CN103063829A - 一种冻存液 - Google Patents
一种冻存液 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103063829A CN103063829A CN2012105604780A CN201210560478A CN103063829A CN 103063829 A CN103063829 A CN 103063829A CN 2012105604780 A CN2012105604780 A CN 2012105604780A CN 201210560478 A CN201210560478 A CN 201210560478A CN 103063829 A CN103063829 A CN 103063829A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stock solution
- frozen stock
- bsa
- standard protein
- cryopreserving liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明是一种冻存液，属于生物体外诊断试剂技术领域，该冻存液以PBST缓冲液作为溶剂，BSA和海藻糖作为溶质；所述PBST缓冲液中的磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，Tween20体积分数为1‰，pH=7.2-7.4，所述BSA的质量分数为0.5%-10%，所述海藻糖的质量分数为5%-30%。本发明标准蛋白在进行常规的冷冻步骤前先用所述冻存液进行溶解，在冻存液的保护下，再通过真空冷冻干燥对标准蛋白进行固化保存，可以保护标准蛋白，使蛋白活性稳定。
Description
技术领域
本发明是一种冻存液，属于生物体外诊断试剂技术领域。
背景技术
酶联免疫吸附（ELISA）实验因其灵敏度高，样本容易获得，操作简单已成为国际公认的蛋白定量金标准。ELISA试剂盒制备的关键技术之一就是标准品的制备。目前ELISA标准品的保存方法有甘油-20度保存法和真空冷冻干燥法。甘油低温保存，蛋白活性通常可保持6个月至1年。常规真空冷冻干燥，蛋白活性能够保持两年，但这不能满足ELISA试剂盒长期保存的需要，标准品需要更长的蛋白活性保持时间。
近年来，传统ELISA标准品的制备过程大都使用真空冷冻干燥法，但没有使用专门用于ELISA标准品制备的冻存液。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能使ELISA标准品在4度保存3年以上，蛋白活性保持在99.5%以上，蛋白活性变异在1%以内的冻存液。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是该冻存液以PBST缓冲液作为溶剂，BSA和海藻糖作为溶质；所述PBST缓冲液中的磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，Tween20体积分数为1‰，pH=7.2-7.4，所述BSA的质量分数为0.5%-10%，所述海藻糖的质量分数为5%-30%。
作为优选，所述PBST缓冲液PH=7.3，BSA的质量分数为10%，海藻糖的质量分数为30%。
本发明标准蛋白在进行常规的冷冻步骤前先用所述冻存液进行溶解，在冻存液的保护下，再通过真空冷冻干燥对标准蛋白进行固化保存，可以保护标准蛋白，使蛋白活性稳定。
本发明与现有技术相比具有的优点是：用该冻存液对ELISA标准蛋白进行真空冷冻干燥后制得的标准品可以在4度条件下保存，保存时间更长，蛋白活性保持水平更高，蛋白活性变异更少。增加了ELISA试剂盒的保存时间和稳定性，减少了ELISA试剂盒因标准品活性降低或丧失而报废，减少经济损失。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。
实施例1：以Human IL-6标准蛋白为例，采用本发明所述冻存液进行真空冷冻干燥得到Human IL-6 标准品的步骤如下：
a、在磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，Tween20体积分数为1‰，pH=7.3的PBST缓冲液中加入BSA和海藻糖，使BSA的质量分数为10%，海藻糖的质量分数为30%，得到冻存液。
b、将所述冻存液用0.22um微孔滤膜抽滤，得到抽滤冻存液；
c、将Human IL-6标准蛋白用所述抽滤冻存液稀释至目的浓度，得到Human IL-6标准浓度蛋白溶液；
d、将所述Human IL-6标准浓度蛋白溶液移至2ml的聚丙烯塑料管，每管存放100ul，用铝箔纸封口后-80度过夜；
e、过夜后用注射器针头在铝箔纸上扎3个小孔，10pa以内真空冷冻干燥8小时，至完全干燥，得到Human IL-6 标准品；
f、除去铝箔纸，拧紧管盖，贴标签，4度保存。
上述Human IL-6 标准品经过37度加速试验，可以保存28天。根据阿伦尼乌斯公式结论，37度保存1天相当于4度保存48天，因此得出本实施例的Human IL-6 标准品在4度可保存3年以上。
实施例2：以实施例1中制得的Human IL-6标准品为例进行蛋白活性与平行性实验，冻干后与冻干前相比，蛋白活性保持在99.5%以上。20个Human IL-6标准品，活性变异在1%以内。
其他实施例：以Human IL-6标准蛋白为例制成Human IL-6标准品后进行保存时间测试，所述冻存液中BSA和海藻糖的质量分数是以下表格中的配比，步骤与实施例1相同，不同配比对应的37度加速试验测得的保存天数如下表：
| BSA | 海藻糖 | 保存天数（37度） |
| 0.5% | 5% | 23天 |
| 1% | 10% | 24天 |
| 3% | 15% | 25天 |
| 5% | 20% | 26天 |
| 8% | 25% | 27天 |
| 10% | 30% | 28天 |
根据阿伦尼乌斯公式结论，37度保存1天相当于4度保存48天，从表中看出Human IL-6 标准品在37度时最少可保存23天，因此得出用本发明所述冻存液制得的Human IL-6 标准品在4度可保存3年以上。
此外，需要说明的是，本说明书中所描述的具体实施例，其配比、工艺所取名称等可以不同。凡依本发明专利构思所述的构造、特征及原理所做的等效或简单变化，均包括于本发明专利的保护范围内。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离本发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。
