CN103120162A - 一种含甘草素和熊果酸的抗植物病毒组合物及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含甘草素和熊果酸的抗植物病毒剂组合物及其应用。该组合物有效成分为甘草素和熊果酸，两者重量百分比分别为0.1%～10%和0.1～5%，有效成分辅以助剂及其它辅助剂可以制备乳油、微乳剂、可溶性液剂或水剂。该抗病毒组合药剂可用于烟草、辣椒、番茄、西葫芦、马铃薯等作物上防治烟草花叶病毒病（Tobacco mosaic virus，TMV）多种植物病毒病。而且对环境、人、畜、害虫天敌及其它有益生物安全。该抗植物病毒剂制备工艺简单，成本低廉，适宜推广应用。

Description

一种含甘草素和熊果酸的抗植物病毒组合物及应用

技术领域

本发明涉及农药制剂及其制剂的制备方法。特别涉及一种含甘草素和熊果酸的抗植物病毒组合物及应用。

背景技术

植物病毒是一种由核酸和蛋白质组成的具有侵染活性的细胞内寄生病原物，据国际病毒分类委员会（ICTV）的第八次报告，目前全世界发现的植物病毒种类达1122个。植物病毒所引起的植物病害素有“植物癌症”之称，其对农作物的危害程度仅次于真菌病原物，几乎每种农作物都受到2～3种病毒的危害。全世界每年由植物病毒造成的经济损失约6百亿美元，仅烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）造成的危害就超过1亿美元。

由于植物病毒对植物细胞具有绝对寄生性，病毒复制所需要的物质和能量场所完全由寄主植物提供，导致病毒和寄主的代谢融为一体；加之植物缺乏完整的免疫系统，病毒一旦侵染植物，就可在植物细胞内无限期存活，直至寄主死亡。因此，抑制植物病毒病的药物很难只选择性地攻击病毒而不伤害寄主细胞，导致目前筛选高效、专一、安全的抗病毒制剂研究面临极大的困难。

目前除了采取传统的抗病毒育种、弱毒株系交叉保护、改进栽培技术、杀虫剂控制传毒介体和转基因等方法外，科研人员还研究出了一些植物病毒病害的化学防治方法。但到目前为止，只有一小部分抗植物病毒剂得到实际应用，这些制剂大多以预防为主，且药效多不理想。由于人们对医药或兽药中抗病毒剂研究较早，一些抗植物病毒剂（如农用病毒唑）就是从抗人或动物病毒剂中发展而来。因此，深入探讨抗植物病毒天然物质，有利于抗植物病毒剂的研究、开发及应用。

甘草素是二氢黄酮的一种，它和异甘草素是甘草中两个较为重要的黄酮类化合物，现代医学证实二氢黄酮类化合物大多对心血管疾病、病毒以及肿瘤等具有很好的疗效，甘草素的药理活性也表明甘草素具有强肝解毒、抗溃疡、预防动脉硬化、治疗精神抑郁、抗癌等活性，而有关甘草素抗病毒的研究起步较晚，现在的研究已表明甘草素对免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiency Virus，HIV）和新城疫病毒（The Newcastle Disease Virus，NDV）具有很好的疗效，但未见甘草素对植物病毒抑制活性的报道。熊果酸，又名乌索酸（乌苏酸），属乌斯烷型五环三萜类化合物，它广泛存在于中药、食物及其它植物中。据文献报道，熊果酸具有抗肿瘤、抗菌消炎、抗高血脂、抗氧化、抗糖尿病、抗病毒及免疫调节等多种生物学效应和保健功能，尤其是熊果酸的抗肿瘤作用备受关注，对其抗肿瘤活性及作用机制做了大量研究，但未见文献有关熊果酸抗植物病毒的报道。因此，这两种化合物在农业上的应用也有待于进一步开发。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种含甘草素和熊果酸的抗植物病毒组合物，该抗植物病毒组合物能够用于制备防治烟草花叶病毒病的农药。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种含甘草素和熊果酸的抗植物病毒组合物，其特征在于，制得的抗植物病毒组合物的有效成分为甘草素和熊果酸，并加入助剂加工而成，制剂形态是乳油、微乳剂、可溶性液剂或水剂，其中：

