CN103211291B - 一种再造烟叶的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：(1)将烟梗、烟末和水混合均匀，后加入细胞破壁酶和助剂I进行酶解反应；(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后进行过滤，得到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到浓缩液；(3)向浓缩液中加入混合菌种和助剂II，进行发酵及酶解反应，得到烟草提取液；(4)向步骤(2)的滤渣中加入浆料，混合均匀，加入过氧化氢进行氧化分解反应，后加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢，得到混合浆料；及(5)将混合浆料制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。上述再造烟叶的制备方法，采用混合菌种在浓缩液中发酵，能够减少木质素的含量，提高吸食效果。
Description
技术领域
本发明涉及烟草加工工艺，特别是涉及一种再造烟叶的制备方法。
背景技术
我国烟草种植面积2000万亩，每年烟叶产量450-500万吨，均居世界首位。国内外种植的烟草主要用作卷烟，卷烟工业多取优质烟叶为原料，其中约有近25％的烟叶、烟末等下脚料被废弃，如弃置或处理不当将造成环境的污染。对这些烟草废弃物的“资源化”利用，不仅可以获得各种有用的产品，为企业挖潜改造提供了可持续发展的契机，也可以减轻烟草废弃物带来的土质和土壤的污染，避免有害成分对地下水的污染。因此，加强烟草废弃物的回收利用不仅可以使这部分废物变为资源，而且能提高经济收入，符合国家对固体废弃物的“减量化”、“资源化”和“无害化”的方针。
国内对再造烟叶的处理方法主要有：1、物理处理方法，主要用微波、蒸汽爆破等方法处理。物理处理方法处理强度大，对烟梗中致香成分损失较大，影响卷烟的吸食品质，同时并不能改变其固有的微观结构，很难使得纳米材料有效吸附。2、化学处理方法，主要用稀酸、碱、臭氧、有机溶剂和氧化等处理，化学处理方法在生产中存在化学物质后期难以处理的问题。3、生物处理方法，生物处理主要通过生物酶或菌对烟梗的细胞壁成分进行降解，单用生物酶处理烟梗生产再造烟叶，由于植物细胞壁是植物的天然保护屏障，往往用酶处理不彻底，只能降解部分细胞壁成分；单用菌处理时间较长会造成细胞壁彻底崩塌，影响再造烟叶的品质，时间短了又不能达到目的。
发明内容
基于此，有必要提供一种卷烟吸食品质较好的再造烟叶的制备方法。
一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将烟梗、烟末和水混合均匀，后加入细胞破壁酶和助剂I进行酶解反应，其中，烟梗、烟末、水的质量比为烟梗∶烟末∶水＝2～5∶1～3∶18～48，所述细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：10～30％的阿拉伯呋喃糖苷酶、20～40％的氨基肽酶、20～40％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、10～30％的转化酶，助剂I由以下质量百分比的成分组成：20～40％聚甘油聚亚油酸酯、20～40％的海藻酸钠、10～30％的硬脂酸钾及10～30％的单宁酸；
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后进行过滤，得到滤液和滤渣，将所述滤液进行浓缩，得到浓缩液；
(3)向所述浓缩液中加入混合菌种和助剂II，进行发酵及酶解反应，后高温灭菌，得到烟草提取液，其中，助剂II由以下质量百分比的成分组成：5～15％的苹果酸、20～40％的磷酸二氢钾、30～60％的硫酸铵、10～30％的大豆油，所述混合菌种由以下质量百分比的成分组成：60～80％的孤独腐质霉、20～40％的嗜热毁丝霉；
(4)向步骤(2)的所述滤渣中加入浆料，混合均匀，后加入过氧化氢进行氧化分解反应，之后加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢，得到混合浆料，其中，所述浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆、木浆中的一种或几种的混合物；及
(5)采用造纸法，将所述混合浆料制成薄片纸基，后将所述烟草提取液涂布到所述薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
在其中一个实施例中，所述细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。
在其中一个实施例中，所述助剂I由以下质量百分比的成分组成：30％的聚甘油聚亚油酸酯、30％的海藻酸钠、20％的硬脂酸钾及20％的单宁酸。
在其中一个实施例中，步骤(1)中，所述细胞破壁酶的质量为烟梗和烟末总量干重的0.5～2‰，烟梗的长度为20～25mm；助剂I的质量为烟梗和烟末总量的0.2～0.6‰；酶解反应的条件为：pH＝4.0～7.0、酶解温度为20～60℃、酶解时间为0.5～2h。
