CN103124737A - 针对革兰氏阴性菌例如奈瑟菌属感染或疾病的免疫原性组合物或疫苗 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及革兰氏阴性菌免疫原性组合物和疫苗、其制造和此类组合物在医学中的用途领域。更具体而言，它涉及包含革兰氏阴性菌的外膜蛋白的免疫原性组合物，所述外膜蛋白涉及细胞外锌的吸收。
Description
技术领域
本发明涉及革兰氏阴性菌免疫原性组合物和疫苗、其制造和此类组合物在医学中的用途领域。更具体而言，它涉及包含革兰氏阴性菌的外膜蛋白的免疫原性组合物，所述外膜蛋白涉及细胞外锌的吸收。此类蛋白质是有希望的抗原，因为它们显示在属于许多不同革兰氏阴性菌物种的菌株之间的高保守性。
背景
革兰氏阴性菌是许多人体病理学的致病因子，并且存在开发针对这些细菌中的许多的有效疫苗的需要。相应地存在鉴定进一步抗原例如外膜蛋白的需要，所述进一步抗原在革兰氏阴性物种内和可能地在其之间是充分保守的，以便此类抗原可以用作疫苗组分。
在脑膜炎奈瑟菌（N. meningitidis）的血清群B的情况下，疫苗的开发已由于下述事实被阻碍，因为其与人聚唾液酸化糖蛋白例如神经细胞粘附分子的免疫学相似性，多糖荚膜是弱免疫原性的。用于疫苗生产的策略因此已集中于脑膜炎球菌外膜例如PorA的表面暴露结构，但已被菌株间的主要外膜蛋白的高抗原变异性妨碍。
然而，近来已发现脑膜炎奈瑟菌表达涉及细胞外锌的吸收的外膜蛋白，“TdfI”或“ZnuD”（WO 00/55327的BASB082；脑膜炎奈瑟菌血清群B的测序基因组中的基因座标签NMB0964；此处称为SEQ ID NO. 1）。这是令人惊讶的，因为先前认为锌经由通过孔蛋白的被动扩散跨越外膜，并且这个发现是涉及跨越革兰氏阴性菌外膜的锌吸收的蛋白质的首次发现。
发明概述
本发明人已鉴定了TdfI在来自众多革兰氏阴性菌物种的许多菌株中的同系物。在这些物种之间氨基酸序列的保守性可以反映TdfI在具有低水平的游离锌的环境中锌的主动吸收中的重要性。TdfI及其鉴定的同系物，以及有待鉴定的同系物，代表用于开发针对革兰氏阴性感染的疫苗开发的抗原的有希望的来源。由于在TdfI及其鉴定的同系物中的二级结构中的氨基酸序列保守性，此类疫苗不仅可以赋予针对个别血清型、亚种和菌株的保护，而且可以赋予跨越细菌物种的所有成员、或其他分类学水平的保护。事实上，如实施例中所示，TdfI可以不管血清群诱导针对测试的几乎所有奈瑟菌属菌株的交叉杀菌抗体，支持这种外膜蛋白用作通用的脑膜炎奈瑟菌抗原的潜力。
本发明基于其预测的进一步令人惊讶的发现是涉及细胞外锌吸收的另一种脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白，“TdfH”（WO 00/11182的BASB024；此处称为SEQ ID NO. 50）的鉴定。虽然认为TdfI涉及从细胞外环境中获得游离锌，但看起来TdfH结合非游离的复合锌，例如如实施例中所示与钙防卫蛋白结合的锌。TdfH的同系物已在来自不同革兰氏阴性菌物种的几种菌株中得到鉴定，并且观察到高度的氨基酸序列保守性。因此，与TdfI类似，TdfH及其同系物预期用作用于针对革兰氏阴性感染和疾病的疫苗接种的抗原来源。
依据支持本发明的工作，目前认为脑膜炎奈瑟菌及许多其他革兰氏阴性物种具有用于跨越外膜的锌吸收的主动机制。涉及至少TdfI和TdfH的此类机制可能是必须的，这是由于在宿主中（例如在人体中），尤其是在特定区室例如呼吸道中低水平的游离锌。如实施例中所示，分别地，缺乏TdfI或H的细胞的活力在低游离锌的条件下或当锌与钙防卫蛋白复合时是受损的。旨在将宿主免疫系统靶向表达TdfI或TdfH的革兰氏阴性菌的疫苗接种允许提供针对由此类细菌的感染的有效预防或治疗，并且由于蛋白质的保守性质，此类疫苗可以具有在革兰氏阴性物种内或可能在革兰氏阴性物种之间显著的交叉保护性。由包含基于这些蛋白质之一的抗原的疫苗赋予的保护可以起因于针对所讨论的细菌的杀菌免疫应答，或简单地起因于蛋白质的锌吸收活性的防止。设想包含TdfI和TdfH衍生的抗原从而靶向鉴定的锌吸收机制的疫苗可以是特别有效的。
相应地，本发明提供了免疫原性组合物或疫苗，和方法，用于引起针对表达涉及细胞外锌吸收的外膜蛋白的革兰氏阴性菌的免疫应答，所述外膜蛋白例如TdfI和/或TdfH及其同系物。还提供了用于制备此类组合物或疫苗的方法。
附图简述
图1. 在蛋白质印迹上TdfI的鉴定。（A）在TSB（泳道1）、RPMI（泳道2）和RPMI中生长的tdfI敲除菌株（泳道3）中生长的HB-1。（B）在具有增加量的TSB加入的RPMI中生长的HB-1。（C）在补充有0.5 μM锌（泳道2）或1 μM锌（泳道4）的RPMI（泳道1）中生长的HB-1。（D）在RPMI（泳道1）中生长的HB-1，伴随增加浓度的TPEN（在泳道2-4中分别为0.1、0.5和1 μM）。
图2. 在野生型和zur突变型菌株中的TdfI表达。通过蛋白质印迹分析评估在RPMI、具有600 nM锌的RPMI或TSB中生长的HB-1和zur突变型的细胞裂解产物中TdfI的存在。
图3. TdfI的拓扑学模型。塞子（plug）结构域带有深灰色，β链带有浅灰色，并且细胞外环带有白色。组氨酸/天冬氨酸段是加框的。
图4. 通过TdfI的锌结合和转运。（A）通过PAR竞争测定来测量与含或不含TdfI的外膜囊泡的锌结合。（B）如通过野生型菌株、tdfI突变型和tonB突变型ICP-MS测量的细胞内锌浓度。
图5. TdfI的锌调节在脑膜炎球菌中是高度保守的。在含或不含加入的锌的RPMI中生长的所示菌株的细胞裂解产物的蛋白质印迹。a得自（36）的克隆组命名；- 指出菌株通过多位点（Multi-Locus）酶电泳进行分型，但无法指定至特定克隆。
图6. TdfI疫苗的蛋白质谱。用于就抗血清生产免疫接种小鼠的外膜囊泡通过SDS-PAGE分离且用考马斯亮蓝染色。
图7. IPTG对在SBA中使用的细胞上的TdfI表达的影响。参见实施例1。
图8. 脑膜炎奈瑟菌菌株MC58的TdfI与053422、FAM18和Z2491，载体菌株α14、α 153和α275的那些的氨基酸序列比对。TonB盒（Tb）、塞子结构域、环和跨膜结构域（Tm）在序列上方标记，并且富含His和Asp的段是有下划线的。
图9. TdfI同系物的氨基酸序列比对。富含组氨酸天冬氨酸的段以灰色突出显示。
图10. ZnuD肽阵列：对于恢复期患者或健康携带者获得的人血清的个别应答。参见实施例3。这个图对应于US 61/312959中的图8。对于图10在图例中从上到下列出的样品对应于在US 61/312959中对于图8的图例中从左上方到右下方（由箭头阅读）列出的样品。
图11. 在培养基的功能中ZnuD的表达水平。参见实施例3。
图12：用于免疫接种的OMVs。参见实施例3。
图13：TdfI同系物的多重比对。
图14：TdfH同系物的多重比对。
图15：钙防卫蛋白与TdfH的结合。
图16：在Zn或Mn的存在下钙防卫蛋白与TdfH的结合。
发明详述
本发明基于脑膜炎奈瑟菌表达涉及锌吸收的外膜蛋白的发现，其中至少一种（TdfI）在测试最多的脑膜炎奈瑟菌菌株以及众多其他革兰氏阴性菌物种中发现。已发现来自脑膜炎奈瑟菌血清群B的TdfI诱导针对所有血清群的脑膜炎奈瑟菌菌株的交叉杀菌抗体，并且因此在其他革兰氏阴性物种中的这些蛋白质及其同系物代表针对革兰氏阴性感染的保护的有希望的抗原。
如本文使用的，术语“TdfI蛋白质”和“TdfH蛋白质”用于指如在脑膜炎奈瑟菌中鉴定的各自蛋白质及其同系物。
因此，在一个方面，本发明提供了包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别至少第一种革兰氏阴性菌菌株的外膜蛋白的免疫应答，其中所述蛋白质涉及细胞外锌的吸收。
如本文使用的，“免疫原性组合物”或“疫苗”意指包含至少一种抗原的组合物，当施用于宿主时，其能够生成免疫应答。如本文使用的“免疫应答”意指B细胞抗体应答。
根据本发明的上下文，“抗原”是在体内刺激免疫应答的任何物质。在一个实施方案中，抗原是衍生自第一种革兰氏阴性菌株的外膜蛋白的多肽，其通过由所述抗原引发的免疫应答识别。在这个意义上的“衍生的”意指该抗原使用所述外膜蛋白作为物理（例如通过靶突变、平截等）或细胞内（例如使用所述蛋白质的已知序列设计合成的多肽）的起始点生成。如本文使用的，“多肽”意指由肽键连接的两个或更多个氨基酸残基的任何链。除了所述抗原外，免疫原性组合物或疫苗还可以包含一种或多种另外的抗原。
“载体蛋白质”意指抗原与之偶联或附着或缀合的任何蛋白质，一般用于增强或促进通过免疫系统的抗原检测的目的。该术语意欲涵盖小肽和大多肽（>10 kDa）。载体可以是任何肽或蛋白质。它可以包含一个或多个T辅助表位。载体蛋白质可以是例如破伤风类毒素（TT）、破伤风类毒素片段C、破伤风毒素的无毒突变型、白喉类毒素（DT）、CRM197、肺炎球菌溶血素（Ply）、蛋白D、PhtD或PhtDE。
由抗原引发的免疫应答可以识别第一种（即单一）细菌菌株的外膜蛋白，或它可以识别存在于两种或更多种菌株上的外膜蛋白，在所述情况下，所述蛋白质无需在菌株之间是等同的，但必须共享类似表位，从而使得分别蛋白质各自通过由抗原引发的免疫应答识别。特别有利的是识别给定革兰氏阴性物种的多重或所有菌株的免疫应答的引发，其中所述菌株相差血清群、血清型、血清亚型或抗原由其衍生的外膜蛋白的精确氨基酸序列中的至少一个。交叉保护还可以延伸超过个别物种。
如本文使用的，术语“外膜蛋白”意指整合至或附着至革兰氏阴性菌外膜或在革兰氏阴性菌外膜上表达的多肽或蛋白质。该蛋白质可以是整合膜蛋白，即“嵌入”膜内，任选具有周质和/或细胞外暴露的部分。可替代地，该蛋白质可以附着至外膜的细胞外表面，与脂质双层或整合蛋白质直接附着。适当地，外膜蛋白长度在600-1000个氨基酸之间。
蛋白质在锌吸收中的牵涉意指该蛋白质结合游离或复合的细胞外锌，和任选将结合的锌转运跨越外膜。革兰氏阴性外膜蛋白是否牵涉锌结合和任选转运，对于本领域技术人员将是可容易地确定的，并且实施例提供其中可以实现这点的几种方式，包括蛋白质结构的建模，锌隔绝竞争测定和响应外部锌浓度的蛋白质表达调节的测定。更具体而言，所述外膜蛋白在锌吸收中的牵涉是这样的，从而使得锌结合对于缺乏所述蛋白质的外膜囊泡是减少的，并且锌的累积在缺乏所述蛋白质的细胞中是减少的，和/或是这样的，从而使得缺乏所述蛋白质的细胞具有减少的在作为唯一锌源的钙防卫蛋白存在下生长的能力。
应当指出在某些实施方案中，由所述免疫应答识别的外膜蛋白可以不由下述氨基酸序列组成：根据PCT/EP2009/052689的NMB0964多肽或如其中公开的其片段，WO 00/55327的SEQ ID NO. 2或如其中公开的其片段，WO 99/57280的SEQ ID NO. 606或如其中公开的其片段，或WO 00/11182的SEQ ID Nos. 2、4和6或如其中公开的其片段。另外或可替代地，表达所述外膜蛋白的所述第一种革兰氏阴性菌菌株不是奈瑟菌属菌株。
在一个实施方案中，所述外膜蛋白的表达响应低锌可用度是上调的。相对于在复合的含锌培养基例如胰蛋白酶大豆肉汤（TSB）上生长的过程中蛋白质的表达水平，所述表达的上调可以是1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10倍或更多倍。此类表达的上调可以使用锌螯合剂适当地以例如1-25μm的TPEN（N,N,N',N'-四（2-吡啶甲基）乙二胺）或低锌的化学成分确定的培养基例如Catlin培养基实现。
在一个实施方案中，表达由所述免疫应答识别的外膜蛋白的所述第一种革兰氏阴性菌菌株是感染具有低水平的游离锌的人和/或动物的机体区室的菌株。此类区室包括例如呼吸道和血液以及泌尿道和肠。适当地，所述第一种革兰氏阴性菌菌株属于感染呼吸道的物种，例如布鲁氏菌属物种（Brucella sp.）、柯克斯体属物种（Coxiella sp.）、假单胞菌属物种（Pseudomonas sp.）、不动杆菌属物种（Acinetobacter sp.）、莫拉菌属物种（Moraxella sp.）、鹦鹉衣原体（Chlamydia psittaci）、沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis）、流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）、副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）、睡眠嗜血杆菌（Haemophilus somnus）、嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）、胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）、百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis）、副百日咳博德特氏菌（Bordetella parapertussis）、支气管炎博德特氏菌（Bordetella bronchoseptica）、溶血曼海姆菌（Mannheimia haemolytica）、达可马巴斯德氏菌（Pasteurella dagmatis）和多杀巴斯德氏菌（Pasteurella multocida）。在一个实施方案中，所述低水平的游离锌是锌与分子例如钙防卫蛋白结合的结果。
低水平的游离锌意指在5、4、3、2、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05或0.01 μM游离锌下，例如存在于Roswell Park Memorial Institute培养基1640（RPMI），通过电感耦合等离子体质谱法其具有约1.69 μM锌。如本文使用的，“锌”指Zn2+。
在特定实施方案中，所述第一种革兰氏阴性菌株属于选自下述的物种或属：博德特氏菌属（Bordetella）；百日咳博德特氏菌；疏螺旋体属（Borrelia）；伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi）；布鲁氏菌属（Brucella）；马耳他布鲁氏菌（Brucella melitensis）；绵羊种布鲁氏菌（Brucella ovis）；衣原体属（Chlamydia）；鹦鹉衣原体；沙眼衣原体；埃希氏菌属（Escherichia）；大肠杆菌（Escherichia coli）；嗜血杆菌属（Haemophilus）；流感嗜血杆菌；军团菌属（Legionella）；嗜肺军团菌；奈瑟菌属（Neisseria）；淋病奈瑟菌（Neisseria gonorrhoeae）；脑膜炎奈瑟菌；假单胞菌属；铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）；耶尔森菌属（Yersinia）；小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica）；莫拉菌属；卡他莫拉菌（Moraxella catarrhalis）；志贺氏菌属（Shigella）；福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）；痢疾志贺氏菌（Shigella dysenteriae）；鲍氏志贺氏菌（Shigella boydii）；柯克斯体属；和贝纳柯克斯体（Coxiella burnetii）。
在另一个实施方案中，所述第一种革兰氏阴性菌株属于选自下述的物种或属：食酸菌属（Acidovorax）；不动杆菌属；鲍氏不动杆菌（Acinetobacter baumannii）；鲍氏不动杆菌；乙酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）；约氏不动杆菌（Acinetobacter johnsonii）；琼氏不动杆菌（Acinetobacter junii）；鲁氏不动杆菌（Acinetobacter lwoffii）；抗辐射不动杆菌（Acinetobacter radioresistens）；放线杆菌属（Actinobacillus）；小放线杆菌（Actinobacillus minor）；胸膜肺炎放线杆菌；聚集菌属（Aggregatibacter）；伴放线菌聚集菌（Aggregatibacter actinomycetemcomitans）；Aggregatibacter aphrophilus；食烷菌属（Alcanivorax）；泊库岛食烷菌（Alcanivorax borkumensis）；固氮弧菌属（Azoarcus）；固氮菌属（Azotobacter）；棕色固氮菌（Azotobacter vinelandii）；博德特氏菌属；支气管炎博德特氏菌；副百日咳博德特氏菌；百日咳博德特氏菌；Bordetella petrii；弯曲杆菌属（Campylobacter）；结肠弯曲杆菌（Campylobacter coli）；乌普萨拉弯曲杆菌（Campylobacter upsaliensis）；丛毛单胞菌属（Comamonas）；睾丸酮丛毛单胞菌（Comamonas testosteroni）；戴尔福特菌属（Delftia）；食酸戴尔福特菌（Delftia acidovorans）；Diaphorobacter；嗜血杆菌属；流感嗜血杆菌；副猪嗜血杆菌；睡眠嗜血杆菌；曼海姆菌属（Mannheimia）；溶血曼海姆菌；莫拉菌属；卡他莫拉菌；奈瑟菌属；淋病奈瑟球菌；脑膜炎奈瑟菌；巴斯德氏菌属（Pasteurella）；达可马巴斯德氏菌；多杀巴斯德氏菌；变形菌属（Proteus）；奇异变形菌（Proteus mirabilis）；假单胞菌属；施氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）；和鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas）。
更具体而言，所述第一种革兰氏阴性菌株的外膜蛋白包含选自下述的氨基酸序列：SEQ ID No. 1；SEQ ID No. 2；SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；SEQ ID No. 9；SEQ ID No. 10；SEQ ID No. 11；SEQ ID No. 12；SEQ ID No. 13；SEQ ID No. 14；SEQ ID No. 15；SEQ ID No. 16；SEQ ID No. 17；SEQ ID No. 18；SEQ ID No. 19；SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；SEQ ID No. 22；SEQ ID No. 23；SEQ ID No. 24；SEQ ID No. 25；SEQ ID No. 26；SEQ ID No. 27；SEQ ID No. 28；SEQ ID No. 29；SEQ ID No. 30；SEQ ID No. 31；SEQ ID No. 32；SEQ ID No. 33；SEQ ID No. 34；SEQ ID No. 35；SEQ ID No. 36；SEQ ID No. 37；SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；SEQ ID No. 41；SEQ ID No. 42；SEQ ID No. 43；SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；SEQ ID No. 46；SEQ ID No. 47；SEQ ID No. 48；SEQ ID No. 49；SEQ ID No. 50；SEQ ID No. 51；SEQ ID No. 52；SEQ ID No. 53；SEQ ID No. 54；SEQ ID No. 55；SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；SEQ ID No. 67；SEQ ID No. 68；SEQ ID No. 69；SEQ ID No. 70；和SEQ ID No. 71，其中SEQ ID No. 1是来自脑膜炎奈瑟菌菌株MC58的TdfI，并且SEQ ID Nos. 2至49是其同系物，并且SEQ ID No. 50是来自脑膜炎奈瑟菌菌株MC58的TdfH，并且SEQ ID Nos. 51至71是其同系物。
在另一个方面，本发明提供了包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自下述的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽：SEQ ID No. 1；SEQ ID No. 2；SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；SEQ ID No. 9；SEQ ID No. 10；SEQ ID No. 11；SEQ ID No. 12；SEQ ID No. 13；SEQ ID No. 14；SEQ ID No. 15；SEQ ID No. 16；SEQ ID No. 17；SEQ ID No. 18；SEQ ID No. 19；SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；SEQ ID No. 22；SEQ ID No. 23；SEQ ID No. 24；SEQ ID No. 25；SEQ ID No. 26；SEQ ID No. 27；SEQ ID No. 28；SEQ ID No. 29；SEQ ID No. 30；SEQ ID No. 31；SEQ ID No. 32；SEQ ID No. 33；SEQ ID No. 34；SEQ ID No. 35；SEQ ID No. 36；SEQ ID No. 37；SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；SEQ ID No. 41；SEQ ID No. 42；SEQ ID No. 43；SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；SEQ ID No. 46；SEQ ID No. 47；SEQ ID No. 48；SEQ ID No. 49；SEQ ID No. 50；SEQ ID No. 51；SEQ ID No. 52；SEQ ID No. 53；SEQ ID No. 54；SEQ ID No. 55；SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；SEQ ID No. 67；SEQ ID No. 68；SEQ ID No. 69；SEQ ID No. 70；和SEQ ID No. 71，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别氨基酸序列的免疫应答。
在这个方面，抗原（至少部分）由其组成的多肽能够引发免疫应答，其至少识别所述多肽与之共享一定程度的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。同一性的程度可以是30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%。在一个实施方案中，多肽与所述多肽与之共享此类氨基酸序列同一性的氨基酸序列具有相同或基本上相同的免疫原性活性。
如本领域已知的，视情况而定，如通过比较序列测定的，“同一性”是在两个或更多个多肽序列或两个或更多个多核苷酸序列之间的关系。在本领域中，视情况而定，如通过在此类序列的串之间的匹配测定的，“同一性”还意指在多肽或多核苷酸序列之间的序列关联性程度。“同一性”可以通过已知方法容易地计算，包括但不限于在下述中描述的那些：（Computational Molecular Biology，Lesk，A.M.，编辑，Oxford University Press，New York，1988；Biocomputing: Informatics and Genome Projects，Smith，D.W.，编辑，Academic Press，New York，1993；Computer Analysis of Sequence Data，部分I，Griffin，A.M.和Griffin，H.G.，编辑，Humana Press，New Jersey，1994；Sequence Analysis in Molecular Biology，von Heine，G.，Academic Press，1987；以及Sequence Analysis Primer，Gribskov，M.和Devereux，J.，编辑，M Stockton Press，New York，1991；以及Carillo，H.和Lipman，D.，SIAM J Applied Math.，48: 1073（1988）。测定同一性的方法设计为给出在测试的序列之间的最大匹配。此外，测定同一性的方法在可公开获得的计算机程序中编码。测定在两个序列之间的同一性的计算机程序方法包括但不限于在GCG程序包中的GAP程序（Devereux，J.，等人，Nucleic Acids Research 12（1）: 387（1984））、BLASTP、BLASTN（Altschul，S.F. 等人，J Mol. BioI. 215: 403-410（1990）、和FASTA（Pearson和Lipman Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85；2444-2448（1988）。BLAST家族的程序是可从NCBI和其他来源公开获得的（BLAST Manual，Altschul，S.，等人，NCBI NLM NIH Bethesda，MD 20894；Altschul，S.，等人，J Mol. BioI. 215: 403-410（1990）。众所周知的Smith Waterman算法也可以用于测定同一性。
用于多肽序列比较的参数可以包括下述：
算法: Needleman和Wunsch，J. Mol BioI. 48: 443-453（1970）
比较矩阵: 来自Henikoff和Henikoff，Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:10915-10919（1992）的BLOSSUM62
缺口罚分: 8
缺口长度罚分: 2
伴随这些参数有用的程序可作为“gap”程序从Genetics Computer Group，Madison WI公开获得。上述参数是用于肽比较的缺省参数（连同对于末端缺口无罚分）。
关于使用ClustalW程序的配对比对的参数可以包括：
缺口开放罚分:10.00
缺口延伸罚分:0.10
蛋白质权重矩阵:Gonnet系列
DNA权重矩阵:IUB
关于使用ClustalW程序的多重比对的参数可以包括：
缺口开放罚分:10.00
缺口延伸罚分:0.20
延迟分散序列:30 %
DNA转变权重:0.50
蛋白质权重矩阵:Gonnet系列
DNA权重矩阵:IUB
使用负面矩阵:关
除非另有说明，本文“同一性”在参考而不是测试序列的整个长度上表示。SEQ ID Nos. 1和50与其各自鉴定的同系物的多重比对显示于图10和11中，并且同一性值显示于表5和6中。
在这个方面的某些实施方案中，所述抗原或多肽可以任选不具有下述氨基酸序列：根据PCT/EP2009/052689的NMB0964多肽或如其中公开的其片段，WO 00/55327的SEQ ID NO. 2或如其中公开的其片段，WO 99/57280的SEQ ID NO. 606或如其中公开的其片段，或WO 00/11182的SEQ ID Nos. 2、4和6或如其中公开的其片段。
在进一步方面，本发明提供了包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自下述的序列的免疫原性片段的多肽：SEQ ID No. 1；SEQ ID No. 2；SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；SEQ ID No. 9；SEQ ID No. 10；SEQ ID No. 11；SEQ ID No. 12；SEQ ID No. 13；SEQ ID No. 14；SEQ ID No. 15；SEQ ID No. 16；SEQ ID No. 17；SEQ ID No. 18；SEQ ID No. 19；SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；SEQ ID No. 22；SEQ ID No. 23；SEQ ID No. 24；SEQ ID No. 25；SEQ ID No. 26；SEQ ID No. 27；SEQ ID No. 28；SEQ ID No. 29；SEQ ID No. 30；SEQ ID No. 31；SEQ ID No. 32；SEQ ID No. 33；SEQ ID No. 34；SEQ ID No. 35；SEQ ID No. 36；SEQ ID No. 37；SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；SEQ ID No. 41；SEQ ID No. 42；SEQ ID No. 43；SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；SEQ ID No. 46；SEQ ID No. 47；SEQ ID No. 48；SEQ ID No. 49；SEQ ID No. 50；SEQ ID No. 51；SEQ ID No. 52；SEQ ID No. 53；SEQ ID No. 54；SEQ ID No. 55；SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；SEQ ID No. 67；SEQ ID No. 68；SEQ ID No. 69；SEQ ID No. 70；和SEQ ID No. 71，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别所述选择序列的免疫应答。
如本文使用的，“免疫原性片段”是具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列在其长度上与本发明氨基酸序列（即，SEQ ID Nos. 1至71之一的）的部分但并非全部是完全相同的，并且其能够引发至少识别其为片段的氨基酸序列的免疫应答。在一个实施方案中，免疫原性片段具有与其中所述片段是片段的氨基酸序列相同或基本上相同的免疫原性活性。适当地，所述免疫原性片段至少部分来自其为片段的氨基酸序列的细胞外部分。所述片段可以另外是例如本发明的氨基酸序列的截短衍生物，例如包括氨基或羧基末端氨基酸序列的连续系列的残基。还可以使用本发明的氨基酸序列的降解形式。
