CN103087021B - 一种倍半萜酯类化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种结构新颖的倍半萜酯类化合物及其制备方法和用途，该化合物是通过伪弯头曲霉（<i>Aspergilluspseudodeflectus</i>）发酵制备的，所述伪弯头曲霉的保藏单位是中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号是CGMCCNo.3550。本发明所制备的倍半萜酯类化合物能够用于制备预防或治疗PTP所介导疾病的药物。

Description

一种倍半萜酯类化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体地说涉及一种倍半萜酯化合物及其制备方法和医药用途。

背景技术

蛋白质酪氨酸的可逆磷酸化具有重要的生物学意义，是细胞生命活动的调控中心。该过程受到作用相反的两种酶的调节：蛋白质酪氨酸激酶催化蛋白质酪氨酸的磷酸化，而蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTP）使其脱磷酸化。PTP是一个大家族，按其在细胞内所处的位置可分为跨膜受体型和胞内非受体型。其中，胞内非受体型包括PTP1B、SHP2等亚型。

目前，大量的研究结果表明，PTP1B和SHP2介导多种疾病的发生和发展，尤其是糖尿病、癌症、肥胖症、骨质疏松症。

糖尿病（diabetes mellitus）是一种由遗传和环境相互作用引起的，以高血糖为特征的临床综合征。糖尿病中90%以上是由于胰岛素的相对不足或胰岛素抵抗而引起的。缓解胰岛素抵抗是临床上治疗糖尿病的重要手段。胰岛素抵抗的主要原因是胰岛素信号通路的阻断或减弱。胰岛素信号通路是由胰岛素（Insulin）、胰岛素受体（Insulin receptor，IR）和胰岛素受体底物构成的。胰岛素通过与IR结合，激活细胞内的胰岛素受体激酶（insulin receptor kinase，IRK)，再通过IRK磷酸化胰岛素受体底物（Insulin receptor substrate，IRS），从而将胰岛素信号传递下去。而人体自身产生的PTP1B通过对IRK的去磷酸化，能够对胰岛素信号通路产生阻断或减弱作用。因此，抑制PTPlB的过度表达，能够有效增强胰岛素信号的传导，缓解胰岛素抵抗，从而达到治疗糖尿病的目的。Klaman L.D等的研究证明（《Molecular and Cellular Biology》,2000,20(15),5479-5489），PTP1B基因敲除小鼠的胰岛素敏感性增强，基础代谢水平和总体能量消耗升高，体重减轻。Elchebly等报道，PTPlB基因敲除鼠在表型上是健康的，同时具有较低的空腹血胰岛素和血糖水平；其在胰岛素耐量实验中血糖明显下降。且上述增敏效应具有组织特异性，它可增加骨骼肌对葡萄糖的摄取，但对脂肪组织无明显影响。更加令人振奋的是，PTPlB基因敲除鼠在高脂饮食喂养时不会出现肥胖或体重增加。上述研究结果表明：PTPlB抑制剂不仅能够用于治疗糖尿病，而且有望成为治疗肥胖症的新选择。

另外，最新的研究表明，PTP1B可以激活癌症的发生和发展途径，特别是乳腺癌、肺癌和结肠癌。PTPIB的抑制剂能够对上述疾病产生治疗作用（Dube N等，《Proc Natl Acad Sci》,2004,101:1834-1839；Bentires-Alj M,等,《Cancer Res,2007》,67:2420-2424；Zhu S,等,《Cancer Res》,2007,67:10129-10137）。

此外，另一种蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP2同样参与人体细胞内的多种信号传递过程。SHP2的抑制剂同样具有胰岛素增敏、增强新陈代谢、抑制肿瘤细胞增殖分化的作用（Neel B.G.,等,《Trends Biochem Sci》,2003,28(6):284-293；Cunnick J.M.,等,《J Biol Chem》,2002,277(11):9498-9504；Rebecca J.C.等,《Blood》,2008,109(3):862-867）。

因此，PTP1B、SHP2的抑制剂，能够用于预防或治疗PTP所介导疾病，特别是癌症、糖尿病、肥胖症。开发具有PTP1B、SHP2抑制作用的新化合物成为目前医药学领域的研究热点之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有PTP抑制作用的倍半萜酯化合物，以及提供该化合物的制备方法和医药用途。

为实现本发明目的，本发明提供了一种倍半萜酯化合物，其结构如下：

伪弯头酯E；

或

伪弯头酯F。

本发明还提供了一种倍半萜酯化合物的用途，具体地说，是结构如式（Ⅰ）或式（Ⅱ）所示的倍半萜酯化合物或含有该倍半萜酯化合物的药物组合物在制备治疗PTP1B介导的疾病的药物中的应用。

