CN103202187A - 一种柑桔柚类用化学诱变繁育抗黄龙病种苗的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种柑桔柚类用化学诱变繁育抗黄龙病种苗的方法，属于种苗繁育技术领域，它通过化学诱变的方法实现，该技术是：选柑桔柚类患黄龙病芽条作接穗—第一次亚硝酸钠药物处理—第二次磷酸氢二钠药物处理—清水冲洗—第一次嫁接形成突变体—第二次嫁接形成抗病体—第三次嫁接形成抗病种苗—表证试验—繁育推广；本方法繁育的抗病苗木有抗体；种在大田，纵使被带病菌柑桔木虱传染，由于自身有抗体、有免疫力，能把侵入植株内的黄龙病菌消灭，达到免疫抗病目的，该方法将有效的遏制黄龙病的蔓延，有利于促进广东省柑桔柚类产业的大发展。

Description

一种柑桔柚类用化学诱变繁育抗黄龙病种苗的方法

 

技术领域

   本发明涉及一种种苗的繁育方法，具体涉及一种柑桔柚类用化学诱变繁育抗黄龙病种苗的方法，属于种苗繁育技术领域。

背景技术

柑桔柚类黄龙病（Liberobacter asiaticum）被认为是世界柑桔柚生产的一种毁灭性病害。感染的柑桔柚品种得病后在3~5年内丧失结果能力，甚至枯死。在我国该病目前分布仍限于长江以南的广东、广西、海南、福建、湖南、贵州、云南、四川、重庆、江西、浙江及台湾等省、市、区；在国外主要分布于亚洲的东南亚、印度半岛、阿拉伯半岛；此外，非洲部分国家、巴西及美国部分地区亦有。

博罗杨村柑桔场在70年代对柑桔黄龙病防治技术采取三大技术措施：一是及时挖除黄龙病树并穴施石灰消毒；二是药杀柑桔木虱；三是补种本场专业队繁育的无病柑桔种苗。但是到80年代后期和90年代，中国知名的最大柑桔场还是被黄龙病毁了。经过30多年后，南方农村报报导了普宁召开广东省柑桔黄龙病防控现场观摩座谈会消息，报导了专家提出防控黄龙病三部曲：购无病苗（是根本）、杀木虱（是重点）、砍病树（是关键）。农村报还报导柑桔主产区提出防治黄龙病采取三板斧：一板斧砍病树；二板斧防治木虱；三板斧种植无病苗木。目前采用的“三部曲”、“三板斧”跟70年代中期杨村柑桔场采取的三大技术措施还是同样的内容、同等的技术水平。说明广东省30多年来防治柑桔黄龙病的技术还没有突破，黄龙病还严重威胁我省柑桔柚产业的发展，全省被黄龙病毁灭的柑桔柚类果园到处可以找到典型。例如梅县松口镇小金村一百多户农户在80年代种植了480多亩金柚（沙田柚）优质高产，为全县作出了示范，可是到了20世纪初，暴发黄龙病到了2005年已全部黄化感病，现在到处是病树头和黄化的残树，令人触目痛心。南方农村报2012年8月2日报导梅州蕉岭县长潭镇麻坑村300多亩柚树九成黄化，疑似感染黄龙病，专家建议及早砍除病株；南方农村报还报导广东14个柑桔主产区，共约有250.9万亩，发病率都在20～30%，个别发病率达40～50%，普遍反映黄龙病正在不断蔓延，柑桔产业受到严重威胁。

各地柑桔场生产基地采取了三大防治措施，仍然防不了，控不了，杀不住黄龙病的蔓延，分析其原因，大体有四方面：

①人为的因素。三大措施的防与控是一系列的技术系统工程，要政府行为与技术指导相结合，如果果苗检疫制度执行不严格，病苗流入市场和千家万户的果园内的黄龙病树砍不了，药杀柑桔木虱不统一部署，留下的后患多，必然导致防不了，控不了。

②防、控技术本身的技术系统就有片面性和不完善的地方。要彻底防治柑桔柚类黄龙病，完善配套技术要求要做到：防、控、抗、治四字方针相结合。

③大范围难防治柑桔木虱，难控黄龙病的原因在于柑桔木虱有三强一多的特点，即繁殖力强；飞跳能力强；带黄龙病菌传播感染能力强。同时柑桔木虱的中间寄主太多，除了柑类、桔类、柚类品种还有橙类、柠檬、黄皮果以及在花卉九里香和大量被农户丢荒的果园病树等，柑桔木虱生存条件太复杂，导致在黄龙病树吸食后，体内能不断繁殖黄龙病杆菌属细菌和浓缩菌液，增强传播能力，带病菌木虱飞到哪里，就把黄龙病传到哪里，带病菌木虱杀不绝，黄龙病就控不了。

