CN103125390A - 一种鹿角蕨的组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鹿角蕨的组培快繁方法。具体是涉及一种对鹿角蕨的叶片进行离体快繁的方法。采集生长良好的鹿角蕨属Platycerium植物的叶片，直接将叶片诱导萌发成为独立的无根苗，再经过继代丛生芽、壮苗及生根、出瓶移栽等步骤繁殖栽培鹿角蕨。本发明方法可成功地对鹿角蕨进行快速繁殖，与采用无菌孢子进行鹿角蕨组培的方法相比，本发明具有培养基成分和培养过程简单、投入少、周期短等优点，组培苗移栽成活率可达90%以上。
Description
技术领域
本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种利用鹿角蕨的叶片进行快速繁殖的方法。
背景技术
鹿角蕨属Platycerium植物分类上隶属于水龙骨科，是观赏蕨中姿态最奇特的一类，属热带雨林中的附生性观赏蕨，因其孢子叶的型态类似麋鹿头上角的形状而得名。鹿角蕨的叶有二型，营养叶圆肾形，密贴于附生物之上，新的营养叶不断地在上面生长，新生时为嫩绿色，起光合作用制造营养和保护自身作用，成熟时枯死转为浅褐色，木质化，不脱落，可积存林中腐殖质获取营养和保护植物免受干旱威胁；孢子叶叉角状下垂，顶端分叉呈凹状深裂，在背处结出孢子。鹿角蕨属植物在全世界约有15种，原产于非洲、东南亚、马达加斯加和南美的热带、亚热带雨林中。我国仅云南鹿角蕨P. wallichii一种，属于国家二级保护植物。
鹿角蕨在欧美的公园、植物园、商店、居室、窗台等地方的装饰和布置十分流行，将鹿角蕨贴生于古老枯木或装饰于吊盆，作悬吊式或镶挂式布置，是室内观叶植物中珍贵稀有的精品，它别致逗人、四季常青、姿态潇洒、光泽清新、淡雅秀丽，别具热带雨林气息，同时耐阴性强，病虫害少，管理方便，已受到越来越多的人喜爱，具有巨大的市场前景。
鹿角蕨的繁殖现主要采用分株和孢子播种繁殖，孢子繁殖必须在热带原始生境中才有可能，分株繁殖是把母株圆肾形假叶旁边长出的小株分离繁殖，速度慢，系数低，难以得到大量的种苗。对鹿角蕨的无菌孢子进行组培，需经过孢子无菌萌发、配子体生长培养、授精形成合子、孢子体增殖培养、生根培养、出瓶移栽等步骤，过程非常繁琐，周期很长。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种简单快速的鹿角蕨组培快繁方法。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现。
除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。
一种鹿角蕨的组培快繁方法，包括以下步骤：
（1）无根苗的萌发：采集生长良好的鹿角蕨属植物的叶片，包括营养叶或孢子叶，用清水洗去叶片表面的毛和异物，切成1cm×1cm的小块；然后转移至超净工作台，先用无菌水洗涤3次，放入75%酒精中30s，再用无菌水洗涤3次，后置于0.1～0.2%升汞溶液中消毒5～15min，无菌水洗涤6次，切去周围受伤的部位后接种到萌发培养基上；培养温度为20～30℃，光照1000～2000 Lx，光照时间8～12 h/d；所述的萌发培养基pH 5.8,每升萌发培养基中含有活性炭0.5～2 g，吲哚丁酸0.05～1 mg，6-苄氨基腺嘌呤 0.05～1 mg，食用白糖30 g，琼脂7g，其余为MS；
（2）继代丛生芽：将步骤（1）培养得到的无根苗转到继代培养基中，在20～30℃、1000～2000 Lx、8～12 h/d光照下培养，每升继代培养基中含有活性炭0.3～2 g，吲哚乙酸 0.1～1 mg，食用白糖30 g，琼脂7g，其余为MS，pH 5.8；
