CN103119061A

CN103119061A - 治疗注意力不足过动症的方法

Info

Publication number: CN103119061A
Application number: CN2011800455232A
Authority: CN
Inventors: 奥列格·伊里奇·爱泼斯坦
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-07-21
Filing date: 2011-07-15
Publication date: 2013-05-22
Also published as: EA029199B1; MX2013000807A; US8987206B2; EP2596019A2; EA201300139A1; GB2496343B; FR2962911A1; AU2011281244A1; NZ606970A; CA2805963A1; GB2496343A; US20120321672A1; WO2012010970A2; GB201302928D0; DE112011102411T5; UA112755C2; JP2013535444A; ITTO20110632A1; WO2012010970A3

Abstract

本发明涉及通过给予活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体以及活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体，对注意力不足过动症（ADHD）以及注意力不足症（ADD）进行治疗的方法。

Description

治疗注意力不足过动症的方法

技术领域

本发明涉及医药领域，可用于注意力不足过动症（attention deficithyperactivity disorder）的治疗。

背景技术

注意不足过动症（ADHD）为儿童期最常见的神经行为性疾病之一，并在4-10%的儿童中观察到了该疾病。在被诊断患有ADHD的儿童中，大约50%具有持续至成年的症状。情绪躁动、冲动行为和想法、注意力缺乏、不能专注和集中、说话过度以及心不在焉（absent-mindedness）等是ADHD的一些症状。

已知含有抗脑特异性S-100蛋白抗血清的亲神经性药物（RU2156621C1，A61K39/395，9/27/2000）。然而，对于治疗包括注意力不足过动症在内的神经行为性疾病而言，这些药剂并未提供足够的治疗效力。因此，对在注意力不足过动症治疗中具有期望治疗效力的新药产品存在持续需求。

本专利申请的发明人Dr.Oleg I.Epshtein已发现了经顺势疗法技术强化的极度稀释形式（或极低形式）抗体（活性强化形式）的治疗效果。美国专利号7,582,294公开了通过给予抗前列腺特异性抗原（PSA）的、顺势疗法活性形式的抗体来治疗良性前列腺增生症（Benign ProstaticHyperplasia）或前列腺炎（prostatitis）的药剂。美国专利号7,700,096公开了顺势疗法强化形式的抗内皮NO合酶抗体。

S-100蛋白是主要在脑灰质中（主要在神经胶质细胞和施旺细胞中）发现的细胞质酸性钙结合蛋白。所述蛋白质以由两种免疫学上不同的亚基（α和β）组成的多种均二聚体或异二聚体异构体存在。已经提出将S-100蛋白用作诊断的辅助，并用于对脑病变和由于脑损伤（如中风）而造成的神经伤害进行评价。Yardan等，Usefulness of S100B Protein inNeurological Disorders，J Pak Med Assoc Vol.61，No.3，2011年3月，以引用的方式将其内容并入本文。

已证明极低剂量的抗S-100蛋白抗体具有抗焦虑（anxiolytic）、抗衰弱（anti-asthenic）、抗攻击（anti-aggressive）、应激保护（stress-protective）、抗缺氧（anti-hypoxic）、抗局部缺血（anti-ischemic）、神经保护（neuroprotective）和促智（nootropic）活性。参见Castagne V.等，Antibodiesto S100proteins have anxiolytic-like activity at ultra-low doses in the adultrat，J Pharm Pharmacol.，2008，60(3):309-16；Epstein O.I.，Antibodies tocalcium-binding S100B protein block the conditioning of long-termsensitization in the terrestrial snail，Pharmacol Biochem Behav.，2009，94(1):37-42；Voronina T.A.等，第8章，Antibodies to S-100protein inanxiety-depressive disorders in experimental and clinical conditions，In“Animal models in biological psychiatry”，Kalueff A.V.N-Y著，“NovaScience Publishers，Inc.”，2006，第137-152页，以引用的方式将上述文献内容全部并入本文。

一氧化氮（NO）是已显示出在不同生物学过程的信号转导中发挥作用的气态分子。内皮衍生的NO是调节血管张力（vascular tone）的关键分子，其与血管病的联系早已被认视到。NO对许多已知参与动脉粥样硬化斑块（atherosclerotic plaque）形成的过程起抑制作用，所述过程包括单核细胞粘着、血小板凝聚以及血管平滑肌细胞增殖。内皮NO的另一重要作用是保护血管壁免受由其自身代谢产物及脂类和脂蛋白的氧化产物诱导的氧化应激（oxidative stress）。内皮功能障碍在动脉粥样硬化的很早阶段发生。因此，局部NO利用度不足可能是促进人类动脉粥样化形成的最终共路（final common pathway）。除了在血管内皮中的作用以外，NO利用度还显示出了对脂蛋白代谢的调节作用。NO代谢产物的血浆浓度与血浆总胆固醇水平和低密度脂蛋白（LDL）胆固醇水平的负相关性已有报道，而高密度脂蛋白（HDL）在高胆固醇血症患者中改善血管功能。NO缺失对疾病发展具有相当重要的影响。糖尿病与主要由动脉粥样硬化疾病发展加快导致的发病率和死亡率上升有关。并且，报告显示糖尿病患者的肺功能削弱。有人提出胰岛素抵抗可导致气道炎症。Habib等，Nitric Oxide Measurement From Blood To Lungs，Is There A Link?Pak JPhysiol2007；3（1）。

一氧化氮由内皮通过一氧化氮合酶（NO合酶）从L-精氨酸合成的。NO合酶以不同亚型出现，包括组成型（cNOS）和诱导型（iNOS）。组成型NO合酶存在于正常内皮细胞、神经元和其它某些组织中。

发明内容

本发明致力于针对提高对注意力不足过动症（ADHD）以及注意力不足症（ADD）的治疗效力。

在一个方面，本发明提供了用于对注意力不足过动症进行治疗的复合药物组合物，所述药物组合物包含活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体以及作为附加强化组分（additional strengthening component）的活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体。

在另一方面，本发明提供了用于对治疗注意力不足症进行治疗的复合药物组合物，所述药物组合物包含活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体以及作为附加强化组分的活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体。

在一个变型中，本发明提供了复合药物组合物，所述复合药物组合物包含活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体、以及活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体，其中，所述抗体针对的是整个S-100蛋白或其片段。

在一个变型中，本发明提供了复合药物组合物，所述复合药物组合物包含活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体、以及活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体，其中所述抗体针对的是整个NO合酶或其片段。

在一个变型中，本发明这一方面的复合药物组合物包含活性强化形式的抗S-100蛋白抗体，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体处于浸渍至固态载体上的（C12、C30及C50）或（C12、C30及C200）顺势疗法稀释液的混合物形式。活性强化形式的抗NO合酶抗体处于可随后浸渍至固态载体上的（C12、C30及C50）或（C12、C30及C200）顺势疗法稀释液的混合物形式。

在一个变型中，本发明这一方面的复合药物组合物包含活性强化形式的抗NO合酶抗体，其中，所述活性强化形式的抗NO合酶抗体处于浸渍至固态载体上的（C12、C30及C50）或（C12、C30及C200）顺势疗法稀释液的混合物形式。活性强化形式的抗S-100蛋白抗体处于可随后浸渍至固态载体上的（C12、C30及C50）或（C12、C30及C200）顺势疗法稀释液的混合物形式。

优选地，活性强化形式的抗S-100蛋白抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体，更优选为多克隆抗体。在本发明这一方面的一个变型中，活性强化形式的抗S-100蛋白抗体通过连续的百倍稀释（successivecentesimal dilutions）、且每次稀释时均伴以振荡而制备。特别在考虑之列的是竖直振荡（vertical shaking）。

优选地，活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体，更优选为多克隆抗体。在本发明这一方面的一个变型中，活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体通过连续的百倍稀释、且每次稀释时均伴以振荡而制备。特别在考虑之列的是竖直振荡。

在另一方面，本发明提供了对注意力不足过动症进行治疗的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予复合药物组合物，所述复合药物组合物包含a）活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体和b）活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体。

在本发明的一个变型中，提供了如下方案：给予1-2单位剂型的活性强化形式的抗S-100蛋白抗体以及1-2单位剂型的活性强化形式的抗NO合酶抗体；各剂型以每日1-4次进行给予。优选所述1-2单位剂型的各活性强化形式抗体以每日2次进行给予。

附图说明

图1示出了与基线值相比，在治疗2周、4周、6周、8周和12周时ADHD症状迹象减弱（ADHDRS-IV-家庭版量表的总得分）。

具体实施方式

参考所附的权利要求书对本发明进行限定。考虑到权利要求书，下述术语汇编提供了有关定义。

本文所使用的术语“抗体”意味着特异性地结合至另一分子的特定空间和极性结构、并因此被定义为与另一分子的特定空间和极性结构互补的免疫球蛋白。权利要求书中所列举的抗体可包括完整的免疫球蛋白或其片段，可为天然抗体、多克隆抗体或单克隆抗体，并可包括多个类及同种型，例如IgA、IgD、IgE、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3、IgM等。免疫球蛋白的片段可包括Fab、Fv和F(ab')₂以及Fab'等。单数“抗体（antibody）”包括复数“抗体（antibodies）”。

