CN103142780B - 一种马莲籽或马莲籽皮的提取物、其制备方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药领域,一种马莲籽或马莲籽皮的提取物、其制备方法及用途。具体地,本发明涉及一种马莲籽或马莲籽皮的提取物的制备方法,包括将马莲籽和/马莲籽皮进行水沸煮或有机溶剂提取的步骤。本发明还涉及本发明的制备方法制得的马莲籽或马莲籽皮的提取物。本发明的马莲籽提取物或马莲籽皮提取物具有明显的降糖作用,毒副作用小,具有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,一种马莲籽或马莲籽皮的提取物、其制备方法及用途。
背景技术
马莲籽为鸢尾科植物马莲(IrislacteaPall.var.chinensis(Fisch.)Koidz.)的成熟果实。马莲别名马兰或马兰花,原产中国,在中亚细亚和朝鲜亦有野生分布。耐盐碱,耐践踏,根系发达,生长于荒地路旁、山坡草丛。马莲属多年生草本植物,广泛分布于我国各地,根系发达,叶量丰富,对环境适应性强,长势旺盛,管理粗放,是节水、抗旱、抗水、抗寒、耐盐碱、耐贫瘠、抗杂草、抗病、虫、鼠害的地被植物。
马莲的花、种子、根均可入药。花晒干服用可利尿通便,种籽和根除温热、解毒。种籽有退烧、解毒、驱虫的功效。自古至今,马莲籽仅用于中医药方剂,主要用于治疗急性黄疸型传染性肝炎、月经过多、喉痹肿热痛闷、咽喉肿痛、鼻衄、吐血、咽喉闭不通、小便不通、痈肿疮疖、面及鼻病酒皶、偏坠疝气等。目前对马莲籽仁、种皮的提取成份的药理作用研究不多,仅报道了小鼠口服马莲籽醇浸膏具有抗生育、抗着床作用,种皮有效,种仁则无作用。马莲籽甲素腹腔注射,对小鼠迟发型超敏反应有促进作用。
然而,马莲籽提取物的降糖作用至今未见报道。
发明内容
本发明人经过深入的研究和创造性的劳动,发现马莲籽皮具有明显的降糖作用,有效剂量范围内毒副作用小,具有很好的应用前景。本发明人还进一步得到了马莲籽或马莲籽皮提取物的制备方法,并相应地制备了马莲籽或马莲籽皮的提取物。由此提供了下述发明:
本发明的一个方面涉及一种马莲籽或马莲籽皮的提取物的制备方法,包括将马莲籽和/马莲籽皮用水沸煮或用有机溶剂提取的步骤(得到水煮液或有机溶剂提取液);优选地,还包括将水煮液或有机溶剂提取液进行浓缩的步骤(得到浓缩液);可选地,还包括将水煮液或者水煮液的浓缩液进行沉化的步骤;具体地,所述有机溶剂提取为回流提取。
所述沉化可以按照本领域人员知晓的方法进行。
根据本发明任一项所述的方法,其中所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、丁酮和氯仿中的任一种或多种;提取溶剂用量具体地,以马莲籽计,马莲籽与水或有机溶剂的比例为1(g):(2-30)(ml);优选为1(g):(3-20)(ml);更优选为1(g):(3-10)(ml)或者1(g):(3-8)(ml);进一步优选为1(g):5(ml)。
根据本发明任一项所述的方法,其中将马莲籽和/或马莲籽皮用水沸煮或者用有机溶剂提取一次或多次(例如2、3、4或5次);合并水煮液或有机溶剂提取液;优选地,以100克马莲籽计算,水煮液浓缩到100ml;有机溶剂提取液在温度<50℃的条件下减压浓缩至干燥固体。可选地,将马莲籽提取物加水稀释,例如以100克马莲籽计算,加水100ml。
根据本发明任一项所述的方法,其中每次沸煮或提取的时间为不少于15分钟;具体地,为15-60分钟,优选为20分钟。
根据本发明任一项所述的方法,其还包括在沸煮或提取之前,将马莲籽和/或马莲籽皮进行粉碎的步骤;优选地,将粉碎产物过40目筛。
在本发明的具体的实施方案中,可以采取如下的(1)-(3)中的任一方法:
(1)水提取方法:
以马莲籽100克计算,用500ml水浸泡过夜,反复用500ml水煮3次,每次20分钟,合并水煮液,在温度<50℃的条件下减压浓缩至100ml,得到水提取物。相当1.0g/ml马莲籽生药,放入冰箱低温保存。
马莲属多年生草本植物,其籽如高粱米大,成深棕红色,坚硬如石,外层为一薄层深棕红色物,水浸泡后松软,经多次水煮后,外层深棕红色物可大部分脱落,水煮提取物为混悬液体。水煮提后的内层为白色坚硬仁。
(2)乙醇提取法:
以马莲籽100克计算,用粉碎机破碎至粉末状,过40目筛子,用500ml无水乙醇回流提取30分钟,重复提取2次,合并提取液,在温度<50℃的条件下减压浓缩至干燥物,得到乙醇提取物。可选地,加水到100ml,相当1.0g/ml马莲籽生药,放入冰箱低温保存,用于实验。
