CN103120687A - Eryngiolide A在抗结核菌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了Eryngiolide A在制备抗结核菌药物中的应用。本发明针对当前结核病发病率高、结核杆菌多重耐药菌株的出现，使结核病发病率和死亡率呈上升趋势的现状，发现Eryngiolide A具有显著抑制结核菌的活性，具有很好的应用前景。本发明涉及的Eryngiolide A在制备治疗抗结核菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于结核菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于结核菌感染的防治显然具有显著的进步。

Description

Eryngiolide A在抗结核菌药物中的应用

技术领域

本发明涉及药物化合物应用领域，具体涉及Eryngiolide A在制备抗结核菌药物中的应用。

背景技术

近年来全球结核病的发病呈增高趋势，据世界卫生组织（WHO）估计，目前全球受结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染的人口占世界人口的三分之一，其中5~10%的感染者成为结核病患者。我国每年出现活动性肺结核病人130万例，其中传染性肺结核约60万例，其中传染性肺结核约60万例，是全球结核病高负担国家之一。

自抗结核药物相继问世，使结核病的治疗起到划时代的变化。然而由于结核病患者的治疗管理尚不十分规范，不规则化疗，滥用抗结核药物，使结核病耐药情况日益严重，且耐药性的变化更趋向于多种药物同时耐药，这给结核病的防治工作造成极大困难。因此寻找新的抗结核药物，尤其是抗多药耐药性的抗结核药物对保护人民身体健康，具有重要意义。

发明内容

本发明涉及的化合物Eryngiolide A是一个2012年发表（Wang, S.J. et al., 2012. Eryngiolide A, a Cytotoxic Macrocyclic Diterpenoid with an Unusual Cyclododecane Core Skeleton Produced by the Edible Mushroom Pleurotus eryngii. Organic Letters 14 (14), 3672–3675.）的新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途仅仅涉及癌细胞的细胞毒活性（Wang, S. J. et al., 2012. Eryngiolide A, aCytotoxic Macrocyclic Diterpenoid with an Unusual Cyclododecane Core Skeleton Produced by the Edible Mushroom Pleurotus eryngii. Organic Letters 14 (14), 3672–3675.），对于本发明涉及的Eryngiolide A在制备治疗抗结核菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于结核菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于结核菌感染的防治显然具有显著的进步。

发明内容

本发明的目的在于根据现有Eryngiolide A研究中未发现其具有抗结核活性的报道的现状，提供了Eryngiolide A在制备抗结核菌药物中的应用。

所述化合物Eryngiolide A结构如式（Ⅰ）所示：

本发明目的通过以下技术方案予以实现：

发明人先用卡介苗做应试菌株，采用纸片扩散法对Eryngiolide A的抗结核菌活性进行初步试验，根据初步试验的结果，本发明再用固体培养基稀释法测定了该化合物对卡介苗、结核分枝杆菌标准株H37Rv株和耐多药结核分枝杆菌（MDR MTB）三种结核菌的最小抑菌浓度，实验结果证实Eryngiolide A具有很强的抗结核菌和抗耐药性结核菌活性，可作为治疗结核菌感染疾病的先导化合物，也可用于制备治疗结核病药物。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

（1）本发明提供了一种可用于抗结核病治疗的Eryngiolide A，从而扩大了抗结核菌药物的种类；

（2）针对目前结核病发病率高、结核杆菌多重耐药菌株及人体免疫缺陷病毒双重感染的出现，使结核病发病率和死亡率呈上升趋势的现状，本发明发现Eryngiolide A具有抗结核菌和耐药性结核菌活性的特点，可用于抗结核药物的制备，具有非常广阔的应用前景；

（3）本发明涉及的Eryngiolide A在制备治疗抗结核菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于结核菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于结核菌感染的防治显然具有显著的进步。

具体实施方式

 本发明所涉及化合物Eryngiolide A的制备方法参见文献（Wang,S. J. et al., 2012. Eryngiolide A, a Cytotoxic Macrocyclic Diterpenoid with an Unusual Cyclododecane CoreSkeleton Produced by the Edible Mushroom Pleurotuseryngii. Organic Letters 14 (14), 3672–3675.）。