式（Ⅰ）中，

R₁、R₂均为-CH₂OH；

R₃是-(CH=CH)nCH₃或-(CH=CH)nCHO，n为0～2的自然数；

式（Ⅱ）中，

R₁是-CH₂、-CHOH或-C=O；

R₂是-CH₂、-CHOH、-CHOCH₃或-C=O；

R₃是-(CH=CH)nCH₃、或-(CH=CH)nCHO，n为0～3的自然数。

本发明提供了上述倍半萜酯化合物的制备方法，该方法是采用伪弯头曲霉（Aspergillus psedodeflectus）发酵制备所述倍半萜酯化合物。具体地说，包括以下步骤：

a、将伪弯头曲霉菌孢子悬液以5%的接种量接种于种子培养基上（20mL/100mL摇瓶），于26℃，220rpm振摇培养3d；得到一级种子液；将上述一级种子液以5%的接种量接种于种子培养基上（250mL/1000mL摇瓶），于27℃，220rpm培养48h，得到二级种子液；所述伪弯头曲霉（Aspergilluspsedodeflectus）的保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏号是CGMCCNo.3550，保藏日期为：2009年12月28日；其中所述种子培养基为：称取淀粉0.2kg，葡萄糖0.1kg，热榨黄豆饼粉0.02kg，麦牙粉0.06kg，酵母粉0.03kg，NaCl0.02kg，MgSO₄.7H₂O0.01kg，CaCO₃0.02kg，加水至10L，按照常规方法制备成种子培养基，调节pH至7.0。

将上述伪弯头曲霉（Aspergillus psedodeflectus）二级种子液以3%的接种量接种于发酵培养基中，于22-30℃，220rpm培养3-7天，得到发酵液。所述发酵培养基，其配方以质量体积比浓度计为淀粉3%，葡萄糖3%，热榨黄豆饼粉1.0%，棉籽粉1%，NaCl0.1%，KH₂PO₄0.5%，MgSO₄0.05%，CaCO₃0.2%，其余为水，所述发酵培养基的pH值为6.5。

b、对发酵液进行离心或过滤，分离得到固态菌体和上清液，向固态菌体中加入有机溶剂浸泡，过滤，滤液浓缩除去有机溶剂后与上清液合并得到浸提液；

c、将浸提液上大孔树脂柱，用水、有机溶剂的混合液进行梯度洗脱，收集洗脱液，得到活性组分；对所述活性组分进行纯化处理，得到所述倍半萜酯化合物；

所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中任意一种；优选乙醇。

上述制备方法中，c步骤所述梯度洗脱，具体方法如下：

采用水-乙醇二元系梯度洗脱。各梯度以体积百分比计：水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇和100%乙醇，收集各梯度洗脱液，根据HPLC检识的结果，将水和20%乙醇对应的洗脱液合并浓缩，得到流分Ⅰ；40%和60%乙醇对应的洗脱液合并浓缩，得到流分Ⅱ；80%和100%乙醇对应的洗脱液合并浓缩，得到流分Ⅲ。流分Ⅰ不含目的化合物，弃去，得到两个活性组分：流分Ⅱ、流分Ⅲ。

c步骤所述纯化处理，具体方法如下：

流分Ⅱ通过ODS中压柱色谱（2.6×46cm）进一步分离，以甲醇-水二元系梯度洗脱，以体积比浓度为20%、30%、40%、50%和60%的甲醇各洗脱1个柱床（1倍柱体积），收集洗脱液，TLC检识，根据检识结果合并相似的洗脱液后得到流分ⅡA、流分ⅡB、流分ⅡC。流分ⅡA不含有目的化合物；流分ⅡB通过制备型HPLC（流速:16.0mL/mim,流动相：50%CH₃CN-含0.05%CF₃COOH的水）分离，得到伪弯头酯D（Rt:8.4min）、伪弯头酯B（Rt:12.0min）、伪弯头酯A（Rt:15min）；流分ⅡC通过制备级薄层色谱分离处理（体积比为8:1的氯仿:甲醇混合液为展开剂），得到焦曲霉酯G、伪弯头酯C。