所述的乳油由以下原料按重量百分比配制：甘草素：1%～10%，熊果酸：0.5～5%，乳化剂：5%～20%，增效剂：1%～10%，溶剂补至100%；

其中，乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#等中一种或几种的混合物；溶剂为二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮中的一种或几种的混合物；增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物。

所述的微乳剂由以下原料按重量百分比配制：甘草素：1%～10%，熊果酸：0.5～5%，乳化剂：10%～40%，增效剂：1%～10%，助溶剂：5～40%，消泡剂：0.02%，水补至100%；

其中，乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#等中一种或几种的混合物；助溶剂为二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮、木醋液中的一种或几种的混合物；溶剂为水；防冻剂为乙二醇、丙二醇、尿素、丙三醇中的一种或几种的混合物；所述增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物；消泡剂为有机硅消泡剂。

所述的可溶性液剂由以下原料按重量百分比配制：甘草素：0.5%～10%，熊果酸：0.1～5%，乳化剂：10%～40%，增效剂：1%～10%，溶剂补至100%；

其中，乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#等中一种或几种的混合物；溶剂为二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮中、木醋液、乙酸、水中的一种或几种的混合物；增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物。

所述的水剂由以下原料按重量百分比配制：甘草素：0.5%～10%，熊果酸：0.1～5%，乳化剂：10%～40%，增效剂：1%～10%，助溶剂：5～40%，消泡剂：0.02%，水补至100%。

其中，乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#中一种或几种的混合物；助溶剂是二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮中、木醋液、乙酸中的一种或几种的混合物；增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物；消泡剂为有机硅消泡剂；溶剂为水。

本发明所制成的含甘草素和熊果酸植物病毒剂组合物具有以下优点：

1、抗植物病毒活性显著，可用于烟草、辣椒、番茄、西葫芦、马铃薯等作物上防治烟草花叶病毒病（Tobacco mosaic virus,TMV）。

2、对人、畜、害虫天敌及其它有益生物安全，环境兼容性好；

3、生物源农药，使用后无残留毒害；

4、资源丰富、制备方法简单、成本低廉、适宜推广使用。

具体实施方式

为了更好的理解发明的实质，下面用实施例来详细说明发明的技术内容，但发明并不局限于这些实施例。

申请人经过研究，将甘草素与熊果酸组合，并在此基础上添加其它助剂制成混配抗植物病毒组合物。该混配抗植物病毒组合物可以有效防治烟草花叶病毒病害。

本发明的含甘草素和熊果酸的抗病毒组合物，可以制成本领域熟知的农药制剂，如乳油、微乳剂、可溶性液剂或水剂。其中：

乳油由以下原料按重量百分比配制：

甘草素：1%～10%，熊果酸：0.5%～5%，乳化剂：5%～20%，增效剂：1%～10%，溶剂补至100%。

其中，乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#等中一种或几种的混合物；溶剂为二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮中的一种或几种的混合物；增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物。

所述的微乳剂由以下原料按重量百分比配制：

甘草素：1%～10%，熊果酸：0.5～5%，乳化剂：10%～40%，增效剂：1%～10%，助溶剂：5%～40%，消泡剂：0.02%，水补至100%。

其中，乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#等中一种或几种的混合物；助溶剂为二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮、木醋液中的一种或几种的混合物，所用溶剂为水；防冻剂为乙二醇、丙二醇、尿素、丙三醇中的一种或几种的混合物；增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物；消泡剂为有机硅消泡剂。