(3)氯仿提取法:
以马莲籽100克计算,用粉碎机破碎至粉末状,过40目筛子,用500ml氯仿回流提取20分钟,提取1次,在温度<50℃的条件下减压浓缩至固体干燥物。可加水至100ml,相当1.0g/ml马莲籽生药,用于实验。
本发明的另一方面涉及一种马莲籽或马莲籽皮的提取物,其由本发明中任一项所述的方法制得。
本发明的另一方面涉及一种药物组合物,其包含本发明任何一项所述的提取物;可选地,其还包含药学上可接受的载体或辅料;具体地,所述药物组合物为注射剂、口服液、片剂、胶囊剂、颗粒剂或缓释剂。
辅料包括崩解剂、稀释剂、黏合剂、润滑剂等和构成液体药物的辅料包括溶媒、pH调节剂、渗透压调节剂、抗氧剂、防腐剂、矫味剂等。
根据本发明任一项所述的药物组合物,其还包含药学上可接受的载体或辅料;具体地,所述药物组合物为固体制剂、注射剂、外用制剂、喷剂、液体制剂、或复方制剂。
药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时,如果需要,可将提取物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合,制成可作为哺乳动物用的适当的施用形式或剂量形式。
药物组合物可以单位剂量形式给药,给药途径可为肠道或非肠道,如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是,例如稀释剂与吸收剂,如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等;湿润剂与粘合剂,如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等;崩解剂,例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等;崩解抑制剂,例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等;吸收促进剂,例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等;润滑剂,例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片,例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片,或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是,例如稀释剂与吸收剂,如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等;粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等;崩解剂,如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是,例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊,将提取物与上述的各种载体混合,并将由此得到的混合物置于硬的明明胶囊或软胶囊中。也可将药物组合物制成微囊剂,混悬于水性介质中形成混悬剂,亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂,如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂,可以使用本领域常用的所有稀释剂,例如,水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外,为了制备等渗注射液,可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油,此外,还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。
此外,如需要,也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
本发明的再一方面涉及本发明任一项所述的提取物在制备治疗和/预防和/或辅助治疗糖尿病或降低血糖的药物中的用途。
本发明人对马莲籽皮提取物的降低血糖作用进行研究。