在这个方面的某些实施方案中，所述抗原或多肽或免疫原性片段可以任选不具有下述氨基酸序列：根据PCT/EP2009/052689的NMB0964多肽或如其中公开的其片段，WO 00/55327的SEQ ID NO. 2或如其中公开的其片段，WO 99/57280的SEQ ID NO. 606或如其中公开的其片段，或WO 00/11182的SEQ ID Nos. 2、4和6或如其中公开的其片段。
所述抗原或所述多肽或所述免疫原性片段可以特别衍生自TdfI蛋白质，在所述情况下，所述多肽与之具有氨基酸序列同一性的氨基酸序列，或其中所述免疫原性片段是片段的氨基酸序列选自SEQ ID No. 1；SEQ ID No. 2；SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；SEQ ID No. 9；SEQ ID No. 10；SEQ ID No. 11；SEQ ID No. 12；SEQ ID No. 13；SEQ ID No. 14；SEQ ID No. 15；SEQ ID No. 16；SEQ ID No. 17；SEQ ID No. 18；SEQ ID No. 19；SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；SEQ ID No. 22；SEQ ID No. 23；SEQ ID No. 24；SEQ ID No. 25；SEQ ID No. 26；SEQ ID No. 27；SEQ ID No. 28；SEQ ID No. 29；SEQ ID No. 30；SEQ ID No. 31；SEQ ID No. 32；SEQ ID No. 33；SEQ ID No. 34；SEQ ID No. 35；SEQ ID No. 36；SEQ ID No. 37；SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；SEQ ID No. 41；SEQ ID No. 42；SEQ ID No. 43；SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；SEQ ID No. 46；SEQ ID No. 47；SEQ ID No. 48；和SEQ ID No. 49。
在进一步的实施方案中，本发明的免疫原性组合物或疫苗的所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序中的至少一个：
91 - G - S/A/V - S/A/V/G - X - P - V/I/M - V/I - R - G - Q/M/L - X - G/S/A - X - R；
116 - D - V/A/M - S/A - 2（X）- S/G - P/A - D - H - T/A/N -V/I；
154 - G - L/V/A/I - V/I - N/D - V/I/L - X - D - X - K/R - I/L/V - P；
250 - G - X - G/S/A - Y/F/W/V - G/S/T/N - X - Q/R/L - 3（X）- Y - G - L/I/V - L/I/P - G/A - H/D；
334 - R - X - D/E - X - R/K/Q/D - G/T/S/A - E/Q/S/D - 3（X）- P - 3（X）- I/F/V/L - 3（X）- R/A/K/Q - 5（X）- D/N/R/G - Y - X - H - X - E；
510 - R - X - P - X - A/P/V/T - Q/E/M - E - L/M - Y/F - A/S/Y/T - X - G - X - H - X - A - T/L/S - X - T/S/A - F/Y/I/V - E/Q -（1-9）X - G - D/N/Q - X - X - L；
595 - Y - X - Q/G - 2（X）- A - X- - F/L/Y/I - X - G - X - E/D - G/A/V - 3（X）- Y/F/H/Q - 8（X）- G/S/A/T - X - F/S - G - D - X - V/I - R/K/N - A/G；和
657 - P/A - R - X - P/S/A - A/P/G - X - R - L/V/A - S/G。
在再进一步的实施方案中，在每个基序前的数字指示当SEQ ID No. 1和包含所述基序的所述多肽比对时，对应于那个基序的SEQ ID No. 1序列的第一个氨基酸在SEQ ID No. 1序列中的位置。在一个实施方案中，所述多肽或免疫原性片段包含从SEQ ID No. 1的所述第一个氨基酸的位置或SEQ ID No. 2至49的等价位置开始，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
使用标准单字母氨基酸编码描述基序，从左到右以N至C末端方向表示。例如，在相对于基序的其他氨基酸的特定位置上的“- G –”指出在那个位置上对于甘氨酸残基的需求，而例如“- S/A/V -”指定丝氨酸或丙氨酸或缬氨酸残基（不以优先次序）必须占据那个位置。未指定位置，即可以是任何氨基酸残基的位置，由“X”表示，并且多个邻接的此类残基由例如意指“ - X - X - X –”的3（X）指示。
如上所述，所述抗原或所述多肽或所述免疫原性片段可以特别衍生自TdfI蛋白质。可替代地，所述抗原或所述多肽或所述免疫原性片段可以衍生自TdfH蛋白质，在所述情况下，所述多肽与之具有氨基酸序列同一性的氨基酸序列，或其中所述免疫原性片段是片段的氨基酸序列选自SEQ ID No. 50；SEQ ID No. 51；SEQ ID No. 52；SEQ ID No. 53；SEQ ID No. 54；SEQ ID No. 55；SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；SEQ ID No. 67；SEQ ID No. 68；SEQ ID No. 69；SEQ ID No. 70；和SEQ ID No. 71。
在进一步的实施方案中，本发明的免疫原性组合物或疫苗的所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序中的至少一个：
81 - R - S/T - V/I - P - G - A - F/Y - T - Q/N - Q/V/L/I - D - K/Q - G/A/S - S/Q - G - X - V/L - S - V/L - N - V/I - R - G - X - S/N/T - G - F/L - G - R - V/A - N - S/T - M/Q - V/I - D - G - V/I - S/T - Q - T - F；
156 - F - S/N/D/E - G - S/T/A/K - A/G/S/N - G - I/L/V/A - N - S/T/A - L - X - G - S - A - N - L/F - R/K - T - L/I - G/N/S - V/A - D/N - D；
226 - S - X - R/K/Q - X - V/I/S/L - S/A - Q - N/D - Y/F - R/K - V/I - G - G - G；
333 - L - F/A/L/V - K - L/I/F/V - E/R - Y - X - G/N/D/S - V/D/K/H - 4（X）- T/G/N/I - A/L - Q/N/S - F/L/I/Y - R - X - L/M/Y - X - T/N - X -I/L/V - G/A/S - S/T/G - R - K/R/N/S - I/L - X - N - R/D/K/N - N/T - Y - Q；
491 - P - X - G - S/K/E - Q - X - F/I - N/H/K/I - T/S - F/I/V/L - Y - F/L/I - D；
574 - N - H/Y - S - V/A/L/M - S/T/I/M - I/L/F - S - A - X - F/Y/L/I - G/D/S/H - D/T/P - Y/G/L - F - M/N/S/T - P - F - X - S/T/G - Y/F - S/A - R/H/K - T/S - H - R - M/I/V/A - P - N - I/V - Q/K/R - E - M/Y/V - Y/F - F - S/T；和
846 - E/D - V/I - K/Q - N - L/A/V - F/L - D - R/K - R/L/K/N - Y - I/V/M - D/N - P/A - L - D/Y。
在再进一步的实施方案中，在每个基序前的数字指示当SEQ ID No. 50和包含所述基序的所述多肽比对时，对应于那个基序的SEQ ID No. 50序列的第一个氨基酸在SEQ ID No. 50序列中的位置。在一个实施方案中，所述多肽或免疫原性片段包含从SEQ ID No. 50的所述第一个氨基酸的位置或SEQ ID No. 51至71的等价位置开始，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。基序如上文与TdfI基序结合描述。
如上所述，本发明的免疫原性组合物或疫苗可以包含除了在上文定义那种外的一种或多种抗原。在其中所述免疫原性组合物或疫苗包含能够引发识别TdfI蛋白质的免疫应答的抗原的一个实施方案中，所述至少一种另外的抗原可以是能够引发识别如本文定义的TdfH蛋白质的免疫应答的抗原。相反地，在其中所述免疫原性组合物或疫苗包含能够引发识别TdfH蛋白质的免疫应答的抗原的一个实施方案中，所述至少一种另外的抗原可以是能够引发识别如本文定义的TdfI蛋白质的免疫应答的抗原。可替代或另外地，此类另外的抗原可以包括任何抗原，所述抗原可以引发或不引发针对与“第一种”抗原相同的革兰氏阴性菌株或物种，或甚至针对革兰氏阴性菌或其分类群的免疫应答。适当地，所述至少一种另外的抗原是例如来自脑膜炎奈瑟菌的fHbp多肽或Hsf多肽或Hap多肽或NadA多肽或lipo28多肽。
fHbp可以意指来自奈瑟菌属的GNA1870蛋白质，Hsf可以意指来自奈瑟菌属的NMB0992（WO99/31132；在WO99/58683中的SEQ ID NO: 2和4 [BASB029]）蛋白质，NadA可以意指来自奈瑟菌属的NMB1994蛋白质，lipo28可以意指来自奈瑟菌属的GNA2132或NMB2132蛋白质。在本文中提及的GNA和NMB编号分别指由脑膜炎奈瑟菌A和B组编码的多肽，基因组序列可从www.neisseria.org获得。
另外，当蛋白质在本文中具体提及时，它适当地是天然、全长蛋白质及其天然变体的提及，但它还可以包含其抗原片段。这些是含有或包含从蛋白质的氨基酸序列连续获得的至少15个氨基酸、适当地至少20个氨基酸、至少30个氨基酸、至少40个氨基酸或至少50个氨基酸的片段（通常在本文中具体描述的）。抗原片段还可以是免疫原性片段。进一步设想本文对于蛋白质和蛋白质序列的提及包括包含来自所述蛋白质序列或所述蛋白质的氨基酸序列的7、10、12、15、20、30、40或50个（或更多个）邻接氨基酸的免疫原性片段的多肽（任选地，其中所述免疫原性片段能够引起 – 需要时，当与蛋白质载体偶联时 – 可以识别所述蛋白质或所述蛋白质序列的免疫应答）。
Hsf: Hsf具有与自主转运蛋白共同的结构。例如，来自脑膜炎奈瑟菌菌株H44/76的Hsf由氨基酸1- 51构成的信号序列、在表面暴露且含有可变区（氨基酸52-106、121-124、191-210和230-234）的成熟蛋白质的氨基末端上的首区（氨基酸52-479）、颈区（氨基酸480-509）、疏水性α螺旋区（氨基酸518-529）、和其中四条跨膜链跨越外膜的锚定结构域（氨基酸539-591）。
尽管全长Hsf可以用于公开内容的免疫原性组合物中，但取决于免疫原性组合物或疫苗的类型，还可以使用多种Hsf平截和缺失。
当Hsf用于亚单位组合物或疫苗中时，可以使用可溶性过客结构域的部分；例如氨基酸52 - 479的完全结构域，最适当地其保守部分，例如氨基酸134 - 479的序列。适当形式的Hsf可以这样截短，以便缺失公开于WO01/55182中的蛋白质的可变区。
合适变体将包括如WO01/55182中定义的一个、两个、三个、四个或五个可变区的缺失。上述序列和下文描述的那些可以在N或C末端上延伸或截短最高达1、3、5、7、10或15个氨基酸。
因此，Hsf的合适片段包括Hsf的整个首区，适当地含有氨基酸52-473。Hsf的另外合适片段包括首部的表面暴露的区域，包括下述氨基酸序列中的一个或多个：52-62、76-93、116-134,147-157、157-175,199-211、230-252、252-270、284-306、328-338、362-391、408-418、430-440和469-479。
当Hsf存在于外膜囊泡制剂中时，它可以作为全长蛋白质或作为由氨基酸1-51和134-591的融合物（获得氨基酸序列134到C末端的成熟的外膜蛋白）构成的变体表达。合适形式的Hsf可以这样截短，以便缺失公开于WO01/55182中的蛋白质的可变区。合适变体将包括如WO01/55182中定义的一个、两个、三个、四个或五个可变区的缺失。在一个方面，第一个和第二个可变区是缺失的。
合适的变体将缺失在氨基酸序列52直到237或54直到237之间的残基，更适当地缺失在氨基酸52直到133或55直到133之间的残基。成熟蛋白质将缺失信号肽。
Hap：来自脑膜炎奈瑟菌的Hap样蛋白质的计算机分析揭示至少三个结构结构域。将来自菌株H44/76的Hap样序列视为参考，包含氨基酸1 - 42的结构域1编码自主转运蛋白家族特有的sec依赖性信号肽，包含氨基酸43 - 950的结构域2编码可能是表面暴露且对于免疫系统可接近的过客结构域，包含残基951到C末端（1457）的结构域3预测为编码可能装配成桶样结构且锚定到外膜内的β链。因为结构域2和3可能是表面暴露的，充分保守的（在测试的所有菌株中超过80%），并且可以作为亚单位抗原在大肠杆菌中产生，所以它代表有利的疫苗候选物（还参见Pizza等人（2000），Science 287: 1816-1820）。
公开内容的免疫原性组合物可以包含适当地掺入OMV制剂内的全长Hap蛋白质。公开内容的免疫原性组合物还可以包含Hap的过客结构域，其在菌株H44/76中由氨基酸残基43-950组成。Hap的这个片段特别有利地用于公开内容的亚单位组合物中。关于Hap的过客结构域的上述序列可以在N或C末端上延伸或截短最高达1、3、5、7、10、15、20、25或30个氨基酸。
在一个实施方案中，本发明的免疫原性组合物或疫苗包含细菌外膜囊泡制剂，所述制剂包含组合物或疫苗的抗原。此类组合物或疫苗可以通过作为本发明的另一个方面提供的方法产生，所述方法包括培养产生所述抗原的至少第一种革兰氏阴性菌菌株，其中所述抗原在足以提供外膜囊泡产生的水平产生，当施用于受试者时，所述水平引发针对由至少所述第一种革兰氏阴性菌菌株的感染的保护性应答；由培养的菌株制备外膜囊泡；且将所述外膜囊泡与药学可接受的载体或赋形剂组合，以产生适合于施用于受试者的免疫原性组合物。
“足以提供外膜囊泡产生的水平当施用于受试者时，引发针对由至少所述第一种革兰氏阴性菌菌株的感染的保护性应答”意指这样产生足够的抗原，从而使得在包含所述抗原的外膜囊泡施用后，诱导免疫应答，其预防疾病、延缓疾病发展或减少疾病严重性，所述疾病由所述第一种革兰氏阴性菌株引起，或减少或完全消除疾病的症状。
如实施例中所示，TdfI的表达响应游离锌浓度得到调节，从而使得减少水平的游离锌与TdfI表达的上调相关。（TdfH的表达被认为也受游离锌水平影响，尽管程度更少）。因此，在所述方法中，所述细菌菌株的培养可以在包含锌螯合剂的培养基中，适当地以0.01-100、0.1-10、0.3-5或0.5-1 μM的浓度，以便上调所述抗原的表达。所述锌螯合剂可以例如是TPEN。作为锌螯合剂使用的替代方案，根据该方法的所述培养可以在Catlin培养基中发生。
在该方法的一个实施方案中，抗原由包含编码所述抗原的多核苷酸的表达载体在所述第一种革兰氏阴性菌菌株中表达。另外或可替代地，所述抗原由来自异源和/或强启动子的表达产生，即在一个实施方案中，此类启动子被改造到所述细菌菌株的染色体内，从而使得它与编码所述抗原的多核苷酸序列可操作地连接。如本领域技术人员众所周知的，术语“异源的”指在自然界中未一起发现的两个生物学组分。组分可以是宿主细胞、基因或调节区，例如启动子。尽管异源组分在自然界中未一起发现，但它们可以一起发挥作用，如当对于基因异源的启动子与基因可操作地连接时。“强”启动子是以高水平驱动与之可操作地连接的多核苷酸序列的表达的启动子。在属于特定物种的细菌菌株的背景中，何者构成高水平将是本领域技术人员众所周知的，如此类菌株中强启动子的鉴定一样。
进一步关于所述方法，由培养菌株制备外膜囊泡的步骤可以使用去污剂提取执行，或可以通过替代方法实现。在前述情况下，所述提取可以涉及0-0.5%、0.02-0.4%、0.04-0.3%、0.06-0.2%、0.08-0.15%或0.1%去污剂的使用。优选地，去污剂是脱氧胆酸盐。
如上所述，所述抗原的表达在由所述第一种革兰氏阴性菌菌株产生的外膜囊泡中可以是上调的，例如由于在低游离锌的条件下培养。因此，所述抗原的表达在包含此类制剂的本发明的免疫原性组合物或疫苗中的外膜囊泡制剂中可以是上调的。此类上调可以是相对于来自相同菌株的野生型细菌的外膜囊泡制剂中所述抗原的表达。特别地，所述抗原的表达可以是上调1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10倍或更多倍。
对于在低游离锌的条件下的培养可替代或另外地，为了实现所述抗原的此类表达上调，所述外膜囊泡制剂由其衍生的宿主细胞可以在所述抗原的产生中遗传修饰。此类修饰可以涉及内源蛋白质的功能表达的破坏，所述蛋白质在未遗传修饰的宿主细胞中阻遏所述抗原的表达。因此，在内源阻遏蛋白的此类靶向破坏后，所述抗原的表达不再是被阻遏的，即是相对上调的。在一个实施方案中，内源阻遏蛋白是奈瑟菌属或革兰氏阴性菌Zur阻遏物。对于阻遏蛋白表达的破坏可替代或另外地，宿主细胞可以通过引入与编码抗原的多核苷酸可操作地连接的异源和/或强启动子进行修饰。此类启动子在上文讨论。所述引入的启动子可以是诱导型的，即启动子可以分别是响应化学或环境刺激例如IPTG或热而“打开”或上调的。
在另一个方面，本发明进一步提供了遗传改造的革兰氏阴性菌菌株，由其可以衍生包含此类制剂的本发明的免疫原性组合物或疫苗的外膜囊泡制剂。
在一个实施方案中，免疫原性组合物或疫苗包含从两种或多种革兰氏阴性菌菌株中分离的外膜囊泡制剂。在进一步的实施方案中，所述菌株中的至少一种属于选自下述的细菌物种或属：疏螺旋体属；伯氏疏螺旋体；布鲁氏菌属；马耳他布鲁氏菌；绵羊种布鲁氏菌；衣原体属；鹦鹉衣原体；沙眼衣原体；埃希氏菌属；大肠杆菌；军团菌属；嗜肺军团菌；耶尔森菌属；小肠结肠炎耶尔森菌；志贺氏菌属；福氏志贺氏菌；痢疾志贺氏菌；鲍氏志贺氏菌；柯克斯体属；贝纳柯克斯体；食酸菌属；不动杆菌属；鲍氏不动杆菌；乙酸钙不动杆菌；约氏不动杆菌；琼氏不动杆菌；鲁氏不动杆菌；抗辐射不动杆菌；放线杆菌属；小放线杆菌；胸膜肺炎放线杆菌；聚集菌属；伴放线菌聚集菌；Aggregatibacter aphrophilus；食烷菌属；泊库岛食烷菌；固氮弧菌属；固氮菌属；棕色固氮菌；博德特氏菌属；支气管炎博德特氏菌；副百日咳博德特氏菌；百日咳博德特氏菌；百日咳博德特氏菌；Bordetella petrii；弯曲杆菌属；结肠弯曲杆菌；乌普萨拉弯曲杆菌；丛毛单胞菌属；睾丸酮丛毛单胞菌；戴尔福特菌属；食酸戴尔福特菌；Diaphorobacter；嗜血杆菌属；流感嗜血杆菌；副猪嗜血杆菌；睡眠嗜血杆菌；曼海姆菌属；溶血曼海姆菌；莫拉菌属；卡他莫拉菌；奈瑟菌属；淋病奈瑟球菌；脑膜炎奈瑟菌；巴斯德氏菌属；达可马巴斯德氏菌；多杀巴斯德氏菌；变形菌属；奇异变形菌；假单胞菌属；铜绿假单胞菌；施氏假单胞菌；和鞘氨醇单胞菌属。
在本发明的另一个方面，提供了用于产生免疫原性组合物或疫苗的方法，其包括：在足以产生所述抗原的条件和时间下培养包含表达载体的宿主细胞，所述表达载体包含编码所述抗原的多核苷酸，并且从培养基中回收抗原；任选通过选自下述的方法纯化所述抗原：硫酸铵沉淀、乙醇沉淀、酸提取、磷酸纤维素层析、疏水作用层析、羟磷灰石层析和凝集素层析；并且用药学可接受的载体或赋形剂配制所述抗原。在此类方法的背景中，抗原对于宿主细胞可以是内源的，或宿主细胞可以通过引入外源抗原进行遗传改造。用于产生所述抗原目的的宿主细胞的遗传修饰包括内源阻遏蛋白的破坏，以及异源和/或强启动子的使用，如上所述。
本发明延伸至通过提供的方法产生的免疫原性组合物或疫苗。
除了所述抗原和任选地一种或多种进一步的抗原外，本发明的免疫原性组合物或疫苗可以包含药学可接受的赋形剂、佐剂和锌盐中的一种或多种。
在本发明的进一步方面，提供了免疫原性组合物或疫苗，其包含编码抗原和任选地另外的抗原的至少一种多核苷酸，如上定义的，其中所述多核苷酸与真核启动子可操作地连接。在此类方面，抗原自身不施用，但在编码多核苷酸的施用后在体内产生。此类技术是本领域已知的，参见例如Wolff 等人，Science,（1990）247: 1465-8。在此类多核苷酸中抗原的表达将在能够驱动在哺乳动物细胞内的表达的真核启动子的控制下。多核苷酸可以另外包含编码其他抗原的序列。此类真核启动子的例子包括来自使用哺乳动物细胞作为宿主的病毒的启动子，包括腺病毒启动子和逆转录病毒启动子。可替代地，可以使用哺乳动物启动子。
在一个实施方案中，在上文定义的免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由革兰氏阴性菌菌株感染的保护性应答。如本文使用的，“保护性应答”意指这样的免疫应答，其预防疾病、延缓疾病发展或减少疾病严重性，所述疾病由革兰氏阴性菌菌株引起，或减少或完全消除疾病的症状。在进一步的实施方案中，所述组合物或疫苗能够生成针对由两种或多种不同细菌菌株的感染的保护性应答。适当地，所述不同革兰氏阴性菌菌株中的一种或多种属于选自下述的细菌属或物种：疏螺旋体属；伯氏疏螺旋体；布鲁氏菌属；马耳他布鲁氏菌；绵羊种布鲁氏菌；衣原体属；鹦鹉衣原体；沙眼衣原体；埃希氏菌属；大肠杆菌；军团菌属；嗜肺军团菌；耶尔森菌属；小肠结肠炎耶尔森菌；志贺氏菌属；福氏志贺氏菌；痢疾志贺氏菌；鲍氏志贺氏菌；柯克斯体属；贝纳柯克斯体；食酸菌属；不动杆菌属；鲍氏不动杆菌；乙酸钙不动杆菌；约氏不动杆菌；琼氏不动杆菌；鲁氏不动杆菌；抗辐射不动杆菌；放线杆菌属；小放线杆菌；胸膜肺炎放线杆菌；聚集菌属；伴放线菌聚集菌；Aggregatibacter aphrophilus；食烷菌属；泊库岛食烷菌；固氮弧菌属；固氮菌属；棕色固氮菌；博德特氏菌属；支气管炎博德特氏菌；副百日咳博德特氏菌；百日咳博德特氏菌；百日咳博德特氏菌；Bordetella petrii；弯曲杆菌属；结肠弯曲杆菌；乌普萨拉弯曲杆菌；丛毛单胞菌属；睾丸酮丛毛单胞菌；戴尔福特菌属；食酸戴尔福特菌；Diaphorobacter；嗜血杆菌属；流感嗜血杆菌；副猪嗜血杆菌；睡眠嗜血杆菌；曼海姆菌属；溶血曼海姆菌；莫拉菌属；卡他莫拉菌；奈瑟菌属；淋病奈瑟球菌；脑膜炎奈瑟菌；巴斯德氏菌属；达可马巴斯德氏菌；多杀巴斯德氏菌；变形菌属；奇异变形菌；假单胞菌属；铜绿假单胞菌；施氏假单胞菌；和鞘氨醇单胞菌属。
在一个方面，本发明提供了用于治疗或预防革兰氏阴性菌疾病或感染的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如上定义的本发明的免疫原性组合物或疫苗。
在另一个方面，提供了用于在革兰氏阴性菌疾病或感染的治疗或预防中使用的如上定义的免疫原性组合物或疫苗。
如本文使用的，“疾病”意指通过细菌的感染或者通过细菌引起的或与通过细菌的感染有关的任何疾病，包括例如上呼吸道感染和侵袭性细菌疾病例如菌血症和脑膜炎。
虽然所述革兰氏阴性菌疾病可以是通过任何革兰氏阴性菌菌株引起的感染或疾病，但适当地，所述菌株属于选自下述的细菌属或物种：疏螺旋体属；伯氏疏螺旋体；布鲁氏菌属；马耳他布鲁氏菌；绵羊种布鲁氏菌；衣原体属；鹦鹉衣原体；沙眼衣原体；埃希氏菌属；大肠杆菌；军团菌属；嗜肺军团菌；耶尔森菌属；小肠结肠炎耶尔森菌；志贺氏菌属；福氏志贺氏菌；痢疾志贺氏菌；鲍氏志贺氏菌；柯克斯体属；贝纳柯克斯体；食酸菌属；不动杆菌属；鲍氏不动杆菌；乙酸钙不动杆菌；约氏不动杆菌；琼氏不动杆菌；鲁氏不动杆菌；抗辐射不动杆菌；放线杆菌属；小放线杆菌；胸膜肺炎放线杆菌；聚集菌属；伴放线菌聚集菌；Aggregatibacter aphrophilus；食烷菌属；泊库岛食烷菌；固氮弧菌属；固氮菌属；棕色固氮菌；博德特氏菌属；支气管炎博德特氏菌；副百日咳博德特氏菌；百日咳博德特氏菌；百日咳博德特氏菌；Bordetella petrii；弯曲杆菌属；结肠弯曲杆菌；乌普萨拉弯曲杆菌；丛毛单胞菌属；睾丸酮丛毛单胞菌；戴尔福特菌属；食酸戴尔福特菌；Diaphorobacter；嗜血杆菌属；流感嗜血杆菌；副猪嗜血杆菌；睡眠嗜血杆菌；曼海姆菌属；溶血曼海姆菌；莫拉菌属；卡他莫拉菌；奈瑟菌属；淋病奈瑟球菌；脑膜炎奈瑟菌；巴斯德氏菌属；达可马巴斯德氏菌；多杀巴斯德氏菌；变形菌属；奇异变形菌；假单胞菌属；铜绿假单胞菌；施氏假单胞菌；和鞘氨醇单胞菌属。在特定实施方案中，任选地，所述菌株不是奈瑟菌属菌株。
本发明的免疫原性组合物或疫苗可以连同或不连同添加的赋形剂，局部地或全身地以片剂、固体、粉末、液体、气溶胶形式，经口、鼻、鼻咽、肠胃外、肠、胃、局部、经皮、皮下、肌内施用。用于制备可肠胃外施用的组合物的实际方法将是本领域技术人员已知或显而易见的，并且在此类出版物如Remingtons Pharmaceutical Science，第15版，Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania（1980）中更详细地描述。
认识到经口施用可以要求保护组合物免于降解。这一般通过使组合物与试剂结合或通过在适当地有抵抗力的载体中包装组合物来实现，所述试剂使得所述组合物对酸性和酶促水解有抵抗力。保护免于降解的方法是本领域众所周知的。
将组合物施用于处于获得革兰氏阴性疾病的危险中的动物，以预防或至少部分停止疾病及其并发症发展。足够实现这点的量定义为“治疗有效剂量”。对于治疗用途有效的量将依赖于例如免疫原性组合物或疫苗、施用方式、患者的重量和一般健康状态、和开处方医生的判断。取决于由患者需要且耐受的剂量和频率、和施用途径，可以施用免疫原性组合物或疫苗的单次或多次剂量。
免疫原性组合物或疫苗以在宿主中有效引起免疫应答特别是体液免疫应答的量施用。用于免疫接种的量一般范围为0.001 mg - 约1.0 mg/70千克患者，更通常约0.001 mg - 约0.2 mg/70千克患者。可以使用从0.001直到约10 mg/患者/天的剂量，特别当抗原施用于隐蔽部位且不进入血流内，例如进入体腔或器官的腔内时。基本上更高的剂量（例如10 - 100 mg或更多）在经口、鼻或局部施用中是可能的。最初施用可以随后为相同或不同组合物的加强免疫接种，其中至少一次加强剂量、更通常两次加强剂量是优选的。免疫原性组合物或疫苗一般施用于哺乳动物，其就给定革兰氏阴性菌菌株或物种而言是免疫学首次用于实验的。在特定实施方案中，哺乳动物是约五岁或更年轻，且优选约两岁或更年轻的人类幼儿，并且抗原组合物在下述时间中的任何一个或多个施用：两周，一个月，2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个月，或一岁或出生后15、18或21个月，或在2、3、4或5岁龄时。一般而言，对于任何哺乳动物的施用优选在疾病症状的第一个体征前或在可能或实际暴露于给定革兰氏阴性菌株或物种的第一个体征时开始。
在进一步方面，本发明提供了制备免疫球蛋白（例如用于在革兰氏阴性菌疾病的预防或治疗中使用）的方法，其包括用本发明的免疫原性组合物或疫苗免疫接种接受者和从接受者中分离免疫球蛋白的步骤。还提供了如此获得的免疫球蛋白制剂，任选以另外包含药学可接受的赋形剂的药物制剂的形式。
用于多克隆抗体产生的接种物一般通过将免疫原性组合物或疫苗分散在生理学可耐受的稀释剂例如盐水或适合于人使用的其他佐剂中进行制备，以形成水性组合物。将免疫刺激量的接种物施用于哺乳动物，并且随后将接种的哺乳动物维持足以免疫原性组合物或疫苗诱导保护性抗体的时间。抗体可以通过众所周知的技术例如亲和层析分离至所需程度。抗体可以包括来自多种常用动物的抗血清制剂，例如山羊、灵长类动物、驴、猪、马、豚鼠、大鼠或人。将动物放血且回收血清。
依照本发明产生的免疫球蛋白可以包括完整抗体、抗体片段或子片段。抗体可以是任何种类的完整免疫球蛋白，例如IgG、IgM、IgA、IgD或IgE，嵌合抗体，或对于TdfI蛋白质和TdfH蛋白质具有双重特异性的杂交抗体。它们还可以是片段，例如F（ab'）2、Fab'、Fab、Fv等，包括杂交片段。免疫球蛋白还包括天然、合成或遗传改造的蛋白质，其通过结合特异性抗原以形成复合物类似抗体起作用。
本发明的免疫原性组合物或疫苗可以施用于接受者，其随后充当响应来自特异性免疫原性组合物或疫苗的攻击而产生的免疫球蛋白来源。因此治疗的受试者将贡献经由常规血浆分馏方法由其获得超免疫球蛋白的血浆。超免疫球蛋白将施用于另一个受试者，以便赋予针对由给定革兰氏阴性菌物种或菌株的感染的抗性，或治疗由给定革兰氏阴性菌物种或菌株的感染。本发明的超免疫球蛋白特别用于治疗或预防婴儿、免疫受损的个体或需要治疗并且个体没有时间响应疫苗接种产生抗体时的革兰氏阴性菌疾病。
本发明的另外方面是包含针对TdfI蛋白质和/或TdfH蛋白质反应性的单克隆抗体、和药学可接受的赋形剂的药物制剂，其可以用于治疗或预防通过革兰氏阴性菌的感染。此类药物制剂包含单克隆抗体，其可以是任何种类的完整免疫球蛋白，例如IgG、IgM、IgA、IgD或IgE，嵌合抗体，或对于TdfI蛋白质和TdfH蛋白质具有双重特异性的杂交抗体。它们还可以是片段，例如F（ab'）2、Fab'、Fab、Fv等，包括杂交片段。制备单克隆抗体的方法是本领域众所周知的，并且可以包括脾细胞与骨髓瘤细胞的融合（Kohler和Milstein，1975，Nature 256；495；Antibodies - a laboratory manual Harlow和Lane 1988）。可替代地，单克隆Fv片段可以通过筛选合适的噬菌体展示文库来获得（Vaughan TJ等人，1998，Nature Biotechnology 16；535）。单克隆抗体还可以是使用本领域众所周知的技术人源化或部分人源化的。
本发明延伸至用于治疗或预防革兰氏阴性菌疾病的方法，其包括给患者施用有效量的此类药物制剂的步骤，所述药物制剂包含免疫球蛋白或单克隆抗体，和用于在此类疾病的治疗或预防中使用的此类制剂。
本专利说明书内引用的所有参考文献或专利申请引入本文作为参考。
实施例