在其中一个实施例中，步骤(2)中，加热温度为80～100℃，提取时间为0.5～2h。
在其中一个实施例中，步骤(2)中，用滤膜进行过滤，所述滤膜的孔径为1μm～3μm，浓缩液的密度为1.15～1.25g/mL。
在其中一个实施例中，步骤(3)中，所述混合菌种的质量为所述浓缩液中固形物干重的0.5～3％，所述助剂II的质量为所述浓缩液中固形物干重的0.1～0.6％；发酵温度为20～45℃，发酵时间为6～20h；高温灭菌的条件为：加热温度为90～100℃，加热时间为0.1～0.3h。
在其中一个实施例中，助剂II由以下质量百分比的成分组成：10％的苹果酸、30％的磷酸二氢钾、40％的硫酸铵、20％的大豆油。
在其中一个实施例中，步骤(4)中，过氧化氢的质量为所述浆料的1～8％；过氧化氢酶的质量为所述浆料的0.1～0.5‰；氧化分解反应的作用时间为1～2h，作用温度为20～40℃；加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢的反应条件为：pH＝4.0～7.0、反应时间为0.5～2h。
在其中一个实施例中，所述浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆和木浆的混合物，其中，竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％。
上述再造烟叶的制备方法，采用混合菌种在浓缩液中发酵，将烟梗中的木质素作为酶的诱导底物，产生的木质素酶对烟梗中的木质素降解针对性强，降解效率高，减少了烟梗中木质素的含量，同时，过氧化氢可氧化菌种发酵过程没有降解完全的木质素，进一步降低木质素的含量，提高吸食效果。
上述再造烟叶的制备方法，采用复合酶处理结合微生物发酵的工艺，生产条件温和，效率高，污染小，所用酶、菌种、助剂均为食品行业常用的商品化菌种，纯度高、价格低、易于得到且发酵条件容易掌握和控制；利用本发明得到的烟烟梗提取物和纸基制造再造烟叶，具有优良的稳定性和可重复性，且具有更加明显的增香效果和独特的风格特征。该法生产工艺简单，生产成本低，易于实现工业化生产。
上述再造烟叶的制备方法，采用细胞破壁酶和助剂I起到很好的协同增效作用，第一、助剂I可作为表面活性剂，降低溶液表面张力，使细胞破壁酶能很好的与底物接触；第二、助剂I具有渗透剂的功能，可协助酶快速进入烟梗内部结构，对降解起到了很好的协同增效作用；第三、添加助剂I可大大减少细胞破壁酶的用量，在酶活一定的情况下，加如助剂I减少一半酶的用量，可降低至少三分之一的生产成本。
附图说明
图1为一实施方式的再造烟叶的制备方法流程图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
请参阅图1，一实施方式的再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
步骤S100、将烟梗、烟末和水混合均匀，后加入细胞破壁酶和助剂I进行酶解反应。其中，烟梗、烟末、水的质量比为烟梗∶烟末∶水＝2～5∶1～3∶18～48；细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：10～30％的阿拉伯呋喃糖苷酶、20～40％的氨基肽酶、20～40％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、10～30％的转化酶；助剂I由以下质量百分比的成分组成：20～40％聚甘油聚亚油酸酯、20～40％的海藻酸钠、10～30％的硬脂酸钾及10～30％的单宁酸。
其中，细胞破壁酶的质量为烟梗和烟末总量干重的0.5～2‰，烟梗的长度为20～25mm；助剂I的质量为烟梗和烟末总量干重的0.2～0.6‰；酶解反应的条件为：pH＝4.0～7.0、酶解温度为20～60℃、酶解时间为0.5～2h。
优选的，细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。
助剂I由以下质量百分比的成分组成：30％的聚甘油聚亚油酸酯、30％的海藻酸钠、20％的硬脂酸钾及20％的单宁酸。助剂I可以达到以下有益效果：①作为食品级分散剂和渗透剂，助剂I可快速与细胞破壁酶嵌合后作用于烟梗的细胞壁，破坏细胞壁的构成，分解催化细胞壁成分为单独的纤维素、木质素、半纤维素、果胶和蛋白质，经实验室验证，加助剂I后细胞破壁酶的作用速度比不加快5-10倍，而且作用彻底；②助剂I本身也是酶的保护剂，可以使细胞破壁酶加入到烟梗水溶液中快速形成另一个稳定的体系，大大降低酶的失活时间；③所选用的硬脂酸钾，其钾离子有利于大幅提升再造烟叶的品质；④所选用的单宁酸本身为一种风味物质，而且单宁酸对蛋白、果胶、淀粉、多聚糖等有很强的絮凝作用。
步骤S200、将步骤S100的混合物进行加热提取并灭酶，后进行过滤，得到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到浓缩液。
其中，加热温度为80～100℃，提取时间为0.5～2h。加热提取的过程也是灭酶的过程。