流分Ⅲ通过硅胶柱色谱（2.6×46cm）进一步分离，氯仿-甲醇二元系梯度洗脱，以体积比浓度为100%、99%、98%、95%、90%、80%的氯仿各洗脱2个柱床(2倍柱体积）,收集洗脱液，TLC检识，根据检识结果合并相似的收集液后得到流分ⅢA、流分ⅢB、流分ⅢC。流分ⅢA通过Sephadex LH-20凝胶柱色谱（2.6×60cm）分离，体积比为1:1的氯仿、甲醇混合液为洗脱液，收集洗脱液，TLC检识，合并含有目的化合物的部分得到流分ⅢA-1。流分ⅢA-1通过制备型HPLC分离（流速:16.0mL/mim,流动相：80%CH₃CN-水），得到3个化合物，分别为化合物H（Rt：8.2min）、伪弯头酯E（Rt：11.0min,36.5mg）伪弯头酯F（Rt：13.0min）。流分ⅢB，通过HPLC制备（流速:16.0mL/mim,流动相：85%CH₃CN-含0.05%CF₃COOH的水）得到2个化合物，分别为化合物I（Rt:6.2min）和化合物J（Rt:7.6min）。

上述制备方法中，a步骤所采用的发酵培养基，其配方以质量体积比浓度计，最好为：淀粉3%，葡萄糖3%，热榨黄豆饼粉1.0%，棉籽粉1%，NaCl0.1%，KH₂PO₄0.5%，MgSO₄0.05%，CaCO₃0.2%，其余为水，该发酵培养基的pH值最好为6.5。

所述伪弯头曲霉孢子悬液可按照常规方法制备。

上述制备方法中，c步骤所采用的大孔树脂，可选择D312、D101、XAD-16、XAD-1600、HZ816、HZ818、AB-8中任意一种。

除上述制备方法外，本发明所述倍半萜酯化合物还可以按照常规方法，通过合成、半合成或生物转化的方式获得。

本发明还提供了上述倍半萜酯化合物的一种医药用途：将该化合物用于制备预防或治疗PTP所介导疾病的药物。

本发明所述PTP所介导疾病，具体地说是指癌症、糖尿病或肥胖症。

本发明所述癌症，尤其是指乳腺癌、肺癌或结肠癌。

涉及上述医药用途时，根据本领域技术人员的公知常识，不仅是本发明所述倍半萜酯化合物本身，其药学上可接受的盐、异构体、酯或前体药物都可以具有与其相同或相近的医药用途。上述药学上可接受的盐包括钠、钾、钙盐，以及胺盐；所述胺包括氨、烷基胺、苯胺和氨基酸；所述氨基酸包括精氨酸、赖氨酸。上述药学上可接受的盐还可以形成溶剂化物，并具有与之相同或相近的医药用途；所述溶剂化物包括水合物、醇合物。上述前药在体内代谢变化后能够释放出本发明所述倍半萜酯化合物。

本发明所述倍半萜酯化合物的医药用途，具体来说是通过以下方法实现的：

按照常规方法制备药物组合物，其包含上述倍半萜酯化合物和可药用载体。其中，所述倍半萜酯化合物的质量百分含量为0.1-99%，优选5-75%。该药物组合物按照给药途径不同，可分为口服制剂、舌下或颊给药制剂、吸入制剂、注射剂、直肠给药制剂、经皮给药制剂等。其中，优选口服制剂。

当制备口服制剂时，单位剂型中所述倍半萜酯化合物的含量为1-500mg，优选1-250mg。可选择的剂型包括片剂、丸剂、锭剂、胶囊剂、液体、凝胶、糖浆剂、浆液、悬液等。其中，优选片剂、胶囊剂。可药用载体包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、藻酸、藻酸钠、滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶、脂肪油、液体石蜡、液体聚乙二醇等。

当制备舌下或颊给药制剂时，可以采取片剂或糖锭剂的形式，按照常规方法配制。

当制备吸入制剂时，可以采取加压气雾剂的形式。适合的推进剂包括二氯二氟甲烷、三氯氟代甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳。可药用载体包括乳糖、淀粉。

当制备注射剂时，单位剂型中所述倍半萜酯化合物的含量为0.1-100mg，优选0.1-25mg。可选择的剂型包括油性注射液、水性注射液或冻干粉针剂。可药用载体包括脂肪油、油酸乙酯、甘油三酯、脂质体、羧甲基纤维素钠、葡聚糖、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、藻酸、藻酸钠。

当制备直肠给药制剂时，可以采取栓剂或灌肠剂的形式。可药用载体包括可可脂、甘油酯。

当制备经皮给药制剂时，可以采取贴剂的形式。可药用载体包括聚丙烯酸钠、聚丙烯酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇。

上述药物组合物在应用时，应达到有效治疗剂量，并根据疾病的性质、患者的年龄、体重进行合理调整。通常，所述倍半萜酯化合物的给药剂量为0.01-100mg/kg体重，优选为0.1-10mg/kg体重，更优选的是1-5mg/kg体重。给药剂量和频率最终应由医生决定。

具体实施方式

下面用具体实施例来进一步说明本发明的内容，但并不以任何方式意味着对本发明进行限制。下列实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。

