CN103060238A - 一种水产用微生态净水剂及其制备和应用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于水产养殖用的微生态水质调节剂及其制备和应用方法。组成配比如下:蜡状芽孢杆菌1份、侧孢芽孢杆菌1份、酿酒酵母1份;并按照如下步骤制成:将蜡状芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌和酿酒酵母分别深层液体发酵,然后按体积比1∶1∶1混合均匀,本发明利用微生态净水剂进行水质改良,可以提高水中溶解氧(DO)和降低水体中氨氮、亚硝酸盐和COD的含量,改善水质,促进鱼虾健康成长;并能改变水体中的菌群结构,抑制病原菌的生长,有效地预防鱼、虾等水产动物疾病的发生,提高鱼、虾等水产动物的成活率。

Description

一种水产用微生态净水剂及其制备和应用方法
技术领域
本发明涉及一种用于水产养殖用的微生态水质调节剂及其制备和应用方法,属于微生物制剂技术领域和生物环保领域。 
背景技术
随着我国水产养殖业的迅速发展,一些制约水产养殖业健康、持续发展的问题也日益突显。其一,大量工业废水、生活污水的排放对养殖水体造成了灾难性的影响;其二,养殖生产缺乏全面规划和有效管理,盲目无序的造池,大规模增加网箱,片面追求高产出的养殖方式,更是加剧了水质的恶化;其三,不合理投饵所产生的残饵、粪便及渔药的滥用,使水体微生态平衡遭到严重破坏,给水产养殖业造成了直接或间接的负面影响。鉴于以上原因,近年来水产养殖病害频繁发生、水产品失去固有的鲜味以及水体富营养化等,对水产养殖业造成了严重的经济损失。因此采取生物手段和高科技手段治理水体污染,促进养殖业健康发展,保证水体生态环境的良性循环,已是刻不容缓的任务。 
发明内容
本发明针对水产养殖现状,充分利用微生物的生理功能和可修饰性特点进行污染养殖水体的生物修复模拟研究,通过分离、筛选、驯化高效降解菌株,并利用各菌株的功能互补性构建一种复合微生物制剂,并提供其制备和应用方法。降低水体中的化学需氧量和氨氮、亚硝酸盐的浓度,改善养殖水域环境,提高养殖对象的机体免疫力,减少病害的发生,使养殖业良性循环发展。 
一种水产用微生态净水剂的制备方法,由蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC No.4918、侧孢芽孢杆菌(bacillus laterosporus)CGMCC No.6885和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.6884,这3种菌的发酵菌液按1:1:1的体积比配制而成。 
所述的蜡状芽孢杆菌的发酵菌液的制备依次如下: 
新鲜斜面菌种制备,其条件为:LB培养基,30℃,24h; 
摇床种子培养,其条件为:pH7.2~7.5、温度30℃~32℃,转速200r/min~220r/min,培 养10~12h;培养基的组成为蛋白胨10g,NaCl5g,牛肉膏3g,蒸馏水定容至1L; 
液体发酵,其条件为:20L发酵罐培养基装量为12L,搅拌速度200r/min~220r/min,初始pH7.0~7.2,通气比为1.1:1~1.2:1,摇床种子培养液接种量为培养基体积的3%~4%,30℃~32℃温度下发酵24h~28h;培养基组成为:玉米淀粉1.8%~2.0%,工业蛋白胨1.0%~1.2%,MnSO40.02%,CaCl20.02%~0.03%,K2HPO40.012%,KH2PO40.025%,其余为水;每次发酵芽孢数在1.8×1010cfu/mL~2.5×1010cfu/mL之间。 
所述的侧孢芽孢杆菌的发酵菌液的制备依次如下: 
新鲜斜面菌种制备,其条件为:LB培养基,35℃,28h; 
摇床种子培养,其条件为:pH7.0~7.2、温度32℃~35℃,转速180r/min~200r/min,培养14h~16h;培养基的组成为:蛋白胨10g,NaCl5g,牛肉膏3g,蒸馏水定容至1L; 
液体发酵,其条件为:20L发酵罐培养基装量为12L,搅拌速度180r/min~200r/min,初始pH7.0~7.2,通气比1:1~1.1:1,摇床种子培养液接种量为培养基体积的3%~4%,32℃~35℃温度下发酵28h~36h;培养基组成为:葡萄糖2.0%~2.2%,酵母膏0.9%~1.1%,MnSO40.02%,CaCl20.02%~0.03%,KH2PO40.01%,MgSO40.005%,其余为水;每次发酵芽孢数在8×109cfu/mL~1.02×1010cfu/mL之间。 
所述的酿酒酵母的发酵菌液的制备依次如下: 
新鲜斜面菌种制备,其条件为:PDA培养基,28℃,36h~48h; 
摇床种子培养,其条件为:pH自然、温度26℃~28℃,转速180r/min~200r/min,培养24h~28h;培养基的组成为葡萄糖20g,酵母膏10g,蛋白胨10g,蒸馏水定容至1L; 