虽然本发明已以实施例公开如上，但并非用以限定本发明的保护范围，任何熟悉该项技术的技术人员，在不脱离本发明的构思和范围内所作的更动与润饰，均应属于本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种冻存液，其特征在于：所述冻存液以PBST缓冲液作为溶剂，BSA和海藻糖作为溶质；所述PBST缓冲液中的磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，Tween20体积分数为1‰，pH=7.2-7.4，所述BSA的质量分数为0.5%-10%，所述海藻糖的质量分数为5%-30%。
2.根据权利要求1所述的冻存液，其特征在于：所述PBST缓冲液PH=7.3。
3.根据权利要求1或2所述的冻存液，其特征在于：所述BSA的质量分数为10%，所述海藻糖的质量分数为30%。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210560478.0A CN103063829B (zh) | 2012-12-21 | 2012-12-21 | 一种冻存液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210560478.0A CN103063829B (zh) | 2012-12-21 | 2012-12-21 | 一种冻存液 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103063829A true CN103063829A (zh) | 2013-04-24 |
| CN103063829B CN103063829B (zh) | 2015-01-14 |
Family
ID=48106540
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210560478.0A Active CN103063829B (zh) | 2012-12-21 | 2012-12-21 | 一种冻存液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103063829B (zh) |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2109290C1 (ru) * | 1996-04-09 | 1998-04-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Стабилизирующий состав для получения лиофилизированных препаратов на основе конъюгата антииммуноглобулина g и пероксидазы хрена |
| CN1367794A (zh) * | 1999-06-02 | 2002-09-04 | 株式会社容器研究实验室 | 稳定化变性脂蛋白及其制备方法 |
| CN1507565A (zh) * | 2001-05-10 | 2004-06-23 | ҽ�����ϵͳ�������ι�˾ | 冻干形式的定量一步免疫测定 |
| CN1523997A (zh) * | 2000-06-28 | 2004-08-25 | 稳定的白介素2 | |
| WO2006054519A1 (ja) * | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Kyowa Medex Co., Ltd. | リポ蛋白中成分の分別定量用標準品 |
| CN101118238A (zh) * | 2007-08-29 | 2008-02-06 | 浙江大学 | 复合保护剂及其用途 |
| CN101361731A (zh) * | 2008-08-11 | 2009-02-11 | 张文芳 | 白蛋白稳定的多西紫杉醇冻干制剂及其在治疗肿瘤方面的应用 |
| CN101361717A (zh) * | 2007-08-08 | 2009-02-11 | 北京赛生药业有限公司 | 巴曲酶冻干粉针制剂及其制备方法 |
| CN101361747A (zh) * | 2008-08-11 | 2009-02-11 | 张文芳 | 白蛋白稳定的阿霉素冻干制剂及其在治疗肿瘤方面的应用 |
| CN101957364A (zh) * | 2010-09-19 | 2011-01-26 | 李勇 | 冻干型血小板抗原谱细胞的制备方法 |
-
2012
- 2012-12-21 CN CN201210560478.0A patent/CN103063829B/zh active Active
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2109290C1 (ru) * | 1996-04-09 | 1998-04-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Стабилизирующий состав для получения лиофилизированных препаратов на основе конъюгата антииммуноглобулина g и пероксидазы хрена |
| CN1367794A (zh) * | 1999-06-02 | 2002-09-04 | 株式会社容器研究实验室 | 稳定化变性脂蛋白及其制备方法 |
| CN1523997A (zh) * | 2000-06-28 | 2004-08-25 | 稳定的白介素2 | |
| CN1507565A (zh) * | 2001-05-10 | 2004-06-23 | ҽ�����ϵͳ�������ι�˾ | 冻干形式的定量一步免疫测定 |
| WO2006054519A1 (ja) * | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Kyowa Medex Co., Ltd. | リポ蛋白中成分の分別定量用標準品 |
| CN101361717A (zh) * | 2007-08-08 | 2009-02-11 | 北京赛生药业有限公司 | 巴曲酶冻干粉针制剂及其制备方法 |