相对于本文所列举的抗体，术语“活性强化形式”或“强化形式”分别用于表示任意的抗体初始溶液的顺势疗法强化产物。“顺势疗法强化”表示利用顺势疗法的方法对有关物质的初始溶液赋予顺势疗法效力（potency）。尽管不限于此，但是“顺势疗法强化”可包括例如结合外部处理、尤其是竖直（机械）振荡的重复的连续稀释。换句话说，根据顺势疗法技术，对抗体的初始溶液进行连续的重复稀释并对每次获得的溶液进行多次竖直振荡。抗体处于溶剂（优选水或水-乙醇混合物）中的初始溶液的优选浓度范围为约0.5mg/ml至约5.0mg/ml。制备各组分（即抗体溶液）的优选过程为：使用抗体初级基质溶液（primary matrix solution）（原始酊剂，mother tincture）分别被稀释100¹²、100³⁰和100²⁰⁰倍的3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液（C12、C30和C200）；或者使用抗体初级基质溶液分别被稀释100¹²、100³⁰和100⁵⁰倍的3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液（C12、C30和C50）。在美国专利号7,572,441和7,582,294中描述了顺势疗法强化的实例，以引用的方式将其内容整体并入本文并用于所述目的。同时，术语“活性强化形式”用在权利要求书中，术语“极低剂量”用在实施例中。术语“极低剂量”在通过研究和使用顺势疗法稀释和强化形式的物质而产生的领域中成为行业术语。术语“极低剂量”意味着完全支持并与权利要求书中所使用的术语“活性强化”形式基本上同义。

换句话说，当存在三个因素时，抗体处于“活性强化”或“强化”形式。首先，“活性强化”形式的抗体为顺势疗法领域广泛接受的制备方法的产品。其次，“活性强化”形式的抗体必须具备通过现代药物学广泛接受的方法确定的生物活性。第三，“活性强化”形式的抗体所表现出的生物活性不能由顺势疗法方法终产物中的分子形式抗体的存在加以解释。

例如，活性强化形式的抗体可通过使处于分子形式的初始独立抗体经受伴以外部作用（如机械振荡）的连续多重稀释而制备。浓度降低过程中的外部处理还可通过例如暴露至超声、电磁或其它物理因素来完成。V.Schwabe，“Homeopathic medicines”，M.，1967，美国专利号7,229,648和4,311,897（以引用的方式将其内容整体并入本文并用于所述目的）描述了顺势疗法领域中广泛接受的顺势疗法强化方法。这一过程使得初始分子形式抗体的分子浓度均匀降低。重复这一过程直至获得期望的顺势疗法效力。对于单独的抗体，可通过将中间稀释液在期望的药理学模型中进行生物测试来确定所需的顺势疗法效力。尽管不限于此，但是“顺势疗法强化”可包括例如与外部处理、尤其是（机械）振荡相结合的重复的连续稀释。换句话说，根据顺势疗法技术，对抗体的初始溶液（initialsolution）进行连续的重复稀释并对每次获得的溶液进行多次竖直振荡。抗体处于溶剂（优选水或水-乙醇混合物）中的初始溶液的优选浓度范围为约0.5mg/ml至约5.0mg/ml。制备各组分（即抗体溶液）的优选过程为：使用抗体初级基质溶液（原始酊剂）分别被稀释100¹²、100³⁰和100²⁰⁰倍的3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C200；或者使用抗体初级基质溶液（原始酊剂）分别被稀释100¹²、100³⁰和100⁵⁰倍的3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C50。例如在美国专利号7,229,648和4,311,897中，也提供了如何获得期望效力的实例，以引用方式将其并入本文用于所述目的。在下文将更加详细地描述适用于本文所述的“活性强化”形式抗体的过程。

关于用顺势疗法对人类受试者进行治疗已有许多争议。虽然本发明依靠已接受的顺势疗法方法来获得“活性强化”形式的抗体，但是其并不仅仅依赖于在人类受试者中进行顺势疗法来证明其活性。本申请的发明人出乎预料地发现、并在已接受的药理学模型中充分证明，由起始分子形式的抗体进行连续多次稀释而最终得到的溶液具有明确的活性，且与痕量分子形式抗体在目标稀释液中的存在无关。将本文所提供的“活性强化”形式的抗体在广泛接受的药理学活性模型中（在适当的体外实验中或于合适的动物模型中在体内）测试其生物活性。下文进一步提供的实验提供了在此类模型中的生物活性的证据。人类临床研究也提供了如下证据：在动物模型中观察到的活性被很好地转换至人类治疗。人类研究还提供了如下证据：本文所述的“活性强化”形式可用于对在医学科学中作为病理症状而广泛接受的具体人类疾病或紊乱进行治疗。

同样，所要求保护的“活性强化”形式的抗体仅涵盖溶液或固体制剂，所述溶液或固体制剂的生物活性不能由初始、起始溶液（startingsolution）中余留的分子形式抗体的存在进行解释。换句话说，虽然“活性强化”形式的抗体可包含痕量的初始分子形式抗体也在考虑之列，但是由于连续稀释后余留的分子形式抗体的浓度极低，因此本领域技术人员不能以任何程度的合理性将在已接受的药理学模型中观察到的生物活性归因于余留的分子形式抗体。虽然本发明并不受任何具体理论的限制，但是本发明的“活性强化”形式抗体的生物活性并不归因于初始分子形式抗体。优选所述“活性强化”形式抗体处于液体形式或固体形式，其中，初始分子形式抗体的浓度低于所接受的分析技术（如毛细管电泳和高效液相色谱）的检测限。特别优选“活性强化”形式的抗体处于液体形式或固体形式，其中，初始分子形式抗体的浓度低于阿伏伽德罗常数。在分子形式治疗物质的药物学中，通常制作剂量-响应曲线，在该曲线中，以药理学响应水平对给予受试者或在体外进行测试的活性药物的浓度作图。产生任何可检测响应的药物最低水平被称为阈剂量（threshold dose）。特别在考虑之列并优选的是，“活性强化”形式的抗体以低于所给定生物学模型中的分子形式抗体的阈剂量的浓度包含分子抗体（如果有的话）。

ADHD评定量表-IV是指用于诊断ADHD并对因治疗而得到的改善进行测量的工具（DuPaul G.等，1998）。该量表包含18个项目，使用4分Likert型严重程度量表（0=无，1=轻度，2=中度，以及3=重度）对症状进行评定。该量表基于用于ADHD的DSM-IV（精神紊乱的诊断和统计学参考）标准。该量表含有9项对缺乏注意力症状进行评价的项目，以及9项过动和冲动症状进行评价的项目。样例评定问题包括“逃避需要持续的精神努力的任务（如学校作业和家庭作业）”以及“讲话过度”。ADHS评定量表已被开发并标准化作为用于儿童的评定量表。然而，可对临床医师-评定人员进行训练以成功地将这一量表用于成年人。根据DSM-IV，ADHD可分为3个亚型：缺乏注意力主导型、过动-冲动主导型、以及混合型；对于混合型，患者必须完全满足其它两种亚型的标准。缺乏注意力的症状包括无法密切注意细节、难以保持注意力、对其讲话时不听、无法始终坚持指示或完成任务、缺乏组织能力、不愿参加需要持续精神努力的活动、经常遗失物品、容易分心以及经常健忘。患者必须具有这9项症状中的至少6项，才会被认为具有缺乏注意力亚型。ADHD评定量表可通过Guilford出版社得到。

术语“CGI-ADHD-严重程度问卷”是指在对患有精神紊乱的患者进行的治疗研究中常用于测量症状严重程度、治疗应答以及治疗效力的临床总体印象评定量表（Clinical Global Impression rating scales）（Guy，W.，1976）。临床总体印象严重程度量表为7分制量表，要求临床医师在进行评价时，根据其过去对具有相同诊断患者的经验对患者疾病的严重程度进行评定。考虑到总的临床经验，在进行评定时，将患者精神疾病的严重程度评价为：1=正常，完全无病；2，心理疾病的临界线；3，轻度患病；4，中度患病；5，明显患病；6，重度患病；或7，极重度患病。

在一个方面，本发明提供了对注意力不足过动症进行治疗的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予复合药物组合物，所述复合药物组合物包含a）活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体和b）活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体。如上文所述，所述复合物的各单独组分由于其各自的医学用途而为大家所熟知。然而，本申请的发明人惊奇地发现，给予所述复合物明显可用来对注意力不足过动症进行治疗。

优选地，为了治疗目的，将所述复合药物组合物每日给予1-4次，每次给予包含1-2单位剂型的复合物。

用于治疗注意力不足过动症的目的的本申请药物组合物包含主要以1:1的体积比计的活性组分。

出于对注意力不足过动症进行治疗的目的，所述药物组合物的组分可单独给予。然而，优选同时给予1种溶液和/或固体剂型（片剂）形式的复合组分，所述剂型形式包含活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体，以及相应的活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体。

此外，在对注意力不足过动症进行治疗期间，单独应用与同时应用（摄入至生物体内）所声明的药物组合物都是可能的，所述药物组合物处于两种单独制备的药物的形式，所述两种单独制备的药物均处于溶液和固体剂型（片剂）形式、各自包含活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体或活性强化形式的抗S-100蛋白抗体。

