CN103099783B - 经皮给药纳米制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种经皮给药纳米制剂，该纳米制剂含有：曲酸二棕榈酸酯、聚合物材料、刺鼠蛋白、油酸，所述聚合物材料形成纳米制剂载体，其表面修饰有刺鼠蛋白和油酸，内载有曲酸二棕榈酸酯。本发明还公开了该经皮给药纳米制剂的制备方法和应用。本发明的经皮给药纳米制剂，既能有效穿过角质层，又能定位于表皮基底层的黑素细胞，具有很好的色斑治疗作用，适用于黄褐斑、雀斑等色素沉着疾病的治疗。

Description

经皮给药纳米制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种由刺鼠蛋白和油酸双修饰的载有曲酸二棕榈酸酯的经皮给药纳米制剂及其制备方法和应用。

背景技术

色斑是人体皮肤受到紫外线、体内激素、炎症反应等多种因素影响而导致的皮肤黑素量增加，从而在皮肤外观上呈现出的局部颜色变黑。色斑影响了患者的面部美观，进而影响其工作及社交。随着生活水平的提高，对色斑的治疗越来越受到人们的重视，各种祛斑产品和治疗技术层出不穷，然而往往花费巨大却收效甚微。

总结现阶段治疗色斑的药品或化妆品制剂，主要存在以下问题：①剂型以传统乳膏剂为主，难以透过角质层。角质层屏障是经皮给药的最大障碍，也是限制新型经皮给药系统发展的瓶颈；②药物透皮后自由扩散，不能定位作用于黑素细胞而无法发挥最大的药效，且进入正常角质细胞的药物产生的毒性使得角质形成细胞对黑素细胞的调节紊乱，不利于色斑的治疗；③药物作用环节单一。目前色斑的治疗药物以抑制黑素生成的起始限速酶——酪氨酸酶活性为主，但色斑是由于体内微环境的变化而导致的黑素细胞过量产生黑素所致，因此对色斑的治疗仅针对细胞内黑素生成是不够的，还要注重对黑素细胞微环境的调节和治疗。

因此，有必要建立一种能克服角质层屏障的经皮给药制剂，进入皮肤后从不同环节抑制黑素的过量生成，增强药物对黑素细胞的靶向性，降低药物对正常细胞的毒副作用，从而达到有效祛斑，使肤色更均匀的目的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种经皮给药纳米制剂，该经皮给药纳米制剂是由刺鼠蛋白和油酸双修饰的载有曲酸二棕榈酸酯的经皮给药纳米制剂，该制剂既能有效穿过角质层，又能定位于表皮基底层的黑素细胞，具有很好的色斑治疗效果。

此外，还需要提供一种上述经皮给药纳米制剂的制备方法及应用。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种一种经皮给药纳米制剂，该纳米制剂含有：曲酸二棕榈酸酯、聚合物材料、刺鼠蛋白、油酸，所述聚合物材料形成纳米制剂载体，其表面修饰有刺鼠蛋白和油酸，内载有曲酸二棕榈酸酯。

所述聚合物材料为生物降解天然聚合物，可选自：壳聚糖、海藻酸钠、环糊精、普鲁兰多糖、明胶、或植物蛋白。

优选的，所述聚合物材料为壳聚糖，该壳聚糖的相对分子量为5～20kd，其脱乙酰度为70％～95％。

优选的，所述油酸对壳聚糖的氨基取代度为5％～15％。

优选的，所述曲酸二棕榈酸酯的载药量为1％～10％(W/W)。

优选的，本发明经皮给药纳米制剂的粒径应为50～350nm，因为经皮给药纳米制剂的粒径大小对其透皮效果有直接影响，若粒径过大，将难以透过角质层进入皮肤。

在本发明的另一方面，提供了一种上述经皮给药纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：

将壳聚糖溶解后与油酸(Oleic acid，OA)混合，制成油酸壳聚糖复合物；

将油酸壳聚糖复合物经振荡、超声，形成纳米粒混悬液，在该纳米粒混悬液中加入含曲酸二棕榈酸酯(Kojic dipalmitate，KD)的二甲基亚砜溶液，再经透析，得载有曲酸二棕榈酸酯的油酸壳聚糖复合物纳米粒；

将刺鼠蛋白(Agouti signaling protein，ASIP)用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化，然后与所述载有曲酸二棕榈酸酯的油酸壳聚糖复合物纳米粒混合，使刺鼠蛋白偶联于该纳米粒表面，获得刺鼠蛋白和油酸双修饰的载有曲酸二棕榈酸酯的经皮给药纳米制剂(ASIP-OA-KD NPs)。