应当理解本文描述的实施例和实施方案仅用于举例说明性目的，并且根据其的多个修饰或变化对于本领域技术人员将是显而易见的，并且待包括在本申请的精神和权限以及附加权利要求的范围内。本文引用的所有出版物、专利和专利申请为了所有目的在此整体引入作为参考。
实施例1：具有TdfI上调的OMVs的免疫原性
TdfI是被认为当脑膜炎奈瑟菌在血液内时表达的基因。因此当该菌株在常规培养基中生长时，它通常是不表达的，但例如野生型菌株H44/76可以制备为在专门培养条件下（补充有氯高铁血红素的RPMI培养基）表达该蛋白质。下述实验详述了其中TdfI表达已重组制备为可诱导（通过IPTG的使用）的H44/76菌株的使用。这允许在由该菌株制备的OMV疫苗表面上过表达TdfI，并且提供培养表达抗原的菌株的容易方法，以确定针对TdfI生成的抗体是否能够杀死在正常培养条件下（+IPTG）表达TdfI的此类修饰菌株。IPTG对在SBA中使用的细胞上的TdfI表达的影响显示于图7中。
在第0、21和28天时通过肌内途径，将10只小鼠的组用OMV免疫接种三次。每次接种物由在具有MPL的AlPO4上配制的5μg（蛋白质含量）OMVs组成。OMVs衍生自这样改造的脑膜炎奈瑟菌菌株H44/76，以便荚膜多糖和PorA是下调的，并且LOS免疫型是galE型。作出OMVs的比较，其中TdfI是或不是上调的（在IPTG诱导型启动子的控制下上调）。在第42天时，使用表达或不表达TdfI（在培养基中添加或未添加IPTG后）的同源菌株H44/76（B:15:P1.7,16），通过血清杀菌测定获得血样用于分析。
脑膜炎奈瑟菌菌株在具有10 μg/ml氯霉素的GC琼脂培养皿上在37℃+ 5% CO2培养过夜。将它们在补充有或未补充有IPTG 1000 μM的液体TSB培养基中亚培养3小时。将个别血清在56℃灭活30分钟。将血清样品在HBSS-BSA 0.5%中稀释，并且随后在平底微板中25 μl的体积中两倍稀释（8个稀释度）。将细菌在HBSS-BSA 0.5%中稀释，以获得8.103 CFU/ml，并且将12.5μl这种稀释物加入血清稀释物中。还将兔补体（12.5μl）加入每个孔中。在37℃在振荡下温育75分钟后，将15 μl混合物涂布到在37℃+ 5% CO2温育过夜的预温的GC琼脂板上。
计数CFU，并且计算杀死百分比。SBA滴度是给出50%杀死的稀释度。
SBA滴度：由靶细胞的TdfI表达的影响
如果没有IPTG，那么TdfI不在靶细胞上表达，所述靶细胞未被来自用上调TdfI的OMVs免疫接种的小鼠的血清杀死。当TdfI的表达由IPTG特异性诱导时，靶细胞表达TdfI并且被抗TdfI-OMVs小鼠血清杀死。
实施例2: 具有疫苗潜力的在脑膜炎奈瑟菌中的新型锌调节的外膜蛋白
摘要
因为在人宿主中游离铁的浓度低，所以有效的铁获得机制构成关于致病菌的重要毒力因子。在革兰氏阴性菌中，TonB依赖性外膜受体牵涉铁获得。然而，在人宿主中同样罕见的其他金属跨越细菌外膜的转运远不明了。在这个研究中，我们表征了在脑膜炎奈瑟菌中的新型TonB依赖性受体。我们显示细菌在锌限制下产生这种蛋白质，并且它涉及锌吸收。此外，因为该蛋白质在分离物中是高度保守的，并且能够诱导杀菌抗体，所以它构成用于开发针对脑膜炎奈瑟菌的疫苗的新型候选物，对于所述脑膜炎奈瑟菌到目前为止没有可用的有效通用疫苗。指定为TfdI的蛋白质的同系物在位于呼吸道中的许多其他病原体中发现，暗示受体介导的锌吸收对于这种生态位中的存活是特别重要的。
引言
革兰氏阴性菌的细胞外被膜由两个膜――内膜和外膜组成，其通过含有肽聚糖层的周质分离。外膜构成用于来自环境的有害化合物的屏障。大多数营养素可以通过被动扩散经过外膜，经由丰富通道形成外膜蛋白，统称孔蛋白。然而，当营养素的细胞外浓度很低时，扩散不是选项。这是例如对于铁的情况。病原体面对在人宿主内低浓度的游离铁，其中铁由铁转运和贮存蛋白质结合，例如乳铁蛋白和转铁蛋白。因此，有效的铁获得机制构成重要的毒力因子，并且已在许多病原体中广泛研究（1，2）。
当在铁限制条件下生长时，革兰氏阴性菌诱导外膜蛋白的合成，所述外膜蛋白充当关于宿主的铁结合蛋白、血红素或铁载体的受体，其是在铁限制下由细菌产生且分泌的小的铁螯合化合物。此类受体的解析晶体结构揭示有22条链的β桶，其不构成开放通道但由N末端塞子结构域关闭（3）。在配体与受体结合后，后续吸收是要求跨越内膜的质子梯度的能量的主动过程，其经由三种蛋白质的复合物，TonB复合物偶联至外膜中的受体（4，5）。
虽然铁获得机制已在许多革兰氏阴性菌中广泛研究，但关于其他必需重金属例如锌和锰跨越细菌外膜的转运仍知之甚少。这些微量元素的浓度在人宿主中也是低的，其例如响应通过金属硫蛋白和钙防卫蛋白的产生的感染，从而减少金属对于侵入病原体的可用度（6，7）。因此，革兰氏阴性病原体可能具有用于这些金属的有效获得机制，其可以类似或不类似铁获得系统。
脑膜炎奈瑟菌是专性人病原体，其可以无症状地寄居鼻咽粘膜。偶然地，该细菌进入血流且可以引起具有高死亡率的脑膜炎和败血症（8）。虽然基于荚膜多糖，对于脑膜炎奈瑟菌的大多数致病性血清群的疫苗是可得的，但针对血清群B脑膜炎球菌的疫苗是缺乏的。血清群B菌株的多糖荚膜由于其与人糖蛋白的相似性而是弱免疫原性的（9）。因此，亚荚膜抗原被研究作为可替代的疫苗组分；然而，这些研究被主要外膜蛋白的高度抗原变异性所障碍。因此，注意力已转换为次要抗原，包括TonB依赖性受体。
当在铁限制下生长时，脑膜炎奈瑟菌产生TonB依赖性受体用于乳铁蛋白（10）、转铁蛋白（11）、血红蛋白（12，13）和肠菌素（14），都涉及铁吸收。基于同源性检索，Turner等人（15）鉴定了在三种奈瑟菌属菌株的可得基因组序列中关于假定的TonB依赖性家族（Tdf）成员的七种另外的基因。有趣的是，这些tdf基因中的一些的表达在多种微阵列研究中看起来不受铁可用度影响（16，17），表明其产物可能牵涉除了铁外的金属的转运。此处我们研究了这些受体之一的合成调节、功能和疫苗潜力，并且显示这种受体涉及锌吸收。
结果
TdfI不是血红素受体
TdfI（在脑膜炎奈瑟菌血清群A菌株Z2491和血清群B菌株MC58的测序基因组中分别的基因座标签NMA1161和NMB0964）先前鉴定为存在于奈瑟菌属基因组中的七种新型假定TonB依赖性受体之一（15），并且发现在首次用于实验的人血清的存在下是上调的（18）。因为迄今为止研究的几乎所有TonB依赖性受体都涉及铁获得，所以我们假定TdfI转运铁络合物。这个想法通过下述事实得到加强：用NMA1161的氨基酸序列的blast检索（19）揭示与用于血红素吸收的外膜受体的高序列相似性，例如卡他莫拉菌的HumA（20）具有41%同一性和58%相似性。
为了评估TdfI的功能，我们构建了称为HB-1的血清群B菌株H44/76的无包膜衍生物的tdfI缺失突变型。我们发现如通过斑点印迹分析评估的血红素与HB-1和tdfI突变型的相似结合，并且tdfI突变株仍可以在具有血红素作为唯一铁源的板上生长。我们还无法发现通过表达TdfI的大肠杆菌细胞增加的血红素结合。我们还无法补充大肠杆菌血红素营养缺陷型（数据未显示）。因此，我们假定尽管与血红素受体同源，但TdfI不充当血红素受体。
tdfI通过锌的调节
因为TdfI不是血红素受体且未发现由铁调节，所以我们寻找在其中我们可以检测在荚膜缺陷的H44/76脑膜炎奈瑟菌HB-1中的tdfI表达的条件。当该细菌在胰蛋白酶大豆肉汤（TSB）―― 富含复合物的培养基中生长时，我们从未在蛋白质印迹上检测到TdfI（图1A，泳道1）。然而，当该细菌在化学成分确定的RPMI培养基中生长时，TdfI在细菌裂解产物中是可检测的（图1A，泳道2）。检测信号的特异性通过其在RPMI中生长的tdfI敲除菌株中的不存在加以证实（图1A，泳道3）。我们注意到加入RPMI中的即使小量TSB的存在也负面影响TdfI合成（图1B）；看起来TSB含有阻遏tdfI转录的化合物。因为我们注意到RPMI不含痕量金属的来源，所以我们决定测试痕量金属混合物（cocktail）（含有钴、钼、锰、铜和锌）的添加是否阻遏表达tdfI，这看起来是实际情况。我们随后分开地测试所有这些金属，并且发现特别是锌，即使以亚μM浓度，也引起tdfI表达的阻遏（图1C）。因为标准RPMI未补充有特定锌来源，所以细菌生长所需的可用锌推测来自用于制备培养基的盐中的水和/或痕量。我们通过电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测量在RPMI培养基中的锌浓度，并且发现它是~110十亿分率（~1.69 μM）。
当我们用特异性锌螯合剂N,N,N',N'-四（2-吡啶甲基）乙二胺（TPEN）补充RPMI培养基时，tdfI的锌调节变得甚至更加明显。TPEN对于培养基的添加导致在TdfI合成中的剂量依赖性增加（图1D）。然而，超过1 μM TPEN的浓度完全抑制细胞生长，推测是由于来自培养基的总锌耗尽。生长可以通过锌的添加得到恢复（数据未显示）。tdfI的锌调节通过实时定量PCR（RT-qPCR）加以证实，使用得自在补充有或未补充有500 nM锌或0.5 μM TPEN的RPMI中生长的培养物的总RNA。数据显示在锌的存在下的13.8倍阻遏，和在TPEN的存在下的3.8倍上调。在加入的TPEN和锌之间的倍数差异是52.6倍。
转录调节蛋白Zur在tdfI表达中的作用
在大肠杆菌中，锌吸收调节蛋白（Zur）已显示调节znuACB基因的表达，所述znuACB基因编码周质结合蛋白、ATP酶和从周质到细胞质的锌转运所需的整合内膜组分（23）。在锌的存在下，Zur结合在znuACB操纵子的启动子中的Zur结合元件（共有区GAAATGTTATANTATAACATTTC），且从而阻断转录。
在脑膜炎奈瑟菌菌株MC58的基因组序列中，我们鉴定了大肠杆菌zur基因的同系物，即NMB1266，和znuCBA基因的同系物，即NMB0588、NMB0587和NMB0586。此外，我们在奈瑟菌属tdfI（GtAATGTTATATaATAACAaact）和znuC（cAAAcGTTATACagTAtCATaTC）（与大肠杆菌共有区等同的核苷酸是大写情况）上游的区域中发现类似大肠杆菌Zur结合共有区的序列。为了证实Zur在tdfI表达的调节中的牵涉，我们生成菌株HB-1的zur突变型，其实际上组成性产生TdfI（图2）。此外，RT-qPCR证实Zur在znuA和tdfI的表达中的牵涉，因为与其在锌的存在下生长的亲本株相比较，znuA和tdfI表达水平在zur突变型中分别增加5和34倍。
TdfI促进锌获得
因为tdfI的表达通过锌的可用度调节，所以可能TdfI充当关于锌和含锌络合物的受体。我们首先分析氨基酸序列，且使用在www.rostlab.org处的PROFtmb程序构建TdfI的拓扑学模型（图3）。TdfI含有在假定的细胞外环L3中的两个半胱氨酸残基。如果这些半胱氨酸构成二硫键（由细菌膜馏分通过含和不含DTT的SDS-PAGE分析支持的，其中样品与还原剂的温育导致电泳迁移率中的转变，推测是由于二硫键的破坏），那么它们造成紧密接近的都富含组氨酸和天冬氨酸残基的两段氨基酸残基（图3），其可以具有功能重要性，因为同样在大肠杆菌的周质ZnuA蛋白质中，His和Asp残基段涉及结合锌（25）。因此，我们考虑TdfI结合游离锌且将其转运至周质的可能性。为了测试这个假设，我们首先测定TdfI是否可以结合锌。我们就其与4-（2-吡啶偶氮）间苯二酚（PAR）竞争锌的能力比较含和不含TdfI的外膜囊泡。与不含TdfI的囊泡相比较，含有TdfI的外膜囊泡显示~40%增加的锌结合（图4A）。为了测试锌的转运，我们使用ICP-MS就细胞内锌的累积比较tdfI敲除、tonB敲除及其亲本株。HB-1累积比tdfI突变型或tonB突变型多~33%的锌，表明TdfI转运游离锌，并且这种转运需要TonB系统（图4B）。
如果TdfI真正涉及游离锌的摄取，那么将预期与野生型菌株相比较，znu基因表达的阻遏在tdfI突变型中在更高的外部锌浓度时发生。为了测试这个想法，我们在具有500 nM另外的锌的RPMI培养基中生长tdfI突变株和亲本株，所述培养基在很大程度上但未完全阻遏野生型菌株中的tdfI表达（图1C）。我们随后通过RT-qPCR测量tdfI和znuA mRNA的相对水平。tdfI突变型仍含有tdfI基因的前437个核苷酸，其用于基因表达的检测。在tdfI突变型中，存在表达多18.6倍的tdfI和多7.4倍的znuA，显示在应用的生长条件下，在tdfI突变型中的细胞内锌浓度真的低于亲本株中的那种。此外，znuA敲除菌株在锌的存在下表达高水平的TdfI，证实ZnuA是支持细胞中的足够锌水平所需的（图4C）。因此，TdfI和ZnuA都涉及锌的转运。
TdfI的保守性
除了TdfI的功能外，我们还希望研究TdfI是否是用于通用的脑膜炎奈瑟菌疫苗的疫苗候选物。标准之一是抗原必须是保守的。我们首先查看可用的脑膜炎奈瑟菌基因组，并且发现TdfI具有惊人的成熟蛋白质的97-99%氨基酸同一性（图8）。序列差异分散遍及该蛋白质，并且在预测的细胞外环区域中未成簇，其在奈瑟菌属外膜蛋白中通常是抗原上可变的（图8）。我们随后分析在来自不同血清群和不同克隆谱系的32种不同脑膜炎奈瑟菌分离物的实验对象组中TdfI的存在。每种菌株在补充有或未补充有500 nM锌的RPMI培养基中生长，并且通过蛋白质印迹用针对H44/76的TdfI引发的抗血清分析。所有菌株都显示在锌的存在下TdfI的阻遏（图5）。
我们随后希望了解TdfI与其他致病菌的同源性。我们首先比较TdfI与淋病奈瑟菌，并且发现在这两种奈瑟菌属菌株之间的96%同一性和97%相似性。接下来，我们使用在NCBI的blast程序伴随在氨基酸水平40%同一性的截断，以搜索TdfI在其他致病菌中的同系物。我们鉴定了其他致病菌中的同系物，包括卡他莫拉菌、副猪嗜血杆菌、溶血曼海姆菌、鲍氏不动杆菌、多杀巴斯德氏菌、百日咳博德特氏菌和胸膜肺炎放线杆菌，在氨基酸水平上平均41%同一性和59%相似性，并且所有TdfI同系物都具有His/Asp区（图9）。有趣的是，在百日咳博德特氏菌中，tdfI同系物定位邻近znuABC和zur基因的同系物，再次指出在这些基因之间的功能关系。此外，所有这些TdfI同系物都含有富含His-和Asp的段（图9）。
TdfI诱导杀菌抗体
为了研究TdfI的疫苗潜力，我们用含有过表达水平的这种蛋白质的奈瑟菌属外膜囊泡免疫接种小鼠（图6A），并且就杀菌抗体的存在测试所得到的血清。常规地，我们对在TSB培养基中生长的细菌执行血浆杀菌测定；然而，在这些条件下，tdfI不表达。因此，我们在由异丙基β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷（IPTG）诱导型启动子表达TdfI的菌株上就杀菌活性测试血清，并且比较含和不含IPTG生长的培养物。当IPTG不存在时，血清的杀菌滴度是<1:100，但当在细菌的生长过程中存在IPTG时，血清的杀菌滴度是1:1042。在免疫前血清中的滴度也是<1:100。这些数据明确显示TdfI能够引起杀菌抗体。我们还希望研究正常染色体编码的tdfI表达水平是否足以介导补体介导的杀死。为此我们采用zur敲除菌株，其在TSB培养基中组成性产生TdfI，并且在这种培养基中与野生型菌株类似地生长。
讨论
用于锌的高亲和力ZnuABC吸收系统先前已在淋病奈瑟菌中得到鉴定（30）。如上所述，同系物可以在脑膜炎球菌基因组以及许多其他细菌的基因组中发现。在肠道沙门氏菌（Salmonella enterica）中，这种ABC转运蛋白已与毒力相关（31）。涉及锌获得的外膜受体决未鉴定，并且认为锌通过孔蛋白扩散。
然而，在人宿主中，游离锌水平非常可能太低而无法通过被动扩散支持细菌生长。在人血清中的锌总量是约19 μM，但绝大多数由血清蛋白质例如清蛋白结合（32）。此处我们已鉴定由锌调节的外膜受体，TdfI。700 nM锌对于生长培养基的添加完全阻遏TdfI表达。TdfI的功能是结合且转运未结合的（游离）锌。我们预测锌最初由在外部环中的His/Asp段结合，并且随后经由在塞子结构域之上的两个组氨酸内在化（图3b）。TonB系统在锌吸收中的可能作用是它将塞子从桶中拔出，并且伴随这个动作，与两个His残基结合的锌转运到周质内，在其中它由周质结合蛋白ZnuA拾起。
有趣的是，tdfI和znuA表达的相似调节在使用淋病奈瑟菌的微阵列研究中报道（33）。tdfI同系物NGO1205和znuA同系物NGO0168在缺乏NGO0542基因中的突变型中都是上调的。这种基因在那个研究中注释为perR，由于其与在革兰氏阳性生物中发现的锰依赖性过氧化物响应调节蛋白的同源性（34）。然而，这是我们已注释为zur的相同基因。zur注释明显是更准确的，因为我们显示通过zur的不存在或锌的不存在的等同调节。关于注释zur而不是perR的更多证据来自淋病奈瑟菌中的相同研究。用淋球菌perR突变型执行的微阵列显示核糖体蛋白L31和L36同样的上调。奈瑟菌属基因组含有关于编码这些蛋白质的基因各自的两个拷贝，其中每种蛋白质的一个形式含有锌带基序。发现锌可用度是控制在枯草芽孢杆菌（B subtilis）中表达的L31/L36蛋白质类型的关键因素（34）。在淋球菌perR突变型中，特别地诱导缺乏锌带的L31和L36假基因（paralogs）的表达，高度指示perR突变型中扰乱的锌调节。此外，在另一个研究（17）中，执行微阵列以鉴定对于氧化性应激的应答，并且perR以及在PerR研究中鉴定的基因中的任何（33）都未被去阻遏，并且我们未看出锰对tdfI和znuA表达的任何调节作用。
先前，据报道tdfI表达在活性补体的存在下被诱导（18）。在这个微阵列研究中，比较在血清和热灭活的血清的存在下生长的脑膜炎奈瑟菌的表达概况，并且发现TdfI在未处理血清的存在下去阻遏23倍。在锌和补体调节之间的关系乍一看可能是不明显的。关于发现相似调节回路的可能解释可以是在阵列研究中的细菌在具有BSA的RMPI中预生长。清蛋白已知螯合锌，并且因此预生长条件可能已经是严重锌限制的。人血清的热处理将释放来自清蛋白的锌，从而阻遏tdfI表达。这个解释通过下述事实得到加强：当BSA在细菌生长过程中加入TSB培养基时，TdfI表达被诱导（数据未显示）。
Hagen和Cornelissen的研究（35）研究Tdf蛋白质中的任何是否是在人上皮细胞中淋病奈瑟菌的细胞内存活必需的。该作者还测试TdfI同系物敲除（NG1205），但这种突变型在细胞内存活中不受影响。
TdfI的保守性是惊人的；在测序的脑膜炎奈瑟菌菌株中具有98.6%的同一性和在成熟蛋白质的氨基酸水平上的99.2%相似性。在测试的所有脑膜炎球菌中都发现TdfI蛋白质，并且所有菌株都显示锌调节的tdfI表达。在测序的脑膜炎球菌和淋球菌菌株的TdfI蛋白质之间，存在在氨基酸水平的96.1%同一性和97.3%相似性。在TdfI序列之间的差异分散遍及该蛋白质，并且在特定环中不成簇。我们发现TdfI与其他细菌中的同系物的平均41%氨基酸同一性，并且在所有情况下，His/Asp段是保守的。有趣的是，TdfI同系物特别在位于人和动物的呼吸道中的细菌物种中发现。可能在呼吸道的粘膜层中，未结合的锌浓度太低而无法允许通过孔蛋白的足够被动扩散，并且因此TdfI变得对于细菌生长和存活是必需的。虽然TdfI不是细胞内存活所必需的（35），但它可以是体液如血清和其中游离锌浓度同样可以是极低的液剂中是必需的。此外，我们不能排除TdfI另外识别络合形式的锌，其在呼吸道、血清和或脑液中可能是可获得的。
我们已进一步显示TdfI可以在小鼠中诱导杀菌抗体，并且这些抗体特异性针对TdfI。此外，当我们使用表达来自染色体基因座的TdfI的细菌时，我们可以检测杀菌活性，显示在感染过程中抗原浓度足够高，以允许脑膜炎奈瑟菌的清除。
高水平的保守性和引发TdfI特异性杀菌抗体的可能性使得TdfI成为极佳的疫苗候选物。
材料与方法
使用的缩写: IPTG，异丙基β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷；PAR，4-（2-吡啶偶氮）间苯二酚；RPMI，Roswell Park Memorial Institute培养基1640；Tdf，TonB依赖性家族；TPEN，N,N,N’,N’-四（2-吡啶甲基）乙二胺；TSB，胰蛋白酶大豆肉汤；ICP-MS，电感耦合等离子体质谱法。
细菌菌株和生长条件。
在图5中列出的奈瑟菌属菌株来自实验室收集。除了当另有说明时，实验用菌株HB-1及其突变型执行。HB-1是血清群B菌株H44/76的无包膜衍生物（Bos & Tommassen，2005）。脑膜炎奈瑟菌在含有Vitox（Oxoid）和抗生素（在合适时）（卡那霉素，100 μg/ml；氯霉素，10 μg/ml）的GC琼脂（Oxoid）板上在烛罐中在37℃生长。液体培养物在TSB（Difco）或RPMI（Sigma）中在塑料烧瓶中在37℃伴随振荡生长。将IPTG、锌和TPEN以所述浓度加入。将金属作为混合物（终浓度340 nM ZnSO4、160 nM Na2MoO4、800 nM MnCl2、80 nM CoCl2和80 nM CuSO4）或作为单一化合物以与混合物中相同的浓度加入，除非另有说明。将氯化铁作为8 μM的终浓度加入。大肠杆菌菌株DH5α和TOP10F’（Invitrogen）用于常规克隆和BL21（DE3）（Invitrogen）用于表达。大肠杆菌hemA突变型用于评估TdfI的血红素转运（（22）。将大肠杆菌在合适时补充有100 μg/ml氨苄青霉素、50 μg/ml卡那霉素或25 μg/ml氯霉素的Luria-Bertani培养基上繁殖。对于大肠杆菌血红素营养缺陷型C600 hemA::kan（22），培养基补充有5-氨基酮戊酸。
质粒和突变型的构建。
使用NMB0964（tdfI）、NMB1730（tonB）、NMN0586（znuA）、NMB1266（zur），在MC58基因组序列上设计所有引物。
对于在大肠杆菌中的高水平蛋白质生产，使用分别携带限制位点NdeI和BamHI（粗体）的引物0964-F-GATCATATGCATGAAACTGAGCAATCGGTG-和0964-R -GATGGATCCTTAAATCTTCACGTTCACGCCGCC-，通过PCR由菌株H44/76的染色体DNA扩增不含信号序列编码部分的tdfI基因。根据制造商的建议（Invitrogen），将所得到的产物克隆到pCRII-TOPO内，获得pCRII-tdfI，并且使用NdeI/BamHI限制亚克隆到pET11a（Novagen）内，产生质粒pET11a-tdfI。
为了获得tdfI缺失构建体，通过PCR用引物Kan-R –TGACGCGTCTCGACGCTGAGGTCTGC-和Kan-F –TGTGTACAGTCGACTTCAGACGGCCACG-扩增卡那霉素抗性基因盒（36），并且在MluI和BsrGI消化后克隆到用相同酶消化的pCRII-tdfI内。在所得到的构建体pCRII-tdfI::kan中，卡那霉素抗性盒取代在tdfI的bp 437和1344之间的区域。pCRII-tdfI::kan用于使用0964-R和0964-F引物的PCR中，并且所得到的产物用于转化HB-1（37）。通过PCR就正确基因替换测试卡那霉素抗性克隆。
用引物TdfI-F –GCATCATATGGCACAAACTACACTCAAACCC-和TdfI-R –ATGACGTCTTAAAACTTCACGTTCACGCCGCC-扩增来自H44/76的整个tdfI基因，所述引物分别包含关于NdeI和AatII的识别位点（粗体）。使用NdeI和AatII限制位点，将所得到的PCR产物克隆到pCRII-TOPO内且亚克隆到pEN11-pldA内（36）。所得到的质粒pEN11-tdfI构成奈瑟菌属复制质粒，含有lacI Q 基因和串联的lac/tac启动子用于tdfI的控制表达。
使用对于一个片段具有AccI限制位点（粗体）的引物tonB-1（GTACGATGATTGTGCCGACC）、tonB-2（ACTTTAAACTCCGTCGACGCAAGTCGACTGCGGGGGTTAA），以及对于另一个片段具有限制位点AccI（粗体）的tonB-3（TTAACCCCCGCAGTCGACTTGCGTCGACGGAGTTTAAAGT）和tonB-4（GCCATACTGTTGCGGATTTGA），通过扩增tonB基因上游和下游的DNA片段，制备生成tonB敲除的构建体。将两个片段各自克隆到pCRII-TOPO内，并且随后使用引入的限制位点AccI和SpeI位点在pCRII-TOPO载体中彼此连接。随后通过PCR扩增用含有AccI位点的引物，将AccI位点用于将来自先前克隆的pKD3（38）的氯霉素转乙酰酶基因克隆到pCRII-TOPO内。使用引物tonB-1和tonB-4通过PCR扩增所得到的构建体，并且将这种线性片段用于转化脑膜炎奈瑟菌HB-1。
根据相同策略敲除zur基因。在这种情况下用下述引物扩增上游和下游片段：zur-1（TTCGCCGATGGCGGAATACA）、具有以粗体的限制位点AccI的zur-2（CTTTCAGCGCAAAGTCGACTCCGTCGACGCGTGCCTGTTC）、具有以粗体的限制位点AccI的zur-3（GAACAGGCACGCGTCGACGGAGTCGACTTTGCGCTGAAAG）、和zur-4（TCCTATTGCGCAATACCCCC）。
用pMF121转化称为CE2001（39）的脑膜炎奈瑟菌菌株H44/76的porA衍生物，导致整个荚膜基因座的缺失和具有截短的外核的脂多糖的产生（36）。含有脑膜炎奈瑟菌的tonB、exbB和exbD基因的pLAFR衍生质粒（（13）先前得到描述。
SDS-PAGE和蛋白质印迹分析。
由生长6小时的细菌制备细胞裂解产物。将细胞稀释至OD600nm 1，形成团块且在含有2% SDS和5% 2-巯基乙醇的100 μl SDS-PAGE样品缓冲液中煮沸。通过标准SDS-PAGE分离蛋白质。将凝胶用考马斯亮蓝染色，或使用湿法转移系统（Biorad），将蛋白质转移到25 mM Tris-HCl、192 mM甘氨酸、20%甲醇中的硝酸纤维素（Protran）。将膜在含有0.1% Tween 20和0.5% Protifar（Nutricia）的PBS中封闭1小时。将印迹与抗体一起在封闭缓冲液中温育。通过使用山羊抗兔IgG过氧化物酶缀合的第二抗体（Biosource）和增强化学发光检测（Pierce）来检测抗体结合。
免疫接种。
将含有pET11a-tdfI的BL21（DE3）细胞在LB中生长至0.6的OD A600，这之后加入1 mM IPTG并且继续生长2小时。TdfI蛋白质在包含体中累积，所述包含体如所述的（40）分离，并且纯化的蛋白质用于在Eurogentec免疫接种兔。所得到的抗血清SN1042以1/5000稀释度使用。
通过脱氧胆酸盐提取（41）制备在1 mM IPTG的存在或不存在下生长的菌株CE1523 /pEN11-tdfI的外膜囊泡，并且如所述的（32）用于免疫接种小鼠。在42天后收集来自十只小鼠/组的血清且合并。实验顺应比利时的有关国家指导方针和GlaxoSmithKline Biologicals的机构政策。
RT-qPCR。
根据制造商的建议，使用Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time PCR System和SYBR绿色主要混合物（green master mix）（Applied Biosystems）执行RT-qPCR。通过将约4x109奈瑟菌属细胞重悬浮于3 ml Trizol（Invitrogen）中分离总RNA。在加入600 μl氯仿和离心后，将上层相与75%乙醇1:1混合。将这装载到nucleospin RNA II柱（Macherey-Nagel）上，随后将所述柱用来自nucleospin RNA II试剂盒的缓冲液R3洗涤，并且用100 μl水洗脱。随后用Turbo DNA Free（Ambion）处理RNA，以获得无DNA的RNA。为了生成cDNA，根据制造商的建议，使用转录物高保真度cDNA合成试剂盒（Roche），由随机六聚体逆转录1 μg总RNA。作为对照，制备平行样品，其中从反应混合物中省略逆转录酶。PCRs一式三份地以25-μl体积在96孔板（Applied Biosystems）中执行，使用下述循环参数：95℃10分钟用于酶激活，随后为95℃15秒和60℃1分钟的40个循环。执行解链曲线图，以确保信号源于特异性扩增子。使用比较循环阈值方法（Applied Biosystems）执行数据分析，以测定相对表达水平。rmpM转录物用于标准化所有数据。
ICP-MS。
在Utrecht University的Geochemistry系的整合实验室通过ICP-MS测量锌总浓度。脑膜炎奈瑟菌菌株在RPMI培养基从0.1起始OD A550开始生长6小时；在这个时间点，获得样品并且使剩余培养物在1 μM锌的存在下生长另外1小时。在这个小时后，获得第二个样品。将两个样品（7 ml）在磷酸盐缓冲盐水中洗涤且重悬浮于水中，在56℃杀死1小时且冷冻于-80℃。随后将样品解冻，超声处理且通过0.22-μm滤器（Millipore）过滤。
PAR竞争测定。
PAR竞争测定是比色反应，其中在能够释放来自PAR的锌的蛋白质或化学药品的存在下，PAR-锌络合物的橙色朝向黄色改变。测定如所述的（42）执行，伴随下述修饰：代替50 μM，我们加入30 μM锌，并且我们首先测量PAR-锌溶液，并且随后将外膜囊泡加入比色杯中，且再次测量溶液。以这种方式，我们避免了通过UV以时间诱导的潜在变色。随后首先将数据针对PAR-锌测量标准化，并且随后针对单独的PAR样品标准化，以获得用于外膜囊泡的结合值。显示的结果是在500 nm处的吸收的标准化数据。
血清杀菌测定。
用pEN11-tdfI转化野生型H44/76，并且由过夜生长板在具有125 μM FeCl3连同或不连同1 mM IPTG的TSB中在振荡烧瓶中在37℃中温育3小时，直至达到0.5的OD A550。将待测试的血清在汉克平衡盐溶液（HBSS）（GIBCO）、0.3% BSA中稀释1:100，并且随后以50-μl体积在无菌U形底96孔微量滴定板（NUNC）中系列稀释（两倍稀释步骤，八个稀释度）。将细菌在HBSS、0.3% BSA中稀释，以获得~13,000 CFU/ml，并且将37.5 μl样品悬液加入血清稀释物中。将微量滴定板在37℃温育15分钟，同时振荡。随后，将12.5 μl幼兔补体（Pelfreez）或作为关于血清毒性的对照的热灭活（56℃45分钟）补体加入孔中。在振荡的同时在37℃1小时温育后，将微量滴定板置于冰上，以停止杀死。对于每个孔，将20 μl点在GC板上，同时将板倾斜，以允许滴“跑”下板。在过夜温育后，计算菌落并且计算杀死百分比。杀菌滴度定义为获得>50%杀死的最高血清稀释度。
参考文献
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表1. 在测序的奈瑟菌属菌株中的成熟TdfI蛋白质序列的保守性。
实施例3: ZnuD: 关于简单和通用脑膜炎奈瑟菌疫苗的潜在疫苗候选物
摘要