所述医药产品主要按如下所述进行制备。

根据本发明的复合药物组合物可处于液态或固态形式。药物组合物中所含的各活性强化形式抗体由初始分子形式的抗体通过顺势疗法领域所接受的方法制备。起始抗体可为根据已知方法制备的单克隆抗体或多克隆抗体，所述已知方法例如Immunotechniques，G.Frimel，M.，“Meditsyna”，1987，第9-33页；“Hum.Antibodies.Monoclonal andrecombinant antibodies，30years after”，Laffly E.，Sodoyer R.著，2005，Vol.14.，N1-2.，第33-55页中所述，以引用的方式将其内容并入本文。

单克隆抗体可通过如杂交瘤技术获得。所述方法的初始步骤包括基于已在多克隆抗血清制备过程中开发出的原则进行免疫。工作的进一步步骤包括制备出产生具有相同特异性的抗体克隆的杂交细胞。其各自的分离使用与多克隆抗血清制备情况中相同的方法进行。

多克隆抗体可通过动物的主动免疫获得。为了这一目的，例如使合适的动物（如兔）接受适当抗原（脑特异性S-100蛋白和内皮NO合酶）的一系列注射。动物的免疫系统产生相应的抗体，以已知方法从动物中进行收集。这一过程使得能够制备富含单特异性抗体的血清。

如果需要的话，包含抗体的血清例如可通过使用亲和色谱、盐沉淀分级分离或离子交换色谱进行纯化。可将所得到的经纯化的、富含抗体的血清用作制备活性强化形式抗体的起始材料。所得到的处于溶剂（优选水或水-乙醇混合物）中的初始抗体溶液的优选浓度范围为约0.5mg/ml至约5.0mg/ml。

制备各组分的优选过程为：使用抗体初级基质溶液分别被稀释100¹²、100³⁰和100²⁰⁰倍的3种水-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C200。为制备固体剂型，将固态载体通过顺势疗法方法所获得的期望稀释液进行处理。为获得本发明复合物的固体单位剂型，用各稀释液对载体物质进行浸渍。为制备期望的复合剂型，两种浸渍顺序都是适合的。

在优选的实施方式中，用于制备包含本发明所述复合物的活性强化形式的起始材料是抗脑特异性S-100蛋白多克隆抗体和抗内皮NO合酶多克隆抗体，将浓度为0.5mg/ml至5.0mg/ml的初始（基质）溶液用于进行后续的活性强化形式的制备。

为制备所述药物组合物，优选使用抗脑特异性S-100蛋白多克隆抗体和抗内皮NO合酶多克隆抗体。

将佐剂和具有以下序列的牛内皮NO合酶的整个分子用作免疫原（抗原）来对兔进行免疫而获得抗内皮NO合酶多克隆抗体：

SEQ ID NO：1

Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Gly Gln Glu Pro Gly Pro Pro Cys

1 5 10 15

Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Cys Gly Lys Gln Gly

16 20 25 30

Pro Ala Ser Pro Ala Pro Glu Pro Ser Arg Ala Pro Ala Pro Ala

31 35 40 45

Thr Pro His Ala Pro Asp His Ser Pro Ala Pro Asn Ser Pro Thr

45 50 55 60

Leu Thr Arg Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Val Lys Asn

61 65 70 75

Trp Glu Leu GLy ser Ile Thr Tyr Asp Thr Leu Cys Ala Gln Ser

76 80 85 90

Gln Gln Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Cys Cys Leu GLys er Leu

91 95 100 105

Val Leu Pro Arg Lys Leu Gln Thr Arg Pro Ser Pro Gly Pro Pro

106 110 115 120

Pro Ala Glu Gln Leu Leu Ser Gln Ala Arg Asp Phe Ile Asn Gln

121 125 130 135

Tyr Tyr Ser Ser Ile Lys Arg Ser GLys er Gln Ala His Glu Glu

136 140 145 150

Arg Leu Gln Glu Val Glu Ala Glu Val Ala Ser Thr Gly Thr Tyr

151 155 160 165

His Leu Arg Glu Ser Glu Leu Val Phe Gly Ala Lys Gln Ala Trp

166 170 175 180

Arg Asn Ala Pro Arg Cys Val Gly Arg Ile Gln Trp Gly Lys Leu

181 185 190 195

Gln Val Phe Asp Ala Arg Asp Cys Ser Ser Ala Gln Glu Met Phe

196 200 205 210

Thr Tyr Ile Cys Asn His Ile Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly Asn

211 215 220 225

Leu Arg Ser Ala Ile Thr Val Phe Pro Gln Arg Ala Pro Gly Arg

226 230 235 240

Gly Asp Phe Arg Ile Trp Asn Ser Gln Leu Val Arg Tyr Ala Gly

241 245 250 255

Tyr Arg Gln Gln Asp GLy ser Val Arg Gly Asp Pro Ala Asn Val

256 260 265 270

Glu Ile Thr Glu Leu Cys Ile Gln his Gly Trp thr Pro Gly Asn

271 275 280 285

Gly Arg Phe Asp Val Leu Pro Leu Leu Leu Gln Ala Pro Asp Glu

286 290 295 300

Ala Pro Glu Leu Phe Val Leu Pro Pro Glu Leu Val Leu Glu Val

301 305 310 315

Pro Leu Glu His Pro Thr Leu Glu Trp Phe Ala Ala Leu Gil Leu

316 320 325 330

Arg Trp Tyr Ala Leu Pro Ala Val Ser Asn Met Leu Leu Glu Ile

331 335 340 345

Gly Gly Leu Glu Phe Ser Ala Ala Pro Phe Ser Gly Trp Tyr Met

346 350 355 360

Ser Thr Glu Ile Gly Thr Arg Asn Leu Cys Asp Pro His Arg Tyr

361 365 370 375

Asn Ile Leu Glu Asp Val Ala Val Cys Met Asp Leu Asp Thr Arg

376 380 385 390

Thr Thr Ser Ser Leu Trp Lys Asp Lys Ala Ala Val Glu Ile Asn

391 395 400 405

Leu Ala Val Leu His Ser Phe gln Leu Ala Lys Val Thr Ile Val

406 410 415 420

Asp His His Ala Ala Thr Val Ser Phe Met Lys His Leu Asp Asn

421 425 430 435

GLu Gln Lys Ala Arg Gly Gly Cys Pro Ala Asp Trp Ala Trp Ile

436 440 445 450

Val Pro Pro Ile Ser GLys er Leu Thr Pro Val Phe His Gln Clu

451 455 460 465

Met Val Asn Tyr Ile Leu Ser Pro Ala Phe Arq Tyr Gln Pro Asp

466 470 475 480

Pro Trp Lys CLy Ser Ala Thr Lys Gly Ala Gly Ile Thr Arg Lys

481 485 490 495

Lys Thr Phe Lys Glu Val A1a Asn Ala Val Lys Ile Ser Ala Ser

496 500 505 510

Leu Met Gly Thr Leu Met Ala Lys Arg Val Lys Ala Thr Ile Leu

511 515 510 525

Tyr Ala Ser Glu Thr Gly Arg Ala Gln Ser Tyr Ala Gln Gln Leu

526 530 535 540

Gly Arg Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Val Leu Cys Met

541 545 550 555

Asp Glu Tyr Asp Val Val Ser Leu Glu His Glu Ala Leu Val Leu

556 560 565 570

Val Val Thr Ser Thr Phe Gly Asn Gly Asp Pro Pro Glu Asn Cly

571 575 580 585

Glu Ser Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Met Ser GLy Pro Tyr Asn

586 590 595 600

Ser Ser Pro Arg Pro Glu Gln His Lys Ser Tyr Lys Ile Arg Phe

601 605 610 615

Asn Ser Val Ser Cys Ser Asp Pro Leu Val Ser Ser Trp Arg Arg

616 620 625 630

Lys Arg Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly

631 635 64O 645

Thr Leu Arg Phe Cys Val Phe Gly Leu Gly Ser Arg Ala Tyr pro

646 650 655 660

His Phe Cys Ala Phe Ala Arg Ala Val Asp Thr Arq Leu Glu Glu

661 665 670 675

Leu Cly Gly GLu Arg Leu Leu Gln Leu Gly Gln Gly Asp Glu Leu

676 680 685 690

Cys Gly Gln Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Lys Ala Ala phe

691 695 700 705

Gln Ala Ser Cys Glu Thr Phe Cys Val Gly Glu Glu Ala Lvs Ala

706 710 715 720

Ala Ala Gln Asp Ile Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gln

72l 725 730 735

Arg Tyr Arg Leu Ser Thr Gln Ala Glu Cly Leu Cln Leu Leu Pro

736 740 745 150

Gly Leu Ile His Val His Arg Arg Lys Met Phe Gln Ala Thr Val

751 755 760 765

Leu Ser Val Glu Asn Leu Gln Ser Ser Lsy Ser Thr Arg Ala Thr

766 770 775 780

Ile Leu Val Arg Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Gly Leu Gln Tyr