用滤膜进行过滤，所述滤膜的孔径为1μm～3μm，浓缩液的密度为1.15～1.25g/mL。
步骤S300、向浓缩液中加入混合菌种和助剂II，进行发酵及酶解反应，后高温灭菌，得到烟草提取液，其中，助剂II由以下质量百分比的成分组成：5～15％的苹果酸、20～40％的磷酸二氢钾、30～60％的硫酸铵、10～30％的大豆油，混合菌种由以下质量百分比的成分组成：60～80％的孤独腐质霉、20～40％的嗜热毁丝霉。
其中，混合菌种的质量为浓缩液中固形物干重的0.5～3％。助剂II的质量为浓缩液中固形物干重的0.1～0.6％。发酵温度为20～45℃，发酵时间为6～20h。高温灭菌的条件为：加热温度为90～100℃，加热时间为0.1～0.3h。
优选的，助剂II由以下质量百分比的成分组成：10％的苹果酸、30％的磷酸二氢钾、40％的硫酸铵、20％的大豆油。
孤独腐质霉和嗜热毁丝霉混合菌种，这两种菌种均购自北海群林生物工程有限公司。孤独腐质霉和嗜热毁丝霉混合菌种用于烟草的发酵，可以达到以下有益效果：①两种菌是高产木质素酶的菌株，由于本身烟梗中木质素含量较高，烟梗木质素作为两种菌的诱导剂，可高产木质素酶用于降解木质素。
助剂II中的苹果酸、磷酸二氢钾、硫酸铵、大豆油均为发酵酶常用的发酵助剂，①既可增加外加菌的营养条件，又可使烟梗本身的内源菌快速繁殖，自然界的植物都是相生相克，既然烟梗中存在木质素，那么烟梗本身就带有降解木质素的菌，只是降解速度和水平较低，外加营养物质会加快木质素酶的产生，对木质素有针对性的降解；②加入的硫酸铵和大豆油既可提供发酵所需的氮源和碳源，多余的硫酸铵和大豆油又可在后续的加热中发生美拉德反应，起到增香的目的；③选用的磷酸二氢钾中的钾离子也有利于大幅提升再造烟叶的品质。
步骤S400、向步骤S200的滤渣中加入浆料，混合均匀，后加入过氧化氢进行氧化分解反应，之后加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢，得到混合浆料，其中，浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆、木浆中的一种或几种的混合物。
其中，过氧化氢的质量为浆料的1～8％；过氧化氢酶的质量为浆料的0.1～0.5％。氧化分解反应的作用时间为1～2h，作用温度为20～40℃。
加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢的反应条件为：pH＝4.0～7.0、反应时间为0.5～2h。
浆料的质量为滤渣的30～80％。优选的，浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆和木浆的混合物，其中，竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％；或竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％；或竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％；或竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％。浆料的作用为：一方面可补充烟梗本身的纤维含量低，造成的造纸后纸基韧性和强度不够；另一方面竹浆、龙须草浆本身有其天然的香味，可掩盖再造烟叶中的刺激和杂气，有效提升再造烟叶的品质。
过氧化氢酶可将上步反应完成后剩余的过氧化氢进行有效分解，终止过氧化氧的过度作用。
步骤S500、采用造纸法，将混合浆料制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
上述再造烟叶的制备方法，采用混合菌种在浓缩液中发酵，能够产生用于降解木质素的高产木质素酶，减少木质素的含量，同时，过氧化氢可氧化菌种发酵过程没有降解完全的木质素，进一步降低木质素的含量，提高吸食效果。
上述再造烟叶的制备方法，采用复合酶处理结合微生物发酵的工艺，生产条件温和，效率高，污染小，所用酶、菌种、助剂均为食品行业常用的商品化菌种，纯度高、价格低、易于得到且发酵条件容易掌握和控制；利用本发明得到的烟烟梗提取物和纸基制造再造烟叶，具有优良的稳定性和可重复性，且具有更加明显的增香效果和独特的风格特征。该法生产工艺简单，生产成本低，易于实现工业化生产。
下面结合具体实施例，对本发明作进一步的阐述。
实施例1
一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将烟梗机械破碎至长度为20mm，将500g的烟梗、250g的烟末和4500g的水混合均匀，升温至30℃，用柠檬酸调节pH＝4.0，后加入0.375g的细胞破壁酶和0.15g的助剂I进行酶解反应，酶解时间为2h。
其中，细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。助剂I由以下质量百分比的成分组成：30％聚甘油聚亚油酸酯、30％的海藻酸钠、20％的硬脂酸钾及20％的单宁酸。
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后用滤膜进行过滤，得到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到密度为1.15g/L的浓缩液。
