CN102872049B - Gypensapogenin A在制备抗结核菌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了GypensapogeninA在制备抗结核菌药物中的应用。本发明针对当前结核病发病率高、结核杆菌多重耐药菌株的出现，使结核病发病率和死亡率呈上升趋势的现状，发现GypensapogeninA具有显著抑制结核菌的活性，具有很好的应用前景。本发明涉及的GypensapogeninA在制备治疗抗结核菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于结核菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于结核菌感染的防治显然具有显著的进步。

Description

Gypensapogenin A在制备抗结核菌药物中的应用

技术领域

本发明涉及药物化合物应用领域，具体涉及Gypensapogenin A在制备抗结核菌药物中的应用。 

背景技术

近年来全球结核病的发病呈增高趋势，据世界卫生组织（WHO）估计，目前全球受结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染的人口占世界人口的三分之一，其中5~10%的感染者成为结核病患者。我国每年出现活动性肺结核病人130万例，其中传染性肺结核约60万例，其中传染性肺结核约60万例，是全球结核病高负担国家之一。 

自抗结核药物相继问世，使结核病的治疗起到划时代的变化。然而由于结核病患者的治疗管理尚不十分规范，不规则化疗，滥用抗结核药物，使结核病耐药情况日益严重，且耐药性的变化更趋向于多种药物同时耐药，这给结核病的防治工作造成极大困难。因此寻找新的抗结核药物，尤其是抗多药耐药性的抗结核药物对保护人民身体健康，具有重要意义。 

发明内容

本发明涉及的化合物Gypensapogenin A是一个2012年发表（Li, N. et al., 2012. Triterpenes possessing an unprecedented skeleton isolated from hydrolyzate of total saponins from Gynostemma pentaphyllum. European Journal of Medicinal Chemistry 50, 173–178.）的新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途仅仅涉及人肿瘤细胞株的细胞毒活性（Li, N. et al., 2012. Triterpenes possessing an unprecedented skeleton isolated from hydrolyzate of total saponins from Gynostemma pentaphyllum. European Journal of Medicinal Chemistry 50, 173–178.），对于本发明涉及的Gypensapogenin A在制备治疗抗结核菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于结核菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于结核菌感染的防治显然具有显著的进步。 

发明内容

本发明的目的在于根据现有Gypensapogenin A研究中未发现其具有抗结核活性的报道的现状，提供了Gypensapogenin A在制备抗结核菌药物中的应用。 

所述化合物Gypensapogenin A结构如式（Ⅰ）所示： 

本发明目的通过以下技术方案予以实现： 

发明人先用卡介苗做应试菌株，采用纸片扩散法对Gypensapogenin A的抗结核菌活性进行初步试验，根据初步试验的结果，本发明再用固体培养基稀释法测定了该化合物对卡介苗、结核分枝杆菌标准株H37Rv株和耐多药结核分枝杆菌（MDR MTB）三种结核菌的最小抑菌浓度，实验结果证实Gypensapogenin A具有很强的抗结核菌和抗耐药性结核菌活性，可作为治疗结核菌感染疾病的先导化合物，也可用于制备治疗结核病药物。 

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果： 

1. 本发明提供了一种可用于抗结核病治疗的Gypensapogenin A，从而扩大了抗结核菌药物的种类； 

2. 针对目前结核病发病率高、结核杆菌多重耐药菌株及人体免疫缺陷病毒双重感染的出现，使结核病发病率和死亡率呈上升趋势的现状，本发明发现Gypensapogenin A具有抗结核菌和耐药性结核菌活性的特点，可用于抗结核药物的制备，具有非常广阔的应用前景； 

3. 本发明涉及的Gypensapogenin A在制备治疗抗结核菌药物中的用途属于首次公开，由 于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于结核菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于结核菌感染的防治显然具有显著的进步。 

具体实施方式

本发明所涉及化合物Gypensapogenin A的制备方法参见文献（Li, N. et al., 2012. Triterpenes possessing an unprecedented skeleton isolated from hydrolyzate of total saponins from Gynostemma pentaphyllum. European Journal of Medicinal Chemistry 50, 173–178.和Wei, J.X. et al., 1982. Two new dammaran sapogenins from leaves of Panax notoginseng. Planta Medica, 45(3): 167-171.）。 