（3）壮苗及生根：将步骤（2）培养得到的植株继续继代培养丛生芽，已长大的植株则转移到生根培养基中，同时壮苗，在20～30℃、1000～2000 Lx、8～12 h/d光照下培养，每升生根培养基中含有萘乙酸0～2.0 mg，食用白糖20 g，琼脂7g，其余为1/2 MS，pH 5.8；
（4）出瓶移栽：当步骤（3）培养得到的生根苗长至4～6 cm时，在70%～80%遮荫的自然光下炼苗5～7天，再打开瓶盖炼苗3天，取出小苗，洗去根上粘附的培养基，将苗浸入0.01%高锰酸钾或0.1%多菌灵或百菌清3～10min，移植于已消毒的基质上；然后放在荫棚内加盖塑料薄膜罩子，每天喷雾，保持相对湿度85%以上，70%～80%遮荫，温度20～30℃；移栽一周后植株开始恢复生长，用0.1%尿素或磷酸二氢钾喷叶面作为根外施肥，再一个月后即可将小苗定植。
步骤（4）中所述的基质为：碎椰壳+花卉营养土1:1、干蕨根+珍珠岩+花卉营养土1:1:1、草木灰+碎砖粒1:1、水苔+泥炭藓1:1、或泥炭土+珍珠岩+椰糠1:1:1中的一种；
步骤（1）中所述的鹿角蕨属植物包括：二叉鹿角蕨P. bifurcatum、皇冠鹿角蕨P. coronarium、云南鹿角蕨P. wallichii、帝皇鹿角蕨P. wandae、里氏鹿角蕨P. ridleyi、昆士兰鹿角蕨P. surperbum、巨型鹿角蕨P. grande 或荷氏鹿角蕨P. holttumii。
所述培养基中的MS为国际通用的培养基，所述的1/2 MS是将MS中的大量元素减半，其它成分不变而形成的培养基。
相对于现有技术，本发明具有以下优点：本发明采用鹿角蕨叶片进行鹿角蕨的离体快繁，可直接将叶片诱导萌发成为独立的无根苗，再经过继代丛生芽、壮苗及生根、出瓶移栽等步骤，具有培养基成分和培养过程简单、投入少、周期短等优点，组培苗移栽成活率可达90%以上，有利于进行鹿角蕨规模化生产，具有良好地应用前景。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明的技术方案作进一步的说明，但实施例并不是对本发明技术方案的限定。任何人在本发明的启示下直接得出的所有变形，均应在本发明的保护范围内。
实施例1
采集生长良好的云南鹿角蕨P. wallichii的营养叶片，在流水下洗1h，除去叶表面的毛和异物，切成1cm×1cm的小块；然后将材料转移至超净工作台，无菌水洗涤3次，放入75%酒精中浸泡30s，用无菌水洗涤3次，后置于0.1%升汞溶液中消毒10 min，无菌水洗涤6次，切去周围受伤的部位后接种到萌发培养基上（每升中含有活性炭0.5g，吲哚丁酸 0.1 mg，6-苄氨基腺嘌呤 0.2 mg，食用白糖30 g，琼脂7g，PH 5.8，其余为MS），放在温度为25℃，光照1500 Lx，光照时间12 h/d的培养室中培养成为独立的无根苗。将无根苗转到继代培养基中（每升中含有活性炭0.5 g，吲哚乙酸 0.1 mg，食用白糖30 g，琼脂7g，PH 5.8，其余为MS），放在25℃、1500 Lx、12 h/d光照下培养成为丛生芽。将丛生芽部分继续继代培养，已长大的植株则转移到生根培养基中（每升中含有萘乙酸 0.5 mg，食用白糖20 g，琼脂7g，PH 5.8，其余为1/2 MS），在25℃、1500Lx、12 h/d光照下培养成为完整的植株。当生根苗长至5 cm，在70%遮荫的自然光下炼苗7天，再打开瓶盖炼苗3天，用筷子或镊子小心取出小苗，洗去根上粘附的培养基，将苗浸入0.01%高锰酸钾5 min，移植于已消毒的碎椰壳+花卉营养土1:1的基质中，然后放在荫棚内加盖塑料薄膜罩子，每天喷雾，保持相对湿度85%以上，70%遮荫，温度25℃。移栽一周后植株开始恢复生长，用0.1%尿素喷叶面作为根外施肥，再一个月后即可将小苗定植，成活率可达90%以上。