其中，加热温度为80℃，提取时间为2h。过滤所需滤膜孔径为1μm。
(3)向浓缩液中加入混合菌种和助剂II，进行发酵及酶解反应，后高温灭菌，得到烟草提取液。
其中，助剂II由以下质量百分比的成分组成：10％的苹果酸、30％的磷酸二氢钾、40％的硫酸铵、20％的大豆油。混合菌种由以下质量百分比的成分组成：70％的孤独腐质霉和30％的嗜热毁丝霉。混合菌种的质量为浓缩液中固形物干重的3％，助剂II的质量为浓缩液中固形物干重的0.1％。发酵剂酶解反应的条件为：发酵温度为20℃，发酵时间为20h。高温灭菌的条件为：加热温度为100℃，.加热时间为0.1h。
(4)向步骤(2)的滤渣中加入浆料，混合均匀，后加入过氧化氢进行氧化分解反应，之后加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢，得到混合浆料。
其中，浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆和木浆的混合物，其中，竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％。过氧化氢的质量为浆料的8％。氧化分解反应的作用时间为1h，作用温度为40℃。过氧化氢酶的质量为浆料的0.1‰。加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢的反应条件为：pH＝7.0、反应时间为2h。
(5)采用造纸法，将混合浆料制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
实施例2
一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将烟梗机械破碎至长度为25mm，将750g的烟梗、500g的烟末和7500g的水混合均匀，升温至40℃，用柠檬酸调节pH＝5.0，后加入1.25g的细胞破壁酶和0.375g的助剂I进行酶解反应，酶解时间为1h。
其中，细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。助剂I由以下质量百分比的成分组成：30％聚甘油聚亚油酸酯、30％的海藻酸钠、20％的硬脂酸钾及20％的单宁酸。
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后用滤膜进行过滤，得、到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到密度为1.20g/L的浓缩液。
其中，加热温度为90℃，提取时间为1h，过滤所需滤膜孔径为2μm。
(3)向浓缩液中加入混合菌种和助剂II，进行发酵及酶解反应，后高温灭菌，得到烟草提取液。
其中，助剂II由以下质量百分比的成分组成：10％的苹果酸、30％的磷酸二氢钾、40％的硫酸铵、20％的大豆油。混合菌种由以下质量百分比的成分组成：70％的孤独腐质霉和30％的嗜热毁丝霉。混合菌种的质量为浓缩液中固形物干重的0.5％，助剂II的质量为浓缩液中固形物干重的0.3％。发酵剂酶解反应的条件为：发酵温度为30℃，发酵时间为10h。高温灭菌的条件为：加热温度为90℃，加热时间为0.3h。
(4)向步骤(2)的滤渣中加入浆料，混合均匀，后加入过氧化氢进行氧化分解反应，之后加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢，得到混合浆料。
其中，浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆和木浆的混合物，其中，竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％。过氧化氢的质量为浆料的5％。氧化分解反应的作用时间为2h，作用温度为30℃。过氧化氢酶的质量为所述浆料的0.3‰。加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢的反应条件为：pH＝6.0、反应时间为1h。
(5)采用造纸法，将混合浆料制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
实施例3
一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将烟梗机械破碎至长度为23mm，将1000g的烟梗、750g的烟末和10500g的水混合均匀，升温至50℃，用柠檬酸调节pH＝6.0，后加入2.625g的细胞破壁酶和1.05g的助剂I进行酶解反应，酶解时间为0.5h。
.其中，细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。助剂I由以下质量百分比的成分组成：30％聚甘油聚亚油酸酯、30％的海藻酸钠、20％的硬脂酸钾及20％的单宁酸。