本发明人采用构建的糖尿病小鼠模型,与标准的降糖药物比较,证明了马莲籽提取物有明显的治疗作用。实验选用雄性昆明小鼠,每天6小时太阳光照,饲养环境25°C,高脂饲料喂养10天。此后,禁食不禁水14h大剂量静脉注射链脲佐菌素(STZ,pH4.5柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液配制)65mg/kg,1次/天连续4天,诱导小鼠血糖升高。用血糖仪检测血糖。STZ诱导的糖尿病模型鼠与对照相比,存在明显的多饮、多食、多尿和体质量减轻等典型的糖尿病表现。
本发明人进一步确定了马莲籽的有效部位。本发明人发现,脱皮后的马莲籽仁经水煮或醇类和氯仿提取均无药效活性和治疗作用。
本发明的再一方面涉及马莲籽和/或马莲籽皮在制备本发明任一项所述的提取物的用途。
本发明的再一方面涉及马莲籽和/或马莲籽皮在制备治疗和/预防和/或辅助治疗糖尿病或者降低血糖的药物中的用途。
本发明的再一方面涉及一种治疗和/预防和/或辅助治疗糖尿病或者降低血糖的方法,包括使用有效量的本发明任一项所述的提取物或者本发明的药物组合物的步骤。
本发明中,给予的对象为受试者,例如哺乳动物,包括但不限于:人、猴子、猪、牛、羊,等等。
在本发明中,术语“有效量”是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的剂量。
本发明的提取物的给药剂量取决于许多因素,例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度,患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应,给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个,例如二、三或四个剂量形式给药。
可改变药物组合物中提取物的实际剂量水平,以便所得的剂量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是,本领域的做法是,剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始,逐渐增加剂量,直到得到所需的效果。
但应认识到,本发明提取物和药物组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者,具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定,所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度;所采用的具体组合物;患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食;给药时间、给药途径和排泄率;治疗持续时间;同时使用的药物;及医疗领域公知的类似因素。例如,本领域的做法是,剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始,逐渐增加剂量,直到得到所需的效果。一般说来,本发明提取物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001-1000mg/kg体重/天,例如介于0.01-100mg/kg体重/天,例如介于0.01-10mg/kg体重/天。
根据本发明的提取物或药物组合物可以有效地预防和/或治疗本发明所述的各种疾病或病症。
本发明中,所述马莲籽或马莲籽皮可以是干的或者鲜的,其水分含量不被特别限定;如果没有特殊说明,是指干的马莲籽或马莲籽皮。
本发明中所提及的提取物,如果没有特别说明,其为马莲籽和/或马莲籽皮的提取物。
发明的有益效果
本发明的马莲籽提取物或马莲籽皮提取物具有明显的降糖作用,毒副作用小,具有很好的应用前景。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1:马莲籽提取物的制备方法
(1)马莲籽水提取物的制备
取干的马莲籽100克,500ml水浸泡过夜,反复用500ml水煮3次,每次20分钟,合并水煮液,在温度<50℃的条件下减压浓缩至100ml,得到水提取物。相当1.0g/ml马莲籽生药,放入冰箱低温保存。
(2)马莲籽乙醇提取物的制备