781 785 790 795

Gln Pro Gly Asp His Ile Gly Ile Cys Pro Pro Asn Arg Pro Gly

796 800 805 810

Leu Val Glu Ala Leu Leu Ser Arg Val Glu Asp Pro Pro Pro Pro

811 815 820 825

Thr Glu Ser Val Ala Val Glu Gln Leu Glu Lys GLys er Pro Gly

826 830 835 840

Gly Pro Pro Pro Ser Trp Val Arg Asp Pro Arg Leu Pro Pro Cys

841 845 850 855

Thr Leu Arg Gln Ala Leu Thr Phe Phe Leu Asp Ile Thr Ser Pro

856 860 865 870

Pro Ser Pro Arg Leu Leu Arg Leu Leu Ser Thr Leu Ala Glu Glu

871 875 880 885

Pro Ser Glu Gln Gln Glu Leu Glu Thr Leu Ser Gln Asp Pro Arg

886 890 895 900

Arg Tyr Glu Glu Trp Lys Trp Phe Arg Cys Pro Thr Leu Leu Glu

901 905 910 915

Val Leu Glu Gln Phe Pro Ser Val Ala Leu Pro Ala Pro Leu Leu

916 920 925 930

Leu Thr Gln Leu Pro Leu Leu Gln Pro Arg Tyr Tyr Ser Val Ser

931 935 940 945

Ser Ala Pro Asn Ala His Pro Gly Glu Val His Leu Thr Val Ala

946 950 955 960

Val Leu Ala Tyr Arg Thr Gln Asp Gly Leu Gly Pro Leu His Tyr

961 965 970 975

Gly Val Cys Ser Thr Trp Leu Ser Gln Leu Lys Thr Gly Asp Pro

976 980 985 990

Val Pro Cys Phe Ile Arg Gly Ala Pro Ser Phe Arg Leu Pro Pro

991 995 1000 1005

Asp Pro Tyr Val Pro Cys Ile Leu Val Gly Pro Gly Thr Gly Ile

1006 1010 1015 1020

Ala Pro Phe Arg Gly Phe Trp Gln Glu Arg Leu His Asp Ile Glu

1021 1025 1030 1035

Ser Lys Gly Leu Gln Pro Ala Pro Met Thr Leu Val Phe Gly Cys

1036 1140 1145 1050

Arg Cys Ser Gln Leu Asp His Leu Tyr Arg Asp Glu Val Gln Asp

1051 1155 1160 1065

Ala Gln Glu Arg Gly Val Phe Gly Arg Val Leu Thr Ala Phe Ser

1066 1170 1175 1080

Arg Glu Pro Asp Ser Pro Lys Thr Tyr Val Gln Asp Ile Leu Arg

1081 1185 1190 1095

Thr Glu Leu Ala Ala Glu Val His Arg Val Leu Cys Leu Glu Arg

1096 1100 1105 1110

G1y His Met Phe Val Cys Gly Asp Val Thr Met Ala Thr Ser Val

1111 1115 1120 1125

Leu Gln Thr Val Gln Arg Ile Leu Ala Thr Glu Gly Asp Met Glu

1126 1130 1135 1140

Leu Asp Glu Ala Gly Asp Val Ile Gly Val Leu Arg Asp Gln Gln

1141 1145 1150 1155

Arg Tyr His Glu Asp Ile Phe Gly Leu Thr Leu Arg Thr Gln Glu

1156 1160 1165 1170

Val Thr Ser Arg Ile Arg Thr Gln Ser Phe Ser Leu Gln Glu Arg

1171 1175 1180 1185

His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro

1186 1190 1195 1200

Asp Thr Pro Gly Pro

1201 1205

抗内皮NO合酶多克隆抗体可使用以下序列的人内皮NO合酶的整个分子获得：

SEQ ID NO:2

Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Ala Gln Glu Pro Gly Pro Pro Cys

1 5 10 15

Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Cys Gly Lys Gln Gly

16 20 25 30

Pro Ala Thr Pro Ala Pro Glu Pro Ser Arg Ala Pro Ala Ser Leu

31 35 40 45

Leu Pro Pro Ala Pro Glu His Ser Pro Pro Ser Ser Pro Leu Thr

46 50 55 60

Gln Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Val Lys Asn Trp Glu

61 65 70 75

Val GLys er Ile Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Ala Gln Ala Gln Gln

76 80 85 90

Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Arg Cys Leu GLys er Leu Val Phe

91 95 100 105

Pro Arg Lys Leu Gln Gly Arg Pro Ser Pro Gly Pro Pro Ala Pro

106 110 115 120

Glu Gln Leu Leu Ser Gln Ala Arg Asp Phe Ile Asn Gln Tyr Tyr

121 125 130 135

Ser Ser Ile Lys Arg Ser GLys er Gln Ala His Glu Gln Arg Leu

136 140 145 150

Gln Glu Val Glu Ala Glu Val Ala Ala Thr Gly Thr Tyr Gln Leu

151 155 160 165

Arg Glu Ser Glu Leu Val Phe Gly Ala Lys Gln Ala Trp Arg Asn

166 170 175 180

Ala Pro Arg Cys Val Gly Arg Ile Gln Trp Gly Lys Leu Gln Val

181 185 190 195

Phe Asp Ala Arg Asp Cys Arg Ser Ala Gln Glu Met Phe Thr Tyr

196 200 205 210

Ile Cys Asn His Ile Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly Asn Leu Arg

211 215 220 225

Ser Ala Ile Thr Val Phe Pro Gln Arg Cys Pro Gly Arg Gly Asp

226 230 235 240

Phe Arg Ile Trp Asn Ser Gln Leu Val Arg Tyr Ala Gly Tyr Arg

241 245 250 255

Gln Gln Asp GLy Ser Val Arg Gly Asp Pro Ala Asn Val Glu Ile

256 260 265 270

Thr Glu Leu Cys Ile Gln His Gly Trp Thr Pro Gly Asn Gly Arg

271 275 280 285

Phe Asp Val Leu Pro Leu Leu Leu Gln Ala Pro Asp Glu Pro Pro

286 290 295 300

Glu Leu Phe Leu Leu Pro Pro Glu Leu Val Leu Glu Val Pro Leu

301 305 310 315

Glu Hig Pro Thr Leu Gly Trp Phe Ala Ala Leu Gly Leu Arg Trp

316 320 325 330

Tyr Ala Leu Pro Ala Val Ser Asn Met Leu Leu Glu Ile Gly Gly

331 335 340 345

Leu Glu Phe Pro Ala Ala Pro Phe Ser Gly Trp Tyr Met Ser Thr

346 350 355 360

Glu Ile Gly Thr Arg Asn Leu Cys Asp Pro His Arg Tyr Asn Ile

361 365 370 375

Leu Glu Asp Val Ala Val Cys Met Asp Leu Asp Thr Arg Thr Thr

376 380 385 390

Ser Ser Leu Trp Lys Asp Lys Ala Ala Val Glu Ile Asn Val Ala

391 395 400 405

Val Leu His Ser Tyr Gln Leu Ala Lys Val Thr Ile Val Asp His

406 410 415 420

His Ala Ala Thr Ala Ser Phe Met Lys His Leu Glu Asn Glu Gln

421 425 430 435

Lys Ala Arg Gly Gly Cys Pro Ala Asp Trp Ala Trp Ile Val Pro

436 440 445 450

Pro Ile Ser Glys er Leu Thr Pro Val phe His Gln Glu Met Val

451 455 460 465

Asn Tyr Phe Leu Ser Pro Ala Phe Arg Tyr Gln Pro Asp Pro Trp

466 470 475 480

Lys Gly Ser Ala Ala Lys Gly Thr Gly Ile Thr Arg Lys Lys Thr

481 485 490 495

Phe Lys Glu Val Ala Asn Ala Val Lys Ile Ser Ala Ser Leu Met

496 500 505 510

Gly Thr Val Met Ala Lys Arg Val Lys Ala Thr Tle Leu Tyr Gly

511 515 510 525

Ser Glu Thr Gly Arg Ala Gln Ser Tyr Ala Gln Gln Leu Cly Arg

526 530 535 540

Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Val Leu Cys Met Asp Glu

541 545 550 555

Tyr Asp Val Val Ser Leu Glu His Glu Thr Leu Val Leu Val Val

556 560 565 570

Thr Ser Thr Phe Gly Asn Cly Asp Pro Pro Glu Asn Gly Glu Ser

571 575 580 585

Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Het Ser Gly Pro Tyr Asn Ser Ser