以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

实施例1：本发明所涉及化合物Eryngiolide A片剂的制备：

取20克化合物Eryngiolide A，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。

实施例2：本发明所涉及化合物Eryngiolide A胶囊剂的制备：

取20克化合物Eryngiolide A，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。

下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。

下面结合具体实施例对本发明做进一步地描述，但具体实施例并不对本发明做任何形式的限定。

实验例1  固体培养基稀释法测定Eryngiolide A抗卡介苗（BCG）绝对浓度

从斜面上刮取卡介苗培养物，加入到3ml Middlebrook7H9肉汤培养基中，加入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于漩涡振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏比浊管（MacFarland No.1）比浊，即配成1mg/ml的卡介苗（BCG）菌悬液。

将Eryngiolide A用DMSO配成高浓度的原液，用含5%的吐温-80无菌超纯水稀释原液至所需浓度，将稀释好的Eryngiolide A按所需剂量加入到4ml Middlebrook7H11琼脂培养基（该培养基已经121℃高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55℃），混匀，制成含Eryngiolide A，浓度分别为6.0 ug/ml，4.0 ug/ml，3.0 ug/ml，2.0 ug/ml，1.5 ug/ml，1.0 ug/ml，0.75 ug/ml，0.5 ug/ml等浓度的斜面培养基。

将浓度为1 mg/ml的卡介苗（BCG）菌悬液用接种环蘸取数环，分别接种于含Eryngiolide A系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37℃培养4~8周，观察实验结果，结果如表1所示。

本实施例中所用Middlebrook7H9肉汤培养基和Middlebrook7H11琼脂培养基为本领域技术人员进行结核菌培养时的常用培养基，其配方采用常规配方即可。

实验例2  固体培养基稀释法测定Eryngiolide A抗结核分枝杆菌标准株H37Rv株绝对浓度

从斜面上刮取结核分枝杆菌标准株H37Rv株培养物，加入到3 ml Middlebrook7H9肉汤培养基中，加入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于漩涡振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏比浊管（MacFarland No.1）比浊，即配成1 mg/ml的H37Rv株菌悬液。

将Eryngiolide A分别用DMSO配成高浓度的原液，用含5%的吐温-80无菌超纯水稀释原液至所需浓度，将稀释好的Eryngiolide A按所需剂量加入到4ml Middlebrook7H11琼脂培养基（该培养基已经121℃高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55℃），混匀，制成含Eryngiolide A，浓度分别为6.0 ug/ml，4.0 ug/ml，3.0 ug/ml，2.0 ug/ml，1.5 ug/ml，1.0 ug/ml，0.75 ug/ml，0.5 ug/ml等浓度的斜面培养基。

将浓度为1mg/ml的H37Rv株菌悬液用接种环蘸取数环，分别接种于含Eryngiolide A系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37℃培养4~8周，观察实验结果，结果如表1所示。

实验例3 固体培养基稀释法测定Eryngiolide A抗结核分支杆菌临床分离耐ISRE MTB株绝对浓度

从斜面上刮取结核分枝杆菌临床分离耐ISRE MTB株（耐异烟肼、链霉素、利福平、乙胺丁醇结核分枝杆菌临床分离柱）培养物，加入到3ml Middlebrook7H9肉汤培养基中，加入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于漩涡振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏比浊管（MacFarland No.1）比浊，即配成1mg/ml的菌悬液。

将Eryngiolide A分别用DMSO配成高浓度的原液，用含5%的吐温-80无菌超纯水稀释原液至所需浓度，将稀释好的Eryngiolide A按所需剂量加入到4ml Middlebrook7H11琼脂培养基（该培养基已经121℃高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55℃），混匀，制成含Eryngiolide A，浓度分别为6.0 ug/ml，4.0 ug/ml，3.0 ug/ml，2.0 ug/ml，1.5 ug/ml，1.0 ug/ml，0.75 ug/ml，0.5 ug/ml等浓度的斜面培养基。

将浓度为1mg/ml的结核分枝杆菌临床分离耐ISRE MTB株菌悬液用接种环蘸取数环，分别接种于含Eryngiolide A系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37℃培养4~8周，观察实验结果，结果如表1所示。

表1 固体培养基稀释法测定Eryngiolide A抗结核菌绝对浓度结果

结论： Eryngiolide A具有很强的抗结核菌和抗耐药性结核菌活性，可作为治疗结核菌感染疾病的先导化合物，也可用于制备治疗结核病药物。

Claims (1)

1.Eryngiolide A在抗结核菌药物中的应用，所述化合物Eryngiolide A结构如式（Ⅰ）所示：

式（Ⅰ）。