脑膜炎奈瑟菌血清群B是更年轻人群中的细菌性败血症和脑膜炎的主因。可获得的疫苗基于得自野生型菌株的外膜囊泡。然而，在刚学步的小孩和婴儿中，它们仅赋予针对表达同源PorA的菌株的保护，所述PorA是主要和可变的外膜蛋白。在鉴定允许开发能够预防更年轻人群中的脑膜炎球菌感染的疫苗的疫苗抗原的寻求中，ZnuD（TdfI）已鉴定为潜在候选物。此处，我们已延伸了ZnuD的潜在价值的分析，显示它是由测试的所有脑膜炎奈瑟菌血清群B菌株（当在锌限制下生长时）表达的非常充分保守的抗原，诱导针对测试的大多数菌株的交叉杀菌抗体，无论血清群如何，并且还在感染过程中且最可能在携带过程中表达。此外，抗ZnuD抗体能够介导未被抗人因子H结合蛋白（fHbp）杀死的菌株的补体杀死。
引言
脑膜炎奈瑟菌是革兰氏阴性、有包膜的细菌。它是无症状地寄居在约10%的成年人群的上呼吸道的专性人病原体。偶然地，它移位至血流，导致可能进展至脑膜炎和死亡的菌血症。由于其快速的进展和引起流行病的趋势，脑膜炎奈瑟菌是最可怕的细菌感染之一。这种细菌基于荚膜多糖的化学组成分类为13个血清群。然而，仅血清群A、B、C、Y和W-135和更少程度的X已与疾病相关。在人中提供有效免疫的缀合多糖疫苗变得对于血清群A、C、Y和W135可获得。不幸的是，缀合方法不能容易地应用于血清群B（MenB），因为其荚膜多糖与聚唾液酸化的宿主糖蛋白例如神经细胞粘附分子共享结构相似性。
第一代MenB疫苗基于在去污剂提取后纯化的外膜囊泡（OMVs），以减少脂寡糖（LOS）含量。PorA是最丰富的外膜蛋白（OMPs）之一和这些OMVs中的免疫显性组分。然而，PorA展示高抗原变异性，限制基于OMV的疫苗的功效，尤其是低于2-4岁龄；在欧洲总计约50% MenB病例的年龄组，具有约16/100,000低于1岁大的婴儿的发生率。为了克服这个局限性，保守的次要OMPs的使用已得到研究。
近来，认识到整合OMPs具有疫苗候选物的潜力。对于锌吸收组分D命名为ZnuD的这种蛋白质在锌限制下表达，并且涉及锌吸收。基于这种蛋白质作为疫苗候选物的潜力，我们已延伸其研究，寻找在人中抗ZnuD抗体的存在，其诱导交叉杀菌抗体的潜力，并且证实这种蛋白质是非常充分保守的，且在测试的所有脑膜炎奈瑟菌菌株中都表达，无论血清群如何，除了来自ST-23克隆复合物的少数血清群Y菌株外。
结果
ZnuD是免疫原性且在人中表达的。
ZnuD不由在常规琼脂培养基上生长的脑膜炎奈瑟菌表达，除了在加入锌螯合剂例如TPEN后以外，询问其在宿主中的表达。证实ZnuD在人中表达的间接方法是估计来自恢复期患者和/或健康携带者的血清中抗ZnuD抗体的存在。为了这个目的，使用覆盖77%未成熟蛋白质的肽阵列方法。
来自12个恢复期受试者和11个携带者的血清在这个肽阵列中测试3 – 5次。图10显示在两组受试者之间的个别应答的强度。针对肽的应答强度和由血清识别的肽数目在恢复期组中大于携带者组中。所有恢复期血清至少针对相同5个非连续肽反应，指出ZnuD在感染过程中是明确表达的。在携带者血清中针对一些肽反应的抗体的存在还暗示ZnuD在上呼吸道的寄居过程中表达。
评估ZnuD疫苗潜力的有关培养条件的开发
如先前已证实的，抗ZnuD抗体能够介导其遗传修饰为过表达ZnuD的同源菌株的补体杀死。通过使用菌株的大型实验对象组估计ZnuD抗体的交叉杀菌潜力不允许遗传修饰所有这些菌株。因为ZnuD的表达由Zur调节，所以我们已确定与δzur菌株相比较，通过野生型菌株实现相同水平的ZnuD表达所需的锌螯合剂的量。这通过在MH琼脂板中使用20μM TPEN来实现（图11）。
ZnuD是非常充分保守的抗原并且由所有脑膜炎奈瑟菌菌株表达，除了来自ST23克隆复合物的一些德国血清群Y菌株外。
已经证实ZnuD在来自血清群A、B、C、W-135和Y的132种菌株的实验对象组上由除了一个外的所有菌株表达。将这延伸且对于43种另外的菌株证实，包括自2005年以后从位于英国、西班牙和德国的恢复期受试者中分离的每个血清群A、C、W-135和Y的2种菌株，和30种血清群B菌株。总之，在测试的175种菌株中，仅一种不表达ZnuD。这种菌株是来自在德国患者中分离的ST-23克隆复合物的血清群Y。
特别注意来自这个ST-23克隆复合物的血清群Y菌株。测试在德国分离的七种菌株，并且所有都不表达ZnuD。序列分析已揭示对于4种菌株由于单个核苷酸缺失的终止突变。其中三种具有在相同位置上的缺失。
Znu D诱导针对血清群A、B、C、W-135和Y的交叉杀菌抗体
在人中ZnuD的表达和免疫原性的证实促使我们更深入地估计ZnuD作为通用的脑膜炎奈瑟菌疫苗抗原的潜力。为了这个目的，由过表达ZnuD或未过表达ZnuD的两种菌株产生OMVs。这两种菌株具有相似的背景，因为两者都衍生自表达fHbp家族B的H44/76菌株。为了避免在OMV制剂中残留荚膜多糖的存在以及抗LOS和PorA特异性杀菌抗体的诱导，在两种菌株中执行galE和porA缺失突变。
SDS-PAGE分析暗示ZnuD代表由过表达菌株产生的OMVs的约15%蛋白质含量，而在对照OMVs制剂中未观察到ZnuD（图12a）。因为fHbp描述为当存在于OMVs中时是非常免疫原性的，所以通过ELISA检查其含量。估计在ZnuD OMVs中fHbp的量是对照OMVs中的4倍（图12b）。将小鼠和豚鼠用在AlPO4上吸附的OMVs免疫接种三次。在第三次免疫接种后2周获得血清样品，并且将它们合并以便获得3个血清库/组。
ELISA用于评估针对ZnuD和fHbp的应答（表3）。用对照OMVs的免疫接种在小鼠和豚鼠中诱导少数或无ZnuD抗体（分别为GMT = 73和10 EU/ml）。如预期的，在来自用ZnuD OMVs免疫接种的动物的血清中测量到高水平的抗ZnuD抗体（分别为GMT = 15096和5893 EU/ml）。令人惊讶的是，fHbp的免疫原性看起来在小鼠和豚鼠之间是不同的。与小鼠血清（分别为1342和59314 EU/ml）相比较，抗fHbp抗体的水平在来自用对照或ZnuD OMVs免疫接种的豚鼠的血清中明显更低（分别为335和2733 EU/ml）。在抗对照OMV和抗ZnuD OMV血清之间的抗fHbp抗体的不同水平与对照和ZnuD OMVs中不同的fHbp量一致。
合并的血清在SBA中针对连同或不连同TPEN培养的14种血清群B脑膜炎奈瑟菌菌株的实验对象组进行测试。这些菌株中的六种通常由HPA用于估计MenB疫苗。这个实验对象组包括两种流行病菌株（H44/76和NZ98/254）以及4种最流行的英国血清亚型的4种菌株，其可占2000和2001中的59.3% MenB疾病（M01-240013、M01-240101、M01-240149和M01-240355）。对于所有这14种菌株，通过蛋白质印迹分析证实在TPEN的存在下ZnuD的表达。此外且由于在来自用OMVs免疫接种的动物的血清中抗fHbp抗体的存在，还在杀菌测试中测试来自用重组fHbp B免疫接种的小鼠的血清库（表3）。
抗fHbp抗体的杀菌活性与通过细菌的fHbp表达水平相关，并且是家族特异性的。使用常规培养条件，仅表达中（+/-）至高水平（++）fHbp B的5种菌株被抗fHbp B血清杀死（阳性截断固定在128），而表达fHbp A或低水平fHbp B的菌株无一被杀死。在TPEN的存在下，相同5种菌株加上两种（NZ124和DE10690-06）被抗fHbp B抗体杀死。在TPEN的存在或不存在获得的SBA滴度总体是相似的，具有在TPEN的存在下测量到略微更高滴度的趋势。这暗示菌株对由抗体介导的补体杀死的敏感性在螯合剂的存在下不是急剧增加的。
当在不存在TPEN的情况下培养时，来自用对照OMVs免疫接种的小鼠的血清无法介导菌株的补体杀死。在螯合剂的存在下，仅三种菌株展示正好超过截断（cut-off）的SBA滴度。因为这3种菌株被抗fHbp B抗体杀死，所以用抗对照OMVs血清观察到的杀死最可能是由于抗fHbp抗体的存在，和当与TPEN一起培养时，菌株对补体杀死略微增加的敏感性。通过用ΔfHbp H44/76菌株执行杀菌测定，这些抗fHbp抗体的作用对于这3种菌株之一得到明确证实（表4）。预期不存在通过来自用对照OMVs免疫接种的豚鼠的血清的杀死，并且归于如由ELISA结果暗示的在这个物种中fHbp的更低免疫原性。
在不存在锌螯合剂的情况下，来自用ZnuD OMVs免疫接种的小鼠的血清不介导除了四种外的测试菌株的补体杀死。这四种菌株同样被抗fHbp抗体杀死。通过用ΔfHbp H44/76菌株执行杀菌测定，这些抗fHbp抗体的作用对于菌株H44/76得到明确证实（表4）。在允许ZnuD表达的杀菌测定中测试的相同抗ZnuD OMVs血清允许介导测试的14种菌株中12种的杀死。类似结果用来自豚鼠的血清观察到。在培养基中不存在TPEN的情况下，菌株在活性补体的存在下不被杀死，除了三种外。再次，对于这三种菌株之一，H44/76，抗fHbp抗体的作用通过使用ΔfHbp菌株得到证实。在TPEN的存在下，除了两种外的所有菌株被杀死，具有明确超过截断的SBA滴度。未被杀死的两种菌株是未被小鼠血清杀死的相同菌株。通过蛋白质印迹分析证实通过这两种菌株（760676和M05-024072）的ZnuD表达。
用由过表达无关抗原的H44/76菌株纯化的OMVs免疫接种第三组小鼠和豚鼠。在血清杀菌测定中TPEN的不存在或存在下，结果类似于用对照血清观察到的结果（数据未显示）。此外，还对每个血清群A、C、W-135和Y的一种菌株执行杀菌测定，证实抗ZnuD抗体针对这四个血清群的交叉杀菌活性（数据未显示）。
ZnuD和fHbp作为杀菌抗体的靶的证实
为了证实ZnuD是杀菌抗体的主要靶，并且因为存在在TPEN的存在下观察到更高杀菌滴度的趋势，在含或不含TPEN的杀菌测定中使用δznuD H44/76菌株（表4）。
在不存在TPEN的情况下，SBA滴度在H44/76 WT和δznuD菌株之间是相似的，无论血清的起源（动物物种和用于免疫接种的OMVs）如何。在这个杀菌条件下，对于δfHbp菌株未观察到杀死。这些结果证实fHbp是在不存在ZnuD表达的情况下杀菌抗体的主要靶。
在TPEN的存在下，δfHbp菌株不被来自对照动物的血清杀死，而对于δfHbp菌株和WT H44/76菌株测量到相似滴度。如预期的，当使用抗ZnuD OMVs血清时，与H44/76相比较，杀菌滴度对于δfHbp菌株更低。
这些结果证实ZnuD OMVs已诱导抗fHbp和抗ZnuD杀菌抗体，而对照OMVs仅已引起抗fHbp抗体的产生。结果还证实fHbp和ZnuD的共表达不是诱导由杀菌抗体介导的补体杀死所必需的。
讨论
ZnuD不在常规培养基例如Mueller Hinton培养基或胰蛋白酶大豆肉汤培养基上表达。这些培养基开发用于培养苛求菌，并且因此富含少量元素（oligo-elements）。在MH琼脂中，取决于制造商，锌的总量范围为200μg - 450μg/L。在此类培养基中，游离锌很可能是以这样的浓度可获得的，从而使得脑膜炎奈瑟菌不需要特别表达在锌获得中专用的外膜受体，因为锌经由非特异性孔蛋白的被动扩散很可能足以允许细菌的生长。在牛血清中，游离锌的量估计是约0.01μg/L（0.15nM），对应于在血清中（800μg/L）约0.0008%的锌总量。在儿童中，锌总浓度估计约750μg/L，并且通过外推，游离锌应也是约0.01μg/L。在脑脊髓液中，锌的总浓度是约111μg/L。ZnuD在人中的表达通过在来自恢复期患者的血清中的抗体检测间接地证实。肽阵列结果也暗示在携带者中的表达。基于在肽阵列中测量的信号强度，得出结论在上呼吸道中的ZnuD表达低于血液中的那种应是错误的。事实上，实验设计为检测血清IgG，其弱反映由微生物寄居诱导的粘膜免疫应答。进行中的实验旨在通过在急性患者的脑脊髓液中直接执行脑膜炎奈瑟菌的染色来证实ZnuD的体内表达。
为了允许ZnuD在常规培养基上的表达，需要使用锌螯合剂。这未设定先例，因为金属螯合剂的使用已描述为证实铁结合蛋白例如TbpA/B的潜力。然而，研究TPEN的浓度对ZnuD表达的水平的影响（数据未显示），目的在于选择应对应于体内ZnuD表达水平的浓度。为了这个目的，在δzur菌株中ZnuD的表达用作基准。根据剂量范围实验，选择20μM TPEN的浓度。应当指出在避免使用螯合剂的尝试中，其他培养基在估计中。用Catlin培养基获得有希望的结果，所述Catlin培养基是先前开发用于奈瑟菌属生长的化学成分确定的培养基。流式细胞术分析暗示在这种培养基中的ZnuD表达类似于通过在MH琼脂上生长的δzur菌株的ZnuD表达（数据未显示）。
使用选择为潜在模拟ZnuD的体内表达的培养条件（MH琼脂 + 20μM TPEN），就这种OMP的表达评估43种菌株的实验对象组。在所有这些菌株中都检测到ZnuD。总之，已就其ZnuD表达分析182种脑膜炎奈瑟菌菌株。ZnuD表达在所有菌株中都得到证实，除了都是近期在德国分离且来自ST-23克隆复合物的7种血清群Y菌株外。对于其中4种，表达的不存在与终止突变关联，对于剩余三种菌株，不存在基于核苷酸序列分析的解释。应更小心注意以评估在血清群Y菌株中的ZnuD表达，因为其表达在更古老的MenY菌株中得到证实。
因为ZnuD是整合OMP，所以我们已选择OMVs用于其对于免疫系统的呈递。这些OMVs通过0.5% DOC从ΔgalE和ΔporA H44/76菌株中提取，以减少LOS含量。在此类条件下，我们先前已证实这类OMVs不诱导针对LOS的杀菌抗体的产生。用对照OMVs免疫接种的小鼠和豚鼠已诱导针对少数菌株的有限的杀菌应答。这种保护性应答最可能涉及一些抗fHbp抗体的产生，如通过其在ELISA中的存在和通过在杀菌测定中使用ΔfHbp菌株证实的。结果还暗示当以其天然构象存在于OMVs中时，即使以低量存在于这些OMVs中，由于使用去污剂用于提取囊泡，fHbp是高度免疫原性的蛋白质，特别是在小鼠中。用ZnuD OMVs免疫接种的小鼠和豚鼠引起抗ZnuD抗体的产生。基于ELISA数据，与fHbp相对比，ZnuD在两个物种中的免疫原性看起来是非常相似的。抗ZnuD OMVs血清能够介导测试的所有菌株的补体杀死，无论血清群如何，但仅在允许ZnuD表达的培养条件下。例外是两种血清群B菌株，对于其杀死的不存在不是由于ZnuD表达的不存在。进一步研究在进行中，以解释这种杀死的不存在。在被杀死的菌株中，两种是有利的，因为它们近期已用于婴儿临床试验中，评估由基于衍生自NZ98/254菌株的5种蛋白质和OMVs的多价疫苗诱导的交叉保护。来自用这种复合疫苗免疫接种的受试者的血清未能介导菌株M01-240355的杀死，并且仅50%的婴儿已显示在1岁时针对菌株M01-240101的交叉保护。这两种菌株在英国分离，并且分别来自ST-213和ST-269克隆复合物。这两种克隆复合物代表在2008年从英国病例中分离的39% MenB菌株。在呈现的临床前实验中，用ZnuD OMVs免疫接种的小鼠和豚鼠已引起针对这两种菌株的高杀菌应答（兔SBA滴度> 1700）。对于菌株M01-240355，这种杀死不是由于抗ZnuD和抗fHbp B抗体的共存在，因为这种菌株表达fHbp A。此外，我们已证实菌株M01-240101在人补体的存在下也被抗ZnuD抗体杀死（数据未显示）。
总之，ZnuD是非常充分保守的蛋白质，由所有血清群B菌株表达，并且能够介导针对测试的大多数血清群B菌株以及针对血清群A、C、W和Y菌株的交叉杀菌应答。ZnuD的优点是ZnuD是非常充分保守的，并且迄今为止仅描述了一个家族。更广泛的疫苗可以组合fHbp和ZnuD。
实施例4：钙防卫蛋白与TdfH的结合
钙防卫蛋白由嗜中性粒细胞、巨噬细胞和鳞状上皮产生。它用作用于炎性肠病的粪便中的诊断工具。此外，它在与LPS接触后是上调的，并且当患者具有脑膜炎时，它可以在脑脊液中发现。钙防卫蛋白是人蛋白质S100A8和S100A9的异四聚体，并且可以结合两个锌或锰原子。当将钙防卫蛋白点在其中奈瑟球属在汇合层中铺平板的板上时，由于锌和/或锰的隔离，存在生长的最初抑制。我们认为奈瑟菌属可以从仅一个结合位点（低亲和力位点）获得锌和/或锰。最初清除来自锌和/或锰隔离至高亲和力位点，引起生长抑制。当低亲和力位点也变得装载有锌和/或锰时，奈瑟菌属可以使用通过经由TdfH吸收的这些金属。因此，在最初清除后，在清除区（clearing zone）中观察到生长。此外，吸收过程需要在内膜中来自质子动力势的能量，其通过TonB穿梭至外膜，如通过在清除区中TonB突变型的生长缺乏显示的。
| 菌株 | 在清除区中的生长 |
| H44/76 cps- | 是 |
| TdfH K.O. | 否 |
| TdfI K.O. | 是 |
| TdfH/TdfI K.O. | 否 |
| TonB K.O. | 否 |
以高量表达TdfH的pEN11衍生物用于测试TdfH是否可以结合钙防卫蛋白。具有pEN11-TdfH-终止子的B2540在含和不含1mM IPTG的TSB培养基中生长。在生长6小时获得1 OD550nm的细菌，并且在HBSS中洗涤一次。将细菌重悬浮于1ml HBSS中，并且加入4 ug钙防卫蛋白。允许钙防卫蛋白结合1小时，这之后将细胞在HBSS中洗涤两次。随后将团块重悬浮于样品缓冲液中，并且煮沸10分钟。裂解产物随后通过SDS-PAGE和用抗钙防卫蛋白的蛋白质印迹进行分析（图15）。
如图15中所示，信号是可检测的，但比对于样品中存在的TdfH量预期的更弱。随后研究当锌或锰加入结合步骤时，结合是否更佳（图16）。当锌或锰存在时，显著更多的钙防卫蛋白结合TdfH。
Claims (335)
1.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别至少第一种革兰氏阴性菌菌株的外膜蛋白的免疫应答，其中所述蛋白质涉及细胞外锌的吸收。
2.如权利要求1中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述第一种革兰氏阴性菌菌株不是奈瑟菌属菌株。
3.如权利要求1或权利要求2中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述外膜蛋白不由下述氨基酸序列组成：根据PCT/EP2009/052689的NMB0964多肽或如其中公开的其片段，WO 00/55327的SEQ ID NO. 2或如其中公开的其片段，WO 99/57280的SEQ ID NO. 606或如其中公开的其片段，或WO 00/11182的SEQ ID Nos. 2、4和6或如其中公开的其片段。
4.如权利要求1 – 3中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述外膜蛋白是整合的外膜蛋白。
5.如权利要求1 – 4中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述外膜蛋白长度是600-1000个氨基酸。
6.如权利要求1 – 5中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述外膜蛋白在细胞外锌的吸收中的牵涉是这样的，从而使得锌结合对于缺乏所述蛋白质的外膜囊泡是减少的，和/或锌的累积在缺乏所述蛋白质的细胞中是减少的，和/或是这样的，从而使得缺乏所述蛋白质的细胞具有减少的在作为唯一锌源的钙防卫蛋白存在下生长的能力。
7.如权利要求1 – 6中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述外膜蛋白的表达响应低细胞外锌浓度是上调的。
8.如权利要求7中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述外膜蛋白响应低细胞外锌浓度的表达上调是这样的，从而使得所述蛋白质的表达在锌螯合剂的存在下可以是上调的。
9.如权利要求1 – 8中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述第一种革兰氏阴性菌菌株感染具有低水平的游离锌的人和/或动物的机体区室。
10.如权利要求9中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述低水平的游离锌是由于锌与钙防卫蛋白的结合。
11.如权利要求1 – 10中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述第一种革兰氏阴性菌菌株感染人和/或动物的呼吸道或血液或泌尿道或肠。
12.如权利要求1 – 11中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述第一种革兰氏阴性菌菌株属于选自下述的细菌属或物种：博德特氏菌属（Bordetella）；百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis）；疏螺旋体属（Borrelia）；伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi）；布鲁氏菌属（Brucella）；马耳他布鲁氏菌（Brucella melitensis）；绵羊种布鲁氏菌（Brucella ovis）；衣原体属（Chlamydia）；鹦鹉衣原体（Chlamydia psittaci）、沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis）；埃希氏菌属（Escherichia）；大肠杆菌（Escherichia coli）；嗜血杆菌属（Haemophilus）；流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）；军团菌属（Legionella）；嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）；奈瑟菌属（Neisseria）；淋病奈瑟菌（Neisseria gonorrhoeae）；脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis）；假单胞菌属（Pseudomonas）；铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）；耶尔森菌属（Yersinia）；小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica）；莫拉菌属（Moraxella）；卡他莫拉菌（Moraxella catarrhalis）；志贺氏菌属（Shigella）；福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）；痢疾志贺氏菌（Shigella dysenteriae）；鲍氏志贺氏菌（Shigella boydii）；柯克斯体属（Coxiella）；和贝纳柯克斯体（Coxiella burnetii）。
13.如权利要求1 – 11中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述第一种革兰氏阴性菌菌株属于选自下述的细菌属或物种：食酸菌属（Acidovorax）；不动杆菌属（Acinetobacter）；鲍氏不动杆菌（Acinetobacter baumannii）；鲍氏不动杆菌；乙酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）；约氏不动杆菌（Acinetobacter johnsonii）；琼氏不动杆菌（Acinetobacter junii）；鲁氏不动杆菌（Acinetobacter lwoffii）；抗辐射不动杆菌（Acinetobacter radioresistens）；放线杆菌属（Actinobacillus）；小放线杆菌（Actinobacillus minor）；胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）；聚集菌属（Aggregatibacter）；伴放线菌聚集菌（Aggregatibacter actinomycetemcomitans）；Aggregatibacter aphrophilus；食烷菌属（Alcanivorax）；泊库岛食烷菌（Alcanivorax borkumensis）；固氮弧菌属（Azoarcus）；固氮菌属（Azotobacter）；棕色固氮菌（Azotobacter vinelandii）；博德特氏菌属（Bordetella）；支气管炎博德特氏菌（Bordetella bronchiseptica）；副百日咳博德特氏菌（Bordetella parapertussis）；百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis）；Bordetella petrii；弯曲杆菌属（Campylobacter）；结肠弯曲杆菌（Campylobacter coli）；乌普萨拉弯曲杆菌（Campylobacter upsaliensis）；丛毛单胞菌属（Comamonas）；睾丸酮丛毛单胞菌（Comamonas testosteroni）；戴尔福特菌属（Delftia）；食酸戴尔福特菌（Delftia acidovorans）；Diaphorobacter；嗜血杆菌属（Haemophilus）；流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）；副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）；睡眠嗜血杆菌（Haemophilus somnus）；曼海姆菌属（Mannheimia）；溶血曼海姆菌（Mannheimia haemolytica）；莫拉菌属（Moraxella）；卡他莫拉菌（Moraxella catarrhalis）；奈瑟菌属（Neisseria）；淋病奈瑟球菌（Neisseria gonorrhoeae）；脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis）；巴斯德氏菌属（Pasteurella）；达可马巴斯德氏菌（Pasteurella dagmatis）；多杀巴斯德氏菌（Pasteurella multocida）；变形菌属（Proteus）；奇异变形菌（Proteus mirabilis）；假单胞菌属（Pseudomonas）；施氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）；和鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas）。
14.如权利要求1 – 13中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述外膜蛋白包含选自下述的氨基酸序列：SEQ ID No. 1；SEQ ID No. 2；SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；SEQ ID No. 9；SEQ ID No. 10；SEQ ID No. 11；SEQ ID No. 12；SEQ ID No. 13；SEQ ID No. 14；SEQ ID No. 15；SEQ ID No. 16；SEQ ID No. 17；SEQ ID No. 18；SEQ ID No. 19；SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；SEQ ID No. 22；SEQ ID No. 23；SEQ ID No. 24；SEQ ID No. 25；SEQ ID No. 26；SEQ ID No. 27；SEQ ID No. 28；SEQ ID No. 29；SEQ ID No. 30；SEQ ID No. 31；SEQ ID No. 32；SEQ ID No. 33；SEQ ID No. 34；SEQ ID No. 35；SEQ ID No. 36；SEQ ID No. 37；SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；SEQ ID No. 41；SEQ ID No. 42；SEQ ID No. 43；SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；SEQ ID No. 46；SEQ ID No. 47；SEQ ID No. 48；SEQ ID No. 49；SEQ ID No. 50；SEQ ID No. 51；SEQ ID No. 52；SEQ ID No. 53；SEQ ID No. 54；SEQ ID No. 55；SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；SEQ ID No. 67；SEQ ID No. 68；SEQ ID No. 69；SEQ ID No. 70；和SEQ ID No. 71。
15.如权利要求1 – 14中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述抗原是衍生自所述外膜蛋白的多肽。
16.包含抗原的任选地根据权利要求1 – 15的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自下述的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽：SEQ ID No. 1；SEQ ID No. 2；SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；SEQ ID No. 9；SEQ ID No. 10；SEQ ID No. 11；SEQ ID No. 12；SEQ ID No. 13；SEQ ID No. 14；SEQ ID No. 15；SEQ ID No. 16；SEQ ID No. 17；SEQ ID No. 18；SEQ ID No. 19；SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；SEQ ID No. 22；SEQ ID No. 23；SEQ ID No. 24；SEQ ID No. 25；SEQ ID No. 26；SEQ ID No. 27；SEQ ID No. 28；SEQ ID No. 29；SEQ ID No. 30；SEQ ID No. 31；SEQ ID No. 32；SEQ ID No. 33；SEQ ID No. 34；SEQ ID No. 35；SEQ ID No. 36；SEQ ID No. 37；SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；SEQ ID No. 41；SEQ ID No. 42；SEQ ID No. 43；SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；SEQ ID No. 46；SEQ ID No. 47；SEQ ID No. 48；SEQ ID No. 49；SEQ ID No. 50；SEQ ID No. 51；SEQ ID No. 52；SEQ ID No. 53；SEQ ID No. 54；SEQ ID No. 55；SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；SEQ ID No. 67；SEQ ID No. 68；SEQ ID No. 69；SEQ ID No. 70；和SEQ ID No. 71，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别所述氨基酸序列的免疫应答。