586 590 595 600

Pro Arg Pro Glu Cln His Lys Ser Tyr Lys Ile Arg Phe Asn Ser

601 605 610 615

Ile Ser Cys Ser Asp Pro Leu Val Ser Ser Trp Arg Arg Lys Arg

616 620 625 630

Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly Thr Leu

631 635 640 645

Arg Phe Cys Val Phe Gly Leu GLys er Arg Ala Tyr Pro His Phe

646 650 655 660

Cys Ala Phe Ala Arg Ala Val Asp Thr Arg Leu Glu Glu Leu Gly

661 665 670 675

Gly Glu Arg Leu Leu Gln Leu Gly Gln Gly Asp Glu Leu Cys Cly

676 680 685 690

Gln Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Gln Ala Ala Phe Gln Ala

691 695 700 705

A1a Cys Glu Thr Phe Cys Val Gly Glu Asp Ala Lys Ald Ala Ala

706 710 715 720

Arg Asp Ile Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gln Arg Tyr

721 725 730 735

Arg Leu Ser Ala Gln Ala Glu Gly Leu Gln Leu Len Pro Gly Leu

736 740 745 750

Ile His Val His Arg Arg Lys met Phe Gln Ala Thr Ile Arg Ser

751 755 760 765

Val Glu Asn Leu Gln Ser Ser Lys Ser Thr Arg Ala Thr Ile Leu

766 770 775 780

Val Arg Leu Asp Thr Gly Gly Gln Glu Gly Leu Gln Tyr Gln Pro

781 785 790 795

Gly Asp His Ile Gly Val Cys Pro Pro Asn Arg Pro Gly Leu Val

796 800 805 810

Glu Ala Leu Leu Ser Arg Val Glu Asp Pro Pro Ala Pro Thr Glu

811 815 820 825

Pro Val Ala Val Glu Gln Leu Glu Lys Gly Ser Pro Gly Gly Pro

826 830 835 840

Pro Pro Gly Trp Val Arg Asp Pro Arg Leu Pro Pro Cys Thr Leu

841 845 850 855

Arg Gln Ala Leu Thr Phe Phe Leu Asp Ile Thr Ser Pro Pro Ser

856 860 865 870

Pro Gln Leu Leu Arg Leu Leu Ser thr Leu Ala Glu Glu Pro Arg

871 875 880 885

Glu Gln Gln Glu Leu Glu Ala Leu Ser Gln Asp Pro Arg Arg Tyr

886 890 895 900

Glu Glu Trp Lys Trp Phe Arg Cys Pro Thr Leu Leu Glu Val Leu

901 905 910 915

Glu Gln Phe Pro Ser Val Ala Leu Pro Ala Pro Leu Leu Leu Thr

916 920 925 930

Gln Leu Pro Leu Leu Gln Pro Arg Tyr Tyr Ser Val Ser Ser Ala

931 935 940 945

Pro Ser Thr His Pro Gly Glu Ile His Leu Thr Val Ala Val Leu

946 950 955 960

Ala Tyr Arg Thr Gln Asp Gly Leu Gly Pro Leu His Tyr Gly Val

961 965 970 975

Cys Ser Thr Trp Leu Ser Gln Leu Lys Pro Gly Asp Pro Val Pro

976 980 985 990

Cys Phe Ile Arg Gly Ala Pro Ser Phe Arg Leu Pro Pro Asp Pro

991 995 1000 1005

Ser Leu Pro Cys Ile Leu Val Gly Pro Gly Thr Gly Ile Ala Pro

1006 1010 1015 1020

Phe Arg Gly Phe Trp Gln Glu Arg Leu His Asp Ile Glu Ser Lys

1021 1025 1030 1035

Gly Leu Gln Pro Thr Pro Met Thr Leu Val Phe Gly Cys Arg Cys

1036 1140 1145 1050

Ser Gln Leu Asp His Leu Tyr Arg Asp Glu Val Gln Asn Ala Gln

1051 1155 1160 1065

Gln Arg Gly Val Phe Gly Arg Val Leu Thr Ala Phe Ser Arg Glu

1066 1170 1175 1080

Pro Asp Asn Pro Lys Thr Tyr Val Gln Asp Ile Leu Arg Thr Glu

1081 1085 1090 1095

Leu Ala Ala Glu Val His Arg Val Leu Cys Leu Glu Arg Gly His

1096 1100 1105 1110

Met Phe Val Cys Gly Asp Val Thr Met Ala Thr Asn Val Leu Gln

1111 1115 1120 1125

Thr Val Gln Arg Ile Leu Ala Thr Glu Gly Asp Met Glu Leu Asp

1126 1130 1135 1140

Glu Ala Gly Asp Val Ile Gly Val Leu Arg Asp Gln Gln Arg Tyr

1141 1451 1150 1155

His Glu Asp Ile Phe Gly Leu Thr Leu Arg Thr Gln Glu Val Thr

1156 1160 1165 1170

Ser Arg Ile Arg Thr Gln Ser Phe Ser Leu Gln Glu Arg Gln Leu

1171 1175 1180 1185

Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Ser Asp Thr

1186 1190 1195 1200

Asn Ser Pro

1201 1203

为获得抗内皮NO合酶多克隆抗体，还可使用例如选自以下序列的内皮NO合酶的片段：

SEQ ID NO:3

Pro Trp Ala Phe

1192 1195

SEQ ID NO:4

Gly Ala Val Pro

1189 1192

SEQ ID NO:5

Arg

1185

His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro

1186 1190 1195 1200

Asp Thr Pro Gly Pro

1201 1205

SEQ ID NO:6

Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro

11941195 1200

Asp Thr Pro Gly Pro

1201 1205

SEQ ID NO:7

His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp

1186 1190 11951196

SEQ ID NO:8

His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro

1186 1190 1195 1200

Asp Thr Pro Gly Pro

1201 1205

制备起始抗内皮NO合酶多克隆抗体的示例性过程可描述如下。在采血前7-9天，将期望抗原经1-3次静脉注射至兔，以增高兔血流中的多克隆抗体水平。一旦免疫后，采集血样以测试抗体水平。通常，可溶性抗原免疫反应在第一次注射后40-60天内达到最高水平。第一个免疫周期结束后，兔具有30天的康复期，之后经另外的1-3次静脉注射进行再免疫。

为获得包含期望抗体的抗血清，从兔中收集免疫后的兔血液并置于50ml离心管中。用木质药匙（spatula）将管壁上所形成的产物凝块移除，将棒置于管中心的凝块中。然后将血液放置于冷却器中于4℃的温度下过夜。第二天，将药匙上的凝块移除，将剩余液体在13000转/分下离心10min。上清液体为目标抗血清。所获得的抗血清通常为黄色。向抗血清加入20wt%的NaN₃至最终浓度为0.02%并在-20℃的温度下于冷冻状态贮存至使用，或者不加入NaN₃而在-70℃的温度下贮存至使用。为了从抗血清中分离目标抗内皮NO合酶抗体，下述固相吸附顺序很适合：

（a）将10ml兔抗血清用0.15M的NaCl稀释2倍，之后加入6.26gNa₂SO₄，混合并在4℃下孵育12-16小时。

（b）将沉淀物经离心移除，在10ml磷酸盐缓冲液中稀释并使用相同的缓冲液在环境温度下透析过夜。

（c）移除沉淀物后，将溶液加样至用磷酸盐缓冲液平衡后的DEAE-纤维素柱。

（d）通过在280nm处对洗脱液的光密度进行测量来确定抗体馏分。

使用亲和色谱法，通过将所获得的抗内皮NO合酶抗体附至色谱介质的不溶性基质上、并随后用浓的盐溶液洗脱，对所分离出的粗抗体进行纯化。

将所得到的缓冲溶液用作顺势疗法稀释方法的起始溶液，所述顺势疗法稀释方法用来制备活性强化形式的抗体。抗原纯化的抗内皮NO合酶多克隆兔抗体的初始基质溶液的优选浓度为0.5-5.0mg/ml，优选2.0-3.0mg/ml。

由神经元细胞与神经胶质细胞（星形细胞和少突胶质细胞）表达的脑特异性S-100蛋白，直接或通过与其它蛋白相互作用在CNS中执行许多针对维持正常脑部机能的功能，包括影响学习和记忆过程、神经元的生长和生存力、神经元组织中代谢过程的调节及其它。为获得抗脑特异性S-100蛋白多克隆抗体，使用了脑特异性S-100蛋白，在如下列文章和书籍中对所述脑特异性S-100蛋白的理化性质进行了描述：M.V.Starostin，S.M.Sviridov，Neurospecific Protein S-100，Progress of ModernBiology，1977，第5卷，第170-178页；M.B.Shtark，Brain-Specific ProteinAntigenes and Functions of Neuron，“Medicine”，1985，第12-14页。通过以下技术从牛的脑组织中分离出脑特异性S-100蛋白：

-使用专门的研磨装置将液氮冷冻的牛脑组织磨成粉末；

-以1:3（重量/体积）的比例使用提取缓冲液经匀化作用提取蛋白；

-将匀浆在60℃下加热10min，然后在冰浴中冷却至4℃；

-通过离心移除热不稳定蛋白；

-分阶段进行硫酸铵分级分离，然后移除沉淀的蛋白；

-使用通过将pH降至4.0实现的100%饱和硫酸铵对含S-100蛋白的馏分进行沉淀；通过离心收集期望的馏分；

-将沉淀物溶于含EDTA和巯基乙醇的最小体积缓冲液中，将沉淀物用去离子水进行透析，然后冻干；

-随后通过离子交换介质色谱、DEAE-纤维DE-52色谱以及DEAE-sephadex A-50色谱对酸性蛋白分级分离；

-将经收集并透析的馏分（含S-100蛋白）根据分子量在sephadexG-100上通过凝胶过滤进行分离；

-将纯化的S-100蛋白进行透析和冻干。

纯化的脑特异性S-100蛋白的分子量为21000D。

由于天冬氨酸和谷氨酸的高含量，脑特异性S-100蛋白高度酸性化，并且在聚丙烯酰胺凝胶的不连续缓冲体系中的电内渗过程中占据了阳极末端位置，这有利于其鉴定。

还可通过类似于所述用于内皮NO合酶抗体的方法学，使用佐剂来获得抗S-100蛋白多克隆抗体。可将S-100蛋白的整个分子用作兔免疫的免疫原（抗原）：

牛S-100B(SEO ID NO：9)

