CN103175812A - 微生物检测装置的校正方法、以及微生物检测装置的校正套件 - Google Patents

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Abstract

本发明提供微生物检测装置的不使用微生物的校正方法。该微生物检出装置的校正方法包括：将聚苯乙烯粒子装入到微生物检测装置（20）的步骤，该聚苯乙烯粒子发出强度与微生物被照射光时发出的荧光的强度相同的荧光；将光从微生物检测装置（20）的光源照射到聚苯乙烯粒子，用微生物检测装置（20）的荧光检测器检测由聚苯乙烯粒子发出的荧光的步骤；基于检测出的荧光的强度，校正微生物检测装置（20）的步骤。

Description

微生物检测装置的校正方法、以及微生物检测装置的校正套件
技术领域
本发明涉及环境评价技术，特别涉及一种微生物检测装置的校正方法、以及微生物检测装置的校正套件。
背景技术
例如在医药品制造工厂的超净间中，在室内的空气中飞散的微生物的量由微生物检测装置监视。在评价微生物检测装置的性能、校正其精度时，在微生物检测装置装入已知的微生物，评价微生物检测装置的输出（例如，参照专利文献1至3）。
现有技术文献
专利文献
专利文献1日本特开2004-159508号公报
专利文献2日本特开2008-22764号公报
专利文献3日本特开2008-22765号公报
发明内容
发明要解决的课题
但是，在评价微生物检测装置时所使用的微生物有污染超净间或腔室等的环境的可能性。在此，本发明的一个目的是提供微生物检测装置的不使用微生物的校正方法以及微生物检测装置的校正套件。
解决课题的手段
本发明提供的微生物检测装置的校正方法包含以下步骤：（a）将聚苯乙烯粒子装入到微生物检测装置的步骤，该聚苯乙烯粒子发出强度与微生物被光照射时所发出的荧光的强度相同的荧光；（b）将光从微生物检测装置的光源照射到聚苯乙烯粒子，用微生物检测装置的荧光检测器检测由聚苯乙烯粒子发出的荧光的步骤；和（c）基于检测出的荧光的强度，校正微生物检测装置的步骤。
又，本发明提供的微生物检测装置的校正套件具有聚苯乙烯粒子，该聚苯乙烯粒子发出强度与微生物被照射光时发出的荧光的强度大致相同的荧光。
发明效果
根据本发明，能够提供微生物检测装置的不使用微生物的校正方法以及微生物检测装置的校正套件。
附图说明
图1是本发明的实施形态所涉及的试验室的示意图。
图2是本发明的实施形态所涉及的微生物检测装置的示意性的截面图。
图3是表示本发明的实施例所涉及的，在干燥条件下，用荧光显微镜观察到的聚苯乙烯粒子以及微生物的荧光强度的分布的图表。
图4是表示本发明的实施例所涉及的，在干燥条件下，用荧光显微镜观察到的聚苯乙烯粒子以及微生物的荧光强度的分布的图表。
图5是表示本发明的实施例所涉及的，在干燥条件下，用荧光显微镜观察到的聚苯乙烯粒子以及微生物的荧光强度的分布的图表。
图6是表示本发明的实施例所涉及的，在干燥条件下，用荧光显微镜观察到的聚苯乙烯粒子的荧光强度的95%可靠区间的图表。
图7是表示本发明的实施例所涉及的，用荧光显微镜观察到的聚苯乙烯粒子以及微生物的荧光强度的图表。
图8是表示本发明的实施例所涉及的，在液体中的条件下，用荧光显微镜观察到的聚苯乙烯粒子的荧光强度的分布的图表。
图9是表示本发明的实施例所涉及的，在液体中的条件下，用荧光显微镜观察到的聚苯乙烯粒子的荧光强度的95%可靠区间的图表。
图10是表示本发明的实施例所涉及的，由空中浮游菌检测器检测到的聚苯乙烯粒子以及微生物的荧光强度的图表。
具体实施方式
以下对本发明的实施方式进行说明。在以下的附图的记载中，对于相同或者类似的部分标注相同或者类似的符号来表示。但是，附图是示意性的图。因此，具体的尺寸等需要参照以下的说明来判断。又，包含有在附图互相之间互相的尺寸关系或比率不同的部分是当然的。
实施形态所涉及的微生物检测装置的校正方法包含以下步骤：将聚苯乙烯粒子装入到微生物检测装置的步骤，该聚苯乙烯粒子发出强度与微生物被照射光时所发出的荧光的强度大致相同的荧光；从微生物检测装置的光源向聚苯乙烯粒子照射光，由微生物检测装置的荧光检测器检测从聚苯乙烯粒子发出的荧光的步骤；以及基于检验出的荧光的强度，校正微生物检测装置的步骤。
如图1所示，成为校正方法的对象的微生物检测装置20例如被设置于试验室1中。试验室1是具有形成结构骨架的例如铝制的框架和被嵌入框架中、形成侧壁的聚碳酸酯制的透明面板的腔室。在试验室1中，例如设置有供气装置11A、11B。供气装置11A、11B通过HEPA(高效空气过滤器，High Efficiency Particulate AirFilter)以及ULPA(超低渗透空气过滤器，Ultra Low Penetration AirFilter)等的超高性能空气过滤器，将洁净的空气送到试验室1内部。在试验室1的侧壁上，也可以设置有门。
实施形态所涉及的聚苯乙烯粒子从被设置于试验室1中的喷雾装置2喷出到试验室1内部。喷雾装置2例如是喷射式喷雾器，其保管以规定的浓度包含聚苯乙烯粒子的流体。喷雾装置2以规定的流量被供给压缩气体等的气流，通过将气流喷射到包含聚苯乙烯粒子的流体中以使气溶胶产生，在试验室1内部使包含聚苯乙烯粒子的流体成为雾状，以进行喷雾。又，在图1中，虽然喷雾装置2被配置在试验室1内部，但是也可以将喷雾装置2配置到试验室1的外部，用配管等将喷雾装置2所喷雾的气溶胶引导到试验室1内部。
在试验室1内，配置有作为搅拌装置的搅拌风扇10A、10B、10C、10D。搅拌风扇10A-10D搅拌试验室1内部的空气，防止由于散布于试验室1内部的聚苯乙烯粒子的自身重力的自然沉降。
又，在试验室1内，配置有作为洁净化装置的空气过滤器6。空气过滤器6去除在试验室1内部的空气等气体中所包含的微粒、微生物，将气体洁净化。例如，在从喷雾装置2在试验室1内对包含聚苯乙烯粒子的流体进行喷雾之前，通过运转空气过滤器6，可以预先将喷雾装置2所喷雾的聚苯乙烯粒子以外的微粒、微生物从试验室1内部去除。又，在图1中，虽然空气过滤器6被配置在试验室1内部底面，但是也可以将空气过滤器6配置在试验室1的壁面或者天花板部。
例如如图2的示意性的截面图所示，微生物检测装置20具有壳体21和将空气从试验室1的内部吸引到壳体21的内部的第1吸引装置22。由第1吸引装置22所吸引的空气从壳体21内部的喷嘴23的顶端喷出。从喷嘴23的顶端所放出的空气由与喷嘴23的顶端相对的、被配置到壳体21的内部的第2吸引装置24吸引。微生物检测装置20进一步具有激光器等的光源25。光源25朝向从喷嘴23的顶端放出、由第2吸引装置24吸引的空气照射激光26。激光26可以是可见光，也可以是紫外光。激光26是可见光的情况下，激光26的波长例如在400至410nm的范围内，例如是405nm。激光26是紫外光的情况下，激光26的波长例如在310至380nm的范围内，例如是340nm。
在空气中包含细菌等的微生物的情况下，被照射激光26的细菌发出荧光。作为细菌的例子，举例有革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、以及包含霉菌孢子的真菌。作为革兰氏阴性菌的例子，举例有大肠杆菌。作为革兰氏阳性菌的例子，举例有表皮葡萄球菌、枯草杆菌芽孢、微球菌以及棒状杆菌。作为包含霉菌孢子的真菌的例子，举例有曲霉菌。微生物检测装置20进一步具有荧光检测器27。荧光检测器27检测微生物发出的荧光，计测荧光强度。微生物检测装置20能够基于荧光强度的大小，测量在空气中包含有的微生物的浓度。
在校正微生物检测装置20时，理想的是，用空气过滤器6将图1所示的试验室1内部的灰尘、粉尘、微粒以及微生物等完全地去除，从喷雾装置2放出聚苯乙烯粒子。包含被放出的聚苯乙烯粒子的空气被装入微生物检测装置20中，照射图2所示的激光26。一般地，聚苯乙烯粒子不被分类为荧光物质，被激光26照射的聚苯乙烯粒子发出自身荧光。这里，发明人首次发现了1个聚苯乙烯粒子发出的自身荧光的强度接近1个微生物发出的荧光的强度。因此，不使用微生物，使用聚苯乙烯粒子，能够对微生物检测装置20的荧光检测器27的灵敏度等进行校正。
聚苯乙烯粒子发出的荧光的强度依存于聚苯乙烯粒子的材料以及粒径而变化。因此，也可以将材料以及粒径不同的多个聚苯乙烯粒子分别装入微生物检测装置20中，评价微生物检测装置20的荧光检测器27是否具有能够分离材料以及粒径不同的多个聚苯乙烯粒子各自的荧光强度的差异的灵敏度。
聚苯乙烯粒子例如由聚苯乙烯构成。或聚苯乙烯粒子由聚苯乙烯与添加物构成。又或者聚苯乙烯粒子由例如98质量%（质量百分比）的聚苯乙烯与2质量%的二乙烯基苯构成。
本质上地由聚苯乙烯构成的聚苯乙烯粒子的粒径优选为0.75μm以上且不到10μm，更优选为0.75μm以上且不到5μm。本质上地由聚苯乙烯构成的聚苯乙烯粒子的粒径小于0.75μm的话，1个聚苯乙烯粒子发出的荧光强度具有比1个微生物发出的荧光的强度弱的倾向。本质上地由聚苯乙烯构成的聚苯乙烯粒子的粒径在5μm以上的话，1个聚苯乙烯粒子发出的荧光强度具有比1个微生物发出的荧光的强度强的倾向。又，本质上地由聚苯乙烯构成的聚苯乙烯粒子的粒径在10μm以上的话，1个聚苯乙烯粒子发出的荧光强度具有比1个微生物发出的荧光的强度更强的倾向。本质上由聚苯乙烯构成的聚苯乙烯粒子的粒径被选择为使得聚苯乙烯粒子被照射光时发出的荧光的强度和微生物发出的荧光的强度大致相同的话，聚苯乙烯粒子的粒径不被限定于上述的范围。
本质上由聚苯乙烯和二乙烯基苯构成的聚苯乙烯粒子的粒径优选为0.75μm以上7.5μm以下。本质上由聚苯乙烯和二乙烯基苯构成的聚苯乙烯粒子的粒径小于0.75μm的话，1个聚苯乙烯粒子发出的荧光强度具有比1个微生物发出的荧光的强度弱的倾向。本质上由聚苯乙烯和二乙烯基苯构成的聚苯乙烯粒子的粒径大于7.5μm的话，1个聚苯乙烯粒子发出的荧光强度具有比1个微生物发出的荧光的强度强的倾向。本质上由聚苯乙烯与二乙烯基苯构成的聚苯乙烯粒子的粒径被选择为使得聚苯乙烯粒子被照射光时发出的荧光的强度和微生物发出的荧光的强度大致相同的话，聚苯乙烯粒子的粒径不被限定于上述的范围。
以往，在校正微生物检测装置时，将已知浓度的微生物装入微生物检测装置中，对微生物检测装置所算出的微生物的浓度与实际的微生物的浓度进行比较等。但是由于微生物需要培养设备或漏出防止用的安全设备，因此存在微生物检测装置的校正需要的成本高这样的问题。相对于此，在微生物检测装置的校正中使用聚苯乙烯粒子的话，由于不需要培养设备或安全设备，因此能够使微生物检测装置的校正需要的成本大幅度地降低。
又，《应用微生物学与生物技术》（Applied Microbiology and Biotechnology），卷30,59-66以及《化学工程》(The Chemical Engineering Journal)，卷34，B7B12中记载的那样，微生物发出的荧光能够根据微生物的生长条件变化。因此，即使使用微生物进行微生物检测装置的校正，也存在无法得到用于设定微生物检测装置的荧光检测器的灵敏度的目标值（阈值）的指针的情况。相对于此，在微生物检测装置的校正中使用聚苯乙烯粒子的话，聚苯乙烯粒子发出的荧光的强度是稳定的，因此能够可靠地进行微生物检测装置的校正。
实施例
以下，通过实施例更具体地对实施形态进行说明，但是本发明完全不被以下的实施例所限定。
（聚苯乙烯粒子的得到）
聚苯乙烯粒子是从飞世尔科技公司得到赛默飞世尔纳米球3000系列·标准尺寸的型号3500A、乳胶微球悬浮液5000系列的型号5100A、杜克标准4000系列单分散粒度的型号4203A以及4205A。
型号3500A的粒子作为悬浮液被提供，粒径是498nm±9nm（变差系数1.6%），材料是聚苯乙烯，密度是1.05g/cm3，折射率是1.59。型号3500A的粒子具有能够作为粒径为0.5μm的标准样本使用的粒径均匀性。
型号5100A的粒子作为悬浮液被提供，粒径是1.0μm（变差系数3%以下），材料是聚苯乙烯，密度是1.05g/cm3，折射率是1.59。
型号4203A的粒子作为悬浮液被提供，粒径是3.002μm±0.019（变差系数1.1%），材料是聚苯乙烯。型号4203A的粒子具有能够作为粒径为3μm的标准样本使用的粒径均匀性。
型号4205A的粒子作为悬浮液被提供，粒径是4.993μm±0.040（变差系数1.0%），材料是聚苯乙烯。型号4205A的粒子具有能够作为粒径为5μm的标准样本使用的粒径均匀性。
又，从Bangs Laboratories公司得到聚合物微球系列的型号PS04N/5749、型号PS06N/5623以及型号PS05N/7508。
型号PS04N/5749的粒子作为悬浮液被提供，粒径是1.01μm，材料是聚苯乙烯，密度是1.05g/cm3。
型号PS06N/5623作为悬浮液被提供，粒径是5.09μm（标准偏差为0.44μm），材料是交联聚苯乙烯二乙烯基苯（cross linked poly(styrene/2%divinylbenzen），密度是1.062g/cm3。型号PS06N/5623的粒子具有能够作为粒径为5μm的标准样本使用的粒径的均匀性。
型号PS05N/7508的粒子作为悬浮液被提供，粒径是4.61μm（标准偏差为0.63μm），材料是聚苯乙烯，密度是1.05g/cm3。型号PS05N/7508的粒子具有能够作为粒径为4.6μm的标准样本使用的粒径均匀性。
进一步，从JSR株式会社得到DYNOSPHERES(注册商标)系列的型号SS-053-P以及SS-104-P。
型号SS-053-P的粒子作为悬浮液被提供，平均粒径是5.124μm（变差系数为1.22%），材料是聚苯乙烯。型号SS-053-P的粒子作为标准粒子实际上多用于粒径测量装置的校正以及尺寸标准。
型号SS-104-P的粒子作为悬浮液被提供，平均粒径是10.14μm（变差系数为1.20%），材料是聚苯乙烯。型号SS-104-P的粒子作为标准粒子实际上多用于粒径测量装置的校正以及尺寸标准。
又进一步，从Polyscience Inc.公司得到微珠NIST可追踪粒度标准(Microbead NISTTraceable ParticleSize Standard)3.00μm（型号64060-15）。型号64060-15的粒子作为悬浮液被提供，粒径的分布是从2.85μm到3.15μm，材料是聚苯乙烯。型号64060-15的粒子作为标准粒子实际上多用于粒径测量装置的校正以及尺寸标准。
（聚苯乙烯粒子的清洗）
将得到了的聚苯乙烯粒子的悬浮液1mL移到微型离心管，使用离心机（日立工机株式会社，CT13R)以13,000g离心5分钟，除掉上清液。接着，将聚苯乙烯粒子再悬浮于灭菌蒸馏水中。然后，进一步反复2次聚苯乙烯粒子的悬浮液的离心以及再悬浮，洗净聚苯乙烯粒子。作为最后得到的聚苯乙烯粒子的悬浮液的溶剂的灭菌蒸馏水的体积是0.5mL。
（微生物的得到）
得到的微生物是大肠杆菌（Escherichia coli,简称E.coli、ATCC13706)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis、ATCC12228)、枯草杆菌芽孢(Bacillus atrophaeus、ATCC9372)、微球菌(Micrococcus lylae、ATCC27566)、棒状杆菌(Corynebacterium afermentans、ATCC51403)以及曲霉菌(Aspergillus niger略称A.niger、ATCC9142）。又，ATCC是美国培养细胞系统存储机关(American Type Culture Collection）的简称。
大肠杆菌是革兰氏阴性菌。表皮葡萄球菌、枯草杆菌芽孢、微球菌以及棒状杆菌是革兰氏阳性菌。曲霉菌也被称为曲霉，是霉菌孢子的1种。
（微生物的调制方法）
将大肠杆菌、表皮葡萄球菌以及微球菌在3mL的胰蛋白胨大豆液体培养基(トリプトソイ液体培地)（Becton，Dickinson and Company，Ref：211825）中进行培养，以32℃有氧地培养一晚。将大肠杆菌、表皮葡萄球菌以及微球菌进一步通过琼脂培养基培养的情况下，将菌液在胰蛋白胨大豆琼脂培养基(トリプトソイ寒天培地)（荣研化学株式会社、E-MP25）上进行划线接种，以32℃有氧地培养一晚。
在培养棒状杆菌时，使用R培养基（蛋白胨10g、酵母提取物5ｇ、麦芽提取物5ｇ、酪蛋白氨基酸5ｇ、牛肉提取物2ｇ、甘油2ｇ、吐温8050mg、MgSO4·7H2O1g、蒸馏水1L、pH7.2)作为液体培养基，使用羊血琼脂培养基(荣研化学株式会社M-58）作为琼脂培养基。
从液体培养基调制微生物的情况下，使用离心机（久保田商事株式会社、2410或日立工机株式会社、CT13R），以2100ｇ将培养液离心3分钟并集菌，除掉上清的培养基后，将微生物再悬浮于灭菌蒸馏水中。然后，进一步反复2次微生物的悬浮液的离心以及再悬浮，洗净微生物。作为最后得到的微生物的悬浮液的溶剂的灭菌蒸馏水的体积是3mL。
在从琼脂培养基调制微生物的情况下，刮下琼脂培养基上的菌落，将其悬浮于5mL的灭菌蒸馏水中。接着，使悬浮液形成轻微的漩涡以使微生物分散后，以2100ｇ将悬浮液离心3分钟并集菌，通过除掉上清液来洗净微生物。然后，将微生物再悬浮于5mL的灭菌蒸馏水中。
关于枯草杆菌芽孢，使用在市场出售的芽胞液（NORTH AMERICAN SCIENCEASSOCIATES,Inc.,SUN-07）。
关于曲霉菌，将在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ai sicence株式会社、PM0002-1）上被培育、以4℃保存的曲霉菌在相同培养基上进行穿刺，以25℃培养一周，使之形成孢子。接着，在形成了孢子的培养板上倒大约10mL的二辛基磺基琥珀酸钠50mg/L的水溶液，以抛弃式接种环轻微地刮掉孢子，使其分散在水溶液体中。用吸量管回收孢子分散了的水溶液，用8片重叠的灭菌纱布过滤除掉菌丝后，将过滤液以1400g离心10分钟，除掉上清液。在沉淀了的孢子中加入10mL灭菌蒸馏水，洗净后再次以相同条件进行离心。如此反复3次后，在5mL的灭菌蒸馏水中进行悬浮，作为孢子液。
（利用荧光显微镜在干燥条件下进行的荧光强度的测量）
将聚苯乙烯粒子或微生物的悬浮液滴下到载玻片上，使其在暗处干燥后，用荧光显微镜（奥林巴斯株式会社BX51）进行观察。关于通过波长340nm附近的光的激发，使用UMWU2，关于通过波长405nm附近的光的激发，使用U-MNV2镜单元。通过使用UMPlanFL x100物镜，在载玻片上不遮盖盖玻片地对聚苯乙烯粒子或微生物进行观察。使用DIC滑块截断来自暗视野光路的杂散光。用连接到显微镜的DP-70CCD摄像机（奥林巴斯株式会社）拍摄聚苯乙烯粒子或微生物的荧光图像以及同一视野的明视野图像。
所拍摄的荧光图像是使用图像分析软件Image-Pro Plus6.3J(MediaCybernetics,Inc.），变换为8位灰度图像，检测出荧光图像内的聚苯乙烯粒子或微生物。每1个聚苯乙烯粒子的荧光强度是通过合计图像分析软件确认为粒子的范围中的像素的灰度值来算出的。此时，求出图像内的、不包含粒子的任意的范围的像素的平均灰度值，将其作为背景值，通过从被确认为粒子的范围内的各个像素的灰度值减去背景值，对每1个聚苯乙烯粒子的荧光强度进行修正。又，在多个聚苯乙烯粒子的凝集体被确认为一个粒子的情况下，基于明视野图像判别粒子数，用粒子数除粒子的凝集体的荧光强度，求出每1个聚苯乙烯粒子的平均荧光强度。每1个微生物的荧光强度也通过同样的方法求出。
图3、图4以及图5示出使用波长为405nm附近的激发光的情况下的、聚苯乙烯粒子以及微生物的荧光强度的分布。又，关于型号PS05N/7508、型号PS06N/5623、型号4203A以及型号4205A的聚苯乙烯粒子，图6示出从荧光强度的分布算出的95%可靠区间的图表。如图3、图4以及图5所示，型号5100A的粒子、型号4203A的粒子、型号PS04N/5749、型号PS06N/5623的粒子、型号PS05N/7508、型号SS-053-P以及型号64060-15的粒子发出和微生物同样强度的荧光。型号5100A的粒子发出的荧光的强度特别接近于棒状杆菌、微球菌以及大肠杆菌发出的荧光的强度。型号PS04N/5749的粒子发出的荧光的强度特别接近于大肠杆菌发出的荧光的强度。型号PS05N/7508的粒子发出的荧光的强度特别接近于棒状杆菌、微球菌、葡萄球菌、枯草杆菌以及曲霉菌各自发出的荧光的强度。型号PS06N/5623的粒子以及型号4203A的粒子各自发出的荧光的强度特别接近于枯草杆菌以及曲霉菌各自发出的荧光强度。型号SS-053-P的粒子发出的荧光的强度特别接近于棒状杆菌、微球菌、葡萄球菌、枯草杆菌以及曲霉菌各自发出的荧光的强度。型号64060-15的粒子发出的荧光的强度特别接近于曲霉菌发出的荧光的强度。
型号3500A的粒子发出的荧光的强度比微生物发出的荧光的强度弱。型号SS-104-P的粒子发出的荧光的强度比微生物发出的荧光的强度略微强。型号4205A的粒子发出的荧光的强度比微生物发出的荧光的强度强。
又，图7示出分别使用波长为405nm附近的激发光以及波长为340nm附近的激发光的情况下的、聚苯乙烯粒子以及微生物的荧光强度的分布。如图7所示，即使改变激发光的波长，聚苯乙烯粒子以及微生物各自发出的荧光的强度的变化也并不显著。
（通过荧光显微镜进行的荧光强度的液体中测量）
将聚苯乙烯粒子（型号PS05N/7508、型号PS06N/5623、型号4203A、型号4205A)的悬浮液滴下到载玻片上，在悬浮液上不覆盖盖玻片，不使悬浮液干燥，用荧光显微镜(奥林巴斯株式会社BX51）进行观察。关于通过波长405nm附近的光的激发，使用UMNV2镜单元。在物镜使用UMPlanFL x100，以覆盖盖玻片的状态观察聚苯乙烯粒子。使用DIC滑块截断来自暗视野光路的杂散光。用连接到显微镜的DP-70CCD摄像机（奥林巴斯株式会社）拍摄聚苯乙烯粒子的荧光图像以及同一视野的明视野图像。
所拍摄的荧光图像是使用图像分析软件Image-Pro Plus6.3J(MediaCybernetics,Inc.），变换为8位灰度图像，检测出荧光图像内的聚苯乙烯粒子。每1个聚苯乙烯粒子的荧光强度是通过合计图像分析软件确认为粒子的范围中的像素的灰度值来算出的。此时，求出图像内的、不包含粒子的任意的范围的像素的平均灰度值，将其作为背景值，通过从被确认为粒子的范围内的各个的像素的灰度值减去背景值，对每1个聚苯乙烯粒子的荧光强度进行修正。又，在多个聚苯乙烯粒子的凝集体被确认为一个粒子的情况下，基于明视野图像判别粒子数，用粒子数除粒子的凝集体的荧光强度，求出每1个聚苯乙烯粒子的平均荧光强度。
图8示出使用波长为405nm附近的激发光的情况下的、聚苯乙烯粒子的荧光强度的分布。又，图9示出从荧光强度的分布算出的95％可靠区间的图表。在液体中进行观察时，聚苯乙烯粒子发出的荧光的强度和干燥条件下相比，整体地降低了。但是，根据粒子的种类的荧光强度的大小关系无论是在干燥条件下还是在液体中条件下都大致一致。例如，如图6所示，在干燥条件下，按照型号PS05N/7508、型号PS06N/5623、型号4203A、型号4205A的顺序，荧光强度有变强的倾向。例如，如图9所示，在液体中也是按照型号PS05N/7508、型号PS06N/5623、型号4203A、型号4205A的顺序，荧光强度有变强的倾向。微生物发出的荧光的强度和干燥条件下比较，在液体中也是整体地降低。因此，即使在液体中，聚苯乙烯粒子的荧光强度也接近于微生物的荧光强度。
（采用微生物检测装置的荧光强度的测量）
采用微生物检测装置的荧光强度的测量按照文献（气溶胶科学杂志（Journal ofAerosol Science），卷42,397-407,2011）进行。即，在设置了HEPA过滤单元的3ｍ3容量的密闭了的腔室内，运转HEPA过滤单元，将腔室内部的空气洁净化。然后，使用喷雾器（Salter Labs制Ref8900），以5L/min的流量对聚苯乙烯粒子或微生物的悬浮液进行喷雾20秒，使其在浮游到腔室内的空中。然后，搅拌内部的空气30秒，使水滴干燥且使聚苯乙烯粒子或微生物均匀地扩散。在之后的60秒，以空中浮游菌检测器（AzbilBioVigilant公司制IMD-A300）作为微生物检测装置测量腔室内的空气，检测出空气中所包含的聚苯乙烯粒子或微生物。检测出的聚苯乙烯粒子或微生物的荧光强度作为空中浮游菌检测器的荧光检测器的检测电压值而得到。
图10示出用空中浮游菌检测器测量到的、聚苯乙烯粒子以及微生物的荧光强度的分布。在用空中浮游菌检测器测量的情况下，也示出了聚苯乙烯粒子的荧光强度接近于微生物的荧光强度。
符号的说明
1试验室
2喷雾装置
6空气过滤器
10A、10B、10C、10D搅拌风扇
11A、11B供气装置
20微生物检测装置
21壳体
22吸引装置
23喷嘴
24吸引装置
25光源
26激光
27荧光检测器。

Claims (30)

1.一种微生物检测装置的校正方法，其特征在于，包括：
将聚苯乙烯粒子装入到微生物检测装置的步骤，该聚苯乙烯粒子发出强度与微生物被光照射时所发出的荧光的强度相同的荧光；
将光从所述微生物检测装置的光源照射到所述聚苯乙烯粒子，用所述微生物检测装置的荧光检测器检测由所述聚苯乙烯粒子发出的荧光的步骤；和
基于所述检测出的荧光的强度，校正所述微生物检测装置的步骤。
2.如权利要求1所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子本质上由聚苯乙烯构成。
3.如权利要求1所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子本质上由聚苯乙烯和二乙烯基苯构成。
4.如权利要求1所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子是由98质量%的聚苯乙烯和2质量%的二乙烯基苯构成。
5.如权利要求2所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直径为0.75μm以上且不到10μm。
6.如权利要求2所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直径为0.75μm以上且不到5μm。
7.如权利要求3或4所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直径为0.75μm以上且在7.5μm以下。
8.如权利要求1至7中任意一项所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述光为可见光。
9.如权利要求1至8中任意一项所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述光的波长为400nm至410nm。
10.如权利要求1至7中任意一项所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述光为紫外光。
11.如权利要求1至7以及10中任意一项所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述光的波长是在310nm至380nm的范围内。
12.如权利要求1至11中任意一项所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述微生物包括细菌。
13.如权利要求12所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，所述细菌为选自由包括大肠杆菌的革兰氏阴性菌，包括表皮葡萄球菌、枯草杆菌芽孢、微球菌以及棒状杆菌的革兰氏阳性菌，和包括霉菌孢子的真菌构成的组的至少一个。
14.如权利要求1至13中任意一项所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，在将光从所述微生物检测装置的光源照射到所述聚苯乙烯粒子的步骤中，所述聚苯乙烯粒子为干燥的。
15.如权利要求1至13中任意一项所述的微生物检测装置的校正方法，其特征在于，在将光从所述微生物检测装置的光源照射到所述聚苯乙烯粒子的步骤中，所述聚苯乙烯粒子存在于液体中。
16.一种微生物检测装置的校正套件，其特征在于，具有聚苯乙烯粒子，该聚苯乙烯粒子发出强度与微生物被照射光时发出的荧光的强度相同的荧光。
17.如权利要求16所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子本质上由聚苯乙烯构成。
18.如权利要求16所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子本质上由聚苯乙烯和二乙烯基苯构成。
19.如权利要求16所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子由98质量%的聚苯乙烯和2质量%的二乙烯基苯构成。
20.如权利要求17所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直径为0.75μm以上且不到10μm。
21.如权利要求17所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直径为0.75μm以上且不到5μm。
22.如权利要求18或19所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子的直径为0.75μm以上且在7.5μm以下。
23.如权利要求16至22中任意一项所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述光为可见光。
24.如权利要求16至23中任意一项所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述光的波长为405nm。
25.如权利要求16至22任意一项所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述光为紫外光。
26.如权利要求16至22以及25中任意一项所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述光的波长是在310nm至380nm的范围内。
27.如权利要求16至26中任意一项所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述微生物包括细菌。
28.如权利要求27所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述细菌为选自由包括大肠杆菌的革兰氏阴性菌，包括表皮葡萄球菌、枯草杆菌芽孢、微球菌以及棒状杆菌的革兰氏阳性菌，和包括霉菌孢子的真菌构成的组的至少一个。
29.如权利要求16至28中任意一项所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子在干燥的状态被光照射时，发出与干燥的状态的微生物所发出的荧光的强度相同强度的荧光。
30.如权利要求16至28中任意一项所述的微生物检测装置的校正套件，其特征在于，所述聚苯乙烯粒子在液体中被光照射时，发出与液体中的微生物所发出的荧光的强度相同强度的荧光。
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