下列实施例所涉及的部分原材料的规格型号如下：

紫外光谱仪：Pharmacia公司Ultrospec2100Pro型；

核磁共振仪：Varian公司Inova500或Bruker AvanceⅢ500（氘代甲醇为溶剂时溶剂残留为内标，其他溶剂以TMS为内标）

低分辨质谱仪：Waters LCMS ZQ2000(ESI mode)；Xevo QT MS

高分辨质谱仪：Bruker Daltonics公司ApexⅡFT-ICRMS。

中压层析系统：Buchi公司

高压液相系统（分析）：Waters公司，2个515型泵，996检测器

高压液相系统（制备）：Waters公司，600型泵，2487检测器

酶标仪：Perkin Elmer公司Victor²1420Multilabel Counter

分析型色谱柱：Chromasil ODS column(4.6×250mm,10μm)

制备色谱柱：Phenomenex ODS column(21.2×250mm,10μm)

反相C18层析介质：40-60μm,Merck公司

层析硅胶：300～400目，青岛海洋化工厂

层析硅胶板：硅胶60F254(涂层厚度0.25mm,20×20cm,Merck公司)

Sephadex LH-20（美国GE公司）

色谱级甲醇和乙腈购自德国Merck公司，其他试剂均为分析纯，购自北京化学试剂厂。

实施例1倍半萜酯化合物的制备

按照以下步骤制备倍半萜酯化合物：

a、将伪弯头曲霉孢子悬液以5%的接种量接种于种子培养基上（20mL/100mL摇瓶），于26℃，220rpm振摇培养3d，得到一级种子液；将上述一级种子液以5%的接种量接种于种子培养基上（250mL/1000mL摇瓶），于27℃，220rpm培养48h，得到二级种子液。上述种子培养基的配制方法为：称取淀粉0.2kg，葡萄糖0.1kg，热榨黄豆饼粉0.02kg，麦牙粉0.06kg，酵母粉0.03kg，NaCl0.02kg，MgSO₄.7H₂O0.01kg，CaCO₃0.02kg，加水至10L，按照常规方法制备成种子培养基，调节pH至7.0。

上述伪弯头曲霉（Aspergillus psedodeflectus）二级种子液以3%的接种量接种于发酵培养基中，于26℃，220rpm培养6天，得到发酵液。所述的发酵培养基，其配方以质量体积比浓度计为：淀粉3%，葡萄糖3%，热榨黄豆饼粉1.0%，棉籽粉1%，NaCl0.1%，KH₂PO₄0.5%，MgSO₄0.05%，CaCO₃0.2%，其余为水。该发酵培养基的pH值为6.5。

其中伪弯头曲霉孢子悬液的制备可按照常规方法制备。如将伪弯头曲霉（Aspergillus psedodeflectus）菌种接种于斜面培养基上，培养14d，将培养所得孢子用15%甘油冲洗下，得到孢子悬液，保存在-80℃冰箱备用。伪弯头曲霉（Aspergillus psedodeflectus）的保藏单位是中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号是CGMCC No.3550。

所述的斜面培养基（PDA培养基）按照常规方法制备。

b、取上述发酵液16L，3000rpm离心15min，分别收集固态菌体和上清液。固态菌体用乙醇浸泡两次（2.0小时/次），离心，分离所得液体浓缩除去乙醇后与上清液合并，得到浸提液。

c、浸提液通过大孔树脂柱（树脂XAD1600,3.5×45cm）吸附，采用水-乙醇二元系梯度洗脱。各梯度以体积百分比计：水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇和100%乙醇，收集各梯度洗脱液，根据HPLC检识的结果，将水和20%乙醇对应的洗脱液合并浓缩，得到流分Ⅰ；40%和60%乙醇对应的洗脱液合并浓缩，得到流分Ⅱ；80%和100%乙醇对应的洗脱液合并浓缩，得到流分Ⅲ。流分Ⅰ不含目的化合物，弃去，得到两个活性组分：流分Ⅱ、流分Ⅲ。

对上述流分Ⅱ、流分Ⅲ分别进行纯化处理：

流分Ⅱ通过ODS中压柱色谱（2.6×46cm）进一步分离，以甲醇-水二元系梯度洗脱，以体积比浓度为20%、30%、40%、50%和60%的甲醇各洗脱1个柱床（100ml），收集洗脱液（15mL/管），TLC检识，根据检识结果合并相似的洗脱液后得到流分ⅡA、流分ⅡB、流分ⅡC。流分ⅡA不含有目的化合物；流分ⅡB通过制备型HPLC（流速:16.0mL/mim,流动相：50%CH₃CN-含0.05%CF₃COOH的水）分离，得到3个化合物，分别为伪弯头酯D（Rt:8.4min,5.6mg）、伪弯头酯B（Rt:12.0min,7.3mg）、伪弯头酯A（Rt:15min,125.4mg）；流分ⅡC通过制备级薄层色谱分离处理（体积比为8:1的氯仿:甲醇混合液为展开剂），得到2个化合物，分别为焦曲霉酯G28.4mg（原Ustusolates E）、伪弯头酯C35.6mg。