Met Ser Glu Leu Glu Lys Ala Val Val Ala Leu Ile Asp Val Phe

1 5 10 15

His Gln Tyr Ser Gly Arg Glu Gly Asp Lys His Lys Leu Lys Lys

16 20 25 30

Ser Glu Leu Lys Glu Leu Ile Asn Asn Glu Leu Ser His Phe Leu

31 35 40 45

Glu Glu Ile Lys Glu Gln Glu Val Val Asp Lys Val Het Glu Thr

46 50 55 60

Leu Asp Ser Asp Gly Asp Gly Glu Cys Asp Phe Gln Glu Phe Met

61 65 70 75

Ala Phe Val Ala Met Ile Thr Thr Ala Cys His Glu Phe Phe Glu

76 80 85 90

His Glu

91 92

人S-100B(SEO ID NO：10)

Met Ser Glu Leu Glu Lvs Ala Met Val Ala Leu Ile Asp Val Phe

1 5 10 15

His Gln Tyr Ser G1y Arg Glu Gly Asp Lys His Lys Leu Lys Lys

16 20 25 30

Ser Glu Leu Lys Glu Leu Ile Asn Asn Glu Leu Ser His Phe Leu

31 35 40 45

Glu Glu Ile Lys Glu Gln Glu Val Val Asp Lys Val Met Glu Thr

46 50 55 60

Leu Asp Asn Asp Gly Asp Gly Glu Cys Asp Phe Gln Glu Phe Met

61 65 70 75

Ala Phe Val Ala Met Val Thr Thr Ala Cvs His Glu Phe Phe Glu

76 80 85 90

His Glu

91 92

人S-100A1(SEO ID NO：11)

Met Glv Ser G1u Leu Glu Thr Ala Met Glu Thr Leu Ile Asn Val

1 5 10 15

Phe His Ala His Ser Gly Lys Glu Gly Asp Lys Tyr Lys Leu Ser

16 20 25 30

Lys Lys Glu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Thr Glu Leu Ser Gly Phe

31 35 40 45

Leu Asp Ala Gln Lys Asp Val Asp Ala Val Asp Lys Val Met Lys

46 50 55 60

Glu Leu Asp Glu Asn Gly Asp G1y Glu Val Asp Phe Gln Glu Tyr

61 65 70 75

Val Val Leu Val Ala Ala Leu Thr Val Ala Cys Asn Asn Phe Phe

76 80 85 90

Trp Glu Asn Ser

91 94

牛S-100A1(SEQ ID NO：12)

Met Gly Ser Glu Leu Glu Thr Ala Met Glu Thr Leu Ile Asn Val

1 5 10 15

Phe His Ala His Ser Gly Lys Glu Gly Asp Lys Tyr Lys Leu Ser

16 20 25 30

Lys Lys Glu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Thr Glu Leu Ser Gly Phe

31 35 4045

Leu Asp Ala Gln Lys Asp Ala Asp Ala Val Asp Lys Val Met Lys

46 50 55 60

Glu Leu Asp Glu Asn Gly Asp Gly Glu Val Asp Phe Gln Glu Tyr

61 65 70 75

Val Val Leu Val Ala Ala Leu Thr Val Ala Cys Ash Asn Phe Phc

76 80 85 90

Trp Glu Asn Ser

91 94

为获得抗血清，可将脑特异性S-100蛋白或S-100蛋白的混合物(抗原)制备成以甲基化牛血清白蛋白作为载剂与完全弗氏佐剂复合，并将其加入至指定的脑特异性S-100蛋白，将其以1-2ml的量经皮下注射入实验动物(兔)的背部区域。在第8天、第15天进行重复免疫。在第26天和第28天例如从耳静脉取血样。

所获得的抗血清效价为1∶500-1∶1000，所述抗血清与神经组织提取物形成单一沉淀带(single precipitin band)，而不与异源体(heterologicalbodies)的提取物进行反应，并且与纯的S-100蛋白和神经组织提取物均形成单一沉淀峰，这表明所获得的抗血清为单特异性。

活性强化形式的复合物各组分可由初始溶液经顺势疗法强化来制备，优选使用通过连续稀释来成比例降低浓度的如下方法：将l份的各在先溶液(preceding solution)(由初始溶液开始)连续稀释于9份(十倍稀释)、或连续稀释于99份(百倍稀释)、或连续稀释于999份(千倍稀释，M衰减)的中性溶剂中，用浓度范围为约0.5mg／ml至约5.0mg／ml的处于溶剂(优选水或水．乙醇混合物)中的初始抗体溶液伴以外部作用来起始。所述外部作用优选包括每次稀释时的多次竖直振荡(稀释增效法，dynamization)。优选将单独的容器用于后续各次稀释，直至所需效力水平或稀释系数。这一方法在顺势疗法领域中被广泛接受。参见例如V.Schwabe，“Homeopathic medicines”，M.，1967，第14-29页，以引用的方式将其并入本文用于所述目的。

例如，为了制备第12百倍稀释液（表示为C12），将1份浓度为2.5mg/ml的抗脑特异性S-100蛋白抗体（或抗内皮NO合酶抗体）的初始基质溶液稀释于99份中性水溶剂或水-醇溶剂（优选15%乙醇）中，并随后进行多次（10次以上）竖直振荡以制成第1百倍稀释液（表示为C1）。第2百倍稀释液（C2）由第1百倍稀释液C1制备。将这一过程重复11次，从而制得第12百倍稀释液C12。因此，第12百倍稀释液C12表示通过将1份浓度为2.5mg/ml的抗脑特异性S-100蛋白抗体的初始基质溶液在处于不同容器内的99份中性溶剂中连续稀释12次所获得的溶液，相当于百倍顺势疗法稀释液C12。以相应的稀释系数进行类似过程，获得C30、C50和C200稀释液。可将中间稀释液在期望的生物模型中进行测试以检测活性。用于本发明复合物中的优选的两种活性强化形式抗体为C12、C30和C200稀释液混合物或C12、C30和C50稀释液混合物。当将活性物质的多种顺势疗法稀释液（主要为百倍稀释液）的混合物用作生物活性液体组分时，组合物的各组分（如，C12、C30、C50、C200）分别根据上述过程制备，直至获得倒数第二份稀释液（例如，分别直至C11、C29、C49和C199），然后根据混合物组成将1份的各组分加入一个容器中，并与所需量的溶剂（如，用97份以进行百倍稀释）进行混合。

因此，通过相应地以100¹²、100³⁰和100²⁰⁰倍（相当于基于顺势疗法技术制备的百倍稀释液C12、C30和C200）或者以100¹²、100³⁰和100⁵⁰倍（相当于基于顺势疗法技术制备的百倍稀释液C12、C30和C50）对基质溶液进行额外稀释，获得极低剂量的活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体。

可使用基于顺势疗法技术的、处于其它多种溶液的混合物形式、例如十倍稀释和/或百倍稀释的活性物质（C12、C30和C100；C12、C30和C50；D20、C30和C100或D10、C30和M100等）。以实验的方式说明效力。

在强化和浓度降低的过程中，可通过超声、电磁、或顺势疗法领域中接受的任何其它物理影响进行外部作用过程。

本发明的药物组合物优选可处于液体或固体单位剂型的形式。药物组合物优选的液体形式为混合物，优选活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体和活性强化形式的抗S-100蛋白抗体处于1:1比例的混合物。优选的液态载体为水或水-乙醇混合物。

可通过使用活性强化形式的活性组分水溶液或水-醇溶液的混合物对药学上可接受的固态载体进行浸渍，来制备本发明药物组合物的固体单位剂型，所述活性组分水溶液或水-醇溶液主要以1:1的比例进行混合并以液态剂型加以使用。或者，可用各所需稀释液对载体进行连续浸渍。两种浸渍顺序均可接受。

优选处于固体单位剂型的药物组合物由药学上可接受的载体的颗粒制备，所述颗粒预先用活性强化形式抗体的水稀释液或水-醇稀释液饱和。固体剂型可为药学领域中已知的任何剂型，包括片剂、胶囊、锭剂及其它。作为非活性药物成分，可使用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉、异麦芽糖、异麦芽酮糖醇及制药中使用的其它单糖、寡糖和多糖，还可使用上述非活性药物成分与其它药学上可接受的赋形剂的工艺混合物，所述赋形剂如异麦芽酮糖醇、交联聚维酮、甜蜜素（sodium cyclamate）、糖精钠、无水柠檬酸等，包括润滑剂、崩解剂、粘结剂和着色剂。优选的载体为乳糖和异麦芽酮糖醇。药物剂型可进一步包含标准药物赋形剂，例如微晶纤维素、硬脂酸镁和柠檬酸。

制备固体单位剂型的实例如下所述。为制备固体口服剂型，将乳糖的100-300μm颗粒用活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体及抗S-100蛋白抗体的水溶液或水-醇溶液、以1kg抗体溶液对5kg或10kg乳糖（1:5至1:10）的比例进行浸渍。为有效浸渍，使乳糖颗粒在沸腾床设备（如，Hüttlin GmbH的“Hüttlin Pilotlab”）中的流化床中接受饱和灌洗（saturation irrigation），随后经由加热的空气流在低于40℃的温度下进行干燥。将用活性强化形式抗体饱和的估计量的干燥颗粒（10-34重量份）置于混合器内，并与25-45重量份的“非饱和”纯乳糖（用于在不降低治疗功效的情况下，降低成本、简化和加速工艺方法的目的）、以及0.1-1重量份的硬脂酸镁和3-10重量份的微晶纤维素一起进行混合。将所获得的片状物质进行均匀混合，并通过直接干压成型（如，在Korsch-XL400压片机中）进行压片，从而形成150-500mg、优选300mg的圆丸。压片后，获得300mg的丸剂，所述丸剂用活性强化形式抗体的复合物的水-醇溶液饱和（3.0-6.0mg/丸）。用于浸渍载体的复合物各组分均处于百倍顺势疗法稀释液、优选C12、C30和C200的混合物的形式。