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后用滤膜进行过滤，得到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到密度为1.25g/L的浓缩液。
其中，加热温度为95℃，提取时间为0.5h。过滤所需滤膜孔径为3μm。
(3)向浓缩液中加入混合菌种和助剂II，进行发酵及酶解反应，后高温灭菌，得到烟草提取液。
其中，助剂II由以下质量百分比的成分组成：10％的苹果酸、30％的磷酸二氢钾、40％的硫酸铵、20％的大豆油。混合菌种由以下质量百分比的成分组成：70％的孤独腐质霉和30％的嗜热毁丝霉。混合菌种的质量为浓缩液中固形物干重的2％，助剂II的质量为浓缩液中固形物干重的0.2％。发酵剂酶解反应的条件为：发酵温度为40℃，发酵时间为6h。高温灭菌的条件为：加热温度为100℃，加热时间为0.2h。
(4)向步骤(2)的滤渣中加入浆料，混合均匀，后加入过氧化氢进行氧化分解反应，之后加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢，得到混合浆料。
其中，浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆和木浆的混合物，其中，竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％。过氧化氢的质量为浆料的3％。氧化分解反应的作用时间为1.5h，作用温度为20℃。过氧化氢酶的质量为所述浆料的0.3‰。加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢的反应条件为：pH＝5.0、反应时间为1h。
(5)采用造纸法，将混合浆料制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
实施例4
一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将烟梗机械破碎至长度为23mm，将1250g的烟梗、750g的烟末和12000g的水混合均匀，升温至50℃，用柠檬酸调节pH＝6.0，后加入4g的细胞破壁酶和1.2g的助剂I进行酶解反应，酶解时间为0.5h。
其中，细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：30％的阿拉伯呋喃糖苷酶、20％的氨基肽酶、20％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、30％的转化酶。助剂I由以下质量百分比的成分组成：20％聚甘油聚亚油酸酯、40％的海藻酸钠、10％的硬脂酸钾及30％的单宁酸。
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后用滤膜进行过滤，得到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到密度为1.25g/L的浓缩液。
其中，加热温度为95℃，提取时间为0.5h。过滤所需滤膜孔径为3μm。
(3)向浓缩液中加入混合菌种和助剂II，进行发酵及酶解反应，后高温灭菌，得到烟草提取液。
其中，助剂II由以下质量百分比的成分组成：50％的苹果酸、40％的磷酸二氢钾、60％的硫酸铵、10％的大豆油。混合菌种由以下质量百分比的成分组成：60％的孤独腐质霉和40％的嗜热毁丝霉。混合菌种的质量为浓缩液中固形物干重的2％，助剂II的质量为浓缩液中固形物干重的0.2％。发酵剂酶解反应的条件为：发酵温度为40℃，发酵时间为6h。高温灭菌的条件为：加热温度为100℃，加热时间为0.2h。
(4)向步骤(2)的滤渣中加入浆料，混合均匀，后加入过氧化氢进行氧化分解反应，之后加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢，得到混合浆料。
其中，浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆和木浆的混合物，其中，竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％。过氧化氢的质量为浆料的3％。氧化分解反应的作用时间为1.5h，作用温度为20℃。过氧化氢酶的质量为所述浆料的0.3‰。加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢的反应条件为：pH＝5.0、反应时间为1h。
(5)采用造纸法，将混合浆料制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
对比例1
一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将烟梗机械破碎至长度为20mm，将500g的烟梗、250g的烟末和4500g的水混合均匀，升温至30℃，用柠檬酸调节pH＝4.0，后加入0.375g的细胞破壁酶进行酶解反应，酶解时间为2h。
