CN103212113A - 万古霉素阳离子脂质体复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖/魔芋葡苷聚糖支架的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药品技术领域，特别是涉及一种万古霉素阳离子脂质体复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖/魔芋葡苷聚糖支架的制备方法；本发明的万古霉素阳离子脂质体复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖/魔芋葡苷聚糖支架的制备方法，该方法可以达到更好的抑菌效果，可以提高骨髓炎的治愈率；包括将壳聚糖溶于3.375g/ml的柠檬酸溶液中，形成壳聚糖/柠檬酸混合液后将磷酸与壳聚糖柠檬酸混合液共同溶于水，配置700ml的溶液。

Description

万古霉素阳离子脂质体复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖/魔芋葡苷聚糖支架的制备方法

技术领域

本发明涉及药品技术领域，特别是涉及一种万古霉素阳离子脂质体复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖/魔芋葡苷聚糖支架的制备方法。

背景技术

现代生活中交通伤和高能量损伤比较常见，此类损伤的骨折粉碎程度和周围软组织破坏范围更为严重复杂，骨髓炎不仅发生率增加，而且多伴有骨缺损，治疗难度更大。另一方面，金属物植入骨内如内固定、人工关节等感染导致慢性骨髓炎也十分常见。因此，慢性骨髓炎的防治仍是临床工作中比较棘手的难题之一。

生物膜细菌是由粘附于实体表面的细菌细胞和细菌自身分泌的聚合性粘多糖包裹细菌所组成的结构性细菌群落。Conterton等人发现生物膜细菌是慢性顽固性细菌感染的主要原因，并提出骨髓炎中形成生物膜的细菌主要为阳性球菌。由于生物膜对细菌具有很强的保护作用，研究表明，生物膜细菌对抗生素的抗药性比浮游的非生物膜细菌强100～1000倍，因此，一旦细菌生物膜在死骨、内固定、人工关节表面滋生，将导致慢性骨髓炎的反复发作，需要手术清除死骨及周围感染组织或取出植入物，并于术后进行长时间抗感染治疗。

脂质体是磷脂分散在水中定向排列而形成的具有单室或多室膜结构的囊泡，它可以包封脂溶性或水溶性药物，其结构类似于生物膜。脂质体可降解，且基本无毒，以脂质体为载体制成的脂质体抗生素具有良好的靶向细菌生物膜作用，协助抗生素穿透生物膜，从而增强抗生素的活性。研究表明：以脂质体为载体制成的脂质体抗生素具有良好的靶向细菌生物膜作用，显著增强抗生素的活性。同时，脂质体还可缓和高浓度抗生素毒性，研究证实高浓度抗生素可抑制内皮细胞及成纤维细胞生长。因此高浓度抗生素可影响骨折愈合初期骨折断端肉芽组织的形成，延长骨折愈合时间。脂质体还具有延长药物疗效，避免耐药性和改变给药途径等优点。目前，脂质体抗生素系统的应用已十分广泛。Ashraf等人研究证实静脉注射脂质体抗生素可有效治疗兔慢性骨髓炎。但是脂质体本身具有不稳定性和聚集融合性等缺点。并且人体网状内皮系统中的肝脏枯否细胞及脾脏巨噬细胞对静脉注射的脂质体抗生素具有很强的清除作用，大大降低了抗生素到达骨组织感染灶的浓度。

抗生素缓释系统的应用曾使大量慢性感染性骨缺损患者达到临床治愈，而且选择合适的骨替代材料作为载体不仅可以治疗感染，还可促进骨缺损的愈合。因此，将脂质体抗生素负载于骨替代材料中，手术清创后植入局部一方面可抗细菌生物膜感染，另一方面还可治疗骨缺损，从而为细菌生物膜感染的防止提供新的思路。

抗生素复合支架在局部治疗感染，特别是深部骨感染方面具有显著疗效。但是，在诸如骨髓炎等顽固性感染病例中，常常由格兰氏-阳性球菌造成并容易形成具有耐药能力的生物膜，抗生素复合支架的疗效受到了限制。国内外研究证实，脂质体对生物膜具有很强的吸附亲和力，脂质体比同等含量的游离药对金黄色葡萄球菌生物膜的生长具有更强的抑制作用。有理由认为，抗生素阳离子脂质体复合的支架，为治疗深部顽固性骨感染提供了一条崭新的思路。但是在目前常用的支架中，例如玻璃珠或骨陶瓷等，他们的制备过程常常需要很高的温度或者热压烧结；而另外一些如丙烯酸骨水泥则需要用到有机溶剂，这样使药物或脂质体与其复合，只能在空白支架制成后采用浸泡或真空负压法，容易造成脂质体结构的破坏并且不能保证脂质体在其中能够均匀分布。