优选将1-2片所请求保护的药物组合物每天给予2-4次。

所请求保护的药物组合物及其组分不具有镇静和肌肉松弛作用，不会造成上瘾和成瘾。

实施例

实施例1

在体外，通过对标准配体[³H]喷他佐辛与重组人σ1受体的结合，对以下物质的效力进行了研究，并通过放射性配体法对所述效力进行了评价：复方制剂，包含极低剂量的活性强化形式的经亲和纯化的抗脑特异性蛋白S-100多克隆兔抗体（抗S-100）和抗内皮NO合酶多克隆兔抗体（抗eNOS），所述抗体通过对初始基质溶液（浓度：2.5mg/ml）进行超级稀释（super-dilution）（100¹²、100³⁰和100²⁰⁰倍）获得，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C200的混合物（比例为1:1）（ULD抗S-100+抗eNOS）；所述复方制剂的组分，极低剂量的活性强化形式的针对抗原亲和纯化的抗脑特异性S-100蛋白多克隆兔抗体，所述抗体通过对初始基质溶液进行超级稀释（100¹²、100³⁰和100²⁰⁰倍）获得，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C200的混合物（ULD抗S-100），以及极低剂量的活性强化形式的经亲和纯化的抗内皮NO合酶多克隆兔抗体，所述通过对初始基质溶液进行超级稀释（100¹²、100³⁰和100²⁰⁰倍）获得，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C200的混合物（ULD抗eNOS）。将强化的蒸馏水（顺势疗法稀释液C12+C30+C200的混合物）用作测试制剂的对照。

Sigma-1（σ1）受体为胞内受体，位于中枢神经系统细胞、大部分外周组织的细胞与免疫活性细胞中。这些受体显示出被认为由许多精神药物引发转位的独特能力。σ1受体的动力学与作用至σ1受体的制剂所产生的各种影响直接相关。这些影响包括对活性通道、胞吐（ecocytosis）、信号传导、质膜重塑（脂筏（raft）的形成）以及脂类转运/代谢作用的调节。这些全都能够促进脑中神经元的可塑性。存在证据表明σ1受体对全部主要的神经介质系统都具有调节作用：去甲肾上腺素系统、血清素系统、多巴胺系统、胆碱能系统以及NMDA可调节的谷氨酸效应。σ1受体在神经退行性疾病（例如阿尔茨海默病和帕金森病）、精神和情感障碍（psychiatric and affective disorders）以及中风的病理生理学中起重要作用；σ1受体还参与学习和记忆过程。就此而言，药物影响配体与σ1受体相互作用效力的能力表明了在其药理学活性范围中的神经保护、抗缺血、抗焦虑、抗抑郁和抗虚弱组分的存在，所述能力允许将这些药物作为尤其是用于治疗脑血管疾病的有效制剂纳入考虑。

在测试（以测定总结合）期间，将20μl的复方制剂（ULD抗S-100+抗eNOS）、或10μl的ULD抗S-100抗体、或10μl的ULD抗NOS抗体加入至孵育介质中。因此，测试复方制剂时，转移至测试盘（test basin）中的ULD抗S-100+抗eNOS的量与作为单一制剂测试的ULD抗S-100抗体和ULD抗NOS抗体的量相同，这也允许将制剂的效力与其各单独的组分相比较。将20μl与10μl的强化水转移至孵育介质中。

此外，还转移了160μl（大约200μg蛋白质）的Jurkat细胞系的细胞膜匀浆（人白血病T淋巴细胞系）；以及最终转移了20μl氚标记的放射性配体[³H]喷他佐辛（15nm）。

为了测量非特异性结合，将20μl未标记的配体氟哌啶醇（10μM）转移至孵育介质中，代替制剂或强化水。

在50mM的Tris-HCl缓冲液（pH=7.4）中于22℃下孵育120分钟、并使用玻璃纤维过滤器（GF/B，Packard）过滤之后，使用闪烁计数器（Topcount，Packard）和闪烁混合物（Microscint0，Packard）测量放射性。特异性结合（测试或对照中）由总结合（测试或对照中）与非特异性结合的差异计算得出。

结果以对照（使用蒸馏水作为对照）中特异性结合抑制的百分比表示（表1）。

表1

制剂和强化水对标准配体[³H]喷他佐辛与人重组σ1受体的结合的影响

注：对照中特异性结合的%=（测试组中的特异性结合/对照组中的特异性结合）*100%；

对照中特异性结合抑制的%=100%-（测试组中的特异性结合/对照组中的特异性结合）*100%。

反映出高于50%抑制的结果表示测试化合物的显著性影响；25%-50%抑制表示轻度-中度影响；低于25%的抑制被认为测试化合物的非显著性影响，并属于本底水平的范畴。

因此，这一测试模型的情况显示ULD抗S-100+抗eNOS复方制剂相比其各单独的组分（ULD抗S-100和ULD抗eNOS）在抑制标准放射性配体[³H]喷他佐辛与人重组σ1受体的结合方面更为有效；转移至测试盘的10μl的ULD抗S-100抑制了标准放射性配体[³H]喷他佐辛与人重组σ1受体的结合，但影响强度次于ULD抗S-100+抗eNOS复方制剂；转移至测试盘的10μl的ULD抗eNOS对标准放射性配体[³H]喷他佐辛与人重组σ1受体的结合没有影响；转移至测试盘的10μl或20μl的强化水对标准放射性配体[³H]喷他佐辛与人重组σ1受体的结合没有影响。

实施例2

组1——活性药物组：给予300mg以水-醇溶液浸渍的片剂（6mg/片），所述水-醇溶液为如下物质的水-醇溶液：极低剂量的活性强化形式的经抗原纯化的抗脑特异性S-100蛋白多克隆兔抗体（抗S-100）和抗内皮NO合酶多克隆兔抗体（抗eNOS）（“ULD抗S-100+ULD抗eNOS”），通过对初始溶液（浓度为2.5mg/ml）超级稀释100¹²、100³⁰和100²⁰⁰倍获得，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C200的混合物。

组2——比较组：给予300mg以水-醇溶液浸渍的片剂（3mg/片），所述水-醇溶液为如下物质的水-醇溶液：极低剂量的活性强化形式的经抗原纯化的兔抗脑特异性S-100蛋白多克隆抗体（ULD抗S-100），通过对初始溶液超级稀释100¹²、100³⁰和100⁵⁰倍获得，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C50的混合物。

组3——对照组（安慰剂）：给予300mg含有赋形剂（267mg乳糖一水合物、30mg微晶纤维素以及3mg硬脂酸镁）的片剂。

对活性药物ULD抗S-100+抗eNOS在治疗注意力不足过动症（ADHD）患者方面的效果进行比较双盲安慰剂-对照研究，所述研究在146名6-12岁的儿童（平均年龄9.3±0.24岁）中进行，所述儿童随机分入三个进行不同治疗的组。在12周内，组1的患者（n=46）接受ULD抗S-100+抗eNOS组合物，每天两次，每次2片；比较组2的成员（n=50）接受ULD抗S-100，每天两次，每次2片；对照组3的成员（n=50）每天接受两次，每次2片。研究中包括的所有患者都具有临床上显著的ADHD表现，这在ADHD症状评价量表（ADHDRS-IV-家庭版）的高分数上得到证实：组1中为33.80±0.92；组2中为32.5±1.14；以及组3中为33.6±0.91。多数儿童的特征在于根据CGI-ADHD-严重度问卷的中等严重度的ADHD。这一量表的总分数为：组1中为4.0±0.02分、组2中为4.0±0.03分以及组3中为4.0±0.00分。因此，在起始阶段，三个组的患者具有可比的ADHD严重度指标。根据在研究登记时的神经学、临床-实验室和器械检查的结果，任何患者都未检出异常。在12周的治疗中，患者由医生探访6次。这一过程中，医师-研究者记录了ADHD临床表现的强度动态（ADHDRS-IV-家庭版量表的总分数）以及疾病严重度（基于CGI-ADHD-严重程度），监督处方、给予治疗并评价治疗的安全性。

对12周治疗在三个组中的效果进行的分析显示，在以ULD抗S-100+抗eNOS组合物治疗的儿童中，ADHDRS-IV-家庭版量表的总分数与初始分数相比下降超过25%的儿童为75%（n=36）；这一数值在以ULD抗S-100治疗的患者中是66%（n=33）、在接受安慰剂的儿童中是56%（n=28）。考虑到状况改善的三个水平梯度（ADHDRS-IV量表总分数与基线相比降低值为<25%、25-49.9%或≥50%），将显示出更多详细评价的各组之间的效力差异示于表2中。在摄入ULD抗S-100+抗eNOS的组1中注意到，52%的儿童与基线相比总分数降低了50%以上，产生了显著改善；在摄入ULD抗S-100的组2中注意到34%的儿童（相比而言，在摄入安慰剂的组3中仅有8%的患者）。