流分Ⅲ通过硅胶柱色谱（2.6×46cm）进一步分离，氯仿-甲醇二元系梯度洗脱，以体积比浓度为100%、99%、98%、95%、90%、80%的氯仿各洗脱2个柱床(200ml）,收集洗脱液（15mL/管），TLC检识，根据检识结果合并相似的收集液后得到流分ⅢA、流分ⅢB、流分ⅢC。流分ⅢA通过Sephadex LH-20凝胶柱色谱（2.6×60cm）分离，体积比为1:1的氯仿、甲醇混合液为洗脱液，收集洗脱液（8mL/管），TLC检识，合并含有目的化合物的部分得到流分ⅢA-1。流分ⅢA-1通过制备型HPLC分离（流速:16.0mL/mim,流动相：80%CH₃CN-水），得到3个化合物，分别为化合物H（Rt：8.2min,53.6mg）、伪弯头酯E（Rt：11.0min,36.5mg）伪弯头酯F（Rt：13.0min,27.7mg）。流分ⅢB，通过HPLC制备（流速:16.0mL/mim,流动相：85%CH₃CN-含0.05%CF₃COOH的水）得到2个化合物，分别为化合物I（Rt:6.2min,40.3mg）和化合物J（Rt:7.6min,67.3mg）。

所得上述各化合物的化学结构、理化性质和核磁数据如下：

(1)伪弯头酯A：

HRFAB-MS m/z387.2139[M+Na]⁺，分子式为：C₂₁H₃₂O₅，UVλ_max(in MeOH):271nm；¹³C NMR(125MHz，CD₃OD)：168.4，146.9，144.4，141.1，130.9，124.8，120.3，76.2，68.1，63.9，63.2，46.4，45.6，41.9，34.7，33.4，33.3，25.3，19.6，19.4，18.7；¹H NMR(500MHz，CD₃OD)：7.15(1H,dd,15.3,10.6)，6.21(1H,dd,14.9,10.9)，6.11(1H,m,14.9,6.4)，5.86(1H,d,5.1)，5.71(1H,d,15.3)，5.61(1H,t,4.7)，4.18(2H,s)，3.65(2H,m)，1.97(1H,d,4.3)，1.91(1H,m)，1.79(3H,d,6.4)，1.45(2H,m)，1.42(1H,m)，1.30(1H,m)，1.22(1H,m)，1.17(3H,s)，1.06(3H,s)，0.92(3H,s)。(2)伪弯头酯B：

HRFAB-MS m/z401.2139[M+Na]⁺，，分子式为C₂₁H₃₀O₆，¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：9.67(1H,d,7.7)，7.36(1H,dd,15.4,11.3)，7.17(1H,dd,15.4,11.3)，6.42(1H,dd,15.4,7.7)，6.28(1H,d,15.4)，5.92(1H,d,5.0)，5.71(1H,t,4.6)，4.36(1H,t,23.1)，4.17(1H,d,12.8)，3.8(2H,m)，2.03(1H,m)，2.01(1H,m)，1.47(2H,m)，1.43(1H,m)，1.31(1H,m)，1.23(1H,m)，1.11(3H,s)，1.09(3H,s)，1.01(3H,s)；¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)：192.8，164.7，147.0,141.8，140.6，137.1，130.1，126.5，75.1，67.5，66.4，62.4，45.1，44.1，40.5，33.8，32.7，31.8，24.8，18.4，18.2。

(3)伪弯头酯C：

HRFAB-MS m/z425.1935[M+Na]⁺，分子式为C₂₃H₃₀O₆，¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：7.23(1H,dd,13.8)，6.51(1H,m)，5.91(1H,m)，5.88(1H,m)，5.84(1H,m)，5.73(1H,s)，4.97(1H,d,12.5)，4.74(1H,d,12.5)，3.14(1H,d,7.1)，2.97(1H,dd,5.2,1.9)，2.03(1H,d,4.7)，1.61(2H,m)，1.42(1H,m)，1.38(3H,d,5.2)，1.28(1H,m)，1.26(2H,m)，1.19(3H,s)，1.12(3H,d,2.3)，1.00(3H,s)；¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)：174.9，165.8，143.8，139.9，134.9，130.8，123.8，121.8，74.6，69，66.4，58.4，57.4，44.8，44.7，37.8，33.8，32.4，30.3，24.7，18.4，17.7，17.5。