液体发酵,其条件为:20L发酵罐培养基装量为12L,搅拌速度180r/min~200r/min,初始pH6.0~6.5,通气比为0.9:1~1:1,摇床种子培养液接种量为培养基体积的4%~5%,26℃~28℃温度下发酵28h~36h;培养基组成为蔗糖2%~2.5%,硫酸铵1%~1.5%,氯化钙0.5%~0.8%,生物素0.01%,磷酸二氢钾0.01%,氯化钠0.01%,硫酸镁0.03%~0.06%,其余为水;酿酒酵母的发酵菌数达7.4×108cfu/mL~9.5×108cfu/mL。 
将三种菌的发酵菌液按体积比1:1:1搅拌混匀,搅拌速度50r/min~80r/min,搅拌时间10min~30min,制得水产用微生态净水剂,其成品活菌数不低于9×109cfu/mL。 
一种水产用微生态净水剂,是由上述的方法制备而成的。 
上述的水产用微生态净水剂的应用方法:投入到水体中,用于净化水产用水体。 
一种用于净化水产用水体的细菌为侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus),保藏编号CGMCC No.6885。 
一种用于净化水产用水体的真菌为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),保藏编号CGMCC No.6884。 
本发明的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.6884: 
菌落及菌体形态特征 
菌株CGMCC No.6884菌落形态为乳白色,不透明,湿润,边缘整齐。菌体形态为圆形,产子囊孢子,形成原始菌丝或成短链状,无掷孢子掷出(图1、图2)。 
生理生化特性 
菌株CGMCC No.6884的生理生化特征见表1~4。 
表1发酵糖类 
Figure 2013100047319100002DEST_PATH_IMAGE001
表2同化碳源 
Figure 2013100047319100002DEST_PATH_IMAGE002
表3同化氮源 
Figure 2013100047319100002DEST_PATH_IMAGE003
表4其他生理生化试验 
Figure 2013100047319100002DEST_PATH_IMAGE004
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.6884能高效降解水体中的氨氮,在氨氮初始浓度为212mg/L时,接种量3%,降解率为91.4%;发酵液淀粉酶活28.4MMU、蛋白酶活215U;对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、沙门氏菌(Salmonella sp.)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)及嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的抑菌圈大小分别为21.3mm、16.7mm、23.8mm、17.9mm、20.7mm。 
蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC No.4918 
细菌形态及菌落特征:菌株CGMCC No.4918菌落较大,圆形,乳白色,边缘整齐,菌落表面湿润光滑、粘稠。菌体呈杆状,末端钝圆,(0.8~1.2)μm×(1.8~3.8)μm,产芽孢,无鞭毛,无荚膜(见图3、图4)。革兰氏染色阳性。 
菌株CGMCC No.4918的生理生化特征为:淀粉水解、柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、接 触酶、石蕊牛奶试验、吲哚试验、V-P试验、甲基红试验、明胶水解试验、0.001%溶菌酶抗性试验阳性;尿素试验、硫化氢试验阴性;利用蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖产酸,不能利用半乳糖、甘露醇产酸。生长温度为5℃~45℃。 
蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC No.4918,能高效降解水体中的亚硝酸盐,在亚硝酸盐初始浓度为10mg/mL时,接种量3%,降解率为88.8%;发酵液淀粉酶活35.5MMU、蛋白酶活268U;对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、沙门氏菌、荧光假单胞菌及嗜水气单胞菌的抑菌圈大小分别为23.6mm、16.9mm、20.4mm、15.9mm、15.7mm。 
本发明的侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)CGMCC No.6885 