萌发无根苗所需的时间较长，至少2个月；丛生芽的诱导所需时间为30天左右；壮苗生根所需时间为50天左右；各步骤的具体转移时间根据植株的实际生长情况而定。
实施例2
重复实例1，有以下不同点：采集二叉鹿角蕨P. bifurcatum的叶片作为外植体，萌发培养基为每升中含有活性炭1.5 g，吲哚丁酸0.5 mg，6-苄氨基腺嘌呤0.5 mg，食用白糖30 g，琼脂7g，PH 5.8，其余为MS；继代培养基为每升中含有活性炭1.5 g，吲哚乙酸1 mg，食用白糖30 g，琼脂7g，PH 5.8，其余为MS；生根培养基为每升中含有萘乙酸1.5 mg，食用白糖20 g，琼脂7g，PH 5.8，其余为1/2MS。
实施例3
重复实施例1，有以下不同点：采集皇冠鹿角蕨P. coronarium的叶片作为外植体，当生根苗长至6 cm，浸入0.1%多菌灵中10min，移植于已消毒的水苔+泥炭藓1:1的基质中。
实施例4
重复实施例1，有以下不同点：采集帝皇鹿角蕨P. wandae的叶片作为外植体，移栽一周后用0.1%磷酸二氢钾喷叶面作为根外施肥。
Claims (2)
1.一种鹿角蕨的组培快繁方法，包括以下步骤：
（1）无根苗的萌发：采集生长良好的鹿角蕨属植物的叶片，包括营养叶或孢子叶，用清水洗去叶片表面的毛和异物，切成1cm×1cm的小块；然后转移至超净工作台，先用无菌水洗涤3次，放入75%酒精中30s，再用无菌水洗涤3次，后置于0.1～0.2%升汞溶液中消毒5～15min，无菌水洗涤6次，切去周围受伤的部位后接种到萌发培养基上；培养温度为20～30℃，光照1000～2000 Lx，光照时间8～12 h/d；所述的萌发培养基pH 5.8,每升萌发培养基中含有活性炭0.5～2 g，吲哚丁酸 0.05～1 mg，6-苄氨基腺嘌呤 0.05～1 mg，食用白糖30 g，琼脂7g，其余为MS；
（2）继代丛生芽：将步骤（1）培养得到的无根苗转到继代培养基中，在20～30℃、1000～2000 Lx、8～12 h/d光照下培养，每升继代培养基中含有活性炭0.3～2 g，吲哚乙酸 0.1～1 mg，食用白糖30 g，琼脂7g，其余为MS，pH 5.8；
（3）壮苗及生根：将步骤（2）培养得到的植株继续继代培养丛生芽，已长大的植株则转移到生根培养基中，同时壮苗，在20～30℃、1000～2000 Lx、8～12 h/d光照下培养，每升生根培养基中含有萘乙酸0～2.0 mg，食用白糖20 g，琼脂7g，其余为1/2 MS，pH 5.8；
（4）出瓶移栽：当步骤（3）培养得到的生根苗长至4～6 cm时，在70%～80%遮荫的自然光下炼苗5～7天，再打开瓶盖炼苗3天，取出小苗，洗去根上粘附的培养基，将苗浸入0.01%高锰酸钾或0.1%多菌灵或百菌清3～10min，移植于已消毒的基质上；然后放在荫棚内加盖塑料薄膜罩子，每天喷雾，保持相对湿度85%以上，70%～80%遮荫，温度20～30℃；移栽一周后 植株开始恢复生长，用0.1%尿素或磷酸二氢钾喷叶面作为根外施肥，再一个月后即可将小苗定植。
2.根据权利要求1所述的鹿角蕨的组培快繁方法，其特征在于：步骤（4）中所述的基质为：碎椰壳+花卉营养土1:1、干蕨根+珍珠岩+花卉营养土1:1:1、草木灰+碎砖粒1:1、水苔+泥炭藓1:1、或泥炭土+珍珠岩+椰糠1:1:1中的一种。
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