(4)伪弯头酯D：

HRFAB-MS m/z399.2139[M+Na]⁺，分子式为C₂₁H₂₈O₆；¹H NMR(CD₃OD，500MHz)：9.68(1H,d,7.7)，7.39(1H,dd,15.3,11.2)，7.18(1H,dd,15.3,11.3)，6.43(1H,dd,15.3,7.7)，6.30(1H,d,15.3)，5.76(1H,s)，5.72(1H,m)，5.39(1H,s)，4.63(1H,dt,13.4,4.4)，4.26(1H,dt,13.4,4.4)，2.12(1H,d,4.4)，1.63(2H,m)，1.42(1H,m)，1.39(1H,m)，1.28(2H,m)，1.24(1H,s)，1.14(1H,s)，1.01(1H,s)；¹³C NMR(CD₃OD，125MHz)：192.7，164.7，147.0，142.0，140.8，137.2，129.9，119.4，98.0，77.6，67.9，66.5，45.6，44.6，38.3，33.6，32.8，31.9，24.7，18.8，17.9。

(5)伪弯头酯E:

UV(MeOH)λmax(logε)303(4.54)nm，ESI-MS m/z425[M+Na]⁺,827[2M+Na]⁺，分子式为C₂₄H₃₄O₅。¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ166.4,145.4,143.7,141.4,135.4,131.2,127.5,123.3,120.3,103.1,81,72.8,66.7,55.6,45.4,44.7,38.5,33.6,33.1,33.1,24.6,19.6,18.6,18.3;δ_H(500MHz,CDCl₃)7.24(1H,dd,J=15.5,11.5),6.51(1H,dd,J=15.0,11.0),6.19(1H,dd,J=15.0,11.0),6.16(1H,m),5.96(1H,q,J=6.5),5.92(1H,d,J=3.9),5.81(1H,d,J=15.3),5.77(1H,t,J=4.3),5.42(1H,s),4.06(1H,d,J=9.3),3.74(1H,d,J=9.3),3.44(3H,s),2.16(1H,td,J=13.4,4.2),2.08(1H,d,J=4.7),1.83(3H,d,J=6.5),1.75(1H,m),1.51(1H,m),1.39(1H,d,J=13.0),1.33(1H,dd,J=13.0,2.5),1.26(1H,m),1.22(3H,s),1.14(3H,s),1.01(3H,s)

(6)伪弯头酯F:

UV(MeOH)λmax(logε)303(4.54)nm，ESI-MS m/z425[M+Na]⁺,827[2M+Na]⁺，分子式为C₂₄H₃₄O₅。¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ166.3,145.4,141.9,141.5,135.5,131.2,127.5,121.3,120.1,104.2,78.4,75.9,66.8,54.8,45.0,44.6,38.2,33.6,32.7,32.3,24.5,19.3,18.6,18.1;δ_H(500MHz,CDCl₃)7.25(1H,dd,J=15.0,11.0),6.52(1H,dd,J=15.0,11.0),6.19(1H,dd,J=15.0,11.0),6.16(1H,m),5.96(1H,dq,J=6.5),5.90(1H,d,J=4.1),5.82(1H,d,J=15.3),5.75(1H,t,J=4.3),5.17(1H,s),4.21(d,J=9.7,1H),3.94(d,J=9.7,1H),3.41(3H,s),2.32(1H,m),2.23(1H,d,J=4.7),1.83(3H,d,J=6.5),1.67(1H,m),1.52(1H,m),1.44(1H,m),1.33(1H,m),1.19(1H,m),1.15(3H,s),1.13(3H,s),1.00(3H,s)。

(7)焦曲霉酯G

HRFAB-MS m/z397.1625[M+Na]⁺，分子式为C₂₁H₂₆O₆，¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：9.68(1H,d,7.7)，7.41(1H,dd,15.5,11.1)，7.18(1H,dd,15.4,11.5)，6.44(1H,dd,15.6,7.7)，6.31(1H,d,15.5)，5.93(1H,s)，5.77(1H,brs)，4.98(1H,dt,12.5,2.5)，4.75(1H,d,12.5)，2.12(1H,m)，2.07(1H,d,5.0)，1.72(1H,m)，1.71(1H,m)，1.61(1H,m)，1.43(1H,m)，1.34(1H,m)，1.20(3H,s)，1.14(3H,s)，1.01(3H,s)；¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)：192.8，174.7，164.6，146.7，141.2，137.5，135.4，129.5，123.2，74.6，69.0，67.3，44.8，44.7，37.8，33.9，32.4，30.2，24.8，18.4，17.7。