其中，细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后用滤膜进行过滤，得到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到密度为1.15g/L的浓缩液。
其中，加热温度为80℃，提取时间为2h。过滤所需滤膜孔径为1μm。
(3)采用造纸法，将滤渣制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
对比例2
一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将烟梗机械破碎至长度为20mm，将500g的烟梗、250g的烟末和4500g的水混合均匀，升温至30℃，用柠檬酸调节pH＝4.0，后加入0.375g的细胞破壁酶和0.45g的助剂I进行酶解反应，酶解时间为2h。
其中，细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。助剂I由以下质量百分比的成分组成：30％聚甘油聚亚油酸酯、30％的海藻酸钠、20％的硬脂酸钾及20％的单宁酸。
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后用滤膜进行过滤，得到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到密度为1.15g/L的浓缩液。
其中，加热温度为80℃，提取时间为2h。过滤所需滤膜孔径为1μm。
(3)采用造纸法，将滤渣制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
对比例3
一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将烟梗机械破碎至长度为20mm，将500g的烟梗、250g的烟末和4500g的水混合均匀，升温至30℃，用柠檬酸调节pH＝4.0，后加入0.375g的细胞破壁酶和0.45g的助剂I进行酶解反应，酶解时间为2h。
其中，细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。助剂I由以下质量百分比的成分组成：30％聚甘油聚亚油酸酯、30％的海藻酸钠、20％的硬脂酸钾及20％的单宁酸。
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后用滤膜进行过滤，得到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到密度为1.15g/L的浓缩液。
其中，加热温度为80℃，提取时间为2h。过滤所需滤膜孔径为1μm。
(3)向浓缩液中加入混合菌种，进行发酵及酶解反应，后高温灭菌，得到烟草提取液。
其中，混合菌种由以下质量百分比的成分组成：70％的孤独腐质霉和30％的嗜热毁丝霉。混合菌种的质量为浓缩液中固形物干重的3％。发酵剂酶解反应的条件为：发酵温度为20℃，发酵时间为20h。高温灭菌的条件为：加热温度为100℃，加热时间为0.1h。
(4)采用造纸法，将滤渣制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
对比例4
一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将烟梗机械破碎至长度为20mm，将500g的烟梗、250g的烟末和4500g的水混合均匀，升温至30℃，用柠檬酸调节pH＝4.0，后加入0.375g的细胞破壁酶和0.45g的助剂I进行酶解反应，酶解时间为2h。
其中，细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。助剂I由以下质量百分比的成分组成：30％聚甘油聚亚油酸酯、30％的海藻酸钠、20％的硬脂酸钾及20％的单宁酸。
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后用滤膜进行过滤，得到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到密度为1.15g/L的浓缩液。
其中，加热温度为80℃，提取时间为2h。过滤所需滤膜孔径为1μm。
(3)向浓缩液中加入混合菌种和助剂II，进行发酵及酶解反应，后高温灭菌，得到烟草提取液。
其中，助剂II由以下质量百分比的成分组成：10％的苹果酸、30％的磷酸二氢钾、40％的硫酸铵、20％的大豆油。混合菌种由以下质量百分比的成分组成：70％的孤独腐质霉和30％的嗜热毁丝霉。混合菌种的质量为浓缩液中固形物干重的3％，助剂II的质量为浓缩液中固形物干重的0.1％。发酵剂酶解反应的条件为：发酵温度为20℃，发酵时间为20h。高温灭菌的条件为：加热温度为100℃，加热时间为0.1h。
.(4)采用造纸法，将滤渣制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
对比例5
一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将烟梗机械破碎至长度为20mm，将500g的烟梗、250g的烟末和4500g的水混合均匀，升温至30℃，用柠檬酸调节pH＝4.0，后加入0.375g的细胞破壁酶和0.45g的助剂I进行酶解反应，酶解时间为2h。