可溶性液剂由以下原料按重量百分比配制：

甘草素：0.5%～10%，熊果酸：0.1～5%，乳化剂：10%～40%，增效剂：1%～10%，溶剂补至100%。

其中，乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#等中一种或几种的混合物；溶剂为二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮、木醋液、乙酸、水中的一种或几种的混合物；增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物。

所述的水剂由以下原料按重量百分比配制：

甘草素：0.5%～10%，熊果酸0.1～5%，乳化剂：10%～40%，增效剂：1%～10%，助溶剂：1～40%，消泡剂：0.02%，水补至100%。

其中乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#等中一种或几种的混合物；助溶剂可以是二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮中、木醋液、乙酸中的一种或几种的混合物；增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物；消泡剂为有机硅消泡剂；溶剂为水。

微乳剂和水剂以水为介质，大量减少了有机溶剂的使用，减低了对环境的毒害；且有效成分以纳米级存在，分散度高，通过添加合适的增效组分，大大提高了活性成分有效利用率。因此优选加工剂型为微乳剂和水剂。

以下是发明人给出的实施例。

实施例1：5%甘草素·熊果酸（4:1）乳油的制备

在20～25℃下，取4份甘草素，1份熊果酸混合，加入25份二甲基亚砜、15份甲醇和5份油溶性氮酮搅拌使其充分溶解，然后在上述混合物中依次加入10份OP-10、醋酸丁酯补足100份，以搅拌速度80～120转/分钟搅拌30～60分钟，即可制得5%甘草素·熊果酸乳油。

实施例2：4.5%甘草素·熊果酸（4:0.5）可溶性液剂的制备

在20～25℃下，取4份甘草素，0.5份熊果酸混合，加入30份二甲基亚砜、10份甲醇和5份环己酮搅拌使其充分溶解，然后在上述混合物中依次加入10份600#、木醋液补足100份，以搅拌速度80～120转/分钟搅拌30～60分钟，即可制得5%甘草素·熊果酸可溶性液剂。

实施例3：2.5%甘草素·熊果酸（2:0.5）微乳剂的制备

在20～25℃下，取2份甘草素，0.5份熊果酸混合，加入30份甲醇搅拌使其充分溶解，然后在上述混合物中依次加入15份OP-10、余量为水，以搅拌速度80～120转/分钟搅拌60～90分钟，即可制得2.5%甘草素·熊果酸微乳剂。

实施例4：10%甘草素·熊果酸（8:2）可溶性液剂的制备

在20℃～25℃下，取8份甘草素，2份熊果酸混合，加入20份N-甲基吡咯烷酮、10份二甲基甲酰胺搅拌使其充分溶解，然后在上述混合物中依次加入2份500#、5份700#、5份NP-10、0.2份油溶性氮酮、余量为二甲基亚砜，以搅拌速度80～120转/分钟搅拌30～60分钟，即可制得10%甘草素·熊果酸可溶性液剂。

实施例5：4种甘草素熊果酸组合物制剂对TMV的室内生物测定

（1）抑制侵染作用测定

采用半叶枯斑法测定，选取生长旺盛、长势一致的5～6叶期心叶烟（Nicotiana glutinosa）为枯斑寄主。以叶脉为界，左半叶接种药液与病毒等体积混合液，右半叶接种蒸馏水与病毒等体积混合液作对照，病毒接种浓度为10μg/mL，钝化时间为5min，接种后立即用清水冲洗接种叶片表面。每处理接种4片叶子，试验重复3次，3d后统计枯斑数，计算抑制率。

抑制率（%）=（对照枯斑数-处理枯斑数）/对照枯斑数×100

测定结果见表1。

表1：4种甘草素·熊果酸组合物制剂对TMV侵染的抑制效果

供试药剂	钝化时间/（min）	稀释倍数/倍	抑制率/%
				5%甘草素·熊果酸乳油	5	200	77.26
4.5%甘草素·熊果酸可溶性液	5	200	75.96
				2.5%甘草素·熊果酸微乳剂	5	200	64.58
10%甘草素·熊果酸可溶性液	5	200	80.69
				20%吗啉胍·乙铜可湿性粉剂	5	200	54.32