17.包含抗原的任选地根据权利要求1 – 15的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自下述的序列的免疫原性片段的多肽：SEQ ID No. 1；SEQ ID No. 2；SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；SEQ ID No. 9；SEQ ID No. 10；SEQ ID No. 11；SEQ ID No. 12；SEQ ID No. 13；SEQ ID No. 14；SEQ ID No. 15；SEQ ID No. 16；SEQ ID No. 17；SEQ ID No. 18；SEQ ID No. 19；SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；SEQ ID No. 22；SEQ ID No. 23；SEQ ID No. 24；SEQ ID No. 25；SEQ ID No. 26；SEQ ID No. 27；SEQ ID No. 28；SEQ ID No. 29；SEQ ID No. 30；SEQ ID No. 31；SEQ ID No. 32；SEQ ID No. 33；SEQ ID No. 34；SEQ ID No. 35；SEQ ID No. 36；SEQ ID No. 37；SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；SEQ ID No. 41；SEQ ID No. 42；SEQ ID No. 43；SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；SEQ ID No. 46；SEQ ID No. 47；SEQ ID No. 48；SEQ ID No. 49；SEQ ID No. 50；SEQ ID No. 51；SEQ ID No. 52；SEQ ID No. 53；SEQ ID No. 54；SEQ ID No. 55；SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；SEQ ID No. 67；SEQ ID No. 68；SEQ ID No. 69；SEQ ID No. 70；和SEQ ID No. 71，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别所述选择序列的免疫应答。
18.如权利要求17或权利要求18中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述抗原或多肽或所述免疫原性片段不具有下述氨基酸序列：根据PCT/EP2009/052689的NMB0964多肽或如其中公开的其片段，WO 00/55327的SEQ ID NO. 2或如其中公开的其片段，WO 99/57280的SEQ ID NO. 606或如其中公开的其片段，或WO 00/11182的SEQ ID Nos. 2、4和6或如其中公开的其片段。
19.如权利要求1 – 18中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其包含至少一种另外的抗原。
20.如权利要求1 – 19中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述抗原或多肽或免疫原性片段衍生自TdfI蛋白质。
21.如权利要求20中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽与选自下述的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性：SEQ ID No. 1；SEQ ID No. 2；SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；SEQ ID No. 9；SEQ ID No. 10；SEQ ID No. 11；SEQ ID No. 12；SEQ ID No. 13；SEQ ID No. 14；SEQ ID No. 15；SEQ ID No. 16；SEQ ID No. 17；SEQ ID No. 18；SEQ ID No. 19；SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；SEQ ID No. 22；SEQ ID No. 23；SEQ ID No. 24；SEQ ID No. 25；SEQ ID No. 26；SEQ ID No. 27；SEQ ID No. 28；SEQ ID No. 29；SEQ ID No. 30；SEQ ID No. 31；SEQ ID No. 32；SEQ ID No. 33；SEQ ID No. 34；SEQ ID No. 35；SEQ ID No. 36；SEQ ID No. 37；SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；SEQ ID No. 41；SEQ ID No. 42；SEQ ID No. 43；SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；SEQ ID No. 46；SEQ ID No. 47；SEQ ID No. 48；和SEQ ID No. 49，或其中所述多肽包含选自所述组的序列的免疫原性片段，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别所述选择序列的免疫应答。
22.如权利要求20或权利要求21中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
G - S/A/V - S/A/V/G - X - P - V/I/M - V/I - R - G - Q/M/L - X - G/S/A - X – R。
23.如权利要求22中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 1的位置91-104或SEQ ID No. 2至49的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
24.如权利要求20 – 23中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
D - V/A/M - S/A - 2（X）- S/G - P/A - D - H - T/A/N -V/I。
25.如权利要求24中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 1的位置116-126或SEQ ID No. 2至49的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
26.如权利要求20 – 25中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
G - L/V/A/I - V/I - N/D - V/I/L - X - D - X - K/R - I/L/V – P。
27.如权利要求26中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 1的位置154-164或SEQ ID No. 2至49的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
28.如权利要求20 – 27中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
G - X - G/S/A - Y/F/W/V - G/S/T/N - X - Q/R/L - 3（X）- Y - G - L/I/V - L/I/P - G/A - H/D。
29.如权利要求28中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 1的位置250-265或SEQ ID No. 2至49的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
30.如权利要求20 – 29中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
R - X - D/E - X - R/K/Q/D - G/T/S/A - E/Q/S/D - 3（X）- P - 3（X）- I/F/V/L - 3（X）- R/A/K/Q - 5（X）- D/N/R/G - Y - X - H - X – E。
31.如权利要求30中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 1的位置91-104或SEQ ID No. 334至363的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
32.如权利要求20 – 31中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
R - X - P - X - A/P/V/T - Q/E/M - E - L/M - Y/F - A/S/Y/T - X - G - X - H - X - A - T/L/S - X - T/S/A - F/Y/I/V - E/Q -（1-9）X - G - D/N/Q - X - X – L。
33.如权利要求32中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 1的位置510-536、537、538、539、540、541、542、543或544或SEQ ID No. 2至49的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
34.如权利要求20 – 33中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
Y - X - Q/G - 2（X）- A - X- F/L/Y/I - X - G - X - E/D - G/A/V - 3（X）- Y/F/H/Q - 8（X）- G/S/A/T - X - F/S - G - D - X - V/I - R/K/N - A/G。
35.如权利要求34中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 1的位置595-628或SEQ ID No. 2至49的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
36.如权利要求20 – 35中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
P/A - R - X - P/S/A - A/P/G - X - R - L/V/A - S/G。
37.如权利要求36中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 1的位置657-665或SEQ ID No. 2至49的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
38.如权利要求19 – 37中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述至少一种另外的抗原是TdfH蛋白质或其免疫原性片段。
39.如权利要求38中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述TdfH蛋白质与选自下述的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性：SEQ ID No. 50；SEQ ID No. 51；SEQ ID No. 52；SEQ ID No. 53；SEQ ID No. 54；SEQ ID No. 55；SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；SEQ ID No. 67；SEQ ID No. 68；SEQ ID No. 69；SEQ ID No. 70；和SEQ ID No. 71，或是根据权利要求42 – 55中任一项的TdfH蛋白质，或所述免疫原性片段是具有选自所述氨基酸序列组的序列，其中所述免疫原性片段由具有所述所选序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别所述选择序列的免疫应答。
40.如权利要求1 – 19中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述抗原或所述多肽或所述免疫原性片段衍生自TdfH蛋白质。
41.如权利要求40中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽与选自下述的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性：SEQ ID No. 50；SEQ ID No. 51；SEQ ID No. 52；SEQ ID No. 53；SEQ ID No. 54；SEQ ID No. 55；SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；SEQ ID No. 67；SEQ ID No. 68；SEQ ID No. 69；SEQ ID No. 70；和SEQ ID No. 71，其中所述多肽包含具有选自所述组的序列的免疫原性片段，其中所述免疫原性片段由具有所述所选序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别所述选择序列的免疫应答。
42.如权利要求40或权利要求41中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
R - S/T - V/I - P - G - A - F/Y - T - Q/N - Q/V/L/I - D - K/Q - G/A/S - S/Q - G - X - V/L - S - V/L - N - V/I - R - G - X - S/N/T - G - F/L - G - R - V/A - N - S/T - M/Q - V/I - D - G - V/I - S/T - Q - T – F。
43.如权利要求42中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 50的位置81-121或SEQ ID No. 51至71的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
44.如权利要求40 – 43中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
F - S/N/D/E - G - S/T/A/K - A/G/S/N - G - I/L/V/A - N - S/T/A - L - X - G - S - A - N - L/F - R/K - T - L/I - G/N/S - V/A - D/N – D。
45.如权利要求44中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 50的位置156-178或SEQ ID No. 51至71的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
46.如权利要求40 – 45中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
S - X - R/K/Q - X - V/I/S/L - S/A - Q - N/D - Y/F - R/K - V/I - G - G – G。
47.如权利要求46中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 50的位置226-239或SEQ ID No. 51至71的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
48.如权利要求40 – 47中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
L - F/A/L/V - K - L/I/F/V - E/R - Y - X - G/N/D/S - V/D/K/H - 4（X）- T/G/N/I - A/L - Q/N/S - F/L/I/Y - R - X - L/M/Y - X - T/N - X -I/L/V - G/A/S - S/T/G - R - K/R/N/S - I/L - X - N - R/D/K/N - N/T - Y – Q。
49.如权利要求48中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 50的位置333-367或SEQ ID No. 51至71的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
50.如权利要求40 – 49中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
P - X - G - S/K/E - Q - X - F/I - N/H/K/I - T/S - F/I/V/L - Y - F/L/I – D。
51.如权利要求50中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 50的位置491-503或SEQ ID No. 51至71的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
52.如权利要求40 – 51中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
N - H/Y - S - V/A/L/M - S/T/I/M - I/L/F - S - A - X - F/Y/L/I - G/D/S/H - D/T/P - Y/G/L - F - M/N/S/T - P - F - X - S/T/G - Y/F - S/A - R/H/K - T/S - H - R - M/I/V/A - P - N - I/V - Q/K/R - E - M/Y/V - Y/F - F - S/T。
53.如权利要求52中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 50的位置574-608或SEQ ID No. 51至71的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
54.如权利要求40 – 53中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含下述氨基酸基序：
E/D - V/I - K/Q - N - L/A/V - F/L - D - R/K - R/L/K/N - Y - I/V/M - D/N - P/A - L - D/Y。
55.如权利要求54中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽或免疫原性片段包含在SEQ ID No. 50的位置846-860或SEQ ID No. 51至71的等价位置上，来自与所述基序邻接的序列在所述基序的N和/或C末端上的1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个进一步氨基酸。
56.如权利要求19和40 – 55中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述至少一种另外的抗原是TdfI蛋白质或其免疫原性片段。
57.如权利要求56中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多肽与选自下述的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性：SEQ ID No. 1；SEQ ID No. 2；SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；SEQ ID No. 9；SEQ ID No. 10；SEQ ID No. 11；SEQ ID No. 12；SEQ ID No. 13；SEQ ID No. 14；SEQ ID No. 15；SEQ ID No. 16；SEQ ID No. 17；SEQ ID No. 18；SEQ ID No. 19；SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；SEQ ID No. 22；SEQ ID No. 23；SEQ ID No. 24；SEQ ID No. 25；SEQ ID No. 26；SEQ ID No. 27；SEQ ID No. 28；SEQ ID No. 29；SEQ ID No. 30；SEQ ID No. 31；SEQ ID No. 32；SEQ ID No. 33；SEQ ID No. 34；SEQ ID No. 35；SEQ ID No. 36；SEQ ID No. 37；SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；SEQ ID No. 41；SEQ ID No. 42；SEQ ID No. 43；SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；SEQ ID No. 46；SEQ ID No. 47；SEQ ID No. 48；和SEQ ID No. 49，或是根据权利要求22 – 37中任一项的TdfI蛋白质，或所述免疫原性片段具有选自所述氨基酸序列组的序列，其中所述免疫原性片段由具有所述所选序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别所述选择序列的免疫应答。
58.如权利要求19 – 57和272 – 278中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述至少一种另外的抗原选自fHbp多肽、Hsf多肽、Hap多肽、NadA多肽和lipo28多肽、或其免疫原性片段。
59.如权利要求1 – 58中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其包括包含所述抗原的细菌外膜囊泡制剂。
60.如权利要求59中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述抗原的表达在所述细菌外膜囊泡制剂中是上调的。
61.如权利要求60中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述上调是相对于来自相同菌株的野生型细菌的外膜囊泡制剂中所述抗原的表达，例如与由其制备所述外膜囊泡的野生型细菌相比较。
62.如权利要求60或权利要求61中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述上调是1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10倍或更多倍。
63.如权利要求59 - 62中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述外膜囊泡制剂由其衍生的宿主细胞在所述抗原的产生中是遗传修饰的。
64.如权利要求63中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述外膜囊泡制剂由其衍生的所述宿主细胞已通过内源蛋白质的功能表达的破坏进行遗传修饰，所述蛋白质在未遗传修饰的宿主细胞中阻遏所述抗原的表达。
65.如权利要求63中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述宿主细胞已遗传修饰为提供来自异源和/或强和/或非锌调节的启动子的所述抗原表达。
66.如权利要求65中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述异源和/或强启动子不由内源蛋白质结合，所述蛋白质在未遗传修饰的宿主细胞中通过结合所述内源启动子来阻遏所述抗原的表达。
67.如权利要求65或权利要求66中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述异源启动子是在宿主细胞强于所述抗原的内源启动子的启动子。
68.如权利要求65 - 67中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述异源和/或强启动子是IPTG诱导型启动子。
69.如权利要求64或66中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述内源蛋白质是奈瑟菌属或革兰氏阴性菌Zur阻遏物。
70.如权利要求59 - 69中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述外膜囊泡制剂从两种或多种革兰氏阴性菌菌株中分离。
71.如权利要求70中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述革兰氏阴性菌菌株中的至少一种属于选自权利要求12和13中定义的细菌物种或属。
72.如权利要求1 - 71中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其包含药学可接受的赋形剂。
73.如权利要求1 - 72中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其包含佐剂。
74.如权利要求1 - 73中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其包含锌盐。
75.权利要求1 - 58中任一项中定义的、包含编码抗原的至少一种多核苷酸和任选地另外抗原的免疫原性组合物或疫苗，其中所述多核苷酸与真核启动子可操作地连接。
76.如权利要求1 - 75中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由革兰氏阴性菌菌株的感染的免疫应答，例如保护性应答。
77.如权利要求76中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由两种或多种不同细菌菌株的感染的免疫应答，例如保护性应答。
78.如权利要求76或权利要求77中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述不同的革兰氏阴性菌菌株中的一种或多种属于选自下述的细菌属或物种：疏螺旋体属；伯氏疏螺旋体；布鲁氏菌属；马耳他布鲁氏菌；绵羊种布鲁氏菌；衣原体属；鹦鹉衣原体；沙眼衣原体；埃希氏菌属；大肠杆菌；军团菌属；嗜肺军团菌；耶尔森菌属；小肠结肠炎耶尔森菌；志贺氏菌属；福氏志贺氏菌；痢疾志贺氏菌；鲍氏志贺氏菌；柯克斯体属；贝纳柯克斯体；食酸菌属；不动杆菌属；鲍氏不动杆菌；乙酸钙不动杆菌；约氏不动杆菌；琼氏不动杆菌；鲁氏不动杆菌；抗辐射不动杆菌；放线杆菌属；小放线杆菌；胸膜肺炎放线杆菌；聚集菌属；伴放线菌聚集菌；Aggregatibacter aphrophilus；食烷菌属；泊库岛食烷菌；固氮弧菌属；固氮菌属；棕色固氮菌；博德特氏菌属；支气管炎博德特氏菌；副百日咳博德特氏菌；百日咳博德特氏菌；百日咳博德特氏菌；Bordetella petrii；弯曲杆菌属；结肠弯曲杆菌；乌普萨拉弯曲杆菌；丛毛单胞菌属；睾丸酮丛毛单胞菌；戴尔福特菌属；食酸戴尔福特菌；Diaphorobacter；嗜血杆菌属；流感嗜血杆菌；副猪嗜血杆菌；睡眠嗜血杆菌；曼海姆菌属；溶血曼海姆菌；莫拉菌属；卡他莫拉菌；奈瑟菌属；淋病奈瑟球菌；脑膜炎奈瑟菌；巴斯德氏菌属；达可马巴斯德氏菌；多杀巴斯德氏菌；变形菌属；奇异变形菌；假单胞菌属；铜绿假单胞菌；施氏假单胞菌；和鞘氨醇单胞菌属。
79.一种遗传修饰的革兰氏阴性菌菌株，由其可以衍生权利要求59 – 69的免疫原性组合物或疫苗的外膜囊泡制剂。
80.一种用于治疗或预防革兰氏阴性菌感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求1 – 79中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗。
81.如权利要求1 – 79中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防革兰氏阴性菌感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防革兰氏阴性菌疾病的药物制造中应用。
82.权利要求80的方法，或权利要求81的免疫原性组合物或疫苗或应用，其中所述革兰氏阴性菌感染或疾病是通过革兰氏阴性菌菌株的感染，或通过革兰氏阴性菌菌株的感染引起的疾病，所述革兰氏阴性菌菌株属于选自下述的细菌属或物种：疏螺旋体属；伯氏疏螺旋体；布鲁氏菌属；马耳他布鲁氏菌；绵羊种布鲁氏菌；衣原体属；鹦鹉衣原体；沙眼衣原体；埃希氏菌属；大肠杆菌；军团菌属；嗜肺军团菌；耶尔森菌属；小肠结肠炎耶尔森菌；志贺氏菌属；福氏志贺氏菌；痢疾志贺氏菌；鲍氏志贺氏菌；柯克斯体属；贝纳柯克斯体；食酸菌属；不动杆菌属；鲍氏不动杆菌；乙酸钙不动杆菌；约氏不动杆菌；琼氏不动杆菌；鲁氏不动杆菌；抗辐射不动杆菌；放线杆菌属；小放线杆菌；胸膜肺炎放线杆菌；聚集菌属；伴放线菌聚集菌；Aggregatibacter aphrophilus；食烷菌属；泊库岛食烷菌；固氮弧菌属；固氮菌属；棕色固氮菌；博德特氏菌属；支气管炎博德特氏菌；副百日咳博德特氏菌；百日咳博德特氏菌；百日咳博德特氏菌；Bordetella petrii；弯曲杆菌属；结肠弯曲杆菌；乌普萨拉弯曲杆菌；丛毛单胞菌属；睾丸酮丛毛单胞菌；戴尔福特菌属；食酸戴尔福特菌；Diaphorobacter；嗜血杆菌属；流感嗜血杆菌；副猪嗜血杆菌；睡眠嗜血杆菌；曼海姆菌属；溶血曼海姆菌；莫拉菌属；卡他莫拉菌；奈瑟菌属；淋病奈瑟球菌；脑膜炎奈瑟菌；巴斯德氏菌属；达可马巴斯德氏菌；多杀巴斯德氏菌；变形菌属；奇异变形菌；假单胞菌属；铜绿假单胞菌；施氏假单胞菌；和鞘氨醇单胞菌属。