其中，细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。助剂I由以下质量百分比的成分组成：30％聚甘油聚亚油酸酯、30％的海藻酸钠、20％的硬脂酸钾及20％的单宁酸。
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后用滤膜进行过滤，得到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到密度为1.15g/L的浓缩液。
其中，加热温度为80℃，提取时间为2h。过滤所需滤膜孔径为1μm。
(3)向浓缩液中加入混合菌种和助剂II，进行发酵及酶解反应，后高温灭菌，得到烟草提取液。
其中，助剂II由以下质量百分比的成分组成：10％的苹果酸、30％的磷酸二氢钾、40％的硫酸铵、20％的大豆油。混合菌种由以下质量百分比的成分组成：70％的孤独腐质霉和30％的嗜热毁丝霉。混合菌种的质量为浓缩液中固形物干重的3％，助剂II的质量为浓缩液中固形物干重的0.1％。发酵剂酶解反应的条件为：发酵温度为20℃，发酵时间为20h。高温灭菌的条件为：加热温度为100℃，加热时间为0.1h。
(4)向步骤(2)的滤渣中加入浆料，得到混合浆料。
其中，浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆和木浆的混合物，其中，竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％。
(5)采用造纸法，将混合浆料制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
对比例6
一种再造烟叶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将烟梗机械破碎至长度为20mm，将500g的烟梗、250g的烟末和4500g的水混合均匀，升温至30℃，用柠檬酸调节pH＝4.0，后加入0.375g的细胞破壁酶和0.45g的助剂I进行酶解反应，酶解时间为2h。
其中，细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。助剂I由以下质量百分比的成分组成：30％聚甘油聚亚油酸酯、30％的海藻酸钠、20％的硬脂酸钾及20％的单宁酸。
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后用滤膜进行过滤，得到滤液和滤渣，将滤液进行浓缩，得到密度为1.15g/L的浓缩液。
其中，加热温度为80℃，提取时间为2h。过滤所需滤膜孔径为1μm。
(3)向浓缩液中加入混合菌种和助剂II，进行发酵及酶解反应，后高温灭菌，得到烟草提取液。
其中，助剂II由以下质量百分比的成分组成：10％的苹果酸、30％的磷酸二氢钾、40％的硫酸铵、20％的大豆油。混合菌种由以下质量百分比的成分组成：70％的孤独腐质霉和30％的嗜热毁丝霉。混合菌种的质量为浓缩液中固形物干重的3％，助剂II的质量为浓缩液中固形物干重的0.1％。发酵剂酶解反应的条件为：发酵温度为20℃，发酵时间为20h。高温灭菌的条件为：加热温度为100℃，加热时间为0.1h。
(4)向步骤(2)的滤渣中加入浆料，混合均匀，后加入过氧化氢进行氧化分解反应，得到混合浆料。
其中，浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆和木浆的混合物，其中，竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％。过氧化氢的质量为浆料的8％。氧化分解反应的作用时间为1h，作用温度为40℃。
(5)采用造纸法，将混合浆料制成薄片纸基，后将烟草提取液涂布到薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
试验结果
选取目前现有烟草薄片制备技术作为空白组，将实施例1～4制得的再造烟叶和对比例1～6的再造烟叶进行比较，经检测得出如下数据。
表1 细胞壁成分检测数据
由表1可知，对比例1～6和实施例1～4与空白组相比，果胶、木质素、细胞壁成分明显下降，且实施例1～4与空白组相比，果胶下降率最高可达60％，木质素下降率最高可达76％，细胞壁物质下降率最高可达20％；实施例1～4与对比例1～6相比，果胶、木质素、细胞壁物质也明显低于对比例1～6，可见将细胞破壁酶、助剂I、复合菌种、助剂II、过氧化氢、过氧化氢酶连用，能起到很好的协同增效作用。
表2 评吸结果
由表2可知，对比例1～6、施例1～4与空白组相比，香气质、杂气、刺激性和余味都有很大程度改善，香气质有很大提升，而杂气，刺激性和余味都有降低。
表3致香物质检测数据