以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。 

实施例1：本发明所涉及化合物Gypensapogenin A片剂的制备： 

取20克化合物Gypensapogenin A，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。 

实施例2：本发明所涉及化合物Gypensapogenin A胶囊剂的制备： 

取20克化合物Gypensapogenin A，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。 

下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。 

实验例1  固体培养基稀释法测定Gypensapogenin A抗卡介苗（BCG）绝对浓度 

从斜面上刮取卡介苗培养物，加入到3ml Middlebrook7H9肉汤培养基中，加入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于漩涡振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏比浊管（MacFarland No.1）比浊，即配成1mg/ml的卡介苗（BCG）菌悬液。 

将Gypensapogenin A用DMSO配成高浓度的原液，用含5%的吐温-80无菌超纯水稀释原液至所需浓度，将稀释好的Gypensapogenin A按所需剂量加入到4ml Middlebrook7H11琼脂培养基（该培养基已经121℃高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55℃），混匀，制成含Gypensapogenin A，浓度分别为6.0 ug/ml，4.0 ug/ml，3.0 ug/ml，2.0 ug/ml，1.5 ug/ml，1.0 ug/ml，0.75 ug/ml，0.5 ug/ml等浓度的斜面培养基。 

将浓度为1 mg/ml的卡介苗（BCG）菌悬液用接种环蘸取数环，分别接种于含 Gypensapogenin A系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37℃培养4~8周，观察实验结果，结果如表1所示。 

本实施例中所用Middlebrook7H9肉汤培养基和Middlebrook7H11琼脂培养基为本领域技术人员进行结核菌培养时的常用培养基，其配方采用常规配方即可。 

实验例2  固体培养基稀释法测定Gypensapogenin A抗结核分枝杆菌标准株H37Rv株绝对浓度 

从斜面上刮取结核分枝杆菌标准株H37Rv株培养物，加入到3 ml Middlebrook7H9肉汤培养基中，加入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于漩涡振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏比浊管（MacFarland No.1）比浊，即配成1 mg/ml的H37Rv株菌悬液。 

将Gypensapogenin A分别用DMSO配成高浓度的原液，用含5%的吐温-80无菌超纯水稀释原液至所需浓度，将稀释好的Gypensapogenin A按所需剂量加入到4ml Middlebrook7H11琼脂培养基（该培养基已经121℃高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55℃），混匀，制成含Gypensapogenin A，浓度分别为6.0 ug/ml，4.0 ug/ml，3.0 ug/ml，2.0 ug/ml，1.5 ug/ml，1.0 ug/ml，0.75 ug/ml，0.5 ug/ml等浓度的斜面培养基。 

将浓度为1mg/ml的H37Rv株菌悬液用接种环蘸取数环，分别接种于含Gypensapogenin A系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37℃培养4~8周，观察实验结果，结果如表1所示。 

实验例3 固体培养基稀释法测定Gypensapogenin A抗结核分支杆菌临床分离耐ISRE MTB株绝对浓度 

从斜面上刮取结核分枝杆菌临床分离耐ISRE MTB株（耐异烟肼、链霉素、利福平、乙胺丁醇结核分枝杆菌临床分离柱）培养物，加入到3ml Middlebrook7H9肉汤培养基中，加入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于漩涡振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏比浊管（MacFarland No.1）比浊，即配成1mg/ml的菌悬液。 

将Gypensapogenin A分别用DMSO配成高浓度的原液，用含5%的吐温-80无菌超纯水稀释原液至所需浓度，将稀释好的Gypensapogenin A按所需剂量加入到4ml Middlebrook7H11琼脂培养基（该培养基已经121℃高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55℃），混匀，制成含Gypensapogenin A，浓度分别为6.0 ug/ml，4.0 ug/ml，3.0 ug/ml，2.0 ug/ml，1.5 ug/ml，1.0 ug/ml， 0.75 ug/ml，0.5 ug/ml等浓度的斜面培养基。 

将浓度为1mg/ml的结核分枝杆菌临床分离耐ISRE MTB株菌悬液用接种环蘸取数环，分别接种于含Gypensapogenin A系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37℃培养4~8周，观察实验结果，结果如表1所示。 

表1 固体培养基稀释法测定Gypensapogenin A抗结核菌绝对浓度结果 

结论： Gypensapogenin A具有很强的抗结核菌和抗耐药性结核菌活性，可作为治疗结核菌感染疾病的先导化合物，也可用于制备治疗结核病药物。 

Claims (1)

1.Gypensapogenin A在制备抗结核菌药物中的应用，所述化合物Gypensapogenin A结构如式（Ⅰ）所示：

式（Ⅰ）。