优选的，所述刺鼠蛋白对油酸壳聚糖复合物纳米粒的接枝率为1～10μg/mg。

在本发明的另一方面，还提供了上述经皮给药纳米制剂的应用，用于制备治疗色素沉着性疾病的药物或化妆品，所述色素沉着性疾病包括雀斑、黄褐斑、黑斑、或老年斑。

本发明经皮给药纳米制剂可分散于水、凝胶或膏霜中外涂于皮肤使用。

本发明的经皮给药纳米制剂，充分利用了油酸的促透作用、刺鼠蛋白对黑素细胞的靶向性，以及刺鼠蛋白和曲酸二棕榈酸酯协同抑制黑色素分泌的能力，在用于色斑治疗时，可有效穿过角质层，浓集定位于表皮基底层的黑素细胞，既可抑制过量黑素的分泌，又避免了对色斑周围正常皮肤肤色的影响。动物实验表明，本发明经皮给药纳米制剂，具有很好的色斑治疗作用，可用于黄褐斑、雀斑等色素沉着疾病的治疗。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是本发明实施例2各实验组以UVB照射前后的色度差异值柱状图。

具体实施方式

为了克服目前传统的祛斑药品或化妆品制剂效果差的技术问题，本发明研制出了一种由刺鼠蛋白和油酸双修饰的载有曲酸二棕榈酸酯的经皮给药纳米制剂，该制剂经皮给药后，利用油酸对角质细胞间脂质的干扰来克服角质层屏障，使纳米制剂进入表皮层；在纳米制剂表面偶联的刺鼠蛋白，利用其对黑皮素受体-1的亲和力，使纳米制剂与表皮基底层的黑素细胞特异性结合；刺鼠蛋白可拮抗促黑素细胞激素(α-MSH)和促肾上腺皮质激素与黑皮素受体-1结合，抑制黑素的生成，与纳米粒中所载的抗酪氨酸酶药物——曲酸二棕榈酸酯协同作用，起到更佳的祛斑效果。

本发明的经皮给药纳米制剂含有：曲酸二棕榈酸酯、聚合物材料、刺鼠蛋白、油酸，在下述优选实施例中，聚合物材料为壳聚糖，该壳聚糖分子量为5000～20000，脱乙酰度为70％～95％。本发明经皮给药纳米制剂中，油酸对壳聚糖的氨基取代度为5％～15％，刺鼠蛋白对油酸壳聚糖纳米复合物的接枝率为1～10μg/mg，曲酸二棕榈酸酯的载药量为1％～10％(W/W)。

下面通过实施例具体阐述本发明。

实施例1刺鼠蛋白和油酸双修饰的载曲酸二棕榈酸酯的经皮给药纳米粒制备

1.油酸壳聚糖复合物的制备

精密称取壳聚糖0.8g，加入30ml pH4.7稀盐酸中搅拌溶解，加入1g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)。按照一定投料比称取油酸(OA)，溶于20ml乙醇。将上述两种溶液混合，于400r/min磁力搅拌，室温下反应48h至反应完全。将终反应液置透析袋中，透析48h，除去剩余的EDC和水溶性副产物。透析液冷冻干燥，得到油酸壳聚糖复合物。

2.载曲酸二棕榈酸酯的油酸壳聚糖复合物纳米粒(OA-KD NPs)的制备

取50mg油酸壳聚糖复合物分散于去离子水5ml中，37℃50r/min水浴振荡24h，而后在冰浴中90W探头超声2min，间歇脉冲为开1s停5s，重复操作3次，得到均匀分散的纳米粒混悬液，经0.45μm滤膜过滤除去杂质，得到产物油酸壳聚糖复合物纳米粒。超声条件下向空白纳米粒溶液(约20mg纳米粒)中缓慢滴加浓度为2％(W/V)曲酸二棕榈酸酯(KD)的二甲基亚砜溶液0.6ml，然后置于透析袋内，于500ml去离子水中透析处理24h，每6h换水一次，除去二甲亚砜，即得载曲酸二棕榈酸酯的油酸壳聚糖复合物纳米粒(OA-KD NPs)。

3.刺鼠蛋白(ASIP)与纳米粒的偶联

取刺鼠蛋白溶液100μl，分别加入EDC和NHS的100mmol/L磷酸盐缓冲液，使刺鼠蛋白的-COOH∶EDC∶NHS摩尔比为1∶5∶5，加入2ml以100mmol/L pH5.4的磷酸盐缓冲液混悬的载药油酸壳聚糖复合物纳米粒(浓度约为30mg/ml)，于室温下温和振摇20min，4℃12000r/min冷冻离心30min，分离纳米粒并用去离子水洗3次，冷冻干燥，得到刺鼠蛋白与油酸双修饰的载曲酸二棕榈酸酯的壳聚糖纳米粒(ASIP-OA-KD NPs)。

实施例2刺鼠蛋白和油酸双修饰的载曲酸二棕榈酸酯的经皮给药纳米粒体内药效评价

1.色素沉着小鼠模型的建立

健康C57BL小鼠36只，随机分成6组，每组6只，小鼠背部涂抹适量脱毛膏，放置5min后，洗去脱毛膏，涂抹适量脱毛液，于第二天开始照射UVB紫外线灯(9W)，每天30min。于照射第7天开始，在照射部位和小鼠一侧耳朵给药。

2.体内抗色素沉着药效评价

5个实验组分别为①阴性对照组(照射造模但不给药)；②载曲酸二棕榈酸酯的油酸壳聚糖纳米粒(OA-KD NPs)；③刺鼠蛋白-载曲酸二棕榈酸酯的油酸壳聚糖纳米粒(ASIP-OA-KDNPs)；④刺鼠蛋白溶液；⑤生理盐水组(空白对照)。其中ASIP-OA-KD NPs混悬液组为1mg/ml，将刺鼠蛋白溶液组浓度调整至与此组中的刺鼠蛋白浓度等同。

每天给药1次，每次给药1ml，3周后处死小鼠(在此期间每周将小鼠新生毛剃除)。取小鼠背部皮肤，使用Lab色度仪测定皮肤亮度，采用小鼠腹部无照射无给药的皮肤作为对照，以ΔL＝L_腹部-L_背部。

结果如图1所示，由图1中可知，与阴性对照组比较，OA-KD NPs、ASIP-OA-KD NPs和刺鼠蛋白溶液实验组中皮肤的亮度差值均有降低，说明在紫外线照射造成黑素沉着的过程中，该三组给药组均可抗色素沉着，其中ASIP-OA-KD NPs组的ΔL值显著小于刺鼠蛋白溶液组(P＜0.01)和OA-KD NPs组(P＜0.05)，说明ASIP-OA-KD NPs抗色素沉着的效果最好，其可能的原因是刺鼠蛋白与曲酸二棕榈酸酯产生了抑制黑色素生成的协同作用，而油酸的修饰更促进了该纳米粒的经皮渗透。

以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (8)

1.一种经皮给药纳米制剂，其特征在于，该纳米制剂含有：曲酸二棕榈酸酯、聚合物材料、刺鼠蛋白、油酸，所述聚合物材料形成纳米制剂载体，其表面修饰有刺鼠蛋白和油酸，内载有曲酸二棕榈酸酯，该曲酸二棕榈酸酯的载药量为1%～10%重量比，所述油酸对聚合物材料的氨基取代度为5%～15%，所述刺鼠蛋白对修饰有油酸的载曲酸二棕榈酸酯纳米制剂的接枝率为1～10μg/mg。

2.根据权利要求1所述的经皮给药纳米制剂，其特征在于，所述聚合物材料为壳聚糖。

3.根据权利要求2所述的经皮给药纳米制剂，其特征在于，所述壳聚糖的相对分子量为5～20kd，其脱乙酰度为70%～95%。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的经皮给药纳米制剂，其特征在于，所述经皮给药纳米制剂的粒径为50～350nm。

5.权利要求1所述经皮给药纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将壳聚糖溶解后与油酸混合，制成油酸壳聚糖复合物；

将油酸壳聚糖复合物经振荡、超声，形成纳米粒混悬液，在该纳米粒混悬液中加入含曲酸二棕榈酸酯的二甲基亚砜溶液，再经透析，得载有曲酸二棕榈酸酯的油酸壳聚糖复合物纳米粒；

将刺鼠蛋白用1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化，然后与所述载有曲酸二棕榈酸酯的油酸壳聚糖复合物纳米粒混合，使刺鼠蛋白偶联于该纳米粒表面，获得刺鼠蛋白和油酸双修饰的载有曲酸二棕榈酸酯的经皮给药纳米制剂。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述刺鼠蛋白对油酸壳聚糖复合物纳米粒的接枝率为1～10μg/mg。

7.权利要求1所述经皮给药纳米制剂的应用，其特征在于，用于制备治疗色素沉着性疾病的药物或化妆品。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述色素沉着性疾病包括雀斑、黄褐斑、黑斑、或老年斑。