由表3可知，实施倒1～4与空白组相比，香气总量分别提升34.88％、75.26％、37.05％和59.47％。说明本发明的再造烟叶的制备方法制得的再造烟叶，香气含量较高，可掩盖再造烟叶中的刺激和杂气，有效提升再造烟叶的品质。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种再造烟叶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将烟梗、烟末和水混合均匀，后加入细胞破壁酶和助剂I进行酶解反应，其中，烟梗、烟末、水的质量比为烟梗∶烟末∶水＝2～5∶1～3∶18～48，所述细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：10～30％的阿拉伯呋喃糖苷酶、20～40％的氨基肽酶、20～40％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、10～30％的转化酶，助剂I由以下质量百分比的成分组成：20～40％聚甘油聚亚油酸酯、20～40％的海藻酸钠、10～30％的硬脂酸钾及10～30％的单宁酸；
(2)将步骤(1)的混合物进行加热提取并灭酶，后进行过滤，得到滤液和滤渣，将所述滤液进行浓缩，得到浓缩液；
(3)向所述浓缩液中加入混合菌种和助剂II，进行发酵及酶解反应，后高温灭菌，得到烟草提取液，其中，助剂II由以下质量百分比的成分组成：5～15％的苹果酸、20～40％的磷酸二氢钾、30～60％的硫酸铵、10～30％的大豆油，所述混合菌种由以下质量百分比的成分组成：60～80％的孤独腐质霉、20～40％的嗜热毁丝霉；
(4)向步骤(2)的所述滤渣中加入浆料，混合均匀，后加入过氧化氢进行氧化分解反应，之后加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢，得到混合浆料，其中，所述浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆、木浆中的一种或几种的混合物；及
(5)采用造纸法，将所述混合浆料制成薄片纸基，后将所述烟草提取液涂布到所述薄片纸基上，再经干燥，制成再造烟叶。
2.根据权利要求1所述的再造烟叶的制备方法，其特征在于，所述细胞破壁酶由以下质量百分比的各组分组成：20％的阿拉伯呋喃糖苷酶、30％的氨基肽酶、30％的α-、β-麦芽碳水化合物水解酶、20％的转化酶。
3.根据权利要求1所述的再造烟叶的制备方法，其特征在于，所述助剂I由以下质量百分比的成分组成：30％的聚甘油聚亚油酸酯、30％的海藻酸钠、20％的硬脂酸钾及20％的单宁酸。
4.根据权利要求1所述的再造烟叶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述细胞破壁酶的质量为烟梗和烟末总量干重的0.5～2‰，烟梗的长度为20～25mm；助剂I的质量为烟梗和烟末总量干重的0.2～0.6‰；酶解反应的条件为：pH＝4.0～7.0、酶解温度为20～60℃、酶解时间为0.5～2h。
5.根据权利要求1所述的再造烟叶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，加热温度为80～100℃，提取时间为0.5～2h。
6.根据权利要求1所述的再造烟叶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，用滤膜进行过滤，所述滤膜的孔径为1μm～3μm，浓缩液的密度为1.15～1.25g/mL。
7.根据权利要求1所述的再造烟叶的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述混合菌种的质量为所述浓缩液中固形物干重的0.5～3％，所述助剂II的质量为所述浓缩液中固形物干重的0.1～0.6％；发酵温度为20～45℃，发酵时间为6～20h；高温灭菌的条件为：加热温度为90～100℃，加热时间为0.1～0.3h。
8.根据权利要求1所述的再造烟叶的制备方法，其特征在于，助剂II由以下质量百分比的成分组成：10％的苹果酸、30％的磷酸二氢钾、40％的硫酸铵、20％的大豆油。
9.根据权利要求1所述的再造烟叶的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，过氧化氢的质量为所述浆料的1～8％；过氧化氢酶的质量为所述浆料的0.1～0.5‰；氧化分解反应的作用时间为1～2h，作用温度为20～40℃；加入过氧化氢酶水解剩余的过氧化氢的反应条件为：pH＝4.0～7.0、反应时间为0.5～2h。
10.根据权利要求1所述的再造烟叶的制备方法，其特征在于，所述浆料为竹浆、龙须草浆、芦苇浆、稻草浆和木浆的混合物，其中，竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％；或竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％；或竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％；或竹浆的质量为滤渣的10％，龙须草浆的质量为滤渣的10％，芦苇浆的质量为滤渣的5％，稻草浆的质量为滤渣的5％，木浆的质量为滤渣的5％。
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