(8)化合物H

化学名称为：(2′E,4′E,6′E)-6β-(1′-carboxyocta-2′,4′,6′-triene)-11,12-epoxy-9,11-dihydroxy-drim-7-ene。

UV(MeOH)λmax(logε)303(4.55)nm，ESI-MS m/z387[M-H]^-,447[M+CH₃COO]^-,411[M+Na]⁺,分子式为C₂₃H₃₂O₅。δ_H(500MHz,CDCl₃)7.25(1H,dd,J=15.0,11.0),6.54(1H,dd,J=15.0,11.0),6.23–6.13(2H,m),5.96(1H,dq,J=14.9,7.0),5.82(1H,d,J=15.5),5.68～5.69(2H),δ5.39(1H,s),4.62(1H,d,J=13.0),4.22(1H,d,J=13.0),2.10(1H,d,J=4.5),1.83(3H,d,J=7.0),1.24(3H,s),1.14(3H,s),0.99(3H,s)。

(9)化合物I

化学名称为：(2′E,4′E,6′E)-6β-(1′-carboxyocta-2′,4′,6′-triene)-9α-hydroxy-drim-7-ene-11,12-olide。

UV(MeOH)λmax(logε)304(4.56)nm，ESI-MS m/z385[M-H]^-,445[M+CH₃COO]^-，分子式为C₂₃H₃₀O₅，¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ175.1,166.4,145.9,141.9,135.8,135.0,131.1,127.2,123.6,119.5,74.6,69.0,66.2,44.74,44.68,37.8,33.8,32.4,30.1,24.7,18.6,18.4,17.7;δ_H(500MHz,CDCl₃)7.26(1H,dd,J=14.8,10.8),6.55(1H,dd,J=14.8,10.8),6.25–6.12(2H,m),5.98(1H,dq,J=14.9,7.0),5.89(1H,m),5.82(1H,d,J=15.3),5.71(1H,t,J=1.5),4.99–4.96(1H,m),4.73(1H,d,J=12.4),2.08～2.03(2H,m),1.84(3H,d,J=6.6),1.78(1H,m),1.70(1H,m),1.59(1H,m),1.42(1H,m),1.31(1H,m),1.19(3H,s),1.13(3H,s),0.99(3H,s)。

(10)化合物J

化学名称为：(2′E,4′E,6′E)-6β-(1′-carboxyocta-2′,4′,6′-triene)-11,12-epoxy-9-hydroxydrim-7-ene

UV(MeOH)λmax(logε)：303(4.57)nm，ESI-MS m/z371[M-H]^-,431[M+CH₃COO]^-，分子式为C₂₃H₃₂O₄。¹³C NMR(126MHz,CD₃OD)δ168.2,146.9,144.3,143.0,136.5,132.5,128.7,124.9,121.1,76.2,68.1,64.0,63.2,46.4,45.5,41.9,34.7,33.4,25.3,19.6,19.5,18.7;δ_H(500MHz,CD₃OD)7.20(1H,dd,J=15.2,11.3),6.52(1H,dd,J=14.8,10.7),6.25–6.12(2H,m),5.94(1H,dq,J=14.9,7.1),5.86(1H,d,J=5.1),5.78(1H,d,J=15.2),5.61(1H,t,J=4.6),4.19(2H,s),3.66(2H,d,J=5.1),1.97(1H,d,J=4.2),1.92(1H,dd,J=14.0,4.5),1.76(3H,d,J=6.5),1.67(1H,dt,J=13.5,2.5),1.45(2H,m),1.30(1H,d,J=15.5),1.23(1H,d,J=15.5),1.18(3H,s),1.07(3H,s),0.92(3H,s)。

实施例2倍半萜酯化合物的制备

按照以下步骤制备倍半萜酯化合物：

a、按照实施例1所述方法得到二级种子培养液，以3%的接种量接种于装有20L发酵培养基的发酵罐中，于28℃，220rpm培养5天，得到发酵液。

其中的发酵培养基可按照实施例1所述方法制备。

上述发酵液20L，3000rpm离心15min，分别收集固态菌体和上清。固态菌体用2倍体积的70%浸泡两次（2.0小时/次），离心分离得到浸提液，浓缩除去丙酮后和上清合并，通入大孔树脂柱（树脂AB-8,3.5×50cm）吸附。

其余分离方法、步骤按照实施例1所述方法进行。由此得到与实施例相同的化合物。其与实施例1相比较效率更高。

实施例3PTPlB、SHP2的抑制活性测定

PTP1B和SHP2均为利用基因工程方法在大肠杆菌中表达后，经亲和层析纯化获得的活性人重组蛋白质酪氨酸磷酸酶。

PTPlB、SHP2抑制活性的测定方法如下：将实施例1制备的倍半萜酯化合物稀释后加入到96孔板中，并分别加入每孔100μl含0.5nM的PTPlB或SHP2酶蛋白的0.01M NaAc-HAc pH6.0酶反应缓冲液，室温下孵育15分钟后，加入100μl含5mM对硝基苯磷酸二钠(pNPP)反应底物的0.01M NaAc-HAc pH6.0，1M的EDTA钠盐缓冲液。37℃反应保温30min，加0.2M NaOH终止反应，用酶标仪测定405nm下的光吸收变化。