将治疗期间的ADHD症状（六次随访中各次的ADHDRS-IV家庭版量表的总分数值）减轻的动态在图1和表3中示出。与初始状态相比ADHD临床意义（clinical implications）的显著性降低（p<0.001）在治疗2周后已在所有三个观测组中发生。在组1和组2的患者中，由于不仅关于筛选（screening）随访，而且当与摄入安慰剂的组3的指标相比时，ADHDRS-IV-家庭版总分数之间的显著性差异已得到认定，因此其中的积极动态更加显著。在随后几周的治疗中，以ULD抗S-100+抗eNOS组合物和单一组分制剂ULD抗S-100治疗的效力开始增长，在活性药物组中最为显著（p<0.05）。在摄入ULD抗S-100+抗eNOS的组1的儿童中的ADHDRS-IV-家庭版量表总分数降低值为16.5分，在摄入ULD抗S-100的组2的患者中为12.4分（相比之下，摄入安慰剂的组3中为6.3分）。作为12周治疗的结果，与基线相比，ADHD临床意义上的强度在以ULD抗S-100+抗eNOS组合物治疗的儿童中降低了几乎一半（-48.8%），而在以ULD抗S-100的患者中降低了多于三分之一（-38.2%）。

摄取ULD抗S-100+抗eNOS组合物或ULD抗S-100影响ADHD的两类症状，这已由ADHDRS-IV-家庭版量表两部分评价的动态证实（表3）。另外，与单一制剂ULD抗S-100治疗的效果相比，ULD抗S-100+抗eNOS组合物的治疗在意义强度（intensity of implications）和注意力不足以及过动/冲动方面的影响程度显著更高。

活性药物ULD抗S-100+抗eNOS以及比较药物ULD抗S-100的积极治疗效果在ADHD严重度评价量表（CGI-ADHR-严重度）的患者治疗结果评价中显示（表4）。在3个月的治疗后，ULD抗-S100+抗eNOS组中几乎四分之一的患者的疾病严重度由中度降至轻度甚至最小限度，这已由CGI-ADHR-严重度量表的平均值下降了15%得以证实（由4.0±0.02降至3.4±0.06；p<0.001）。以单一制剂ULD抗S-100治疗3个月的效果略低，在CGI-ADHR-严重度量表中显示为-10%（相比之下，安慰剂组中为5%）。安全性分析包括了所有参加研究的患者的数据。在整个监测阶段，活性药物ULD抗S-100+抗eNOS和比较制剂ULD抗S-100都具有可与安慰剂相比的耐受性。在摄入ULD抗S-100的组中的一名患者中（头痛，在研究第四周减弱）以及安慰剂组中的一名患者中（梦游，观测第二个月期间）报道了副作用。这些副作用与治疗并无联系。另外，在治疗过程中观察到了一例急性呼吸系统疾病，也与治疗无关。研究组中的所有患者都按照研究方案制定的计划完成了治疗；无人提前退出。在患者身体检查和实验室参数的重复分析过程中并无病理变化，这也证实了所研究的治疗的安全性。

根据患者的身体检查结果（心率、SBP、DBP、体温），治疗期间未记录到任何病理变化。根据访问的分析量表中以及在比较组中的差异并未达到统计显著性，也并未超出生理学的容许偏差（allowable deviation）的限度。高的治疗依从性（adherence to therapy）也进一步表明了研究制剂的有效性和安全性。在治疗第三个月结束时，所述依从性在摄入ULD抗S100+抗eNOS的组1和摄入ULD抗S100的组2中各自为99.8±1.15%和99.8±2.25%（相比之下，摄入安慰剂的组3中为74.6±2.54%）。

因此，研究证明了ULD抗S-100+抗eNOS组合物以及单一组分制剂ULD抗S-100在治疗患有ADHD的儿童方面的效力和安全性。在12周的过程中，在复合药物（ULD抗S-100+抗eNOS）中观测到最显著的治疗效果，这通过大多数（75%）儿童中临床症状的积极动态得以证实。ULD抗S-100+抗eNOS组合物对ADHD的两类症状都具有矫正作用，并且因此注意到在ADHD患者中注意力障碍和过动都显著降低。

表2：在12周的治疗结束时ADHDRS-IV-家庭版量表的总分数动态

与安慰剂组比较具有显著性差异：

^##p<0.01。

表3：ADHDRS-IV-家庭版量表的ADHD临床意义的迹象动态

注：与基线参数比较具有显著性差异：

^*p<0.05,^**p<0.01,^***p<0.001。

与安慰剂组比较具有显著性差异：

^#p<0.05，^##p<0.01，^###p<0.001。

与ULD抗S100组比较具有显著性差异：

^&p<0.05。

表4：由CGI-ADHD-严重度量表表示的ADHD严重程度水平动态

与基线参数比较具有显著性差异：^**p<0.01，^***p<0.001。

Claims

1.一种对注意力不足过动症进行治疗的方法，所述方法包括向有需要的患者给予复合药物组合物，所述复合药物组合物包含a）活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体、以及b）活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体针对的是整个牛脑特异性S-100蛋白。

3.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体针对的是具有序列SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQID NO:11或SEQ ID NO:12的脑特异性S-100蛋白。

4.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体针对的是整个牛NO合酶。

5.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体针对的是整个人NO合酶。

6.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体处于浸渍至固态载体上的C12、C30及C50顺势疗法稀释液的混合物形式，并且所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体处于浸渍至所述固态载体上的C12、C30及C50顺势疗法稀释液的混合物形式。

7.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体处于浸渍至固态载体上的C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式，并且所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体处于浸渍至所述固态载体上的C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式。

8.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体处于浸渍至固态载体上的C12、C30及C50顺势疗法稀释液的混合物形式，并且所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体处于浸渍至所述固态载体上的C12、C30及C50顺势疗法稀释液的混合物形式。

9.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体处于浸渍至固态载体上的C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式，并且所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体处于浸渍至所述固态载体上的C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式。

10.如权利要求1所述的方法，其中，a）所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体，并且b）所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体。

11.如权利要求10所述的方法，其中，a）所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体以及b）所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体为多克隆抗体。

12.如权利要求1所述的方法，其中，a）所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体以及b）所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体通过连续的百倍稀释、且每次稀释时均伴以振荡而制备。

13.如权利要求1所述的方法，其中，所述复合药物组合物以1-2单位剂型进行给予，各剂型每日给予1-4次。

14.如权利要求13所述的方法，其中，所述复合药物组合物以1-2单位剂型进行给予，各剂型每日给予2次。

15.一种减轻注意力不足过动症的症状的方法，所述症状的减轻通过ADHDRS-IV家庭版测试进行测量，通过给予权利要求1所述的复合药物组合物来减轻所述症状。

16.一种减轻注意力不足过动症的症状的方法，所述症状的减轻通过CGI-ADHD严重程度测试进行测量，通过给予权利要求1所述的复合药物组合物来减轻所述症状。

17.如权利要求1所述的方法，其中，所述患者为年龄低于12岁的儿童。

18.如权利要求1所述的方法，其中，所述患者为成人。

19.一种对注意力不足症进行治疗的方法，所述方法包括向有需要的患者给予复合药物组合物，所述复合药物组合物包含a）活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体、以及b）活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体。

20.如权利要求19所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体针对的是整个牛脑特异性S-100蛋白。

21.如权利要求19所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体针对的是具有序列SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的脑特异性S-100蛋白。

22.如权利要求19所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体针对的是整个牛NO合酶。

23.如权利要求19所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体针对的是整个人NO合酶。

24.如权利要求19所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗内皮脑特异性S-100蛋白抗体处于浸渍至固态载体上的C12、C30及C50顺势疗法稀释液的混合物形式，并且所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体处于浸渍至所述固态载体上的C12、C30及C50顺势疗法稀释液的混合物形式。

25.如权利要求19所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体处于浸渍至固态载体上的C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式，并且所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体处于浸渍至所述固态载体上的C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式。

26.如权利要求19所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体处于浸渍至固态载体上的C12、C30及C50顺势疗法稀释液的混合物形式，并且所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体处于浸渍至所述固态载体上的C12、C30及C50顺势疗法稀释液的混合物形式。

27.如权利要求19所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体处于浸渍至固态载体上的C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式，并且所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体处于浸渍至所述固态载体上的C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式。

28.如权利要求19所述的方法，其中，a）所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体，并且b）所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体。

29.如权利要求19所述的方法，其中，a）所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体以及b）所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体为多克隆抗体。

30.如权利要求19所述的方法，其中，a）所述活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体以及b）所述活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体通过连续的百倍稀释、且每次稀释时均伴以振荡而制备。

31.如权利要求19所述的方法，其中，所述复合药物组合物以1-2单位剂型进行给予，各剂型每日给予1-4次。

32.如权利要求31所述的方法，其中，所述复合药物组合物以1-2单位剂型进行给予，各剂型每日给予2次。

33.一种用于对患有注意力不足过动症的患者进行治疗的药物组合物，所述组合物通过如下步骤获得：提供a）活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体以及b）活性强化形式的抗内皮NO合酶抗体，各抗体根据顺势疗法技术通过对每次获得的溶液进行连续的重复稀释和多次振荡而制备；然后通过混合将强化后的溶液进行复合，或者用所述复合后的溶液或用各强化后的溶液分别浸渍载体物质。