| CN101118238A (zh) * | 2007-08-29 | 2008-02-06 | 浙江大学 | 复合保护剂及其用途 |
| CN101361731A (zh) * | 2008-08-11 | 2009-02-11 | 张文芳 | 白蛋白稳定的多西紫杉醇冻干制剂及其在治疗肿瘤方面的应用 |
| CN101361747A (zh) * | 2008-08-11 | 2009-02-11 | 张文芳 | 白蛋白稳定的阿霉素冻干制剂及其在治疗肿瘤方面的应用 |
| CN101957364A (zh) * | 2010-09-19 | 2011-01-26 | 李勇 | 冻干型血小板抗原谱细胞的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103063829B (zh) | 2015-01-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11547111B2 (en) | Compositions and methods for stabilizing circulating tumor cells | |
| Chappell et al. | Glycocalyx protection reduces leukocyte adhesion after ischemia/reperfusion | |
| Mazur | Principles of cryobiology | |
| US8460859B2 (en) | Tissue preservation and fixation method | |
| CN103063830B (zh) | 一种elisa预包被酶标板的制备方法 | |
| S Choudhery et al. | Utility of cryopreserved umbilical cord tissue for regenerative medicine | |
| WO2013117925A1 (en) | Cryopreservation of cells in absence of vitrification inducing agents | |
| Vadivelu et al. | Cryoprotectant-free freezing of cells using liquid marbles filled with hydrogel | |
| Alessio et al. | Hybrid complexes of high and low molecular weight hyaluronan delay in vitro replicative senescence of mesenchymal stromal cells: a pilot study for future therapeutic application | |
| CN106868148B (zh) | 聚集状态可控且能够长期保存的细胞核的制备方法 | |
| WO2020206999A1 (zh) | 胃癌和胆囊胆管癌原代细胞培养方法及配套试剂 | |
| CN103063847B (zh) | 一种elisa标准品的制备方法 | |
| Ekpo et al. | Characterization of limbal explant sites: Optimization of stem cell outgrowth in in vitro culture | |
| CN103063829B (zh) | 一种冻存液 | |
| CN103048448B (zh) | 一种固定液 | |
| CN115023135B (zh) | 线粒体的冷冻保存剂与使用其的线粒体冷冻保存方法 | |
| US9943076B2 (en) | Boron added cell cryopreservation medium | |
| Dhenge et al. | Arachidonic acid and Docosahexanoic acid enhance platelet formation from human apheresis-derived CD34+ cells | |
| CN115299434A (zh) | 细胞冻存液、细胞冻存和复苏方法及其应用 | |
| Biederbick et al. | Combined use of magnetic microbeads for endothelial cell isolation and enhanced cell engraftment in myocardial repair | |
| CN110452876A (zh) | 一种用于肺癌实体瘤原代细胞培养的细胞消化液 | |
| TWI766137B (zh) | 冷凍保存劑與使用其的粒線體冷凍保存方法 | |
| Coskun et al. | Melatonin in preservation solutions prevents ischemic injury in rat kidneys | |
| Kuang et al. | Myocardial apoptosis and injury of donor hearts kept in completely beating status with normothermic blood perfusion for transplants | |
| KR20230091107A (ko) | 인간 각막 내피 세포 및/또는 인간 각막 내피 전구세포의 보존 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20161229 Address after: 310011 Gongshu District, Hangzhou, Hunan Road, No. 36, on the 3rd floor, No. Patentee after: Hangzhou branch biotechnology Limited by Share Ltd Address before: 310011, block A, block B, No. 36, Mau Mau Road, North Hangzhou Software Park, Zhejiang, China Patentee before: Hangzhou Maotiansai Technology Co., Ltd. |