（3）抑制TMV增殖作用测定

采用漂浮叶圆片法测定其在烟草植株内对TMV增殖的抑制活性。将10μg/mL的TMV病毒摩擦接种在健康的普通烟上，6h后用打孔器从接种TMV的烟叶上打取12mm的叶圆片，然后将接种面朝上漂浮于盛有不同浓度药液的培养皿中，以漂浮在清水中接种TMV病毒的叶圆片为阳性对照（CK+），以未接种TMV病毒的健康叶圆片作为阴性对照（CK-），48h后用缓冲液提取叶圆片，离心后，采用间接ELISA法测定上清液在405nm处的OD值。

表2：4种甘草素·熊果酸组合物制剂对TMV增殖的抑制效果

由表1、2可知，上述实施例制备的3种甘草素·熊果酸组合物制剂，对TMV初侵染、增殖抑制效果良好，明显高于对照药剂吗啉胍.乙铜。

实施例6：4种甘草素·熊果酸组合物制剂对TMV的盆栽试验

（1）对普通烟的保护作用

选择5-6叶期，长势一致、健壮的普通烟（Nicotiana tabacum）供试。试验设预防组（施药3次后接种TMV）和对照组（只接种不施药）2组。用上述3种甘草素·熊果酸组合物制剂200倍液喷雾，对照药剂吗啉胍·乙铜500倍液喷雾处理普通烟，每5d施药一次，共施药三次。最后一次施药24h后接种TMV，接种浓度为1：20（W/V）。接种后14d、21d检查发病情况，统计病情指数及防治效果。每处理60株烟苗，试验重复3次。计算防效。

发病率＝（各处理发病株数／处理总株数）×100%

病情指数＝∑（病级数×病株数）／（最高病级×各处理总株数）×100

病情指数增长率＝（喷药后病指—喷药前病指）／喷药前病指×100%

防治效果＝（对照病指—处理病指）／对照病指×100%

保护作用测定结果如表4所示。

表3：4种甘草素·熊果酸组合物制剂对普通烟的保护作用测定结果

（2）对普通烟的治疗作用

选择5-6叶期，长势一致、健壮的普通烟（Nicotiana tabacum）供试。试验设治疗组（接种TMV后施药3次）和对照组（只接种不施药）2组。接种毒源TMV，接种浓度为1：20（W/V），接种后每5d施药一次，共施药三次。药剂为上述3种甘草素·熊果酸组合物制剂200倍液喷雾，对照药剂吗啉胍·乙铜500倍液喷雾。分别于最后一次施药的14d、21d时检查发病情况，统计病情指数及防治效果。每处理60株烟苗，试验重复3次。计算防效。治疗作用测定结果如表5所示。

表4：4种甘草素·熊果酸组合物制剂抗病毒剂对普通烟的治疗作用测定结果

盆栽试验结果表明（表4、表5），上述实施例制备的4种甘草素·熊果酸组合物制剂，对烟草花叶病毒病表现出良好的预防和治疗效果，其保护和治疗效果均好于对照药剂，其中，10%甘草素·熊果酸可溶性液相对防效高于对照药剂10%左右。

实施例7：3种甘草素·熊果酸组合物制剂对TMV的田间小区药效试验

小区试验为随机排列，重复3次，小区面积视实际情况而定，但是面积不能小于30㎡，试验地选择要求肥力均匀、作物种植和管理水平一致，病情发生及危害程度比较均匀；各处理间及试验区周围要设保护行。用上述3种甘草素·熊果酸组合物制剂100、200、400倍液进行叶面常量喷雾，以20%的吗啉胍·乙铜可湿性粉剂500倍液为对照药剂进行叶面常量喷雾，并设清水对照；所有供试药剂必须进行二次稀释。自发病初期开始喷药，后每隔7d喷1次，共3次。第一次喷药前及最后一次喷药后的10d调查发病率和统计病情指数，计算防效，结果见表6。