取干的马莲籽100克,用粉碎机破碎,用500ml无水乙醇回流提取,提取2次,合并提取液,在温度<50℃的条件下减压至干燥固体,加水到100ml,相当1.0g/ml马莲籽生药,放入冰箱低温保存浓缩至100ml,得到乙醇提取物。相当1.0g/ml马莲籽生药,放入冰箱低温保存。
(3)马莲籽氯仿提取物的制备
取干的马莲籽100克,用粉碎机破碎至粉末状,用500ml氯仿反流提取30分钟,提取1次,在温度<50℃的条件下减压浓缩至干燥固体。加水到100ml,相当1.0g/ml马莲籽生药。
(4)马莲籽仁提取物的制备
马莲子仁水提取后的白色沉淀物100克,用粉碎机破碎,用500ml无水乙醇回流提取30分钟,提取2次,合并提取液,在温度<50℃的条件下减压至干燥固体。加水到100ml,相当1.0g/ml马莲籽仁生药,放入冰箱低温保存浓缩至100ml。
按照实施例1方法制得的马莲籽提取物和马莲籽仁提取物用于下面的实施例3和4中的实验。
实施例2:小鼠糖尿病模型的建立
小鼠糖尿病模型构建的实验原理和方法参考:张秋燕,刘秀萍,赵燕燕,等,柿叶提取物对链脲佐菌素糖尿病小鼠血糖血脂的影响,[J],第三军医大学学报,2005,27(14):1449;张均田,现代药理实验方法学[M],北京:北京医科大学、中国协和医科大学出版社,1998:981。
本发明构建的小鼠糖尿病模型,选用雄性昆明小鼠(军事医学科学院动物中心提供),每天6小时太阳光照,饲养环境25°C,高脂饲料喂养10天。此后,禁食不禁水14h大剂量静脉注射链脲佐菌素(STZ,pH4.5柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液配制)65mg/kg,1次/天,连续4天,诱导小鼠血糖升高。给药后观察小鼠一般状况,用血糖仪检测血糖,血糖值高于9.0mmol·L-1的动物作为高血糖组纳入实验,实验设正常对照,模型对照,阳性药对照和实验组。数据统计,组间比较采用t检验,p<0.05有统计学差异。
实施例3:马莲籽提取物的降糖作用实验
(1)马莲籽提取物对模型小鼠的降糖作用
选用按照实施例2的方法制备的链脲佐菌素诱导小鼠Ⅱ型糖尿病模型,血糖值高于9.0mmol·L-1的动物作为高血糖组纳入实验,将高血糖小鼠随机分为模型组、马莲籽水和乙醇提物(均相当于1.0g/ml生药)分为高、低剂量组,以及盐酸二甲双胍组。另取正常小鼠8只作为正常组,每天下午4时给药,正常组和模型组给溶剂,连续给药4天(d)。马莲籽的水提取物、乙醇提取物和氯仿提取物均能明显降低血糖(p<0.001),结果见表1。
表1:马莲籽提取物和马莲籽仁提取物对模型小鼠的降糖作用
##p<0.001与正常组比较;*p<0.05,***p<0.001与模型组比较。
(2)马莲籽提取物对模型小鼠糖耐量的影响
将高血糖小鼠随机分为模型组(溶剂)、马莲籽水和乙醇提物组(相当于1.0g/ml生药)及盐酸二甲双胍组。另取正常小鼠6只作为正常对照组,给药后0.5小时,灌胃给10%的葡萄糖1.0ml,给葡萄糖后1小时(h)测血糖。马莲籽能明显抑制血糖峰值(p<0.001)结果见表2。
表2:马莲籽提取物对模型小鼠糖耐量的影响
组别 | 剂量 | n | 给药后1.5h血糖值(mmol/L) |
正常小鼠 | --- | 7 | 10.66±2.62 |
模型小鼠 | --- | 6 | 18.07±3.05### |
二甲双胍 | 100mg/kg | 6 | 11.61±2.7*** |
乙醇提取物 | 1.0ml/只 | 6 | 9.20±1.35*** |
水提取物 | 1.0ml/只 | 6 | 10.14±1.37*** |
###p<0.001,与正常组比较;***p<0.001与模型组比较。
实施例4:马莲籽提取物的毒副作用检验
(1)乙醇提取物对正常小鼠血糖的影响
将正常小鼠随机分为对照组(溶剂)、马莲籽水和乙醇提物组(相当于1.0g/ml生药)及盐酸二甲双胍组(100mg/kg),分别在给药后3和6小时,测血糖。马莲籽对正常小鼠血糖无明显影响,结果见表3。
表3:马莲籽提取物对正常小鼠血糖的影响
*p<0.05,与正常组比较。
(2)乙醇提取物对正常小鼠体重和饮食的影响
正常小鼠连续灌胃给药马莲籽乙醇提取物(相当于1.0g/ml生药)1周,结果表明,低剂量组对动物体重和饮食量无明显影响,而高剂量组在给药后第6天体出现体重显著减轻,饮食也明显减少。结果马莲籽乙醇提取物在降糖有效剂量(0.5ml/只)时,没有表现出明显的毒副作用,但在大剂量(1.0ml/只)时,则表现出一定的毒副作用。见表4和表5。
表4:马莲籽乙醇提取物对正常小鼠体重的影响
