取－液相色谱在线联用分析水中痕量有机物的方法 | |
| CN202330372U (zh) | 一种在线检测石油钻井溶液的离子色谱系统 | |
| CN217981369U (zh) | 一种二维液相色谱分离系统 | |
| CN208636264U (zh) | 一种基于流路切换的黄曲霉毒素在线自动前处理装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20141029 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |