CN103145778A

CN103145778A - 一种化合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN103145778A
Application number: CN 201110403138
Authority: CN
Inventors: 杨志钧; 阮丽军; 戈梅; 魏维; 殷瑜
Original assignee: Shanghai Laiyi Biomedical Research And Development Center LLC; Shanghai Jiaotong University
Current assignee: Shanghai Laiyi Biomedical Research And Development Center LLC; Shanghai Jiaotong University
Priority date: 2011-12-07
Filing date: 2011-12-07
Publication date: 2013-06-12

Abstract

本发明公开了一种化合物，具有以下结构式：

Description

一种化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及新化合物，具体地说，是关于一种新的化合物及其制备方法和应用。

背景技术

本申请的发明人通过自然筛选的方法获得了一株炭角菌属(Xylaria sp.)菌株，命名为HCCB03890，该菌株的保藏号为CGMCC No.5410。目前对于该菌株的代谢产物的研究很少。

发明内容

本申请的发明人在对炭角菌属(Xylaria sp.)菌株CGMCC No.5410的代谢产物的研究过程中，分离得到了一种化合物，经结构鉴定为一种新的化合物。

因此，本发明的首要目的在于提供一种新的化合物。

本发明的第二个目的在于提供所述化合物的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供所述化合物的应用。

本发明的化合物，化学中文名为2-甲基-7-(3，4，5-三羟基-6(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2氧代)-2，3-二氢苯并呋喃-4-羧酸，英文名为2-methyl-7-(3，4，5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)-2，3-dihydrobenzofuran-4-carboxylic acid，其结构式如下：

本发明的化合物制备方法是通过发酵培养炭角菌属(Xylaria sp.)菌株CGMCC No.5410而获得。

根据本发明，所述制备方法包括对炭角菌属(Xylaria sp.)菌株CGMCCNo.5410的代谢产物进行分离纯化的步骤。

根据一个优选实施例，所述发酵培养的条件如下：

发酵温度为27～30℃，时间为28～35天。

根据一个优选实施例，所述分离纯化包括将发酵液经乙酸乙酯提取的步骤。

根据一个优选实施例，所述分离纯化还包括将乙酸乙酯提取样品经减压硅胶柱分离的步骤。

根据一个优选实施例，所述分离纯化还包括将减压硅胶柱分离样品经戴安P680液相色谱仪分离的步骤。

根据一个优选实施例，所述分离纯化还包括将戴安P680液相色谱仪分离样品经半制备液相色谱纯化的步骤。

本发明的化合物具有抗肿瘤的效果，可用于制备抗肿瘤药物。

根据本发明的优选实施例，所述肿瘤包括肺癌、乳腺癌和胰腺癌。

本发明不仅提供了一种新的化合物，而且该化合物可用于抗肿瘤，因而具有广泛的开发应用前景。

附图说明

图1为本发明获得的化合物的质谱图。

图2为本发明获得的化合物的氢谱图。

图3为本发明获得的化合物的碳谱图。

具体实施方式

以下通过具体实施例，对本发明做进一步详细说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。

本发明所用的菌种为炭角菌属(Xylaria sp.)HCCB03890，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号CGMCCNo.5410。

以下实施例中所使用的大米培养基的配方为：大米800g，纯净水1000ml，pH自然；115℃灭菌20min。

实施例1、化合物的制备

1.1、发酵

采用大米培养基固体发酵炭角菌属(Xylaria sp.)菌株HCCB03890，发酵温度为27～30℃，时间为28～35天。

1.2、分离纯化

将1.1获得的大米发酵物用乙酸乙酯提取后用减压硅胶进行柱分离，采用乙酸乙酯进行洗脱，浓缩得粗样。

然后，用戴安P680液相色谱仪(制备柱YMC-ODS C-18，5μm，20×250mm)进行分离(0～40min用20％～100％甲醇洗脱，流速8ml/min)，得到粗样。