④黄龙病细菌在柑桔柚植株的韧皮部维管束内危害严重，造成植株体内有机养分运输障碍，引起黄化。

到目前为止，全球还没有研究出治黄龙病的有效药物，对柑桔木虱和黄龙病的防控，人类还处于被动的局面。

发明人一直把防治柑桔、柚类黄龙病作为重点研究课题，做了大量的研究工作，包括：无病苗木的繁育；应用各种抗生素高压注射防治研究；改进施肥技术；用奈乙酸生根剂，耐氨固氢菌，“802”调节剂等促根试验；防治柑桔木虱研究；以及高位病树嫁接，改善黄化树等试验研究，均没有收到效果。要取得防治黄龙病的主动权，必须努力去谋求繁育柑桔柚类高抗黄龙病种苗的新技术、新方法和研究筛选出能对症下药治疗黄龙病的药物。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一一种柑桔柚类用化学诱变繁育抗黄龙病种苗的方法，它能够有效地控制柑桔柚类黄龙病蔓延，比较彻底防控柑桔柚类黄龙病。

一种柑桔柚类用化学诱变繁育抗黄龙病种苗的方法，包括以下步骤：

（1）选取柑桔柚类患黄龙病的芽条作接穗；

（2）将选取的芽条用亚硝酸钠药液处理两个小时，亚硝酸钠的质量浓度为0.1%；

（3）将经过步骤（2）处理后的芽条用磷酸氢二钠药液处理两个小时，磷酸氢二钠的体积浓度为0.07M；

（4）将步骤（3）处理后的芽条用纯净清水冲洗8小时；

（5）将步骤（4）清洗后的黄龙病芽条作接穗嫁接在实生苗的砧木上，有些植株长出绿色枝叶，产生突变体留用；有些植株长出黄化的枝叶，淘汰掉；

（6）将步骤（5）嫁接长出绿色枝叶的植株，第二次嫁接上经过两次药物处理的黄龙病接穗，黄化苗进行淘汰；绿色枝叶植株产生抗病体苗木留作第三次嫁接；

（7）将步骤（6）嫁接产生的抗病体苗木第三次嫁接上经两次药物处理的黄龙病接穗，最后培育出抗黄龙病的苗木，作为母本；

（8）将步骤（7）的抗黄龙病种苗的母本作接穗，繁育种苗作大田表证或推广。

所述的步骤（1）的芽条是选经过田间鉴定和实验室测试证实黄龙病树上的芽条。

所述的步骤（5）的芽条需要嫁接在酸柚或柑桔类柠檬实生苗的砧木上。

该抗病育苗技术特点：打破育苗常规，有四点不同。

①接穗来源不同。正常育无病苗木要选无黄化病状的壮旺树上的枝条作接穗，本技术是选经过田间鉴定和实验室测试证实黄龙病树上的枝条作接穗。

②药物处理不同。常规露天育苗，接穗没有药物处理；无病毒育苗技术是以热处理为主和用抗生素消毒手段，运用网室隔离、消毒、防疫组成繁育体系，繁育的是无病毒苗木；本技术是采用化学诱变选亚硝酸钠和磷酸氢二钠等药物两次处理，通过化学药物处理诱导接穗细胞产生抗体，增强自身免疫力。

③嫁接处理不同。常规育苗仅一次嫁接，本技术要经过三次嫁接，第一次嫁接产生突变体，第二次嫁接产生抗病体，第三次才嫁接形成抗黄龙病种苗。

④抗性不同。常规育苗只能育出无病苗木，没有抗体。栽种后被带病菌柑桔木虱咬食后感染黄龙病菌变成黄龙病树；本技术繁育的抗病苗木有抗体；种在大田，纵使被带病菌柑桔木虱传染，由于自身有抗体、有免疫力，能把侵入植株内的黄龙病菌消灭，达到免疫抗病目的，该方法将有效的遏制黄龙病的蔓延，有利于促进广东省柑桔柚类产业的大发展。此项目曾委托广东省科技情报所进行科技查新。于2012年8月8日出具《科技查新报告》结论是，梅县松口沙田柚协会开展的“化学诱变繁育柑桔柚类高抗黄龙病种苗创新技术”的课题，在前述检索中未见国内有相同的研究方案和相同研究成果的报导。说明此繁育技术已达到国内先进水平。