按以下公式计算抑制率：

抑制率=(1-实验组吸光度平均值/空白对照组吸光度平均值)×100%。

抑制活性的评价标准：

IC50值为抑制率为50%时的倍半萜酯化合物浓度（μg/ml）

所述倍半萜酯化合物的抑制活性如表1所示。

表1

上述结果表明，本发明制备的倍半萜酯化合物具有显著的PTP抑制活性，可用于制备预防或治疗PTP所介导疾病的药物。

实施例4具有PTP抑制作用的药物的制备

称取10g实施例1制备的倍半萜酯化合物，加入蔗糖50g、糊精100g，混匀后加乙醇制成湿颗粒，干燥，加入微粉硅胶2g，再次混匀，装入胶囊壳，制成具有PTP抑制作用的药物100粒。

Claims (7)

1.结构如下所示的倍半萜酯化合物：

或

2.权利要求1所述倍半萜酯化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a、将伪弯头曲霉菌孢子悬液以5％的接种量接种于种子培养基上，于26℃，220rpm振摇培养3-5d；得到一级种子液；将上述一级种子液以5％的接种量接种于种子培养基上，于27℃，220rpm培养48h，得到二级种子液；所述伪弯头曲霉(Aspergillus pseudodeflectus)的保藏单位是中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号是CGMCC No.3550；其中所述种子培养基为：称取淀粉0.2kg，葡萄糖0.1kg，热榨黄豆饼粉0.02kg，麦牙粉0.06kg，酵母粉0.03kg，NaCl0.02kg，MgSO₄.7H₂O 0.01kg，CaCO₃ 0.02kg，加水至10L，调节pH至7.0；

将上述伪弯头曲霉(Aspergillus pseudodeflectus)二级种子液以3％的接种量接种于发酵培养基中，于22-30℃，220rpm培养3-7天，得到发酵液；所述发酵培养基其配方以质量体积比浓度计为淀粉3％，葡萄糖3％，热榨黄豆饼粉1.0％，棉籽粉1％，NaCl 0.1％，KH₂PO₄ 0.5％，MgSO₄ 0.05％，CaCO₃ 0.2％，其余为水；发酵培养基的pH值为6.5；

b、对发酵液进行离心或过滤，分离得到固态菌体和上清液，向固态菌体中加入有机溶剂浸泡，过滤，滤液浓缩除去有机溶剂后与上清液合并得到浸提液；

c、将浸提液上大孔树脂柱，用水、有机溶剂的混合液进行梯度洗脱，收集洗脱液，得到活性组分；对所述活性组分进行纯化处理，得到所述倍半萜酯化合物；

所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中任意一种。

3.根据权利要求2所述倍半萜酯化合物的制备方法，其特征在于：所述大孔树脂为D312、D101、XAD-16、XAD-1600、HZ816、HZ818、AB-8中任意一种。

4.根据权利要求2所述倍半萜酯化合物的制备方法，其特征在于：所述a步工序为：将伪弯头曲霉菌孢子悬液以5％的接种量接种于种子培养基上，于26℃，220rpm振摇培养3d；得到一级种子液；将上述一级种子液以5％的接种量接种于种子培养基上，于27℃，220rpm培养48h后，以3％的接种量接种于装有20L上述发酵培养基的发酵罐中，于22-30℃，220rpm培养3-7天，得到发酵液；其中所述种子培养基为：称取淀粉0.2kg，葡萄糖0.1kg，热榨黄豆饼粉0.02kg，麦牙粉0.06kg，酵母粉0.03kg，NaCl0.02kg，MgSO₄.7H₂O 0.01kg，CaCO₃ 0.02kg，加水至10L，按照常规方法制备成种子培养基，调节pH至7.0。

5.权利要求1所述倍半萜酯化合物在制备预防或治疗PTP所介导疾病的药物中的应用。

6.根据权利要求5所述倍半萜酯化合物在制备预防或治疗PTP所介导疾病的药物中的应用，其特征在于：所述PTP所介导疾病是癌症、糖尿病或肥胖症。

7.根据权利要求6所述倍半萜酯化合物在制备预防或治疗PTP所介导疾病的药物中的应用，其特征在于：所述癌症是乳腺癌、肺癌或结肠癌。