83.权利要求82的方法或免疫原性组合物或疫苗或应用，其中所述感染或疾病是通过除奈瑟菌属菌株外的革兰氏阴性菌菌株的感染，或通过除奈瑟菌属菌株外的革兰氏阴性菌菌株引起的疾病。
84.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 2的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 2的氨基酸序列的免疫应答。
85.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 2序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 2序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 2的氨基酸序列的免疫应答。
86.如权利要求84或权利要求85中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由食酸菌属的感染、或由食酸菌属引起的疾病的保护性应答。
87.一种用于治疗或预防食酸菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求84或权利要求85中定义的免疫原性组合物或疫苗。
88.如权利要求84或权利要求85中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防食酸菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防食酸菌属感染或疾病的药物制造中应用。
89.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；和SEQ ID No. 9的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发分别识别SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；SEQ ID No. 9的序列的免疫应答。
90.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；和SEQ ID No. 9的序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发分别识别SEQ ID No. 3；SEQ ID No. 4；SEQ ID No. 5；SEQ ID No. 6；SEQ ID No. 7；SEQ ID No. 8；SEQ ID No. 9的序列的免疫应答。
91.如权利要求89或权利要求90中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由不动杆菌属的感染、或由不动杆菌属引起的疾病的保护性应答。
92.一种用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求89或权利要求90中定义的免疫原性组合物或疫苗。
93.如权利要求89或权利要求90中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防不动杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
94.权利要求91 – 93中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述不动杆菌属是鲍氏不动杆菌。
95.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 10的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 10的氨基酸序列的免疫应答。
96.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 10序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 10序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 10的氨基酸序列的免疫应答。
97.如权利要求95或权利要求96中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由不动杆菌属的感染、或由不动杆菌属引起的疾病的保护性应答。
98.一种用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求95或权利要求96中定义的免疫原性组合物或疫苗。
99.如权利要求95或权利要求96中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防不动杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
100.权利要求97 – 99中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述不动杆菌属是乙酸钙不动杆菌。
101.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 11的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 11的氨基酸序列的免疫应答。
102.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 11序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 11序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 11的氨基酸序列的免疫应答。
103.如权利要求101或权利要求102中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由不动杆菌属的感染、或由不动杆菌属引起的疾病的保护性应答。
104.一种用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求101或权利要求102中定义的免疫原性组合物或疫苗。
105.如权利要求101或权利要求102中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防不动杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
106.权利要求103 – 105中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述不动杆菌属是约氏不动杆菌。
107.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 12的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 12的氨基酸序列的免疫应答。
108.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 12序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 12序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 12的氨基酸序列的免疫应答。
109.如权利要求107或权利要求108中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由不动杆菌属的感染、或由不动杆菌属引起的疾病的保护性应答。
110.一种用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求107或权利要求108中定义的免疫原性组合物或疫苗。
111.如权利要求107或权利要求108中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防不动杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
112.权利要求109 – 111中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述不动杆菌属是琼氏不动杆菌。
113.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 13的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 13的氨基酸序列的免疫应答。
114.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 13序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 13序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 13的氨基酸序列的免疫应答。
115.如权利要求113或权利要求114中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由不动杆菌属的感染、或由不动杆菌属引起的疾病的保护性应答。
116.一种用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求113或权利要求114中定义的免疫原性组合物或疫苗。
117.如权利要求113或权利要求114中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防不动杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
118.权利要求115 – 117中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述不动杆菌属是鲁氏不动杆菌。
119.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 14的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 14的氨基酸序列的免疫应答。
120.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 14序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 14序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 14的氨基酸序列的免疫应答。
121.如权利要求119或权利要求120中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由不动杆菌属的感染、或由不动杆菌属引起的疾病的保护性应答。
122.一种用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求119或权利要求120中定义的免疫原性组合物或疫苗。
123.如权利要求119或权利要求120中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防不动杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
124.权利要求121 – 123中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述不动杆菌属是抗辐射不动杆菌。
125.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 15的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 15的氨基酸序列的免疫应答。
126.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 15序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 15序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 15的氨基酸序列的免疫应答。
127.如权利要求125或权利要求126中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由不动杆菌属的感染、或由不动杆菌属引起的疾病的保护性应答。
128.一种用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求125或权利要求126中定义的免疫原性组合物或疫苗。
129.如权利要求125或权利要求126中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防不动杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
130.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 16的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 16的氨基酸序列的免疫应答。
131.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 16序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 16序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 16的氨基酸序列的免疫应答。
132.如权利要求130或权利要求131中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由不动杆菌属的感染、或由不动杆菌属引起的疾病的保护性应答。
133.一种用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求130或权利要求131中定义的免疫原性组合物或疫苗。
134.如权利要求130或权利要求131中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防不动杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
135.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 17的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 17的氨基酸序列的免疫应答。
136.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 17序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 17序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 17的氨基酸序列的免疫应答。
137.如权利要求135或权利要求136中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由不动杆菌属的感染、或由不动杆菌属引起的疾病的保护性应答。
138.一种用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求135或权利要求136中定义的免疫原性组合物或疫苗。
139.如权利要求135或权利要求136中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防不动杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防不动杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
140.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自SEQ ID No. 18和SEQ ID No. 19的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发分别识别SEQ ID No. 18；SEQ ID No. 19的序列的免疫应答。
141.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自SEQ ID No. 18和SEQ ID No. 19序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发分别识别SEQ ID No. 18；SEQ ID No. 19的序列的免疫应答。
142.如权利要求140或权利要求141中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由放线杆菌属的感染、或由放线杆菌属引起的疾病的保护性应答。
143.一种用于治疗或预防放线杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求140或权利要求141中定义的免疫原性组合物或疫苗。
144.如权利要求140或权利要求141中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防放线杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防放线杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
145.权利要求142 – 144中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述放线杆菌属是小放线杆菌。
146.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；和SEQ ID No. 22的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发分别识别SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；SEQ ID No. 22的序列的免疫应答。
147.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；和SEQ ID No. 22序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发分别识别SEQ ID No. 20；SEQ ID No. 21；SEQ ID No. 22的序列的免疫应答。
148.如权利要求146或权利要求147中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由放线杆菌属的感染、或由放线杆菌属引起的疾病的保护性应答。
149.一种用于治疗或预防放线杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求146或权利要求147中定义的免疫原性组合物或疫苗。
150.如权利要求146或权利要求147中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防放线杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防放线杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
151.权利要求148 – 150中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述放线杆菌属是胸膜肺炎放线杆菌。
152.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 23的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 23的氨基酸序列的免疫应答。
153.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 23序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 23序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 23的氨基酸序列的免疫应答。
154.如权利要求152或权利要求153中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由食烷菌属的感染、或由食烷菌属引起的疾病的保护性应答。
155.一种用于治疗或预防食烷菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求152或权利要求153中定义的免疫原性组合物或疫苗。
156.如权利要求152或权利要求153中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防食烷菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防食烷菌属感染或疾病的药物制造中应用。
157.权利要求154 – 156中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述食烷菌属是泊库岛食烷菌。
158.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 24的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 24的氨基酸序列的免疫应答。
159.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 24序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 24序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 24的氨基酸序列的免疫应答。
160.如权利要求158或权利要求159中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由固氮弧菌属的感染、或由固氮弧菌属引起的疾病的保护性应答。
161.一种用于治疗或预防固氮弧菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求158或权利要求159中定义的免疫原性组合物或疫苗。
162.如权利要求158或权利要求159中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防固氮弧菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防固氮弧菌属感染或疾病的药物制造中应用。
163.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 25的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 25的氨基酸序列的免疫应答。
164.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 25序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 25序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 25的氨基酸序列的免疫应答。
165.如权利要求163或权利要求164中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由固氮菌属的感染、或由固氮菌属引起的疾病的保护性应答。
166.一种用于治疗或预防固氮菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求163或权利要求164中定义的免疫原性组合物或疫苗。
167.如权利要求163或权利要求164中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防固氮菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防固氮菌属感染或疾病的药物制造中应用。
168.权利要求165 – 167中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述固氮菌属是棕色固氮菌。
169.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 26的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 26的氨基酸序列的免疫应答。
170.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 26序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 26序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 26的氨基酸序列的免疫应答。
171.如权利要求169或权利要求170中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由博德特氏菌属的感染、或由博德特氏菌属引起的疾病的保护性应答。
172.一种用于治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求169或权利要求170中定义的免疫原性组合物或疫苗。
173.如权利要求169或权利要求170中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病的药物制造中应用。
174.权利要求171 – 173中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述博德特氏菌属是支气管炎博德特氏菌。
175.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 27的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 27的氨基酸序列的免疫应答。
176.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 27序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 27序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 27序列的免疫应答。
177.如权利要求175或权利要求176中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由博德特氏菌属的感染、或由博德特氏菌属引起的疾病的保护性应答。
178.一种用于治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求175或权利要求176中定义的免疫原性组合物或疫苗。
179.如权利要求175或权利要求176中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病的药物制造中应用。
180.权利要求177 – 179中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述博德特氏菌属是副百日咳博德特氏菌。
181.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 28的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 28的氨基酸序列的免疫应答。
182.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 28序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 28序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 28的氨基酸序列的免疫应答。
183.如权利要求181或权利要求182中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由博德特氏菌属的感染、或由博德特氏菌属引起的疾病的保护性应答。
184.一种用于治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求181或权利要求182中定义的免疫原性组合物或疫苗。
185.如权利要求181或权利要求182中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病的药物制造中应用。
186.权利要求183 – 185中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述博德特氏菌属是百日咳博德特氏菌。