具体实施方式

下面通过实例对本发明做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围；

一种柑桔柚类用化学诱变繁育抗黄龙病种苗的方法，包括以下步骤：

（1）选取柑桔柚类患黄龙病的芽条作接穗；

（2）将步骤（1）选取的芽条用亚硝酸钠药液处理两个小时；

（3）将经过步骤（2）处理后的芽条用磷酸氢二钠药液处理两个小时；

（4）将步骤（3）处理后的芽条用纯净清水冲洗8小时；

（5）将步骤（4）清洗后的黄龙病芽条作接穗嫁接在实生苗的砧木上。出现两种结果：一是有些植株长出绿色枝叶，产生突变体留用；二是有些植株长出黄化的枝叶，进行淘汰；

（6）将步骤（5）嫁接长出的绿色枝叶的植株，第二次嫁接上又经过两次药物处理的黄龙病接穗，又出现两种结果：一是黄化苗进行淘汰；二是绿色枝叶植株产生抗病体苗木留作第三次嫁接；

（7）将步骤（6）嫁接产生的抗病体苗木第三次嫁接上又经两次药物处理的黄龙病接穗，最后培育出抗黄龙病的苗木，作为母本；

（8）将步骤（7）的抗黄龙病种苗的母本作接穗，繁育种苗作大田表证或推广。

所述的步骤（1）的芽条是选经过田间鉴定和实验室测试证实黄龙病树上的芽条。

所述的步骤（5）的芽条需要嫁接在酸柚或柑桔类柠檬实生苗的砧木上。

实施例1 

2007年至今6年时间，采用上述方法繁育柑桔柚类抗黄龙病种苗有284株，安排到松口、隆文两个镇七个村选七户农户进行表证试验，面积共约10亩，把抗黄龙病种苗种在有黄龙病发生的果园内，距黄龙病树不超过100米。

实验结果：在粗放管理的情况下，表证结果全部都不会黄化，不感染黄龙病。有部分已正常结果而且品质好，抗病苗木表现出高抗黄龙病。

实验结果说明：该技术繁育的抗病苗木有抗体；种在大田，纵使被带病菌柑桔木虱传染，由于自身有抗体、有免疫力，能把侵入植株内的黄龙病菌消灭，达到免疫抗病目的。如果能全面推广这一技术，将有效的遏制黄龙病的蔓延，有利于促进广东省柑桔柚类产业的发展。

实施例2

梅县松口镇梅教村黄洪岳重点表证户，于2008年03月02日种植了采用上述方法获得的抗黄龙病的金柚（沙田柚）苗31株，抗黄龙病的砂糖桔苗11株，共计42株，面积约1.3亩，种植在距离黄龙病发生较严重的旱山柚园内，距黄龙病树最近相距约3米，最远相距约60米，经过六年试验表证，李学柱研究员（李研究员係中国农科院中国柑桔研究所的黄龙病专家），于去年亲自到梅教村旱山果园现场调研指导，确认表证的抗黄龙病苗42株都没有感染黄龙病，表现生长正常，枝叶浓绿，有三棵已正常挂果（今年已大部分开花结果）。实践证明，用化学诱变繁育柑桔柚类抗黄龙病种苗具有抗性，抗黄龙病。

Claims (3)

1.一种柑桔柚类用化学诱变繁育抗黄龙病种苗的方法，其特征在于:包括以下步骤：

（1）选取柑桔柚类患黄龙病的芽条作接穗；

（2）将选取的芽条用亚硝酸钠药液处理两个小时，亚硝酸钠的质量浓度为0.1%；

（3）将经过步骤（2）处理后的芽条用磷酸氢二钠药液处理两个小时，磷酸氢二钠的体积浓度为0.07M；

（4）将步骤（3）处理后的芽条用纯净清水冲洗8小时；

（5）将步骤（4）清洗后的黄龙病芽条作接穗嫁接在实生苗的砧木上，有些植株长出绿色枝叶，产生突变体留用；有些植株长出黄化的枝叶，淘汰掉；

（6）将步骤（5）嫁接长出绿色枝叶的植株，第二次嫁接上经过两次药物处理的黄龙病接穗，黄化苗进行淘汰；绿色枝叶植株产生抗病体苗木留作第三次嫁接；

（7）将步骤（6）嫁接产生的抗病体苗木第三次嫁接上经两次药物处理的黄龙病接穗，最后培育出抗黄龙病的苗木，作为母本；

（8）将步骤（7）的抗黄龙病种苗的母本作接穗，繁育种苗作大田表证或推广。

2.根据权利要求1所述的一种柑桔柚类用化学诱变繁育抗黄龙病种苗的方法，其特征在于：所述的步骤（1）的芽条是选经过田间鉴定和实验室测试证实有黄龙病的树上芽条。

3.根据权利要求1所述的一种柑桔柚类用化学诱变繁育抗黄龙病种苗的方法，其特征在于：步骤（5）所述的实生苗的砧木为酸柚、柑桔或柠檬实生苗的砧木。