*p<0.05,**p<0.001与正常组比较。
表5:马莲籽乙醇提取物对正常小鼠饮食的影响
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述,本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导,可以对那些细节进行各种修改和替换,这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。
Claims (22)
1.马莲籽皮的提取物作为唯一药效成分在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗糖尿病或降低血糖的药物中的用途,其中,所述提取物的制备方法包括将马莲籽和/或马莲籽皮用水沸煮或用有机溶剂提取的步骤。
2.马莲籽的提取物作为唯一药效成分在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗糖尿病或降低血糖的药物中的用途,其中,所述提取物的制备方法包括将马莲籽和/或马莲籽皮用水沸煮或用有机溶剂提取的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的用途,其中,所述提取物的制备方法还包括将水煮液或有机溶剂提取液进行浓缩的步骤。
4.根据权利要求3所述的用途,其中,所述提取物的制备方法还包括将水煮液或者水煮液的浓缩液进行沉化的步骤。
5.根据权利要求1或2所述的用途,其中,所述有机溶剂提取为回流提取。
6.根据权利要求1或2所述的用途,其中所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、丁酮和氯仿中的任一种或多种。
7.根据权利要求1或2所述的用途,其中,以马莲籽计,马莲籽与水或有机溶剂的比例为1(g):(2-30)(ml)。
8.根据权利要求1或2所述的用途,其中,以马莲籽计,马莲籽与水或有机溶剂的比例为1(g):(3-20)(ml)。
9.根据权利要求1或2所述的用途,其中,以马莲籽计,马莲籽与水或有机溶剂的比例为1(g):(3-10)(ml)。
10.根据权利要求1或2所述的用途,其中,以马莲籽计,马莲籽与水或有机溶剂的比例为1(g):(3-8)(ml)。
11.根据权利要求1或2所述的用途,其中,以马莲籽计,马莲籽与水或有机溶剂的比例为1(g):5(ml)。
12.根据权利要求1或2所述的用途,其中,将马莲籽和/或马莲籽皮用水沸煮或者用有机溶剂提取一次或多次。
13.根据权利要求12所述的用途,其中,合并水煮液或有机溶剂提取液。
14.根据权利要求3所述的用途,其中,以100克马莲籽计算,将水煮液浓缩到100ml。
15.根据权利要求3所述的用途,其中,有机溶剂提取液在温度<50℃的条件下减压浓缩至干燥固体。
16.根据权利要求1或2所述的用途,其中每次沸煮或提取的时间为不少于15分钟。
17.根据权利要求1或2所述的用途,其中每次沸煮或提取的时间为15-60分钟。
18.根据权利要求1或2所述的用途,其中每次沸煮或提取的时间为20分钟。
19.根据权利要求1或2所述的用途,其还包括在沸煮或提取之前,将马莲籽和/或马莲籽皮进行粉碎的步骤。
20.根据权利要求1或2所述的用途,其中,所述提取物的制备方法选自如下的方法(1)-(3):
(1)水提取方法:
以马莲籽100克计算,用500ml水浸泡过夜,反复用500ml水煮3次,每次20分钟,合并水煮液,在温度<50℃的条件下减压浓缩至100ml,得到水提取物;
(2)乙醇提取法:
以马莲籽100克计算,用粉碎机破碎至粉末状,过40目筛子,用500ml无水乙醇回流提取30分钟,重复提取2次,合并提取液,在温度<50℃的条件下减压浓缩至干燥物,得到乙醇提取物;
(3)氯仿提取法:
以马莲籽100克计算,用粉碎机破碎至粉末状,过40目筛子,用500ml氯仿回流提取20分钟,提取1次,在温度<50℃的条件下减压浓缩至固体干燥物。
21.马莲籽皮作为唯一药效成分在制备治疗和或/预防和/或辅助治疗糖尿病或者降低血糖的药物中的用途。
22.马莲籽作为唯一药效成分在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗糖尿病或者降低血糖的药物中的用途。
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