187.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 29的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 29的氨基酸序列的免疫应答。
188.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 29序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 29序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 29的氨基酸序列的免疫应答。
189.如权利要求187或权利要求188中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由博德特氏菌属的感染、或由博德特氏菌属引起的疾病的保护性应答。
190.一种用于治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求187或权利要求188中定义的免疫原性组合物或疫苗。
191.如权利要求187或权利要求188中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防博德特氏菌属感染或疾病的药物制造中应用。
192.权利要求189 – 191中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述博德特氏菌属是Bordetella petrii。
193.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自SEQ ID No. 30和SEQ ID No. 31的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发分别识别SEQ ID No. 30；SEQ ID No. 31的序列的免疫应答。
194.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自SEQ ID No. 30和SEQ ID No. 31序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发分别识别SEQ ID No. 30；SEQ ID No. 31的序列的免疫应答。
195.如权利要求193或权利要求194中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由丛毛单胞菌属的感染、或由丛毛单胞菌属引起的疾病的保护性应答。
196.一种用于治疗或预防丛毛单胞菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求193或权利要求194中定义的免疫原性组合物或疫苗。
197.如权利要求193或权利要求194中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防丛毛单胞菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防丛毛单胞菌属感染或疾病的药物制造中应用。
198.权利要求195 – 197中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述丛毛单胞菌属是睾丸酮丛毛单胞菌。
199.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 32的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 32的氨基酸序列的免疫应答。
200.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 32序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 32序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 32的氨基酸序列的免疫应答。
201.如权利要求199或权利要求200中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由戴尔福特菌属的感染、或由戴尔福特菌属引起的疾病的保护性应答。
202.一种用于治疗或预防戴尔福特菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求199或权利要求200中定义的免疫原性组合物或疫苗。
203.如权利要求199或权利要求200中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防戴尔福特菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防戴尔福特菌属感染或疾病的药物制造中应用。
204.权利要求201 – 203中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述戴尔福特菌属是食酸戴尔福特菌。
205.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 33的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 33的氨基酸序列的免疫应答。
206.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 33序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 33序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 33的氨基酸序列的免疫应答。
207.如权利要求205或权利要求206中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由Diaphorobacter的感染、或由Diaphorobacter引起的疾病的保护性应答。
208.一种用于治疗或预防Diaphorobacter感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求205或权利要求206中定义的免疫原性组合物或疫苗。
209.如权利要求205或权利要求206中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防Diaphorobacter感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防Diaphorobacter感染或疾病的药物制造中应用。
210.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自SEQ ID No. 34和SEQ ID No. 35的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发分别识别SEQ ID No. 34；SEQ ID No. 35的序列的免疫应答。
211.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自SEQ ID No. 34和SEQ ID No. 35序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发分别识别SEQ ID No. 34；SEQ ID No. 35的序列的免疫应答。
212.如权利要求210或权利要求211中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由嗜血杆菌属的感染、或由嗜血杆菌属引起的疾病的保护性应答。
213.一种用于治疗或预防嗜血杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求210或权利要求211中定义的免疫原性组合物或疫苗。
214.如权利要求210或权利要求211中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防嗜血杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防嗜血杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
215.权利要求212 – 214中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述嗜血杆菌属是副猪嗜血杆菌。
216.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自SEQ ID No. 36和SEQ ID No. 37的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发分别识别SEQ ID No. 36；SEQ ID No. 37的序列的免疫应答。
217.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自SEQ ID No. 68和SEQ ID No. 69的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发分别识别SEQ ID No. 68；SEQ ID No. 69的序列的免疫应答。
218.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自SEQ ID No. 36和SEQ ID No. 37序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发分别识别SEQ ID No. 36；SEQ ID No. 37的序列的免疫应答。
219.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自SEQ ID No. 68和SEQ ID No. 69序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发分别识别SEQ ID No. 68；SEQ ID No. 69的序列的免疫应答。
220.一种免疫原性组合物或疫苗，其包含与权利要求217或权利要求219的免疫原性组合物或疫苗组合的权利要求216的免疫原性组合物或疫苗，或包含与权利要求217或权利要求219的免疫原性组合物或疫苗组合的权利要求218的免疫原性组合物或疫苗。
221.如权利要求216 – 220中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由嗜血杆菌属的感染、或由嗜血杆菌属引起的疾病的保护性应答。
222.一种用于治疗或预防嗜血杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求216 – 220中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗。
223.如权利要求216 – 220中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防嗜血杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防嗜血杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
224.权利要求221 – 223中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述嗜血杆菌属是睡眠嗜血杆菌。
225.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；和SEQ ID No. 41的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发分别识别SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；SEQ ID No. 41的序列的免疫应答。
226.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；和SEQ ID No. 41序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发分别识别SEQ ID No. 38；SEQ ID No. 39；SEQ ID No. 40；SEQ ID No. 41的序列的免疫应答。
227.如权利要求225或权利要求226中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由曼海姆菌属的感染、或由曼海姆菌属引起的疾病的保护性应答。
228.一种用于治疗或预防曼海姆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求225或权利要求226中定义的免疫原性组合物或疫苗。
229.如权利要求225或权利要求226中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防曼海姆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防曼海姆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
230.权利要求227 – 229中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述曼海姆菌属是溶血曼海姆菌。
231.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 42的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 42的氨基酸序列的免疫应答。
232.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 70的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 70的氨基酸序列的免疫应答。
233.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 42序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 42序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 42的氨基酸序列的免疫应答。
234.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 70序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 70序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 70的氨基酸序列的免疫应答。
235.一种免疫原性组合物或疫苗，其包含与权利要求232或权利要求234的免疫原性组合物或疫苗组合的权利要求231的免疫原性组合物或疫苗，或包含与权利要求232或权利要求234的免疫原性组合物或疫苗组合的权利要求233的免疫原性组合物或疫苗。
236.如权利要求231 – 235中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由莫拉菌属的感染、或由莫拉菌属引起的疾病的保护性应答。
237.一种用于治疗或预防莫拉菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求231 – 235中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗。
238.如权利要求231 – 235中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防莫拉菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防莫拉菌属感染或疾病的药物制造中应用。
239.权利要求236 – 238中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述莫拉菌属是卡他莫拉菌。
240.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 43的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 43的氨基酸序列的免疫应答。
241.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 71的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 71的氨基酸序列的免疫应答。
242.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 43序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 43序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 43的氨基酸序列的免疫应答。
243.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 71序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 71序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 71的氨基酸序列的免疫应答。
244.一种免疫原性组合物或疫苗，其包含与权利要求241或权利要求243的免疫原性组合物或疫苗组合的权利要求240的免疫原性组合物或疫苗，或包含与权利要求241或权利要求243的免疫原性组合物或疫苗组合的权利要求242的免疫原性组合物或疫苗。
245.如权利要求240 – 244中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由巴斯德氏菌属的感染、或由巴斯德氏菌属引起的疾病的保护性应答。
246.一种用于治疗或预防巴斯德氏菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求240 – 244中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗。
247.如权利要求240 – 244中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防巴斯德氏菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防巴斯德氏菌属感染或疾病的药物制造中应用。
248.权利要求245 – 247中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述巴斯德氏菌属是达可马巴斯德氏菌。
249.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；和SEQ ID No. 46的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发分别识别SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；SEQ ID No. 46的序列的免疫应答。
250.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；和SEQ ID No. 46序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发分别识别SEQ ID No. 44；SEQ ID No. 45；SEQ ID No. 46的序列的免疫应答。
251.如权利要求249或权利要求250中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由巴斯德氏菌属的感染、或由巴斯德氏菌属引起的疾病的保护性应答。
252.一种用于治疗或预防巴斯德氏菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求249或权利要求250中定义的免疫原性组合物或疫苗。
253.如权利要求249或权利要求250中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防巴斯德氏菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防巴斯德氏菌属感染或疾病的药物制造中应用。
254.权利要求251 – 253中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述巴斯德氏菌属是多杀巴斯德氏菌。
255.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 47的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 47的氨基酸序列的免疫应答。
256.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 47序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 47序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 47的氨基酸序列的免疫应答。
257.如权利要求255或权利要求256中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由变形菌属的感染、或由变形菌属引起的疾病的保护性应答。
258.一种用于治疗或预防变形菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求255或权利要求256中定义的免疫原性组合物或疫苗。
259.如权利要求255或权利要求256中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防变形菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防变形菌属感染或疾病的药物制造中应用。
260.权利要求257 – 259中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述变形菌属是奇异变形菌。
261.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 48的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 48的氨基酸序列的免疫应答。
262.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 48序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 48序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 48的氨基酸序列的免疫应答。
263.如权利要求261或权利要求262中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由假单胞菌属的感染、或由假单胞菌属引起的疾病的保护性应答。
264.一种用于治疗或预防假单胞菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求261或权利要求262中定义的免疫原性组合物或疫苗。
265.如权利要求261或权利要求262中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防假单胞菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防假单胞菌属感染或疾病的药物制造中应用。
266.权利要求263 – 265中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述假单胞菌属是施氏假单胞菌。
267.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 49的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 49的氨基酸序列的免疫应答。
268.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 49序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 49的氨基酸序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 49的氨基酸序列的免疫应答。
269.如权利要求267或权利要求268中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由鞘氨醇单胞菌属的感染、或由鞘氨醇单胞菌属引起的疾病的保护性应答。
270.一种用于治疗或预防鞘氨醇单胞菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求267或权利要求268中定义的免疫原性组合物或疫苗。
271.如权利要求267或权利要求268中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防鞘氨醇单胞菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防鞘氨醇单胞菌属感染或疾病的药物制造中应用。
272.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 50的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 50的氨基酸序列的免疫应答。
273.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 50序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 50的氨基酸序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 50的氨基酸序列的免疫应答。
274.如权利要求272或权利要求273中要求的免疫原性组合物或疫苗，其进一步包括包含与SEQ ID No. 1的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽的抗原，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 1的氨基酸序列的免疫应答，或进一步包括包含SEQ ID No. 1序列的免疫原性片段的多肽的抗原，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 1的氨基酸序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 1的氨基酸序列的免疫应答。
275.如权利要求272 - 274中任一项中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由奈瑟菌属的感染、或由奈瑟菌属引起的疾病的保护性应答。
276.一种用于治疗或预防奈瑟菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求272 - 274中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗。
277.如权利要求272 - 274中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防奈瑟菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防奈瑟菌属感染或疾病的药物制造中应用。
278.权利要求275 – 277中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述奈瑟菌是脑膜炎奈瑟菌。
279.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自SEQ ID No. 51和SEQ ID No. 52的氨基酸序列具有至少51%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发分别识别SEQ ID No. 51；SEQ ID No. 52的序列的免疫应答。
280.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自SEQ ID No. 51和SEQ ID No. 52序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、51、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发分别识别SEQ ID No. 51；SEQ ID No. 52的序列的免疫应答。
281.如权利要求279或权利要求280中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由聚集菌属的感染、或由聚集菌属引起的疾病的保护性应答。
282.一种用于治疗或预防聚集菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求279或权利要求280中定义的免疫原性组合物或疫苗。