纳米羟基磷灰石/壳聚糖/魔芋葡苷聚糖(Nano-hydroxyapatite/chitosan/konjac glucomannan，n-HA/CS/KGM)支架，其内在的诸如良好的生物相容性和生物活性等骨生物特性，使其特别适合于骨科应用，更为重要的是，他的制备可以在室温下进行，这样脂质体成分可以在其制备过程中直接加入并能保护脂质体结构，也能使脂质体在该支架的均匀分布。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种万古霉素阳离子脂质体复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖/魔芋葡苷聚糖支架的制备方法，该方法可以达到更好的抑菌效果，可以提高骨髓炎的治愈率。

本发明的万古霉素阳离子脂质体复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖/魔芋葡苷聚糖支架的制备方法，其特征在于，包括

1)将壳聚糖溶于3.375g/ml的柠檬酸溶液中，形成壳聚糖/柠檬酸混合液；

2)将磷酸与壳聚糖柠檬酸混合液共同溶于水，配置700ml的溶液，记为溶液A；

3)将氢氧化钙溶于水，加入氨水，是的溶液中PH值＝10±0.05；记为溶液B；

4)控制低加速度与搅拌速率，将溶液A和溶液B以汞滴定法反应；

5)将反应产物陈化7天后冷冻干燥即可得到水解动物蛋白/壳聚糖复合粉体；

6)将万古霉素阳离子脂质体溶液加入水解动物蛋白/壳聚糖复合粉体，磁力搅拌至完全均匀；

7)在步骤6)的溶液中加入魔芋葡苷聚糖，使其质量含量为34.5％±0.03％，同时继续磁力搅拌，直至搅拌自行终止；

8)将搅拌均匀的溶胶注入模具中；

9)将步骤8)中的样品与-50℃和7.9Pa真空下冷冻干燥至完全干燥；将支架取出，放置于4℃阴暗无菌环境保存。

与现有技术相比本发明的有益效果为：通过上述步骤1)至9)的操作，可以作为新的载药体在临床抗生物膜细菌感染上起到良好作用；达到更好的抑菌效果，可以提高骨髓炎的治愈率。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

本发明的万古霉素阳离子脂质体复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖/魔芋葡苷聚糖支架的制备方法，其特征在于，包括

1)将壳聚糖溶于3.375g/ml的柠檬酸溶液中，形成壳聚糖/柠檬酸混合液；

2)将磷酸与壳聚糖柠檬酸混合液共同溶于水，配置700ml的溶液，记为溶液A；

3)将氢氧化钙溶于水，加入氨水，是的溶液中PH值＝10±0.05；记为溶液B；

4)控制低加速度与搅拌速率，将溶液A和溶液B以汞滴定法反应；

5)将反应产物陈化7天后冷冻干燥即可得到水解动物蛋白/壳聚糖复合粉体；

6)将万古霉素阳离子脂质体溶液加入水解动物蛋白/壳聚糖复合粉体，磁力搅拌至完全均匀；

7)在步骤6)的溶液中加入魔芋葡苷聚糖，使其质量含量为34.5％±0.03％，同时继续磁力搅拌，直至搅拌自行终止；

8)将搅拌均匀的溶胶注入模具中；

9)将步骤8)中的样品与-50℃和7.9Pa真空下冷冻干燥至完全干燥；将支架取出，放置于4℃阴暗无菌环境保存。

通过上述步骤1)至9)的操作，可以作为新的载药体在临床抗生物膜细菌感染上起到良好作用；达到更好的抑菌效果，可以提高骨髓炎的治愈率。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种万古霉素阳离子脂质体复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖/魔芋葡苷聚糖支架的制备方法，其特征在于，包括

1)将壳聚糖溶于3.375g/ml的柠檬酸溶液中，形成壳聚糖/柠檬酸混合液；

2)将磷酸与壳聚糖柠檬酸混合液共同溶于水，配置700ml的溶液，记为溶液A；

3)将氢氧化钙溶于水，加入氨水，是的溶液中PH值＝10±0.05；记为溶液B；

4)控制低加速度与搅拌速率，将溶液A和溶液B以汞滴定法反应；

5)将反应产物陈化7天后冷冻干燥即可得到水解动物蛋白/壳聚糖复合粉体；

6)将万古霉素阳离子脂质体溶液加入水解动物蛋白/壳聚糖复合粉体，磁力搅拌至完全均匀；

7)在步骤6)的溶液中加入魔芋葡苷聚糖，使其质量含量为34.5％±0.03％，同时继续磁力搅拌，直至搅拌自行终止；

8)将搅拌均匀的溶胶注入模具中；

9)将步骤8)中的样品与-50℃和7.9Pa真空下冷冻干燥至完全干燥；将支架取出，放置于4℃阴暗无菌环境保存。