对得到的粗样进一步用半制备液相色谱(半制备柱为Agilent ZORBAXSB-C18，5μm，9.4mm×250mm)分离(0～25min用18％乙腈等度洗脱，25～45min用18％～35％乙腈梯度洗脱，流速2ml/min)，截取保留时间为28.2min的物质，最终获得化合物纯品，用于以下结构鉴定。

实施例2、化合物的结构鉴定

将实施例1中获得的化合物经正离子电喷雾质谱检测，图谱如图1所示，显示其准分子离子峰为：为m/z 357.1186[M+H]⁺，对应分子式为C₁₆H₂₁O₉，采用Bruker Avance II-400型超导核磁共振仪测定了样品的氢谱(图2)、碳谱(图3)和核磁(MeOH-d₆，400MHz)，核磁数据如表1所示。

表1、化合物的NMR数据

通过解析，确定了该化合物所有碳原子和氢原子的归属，得到了该化合物的结构如下：

该化合物分子式为C₁₆H₂₀O₉，分子量为356，化学中文名为2-甲基-7-(3，4，5-三羟基-6(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2氧代)-2，3-二氢苯并呋喃-4-羧酸，英文名为

2-methyl-7-(3，4，5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)-2，3-dihydrobenzofuran-4-carboxylic acid。

经检索，现有技术中未见有报道过，是一种新的化合物。

实施例3、化合物的生物活性

本实施例中使用的细胞(均来源于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)为：A549(人非小细胞肺癌细胞)，MDA-MB-231(人乳腺癌细胞)，PANC-1(人胰腺癌细胞)。

对实施例1中获得的化合物进行生物活性检测，具体方法如下：

将对数生长期肿瘤细胞，用微量移液器吸取去除上清，用适量的PBS缓冲液清洗去除表层衰老的细胞，用胰蛋白酶消化细胞，1000rpm离心5min，去除上清液。加入营养液(含有10％小牛血清，100U/ml青霉素和100U/ml链霉素)，做成单细胞悬浮液，用血球计数板计数后，按照50,000个/ml接种，取100μl/孔于96孔板中，将96孔板置于37℃的5％CO₂培养箱中培养24h。将DMSO溶解的终浓度为50μg/ml的化合物(DMSO的终浓度为1％)加入到培养好的96孔板细胞中，置于37℃的5％CO₂培养箱中培养48h。采用MTT染料对活细胞染色，次日用Bio-Rad680酶标仪在波长570nm下测定OD值，来研究化合物对肿瘤细胞抑制能力。阴性对照为1％的DMSO，阳性对照为5-氟尿嘧啶(终浓度为50μg/ml)；每个实验重复3次，计算平均值。其中，肿瘤细胞生长的抑制率的计算公式如下：

化合物对肿瘤细胞的抑制率结果如表2所示。

表2、化合物对肿瘤细胞的抑制率(％)

检测对象	A549	MDA-MB-231	PANC-1
				本发明化合物	15.2	8.5	6.4
5-氟尿嘧啶	44.1	57.2	42.9

由表2的结果可知，本发明的化合物对人肺癌、乳腺癌和胰腺癌等肿瘤细胞均具有良好的抗肿瘤活性，因而可以用于制备治疗肿瘤的药物，这对于本领域的技术人员来说是显而易见的。

Claims

1.一种化合物，其特征在于，所述化合物的结构式如下：

2.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，通过发酵培养炭角菌属(Xylaria sp.)菌株CGMCC No.5410而得到。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养的条件如下：

发酵温度为27～30℃，时间为28～35天。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，还包括对发酵产物进行分离纯化的步骤。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述分离纯化包括将发酵液经乙酸乙酯提取的步骤。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述分离纯化还包括将乙酸乙酯提取样品经减压硅胶柱分离的步骤。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述分离纯化还包括将减压硅胶柱分离样品经戴安P680液相色谱仪分离的步骤。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述分离纯化还包括将戴安P680液相色谱仪分离样品经半制备液相色谱纯化的步骤。

9.如权利要求1所述的化合物的应用，其特征在于，用于制备抗肿瘤药物。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为肺癌、乳腺癌和胰腺癌。