283.如权利要求279或权利要求280中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防聚集菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防聚集菌属感染或疾病的药物制造中应用。
284.权利要求281 – 283中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述聚集菌属是伴放线菌聚集菌。
285.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 53的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 53的氨基酸序列的免疫应答。
286.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 53序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 53序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 53的氨基酸序列的免疫应答。
287.如权利要求285或权利要求286中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由聚集菌属的感染、或由聚集菌属引起的疾病的保护性应答。
288.一种用于治疗或预防聚集菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求285或权利要求286中定义的免疫原性组合物或疫苗。
289.如权利要求285或权利要求286中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防聚集菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防聚集菌属感染或疾病的药物制造中应用。
290.权利要求287 – 289中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述聚集菌属是Aggregatibacter aphrophilus。
291.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 54的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 54的氨基酸序列的免疫应答。
292.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 54序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 54序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 54的氨基酸序列的免疫应答。
293.如权利要求291或权利要求292中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由弯曲杆菌属的感染、或由弯曲杆菌属引起的疾病的保护性应答。
294.一种用于治疗或预防弯曲杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求291或权利要求292中定义的免疫原性组合物或疫苗。
295.如权利要求291或权利要求292中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防弯曲杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防弯曲杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
296.权利要求293 – 295中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述弯曲杆菌属是结肠弯曲杆菌。
297.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与SEQ ID No. 55的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发识别SEQ ID No. 55的氨基酸序列的免疫应答。
298.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含SEQ ID No. 55序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有SEQ ID No. 55序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发识别SEQ ID No. 55的氨基酸序列的免疫应答。
299.如权利要求297或权利要求298中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由弯曲杆菌属的感染、或由弯曲杆菌属引起的疾病的保护性应答。
300.一种用于治疗或预防弯曲杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求297或权利要求298中定义的免疫原性组合物或疫苗。
301.如权利要求297或权利要求298中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防弯曲杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防弯曲杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
302.权利要求299 – 301中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述弯曲杆菌属是乌普萨拉弯曲杆菌。
303.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包含与选自SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；和SEQ ID No. 67的氨基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或至少100%同一性的多肽，任选地其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述抗原能够引发分别识别SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；SEQ ID No. 67的序列的免疫应答。
304.一种包含抗原的免疫原性组合物或疫苗，所述抗原包括包含选自SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；和SEQ ID No. 67序列的免疫原性片段的多肽，其中所述免疫原性片段由具有所述选择序列的7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、30、40、50个或更多个邻接氨基酸的氨基酸序列组成，并且其中需要时，当与载体蛋白质偶联时，所述免疫原性片段能够引发分别识别SEQ ID No. 56；SEQ ID No. 57；SEQ ID No. 58；SEQ ID No. 59；SEQ ID No. 60；SEQ ID No. 61；SEQ ID No. 62；SEQ ID No. 63；SEQ ID No. 64；SEQ ID No. 65；SEQ ID No. 66；SEQ ID No. 67的序列的免疫应答。
305.如权利要求303或权利要求304中要求的免疫原性组合物或疫苗，其中所述免疫原性组合物或疫苗能够生成针对由嗜血杆菌属的感染、或由嗜血杆菌属引起的疾病的保护性应答。
306.一种用于治疗或预防嗜血杆菌属感染或疾病的方法，其包括施用保护剂量或有效量的如权利要求303或权利要求304中定义的免疫原性组合物或疫苗。
307.如权利要求303或权利要求304中定义的免疫原性组合物或疫苗，其用于在治疗或预防嗜血杆菌属感染或疾病中应用，或用于在用于治疗或预防嗜血杆菌属感染或疾病的药物制造中应用。
308.权利要求305 – 307中任一项的免疫原性组合物或疫苗或方法，其中所述嗜血杆菌属是流感嗜血杆菌。
309.一种用于产生如权利要求1 – 308中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗的方法，其包括：在足以产生所述抗原的条件和时间下培养包含表达载体的宿主细胞，所述表达载体包含编码所述抗原的多核苷酸，并且从培养基中回收所述抗原；任选通过选自下述的方法纯化所述抗原：硫酸铵沉淀、乙醇沉淀、酸提取、磷酸纤维素层析、疏水作用层析、羟磷灰石层析和凝集素层析；并且用药学可接受的载体或赋形剂配制所述抗原。
310.如权利要求308中要求的方法，其中所述抗原对于所述宿主细胞是内源的。
311.如权利要求309中要求的方法，其中所述抗原对于所述宿主细胞是外源的，所述细胞已遗传修饰为含有编码所述外源抗原的核酸。
312.如权利要求309中要求的方法，其中所述宿主细胞在所述抗原的产生中已是遗传修饰的。
313.如权利要求312中要求的方法，其中所述宿主细胞已通过内源蛋白质的功能表达的破坏进行遗传修饰，所述蛋白质在未遗传修饰的宿主细胞中阻遏所述抗原的表达。
314.如权利要求312中要求的方法，其中所述宿主细胞已遗传修饰为提供来自异源和/或强和/或非锌调节的启动子的所述抗原表达。
315.如权利要求314中要求的方法，其中所述异源和/或强启动子不由内源蛋白质结合，所述蛋白质在未遗传修饰的宿主细胞中通过结合所述内源启动子来阻遏所述抗原的表达。
316.如权利要求314或权利要求315中要求的方法，其中所述异源和/或强启动子是在宿主细胞强于所述抗原的内源启动子的启动子。
317.如权利要求314 - 316中任一项要求的方法，其中所述异源和/或强启动子是IPTG诱导型启动子。
318.如权利要求313或326中要求的方法，其中所述内源蛋白质是奈瑟菌属或革兰氏阴性菌Zur阻遏物。
319.一种用于产生如权利要求59 – 71中任一项中定义的免疫原性组合物或疫苗的方法，其包括培养产生所述抗原的至少第一种革兰氏阴性菌菌株，其中所述抗原在足以提供外膜囊泡产生的水平产生，当施用于受试者时，所述水平引发针对由至少所述第一种革兰氏阴性菌菌株的感染、或由至少所述第一种革兰氏阴性菌菌株引起的疾病的保护性应答；由培养的菌株制备外膜囊泡；且将所述外膜囊泡与药学可接受的载体或赋形剂组合，以产生适合于施用于受试者的免疫原性组合物。
320.如权利要求319中要求的方法，其中所述细菌菌株的所述培养在包含锌螯合剂的培养基中。
321.如权利要求320中要求的方法，其中所述锌螯合剂以0.01-100、0.1-10、0.3-5或0.5-1 μM的浓度存在于所述培养基中。
322.如权利要求320或权利要求321中要求的方法，其中存在于所述培养基中的所述锌螯合剂是TPEN。
323.如权利要求319中要求的方法，其中所述细菌菌株的所述培养在Catlin培养基中。
324.如权利要求319 – 323中任一项中要求的方法，其中所述第一种革兰氏阴性菌菌株包括包含编码所述抗原的多核苷酸的表达载体。
325.如权利要求319 – 324中任一项中要求的方法，其中所述抗原的产生是通过来自异源和/或强启动子的表达。
326.如权利要求319 – 325中任一项中要求的方法，其中由所述培养菌株制备外膜囊泡的所述步骤涉及用0-0.5%、0.02-0.4%、0.04-0.3%、0.06-0.2%、0.08-0.15%或优选0.1%去污剂优选脱氧胆酸盐的提取。
327.如权利要求319 – 325中任一项中要求的方法，其中由所述培养菌株制备外膜囊泡的所述步骤不应用去污剂执行。
328.一种用于产生权利要求72的免疫原性组合物或疫苗的方法，其包括将权利要求1 – 71中任一项的免疫原性组合物或疫苗与药学可接受的赋形剂组合的步骤。
329.一种免疫原性组合物或疫苗，其通过权利要求309 – 328中任一项的方法产生。
330.一种制备用于在革兰氏阴性菌疾病的预防或治疗中应用的免疫球蛋白的方法，其包括用权利要求1 – 308中任一项的免疫原性组合物或疫苗免疫接受者和从所述接受者中分离免疫球蛋白的步骤。
331.一种免疫球蛋白制剂，其可由权利要求330的方法获得。
332.一种药物制剂，其包含权利要求331的免疫球蛋白制剂和药学可接受的赋形剂。
333.一种药物制剂，其包含针对TdfI蛋白质和/或TdfH蛋白质的单克隆抗体和药学可接受的赋形剂。
334.一种用于治疗或预防革兰氏阴性菌疾病的方法，其包括给患者施用有效量的权利要求332或权利要求333的药物制剂的步骤。
335.权利要求332或权利要求333的药物制剂，其用于在治疗或预防革兰氏阴性菌疾病中应用。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111542339A (zh) * | 2017-11-06 | 2020-08-14 | 斯蒂芬·罗杰·格雷夫斯 | 疫苗 |
| CN112043824A (zh) * | 2020-09-17 | 2020-12-08 | 北京市农林科学院 | 一种降低空肠弯曲菌在鸡肠道定植的疫苗及其制备方法 |
| CN113827622A (zh) * | 2021-08-31 | 2021-12-24 | 南方医科大学 | 奇异变形杆菌外膜囊泡在制备预防或治疗骨溶解性疾病药物中的应用 |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2201961B1 (en) | 2005-06-27 | 2018-01-24 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
| EP3366696A1 (en) * | 2010-03-11 | 2018-08-29 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine |
| US9322011B2 (en) * | 2010-09-28 | 2016-04-26 | Abera Bioscience Ab | Fusion protein for secretory protein expression |
| US10967298B2 (en) | 2012-03-15 | 2021-04-06 | Flodesign Sonics, Inc. | Driver and control for variable impedence load |
| US9458450B2 (en) | 2012-03-15 | 2016-10-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustophoretic separation technology using multi-dimensional standing waves |
| US10704021B2 (en) | 2012-03-15 | 2020-07-07 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic perfusion devices |
| US9950282B2 (en) | 2012-03-15 | 2018-04-24 | Flodesign Sonics, Inc. | Electronic configuration and control for acoustic standing wave generation |
| WO2014037472A1 (en) | 2012-09-06 | 2014-03-13 | Novartis Ag | Combination vaccines with serogroup b meningococcus and d/t/p |
| WO2014074927A1 (en) * | 2012-11-09 | 2014-05-15 | Samuel Bogoch | Methods of identifying, preventing, and treating virulent aleutian mink disease virus using replikin sequences |
| PL404229A1 (pl) * | 2013-06-06 | 2014-12-08 | Wrocławskie Centrum Badań Eit + Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością | Wyizolowany immunogenny antygen bakteryjny i jego zastosowanie w profilaktyce i leczeniu zakażeń wywołanych przez Gram-ujemne bakterie |
| WO2015057966A2 (en) * | 2013-10-16 | 2015-04-23 | Samuel Bogoch | THERAPIES, VACCINES, AND PREDICTIVE METHODS FOR MIDDLE EAST RESPIRATORY SYNDROME VIRUS (MERS CoV) |
| WO2015105955A1 (en) | 2014-01-08 | 2015-07-16 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustophoresis device with dual acoustophoretic chamber |
| US11377651B2 (en) | 2016-10-19 | 2022-07-05 | Flodesign Sonics, Inc. | Cell therapy processes utilizing acoustophoresis |
| US11021699B2 (en) | 2015-04-29 | 2021-06-01 | FioDesign Sonics, Inc. | Separation using angled acoustic waves |
| US11708572B2 (en) | 2015-04-29 | 2023-07-25 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic cell separation techniques and processes |
| US11474085B2 (en) | 2015-07-28 | 2022-10-18 | Flodesign Sonics, Inc. | Expanded bed affinity selection |
| US11459540B2 (en) | 2015-07-28 | 2022-10-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Expanded bed affinity selection |
| CN105420161B (zh) * | 2015-12-21 | 2018-07-31 | 江苏省农业科学院 | 一种猪胸膜肺炎放线杆菌外膜囊泡的制备方法及其疫苗 |
| US11214789B2 (en) | 2016-05-03 | 2022-01-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Concentration and washing of particles with acoustics |
| US11085035B2 (en) | 2016-05-03 | 2021-08-10 | Flodesign Sonics, Inc. | Therapeutic cell washing, concentration, and separation utilizing acoustophoresis |
| CA3041517A1 (en) | 2016-10-19 | 2018-04-26 | Flodesign Sonics, Inc. | Affinity cell extraction by acoustics |
| JP2021507561A (ja) | 2017-12-14 | 2021-02-22 | フロデザイン ソニックス， インク．Ｆｌｏｄｅｓｉｇｎ Ｓｏｎｉｃｓ， Ｉｎｃ． | 音響トランスデューサドライバ及びコントローラ |
| CN117180412B (zh) * | 2023-11-06 | 2024-02-02 | 四川大学华西医院 | 一种鲍曼不动杆菌荚膜多糖疫苗及其制备方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999057280A2 (en) * | 1998-05-01 | 1999-11-11 | Chiron Corporation | Neisseria meningitidis antigens and compositions |
| WO2000011182A1 (en) * | 1998-08-18 | 2000-03-02 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Basb024 outer membrane protein of neisseria meningitidis |
| WO2000055327A2 (en) * | 1999-03-12 | 2000-09-21 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Neisseria meningitidis antigenic polypeptides, corresponding polynucleotides and protective antibodies |
| WO2000071725A2 (en) * | 1999-05-19 | 2000-11-30 | Chiron S.P.A. | Combination neisserial compositions |
| WO2001085772A2 (en) * | 2000-05-08 | 2001-11-15 | Microscience Limited | Virulence genes, proteins, and their use |
| US20070031449A1 (en) * | 2003-12-23 | 2007-02-08 | Bos Martine P | Vaccine |
| WO2007148363A1 (en) * | 2006-06-21 | 2007-12-27 | Universita' Degli Studi Di Roma ''tor Vergata'' | Salmonella enterica strains of reduced pathogenicity, method for their preparation and uses thereof |
| CN102215863A (zh) * | 2008-09-08 | 2011-10-12 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 包含脑膜炎奈瑟氏球菌的蛋白质nmb0964的疫苗 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1069006B (zh) | ||||
| GB9726398D0 (en) | 1997-12-12 | 1998-02-11 | Isis Innovation | Polypeptide and coding sequences |
| GB9808866D0 (en) | 1998-04-24 | 1998-06-24 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
| GB9810276D0 (en) | 1998-05-13 | 1998-07-15 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
| ES2539951T3 (es) * | 1999-10-29 | 2015-07-07 | Novartis Vaccines And Diagnositics S.R.L. | Péptidos antigénicos de Neisseria |
| GB9928196D0 (en) * | 1999-11-29 | 2000-01-26 | Chiron Spa | Combinations of B, C and other antigens |
| CN102417537A (zh) | 2000-01-25 | 2012-04-18 | 昆士兰大学 | 包含脑膜炎奈瑟氏球菌表面抗原NhhA的保守区域的蛋白质 |
| CA2493977A1 (en) * | 2002-08-02 | 2004-02-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccine composition comprising lipooligosaccharide with reduced phase variability |
| WO2007042326A2 (en) * | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Intercell Ag | Neisseria meningitidis antigens |
| EP3366696A1 (en) * | 2010-03-11 | 2018-08-29 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine |
-
2011
- 2011-03-11 EP EP18152692.2A patent/EP3366696A1/en not_active Withdrawn
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2016
- 2016-04-28 US US15/140,879 patent/US20170080075A1/en not_active Abandoned
- 2016-06-23 JP JP2016124050A patent/JP2016183185A/ja active Pending
-
2018
- 2018-06-18 US US16/011,222 patent/US20190008943A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999057280A2 (en) * | 1998-05-01 | 1999-11-11 | Chiron Corporation | Neisseria meningitidis antigens and compositions |
| WO2000011182A1 (en) * | 1998-08-18 | 2000-03-02 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Basb024 outer membrane protein of neisseria meningitidis |
| WO2000055327A2 (en) * | 1999-03-12 | 2000-09-21 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Neisseria meningitidis antigenic polypeptides, corresponding polynucleotides and protective antibodies |
| WO2000071725A2 (en) * | 1999-05-19 | 2000-11-30 | Chiron S.P.A. | Combination neisserial compositions |
| WO2001085772A2 (en) * | 2000-05-08 | 2001-11-15 | Microscience Limited | Virulence genes, proteins, and their use |
| US20070031449A1 (en) * | 2003-12-23 | 2007-02-08 | Bos Martine P | Vaccine |
| WO2007148363A1 (en) * | 2006-06-21 | 2007-12-27 | Universita' Degli Studi Di Roma ''tor Vergata'' | Salmonella enterica strains of reduced pathogenicity, method for their preparation and uses thereof |
| CN102215863A (zh) * | 2008-09-08 | 2011-10-12 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 包含脑膜炎奈瑟氏球菌的蛋白质nmb0964的疫苗 |
Non-Patent Citations (10)
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111542339A (zh) * | 2017-11-06 | 2020-08-14 | 斯蒂芬·罗杰·格雷夫斯 | 疫苗 |
| CN112043824A (zh) * | 2020-09-17 | 2020-12-08 | 北京市农林科学院 | 一种降低空肠弯曲菌在鸡肠道定植的疫苗及其制备方法 |
| CN113827622A (zh) * | 2021-08-31 | 2021-12-24 | 南方医科大学 | 奇异变形杆菌外膜囊泡在制备预防或治疗骨溶解性疾病药物中的应用 |
| CN113827622B (zh) * | 2021-08-31 | 2023-11-07 | 南方医科大学 | 奇异变形杆菌外膜囊泡在制备预防或治疗骨溶解性疾病药物中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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