表5：4种甘草素·熊果酸组合物制剂抗病毒剂防治烟草病毒病田间小区药效试验

注：表中数据为3次重复之平均值；“防效”栏中，同数列标后不同字母是指在α=0.05水平上呈显著差异。

从上表可知，上述实施例制备的4种甘草素·熊果酸组合物制剂，对烟草花叶病毒具有良好的防治效果，在稀释100、200、400倍的情况下明显优于药剂对照病毒A，防效差异显著。

Claims (6)

1.一种含甘草素和熊果酸的抗植物病毒组合物，其特征在于，制得的抗植物病毒组合物的有效成分为甘草素和熊果酸，并加入助剂加工而成，制剂形态是乳油、微乳剂、可溶性液剂或水剂，其中：

所述的乳油由以下原料按重量百分比配制：甘草素：1%～10%，熊果酸：0.5～5%，乳化剂：5%～20%，增效剂：1%～10%，溶剂补至100%；

所述的微乳剂由以下原料按重量百分比配制：甘草素：1%～10%，熊果酸：0.5～5%，乳化剂：10%～40%，增效剂：1%～10%，防冻剂：1%～5%，助溶剂：5%～40%，消泡剂：0.02%，水补至100%；

所述的可溶性液剂由以下原料按重量百分比配制：甘草素：0.5%～10%，熊果酸：0.1～5%，乳化剂：10%～40%，增效剂：1%～10%，溶剂补至100%；

所述的水剂由以下原料按重量百分比配制：甘草素：0.5%～10%，熊果酸：0.1～5%，乳化剂：10%～40%，增效剂：1%～10%，助溶剂：5～40%，消泡剂：0.02%，水补至100%。

2.如权利要求1所述的含甘草素和熊果酸的抗植物病毒组合物，其特征在于：

所述乳油中的乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#等中一种或几种的混合物；

所述乳油中的溶剂为二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮中的一种或几种的混合物；

所述乳油中的增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物。

3.如权利要求1所述的含甘草素和熊果酸的抗植物病毒组合物，其特征在于：

所述微乳剂中的乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#等中一种或几种的混合物；

所述微乳剂中的助溶剂是二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮、木醋液中的一种或几种的混合物；

所述微乳剂中的溶剂为水；

所述微乳剂中的防冻剂为乙二醇、丙二醇、尿素、丙三醇中的一种或几种的混合物；所述增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物；

所述微乳剂中的消泡剂为有机硅消泡剂。

4.如权利要求1所述的含甘草素和熊果酸的抗植物病毒组合物，其特征在于：

所述可溶性液剂中的乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#等中一种或几种的混合物；

所述可溶性液剂中的溶剂是二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮中、木醋液、乙酸、水中的一种或几种的混合物；

所述可溶性液剂中的增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物。

5.如权利要求1所述的含甘草素和熊果酸的抗植物病毒组合物，其特征在于：

所述水剂中的乳化剂为农乳500#、600#、1601#、1602#、33#、OP-10、NP-10、OP-15、700#中一种或几种的混合物；

所述水剂中的助溶剂是二甲基亚砜、醋酸丁酯、柠檬酸、乙醇、环己酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮中、木醋液、乙酸中的一种或几种的混合物；

所述水剂中的增效剂为油溶性氮酮、脂肪醇聚氧乙烯醚、快T中的一种或几种的混合物；

所述水剂中的消泡剂为有机硅消泡剂；

所述水剂中的溶剂为水。

6.权利要求1～5其中之一所述的含甘草素和熊果酸的抗植物病毒组合物用于制备防治烟草花叶病毒病农药的应用。