细菌形态及菌落特征:菌株C5菌落较大,圆形,乳白色,边缘整齐,菌落表面湿润光滑、粘稠。菌体呈杆状,(0.5~0.8)μm×(2.5~4.7)μm,有独木舟状侧孢,芽孢为椭圆形。革兰氏染色阳性。(见图5、图6)。 
生理生化特性:淀粉水解、硝酸盐还原、硫化氢试验、明胶水解试验、接触酶、尿素试验阳性,能耐受7%的NaCl和0.001%的溶菌酶,在pH5-7的培养基和无氮培养基上均能生长,利用蔗糖、葡萄糖、甘露醇;不能利用木糖、乳糖、阿拉伯糖。 
侧孢芽孢杆菌(CGMCC No.6885),能高效降解水体中的COD,在COD初始浓度为456.2mg/L时,接种量3%,降解率达94.1%。发酵液淀粉酶活31.7MMU、蛋白酶活323U;对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、沙门氏菌、荧光假单胞菌及嗜水气单胞菌的抑菌圈大小分别为18.8mm、16.7mm、16.9mm、12.9mm、21.3mm。 
本发明的蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC No.4918,已经于2011年5月30日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行了专利保藏;生物保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所。 
本发明的侧孢芽孢杆菌(bacillus laterosporus)CGMCC No.6885已经于2012年11月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行了专利保藏;生物保藏单位地址为北京市朝阳区大屯路,中国科学院微生物研究所。 
本发明的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.6884已经于2012年11月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行了专利保藏;生物保藏单位地址为北京市朝阳区大屯路,中国科学院微生物研究所。 
上述水产用微生态净水剂中的有益微生物能直接吸纳、消化、降解水体中的氨氮和亚硝酸盐等污染物,降低其在水体中的含量,改善水体质量;有益微生物在生长繁殖过程中产生各种代谢产物如抗生素、酶类等,能有效抑制病原微生物的生长,减少病原体,减少动物疾病的发生;有益微生物能维持动物肠道微环境的生态平衡,提高饲料利用率,提高动物免疫力,促进动物生长。通过筛选定植力强、稳定、高效的微生物菌株,根据菌株功能互补作用,能动组合制成复合微生物菌剂,合理使用,实现水体动物健康清洁养殖,有效改善养殖业对 生态环境的影响,使水体养殖稳定可持续的发展。 
附图说明:
图1:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.6884的菌落形态图; 
图2:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.6884的菌体形态特征图; 
图3:蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC No.4918的菌落形态图; 
图4:蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC No.4918的菌体形态特征图; 
图5:侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)CGMCC No.6885的菌落形态图; 
图6:侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)CGMCC No.6885的菌体形态特征图; 
图7:不同微生态制剂对模拟水体COD的影响; 
图8:不同微生态制剂对模拟水体氨氮的影响; 
图9:不同微生态制剂对模拟水体亚硝酸盐的影响; 
图10:不同微生态制剂对模拟水体溶解氧的影响; 
图11:不同微生态制剂对模拟水体pH值的影响。 
具体实施方式
以下结合实施例旨在进一步说明本发明,而非限制本发明。 
实施例1: 
水产用微生态净水剂的制备 
1.蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC No.4918菌液的制备 
新鲜斜面菌种制备,其条件为:LB培养基,30℃,24h; 
挑取斜面菌种进行摇床种子液培养:pH7.2~7.5、温度30℃~32℃,转速200r/min~220r/min,培养10~12h;培养基的组成为蛋白胨10g,NaCl5g,牛肉膏3g,蒸馏水定容至1L; 
液体发酵条件为:20L发酵罐培养基装量为12L,搅拌速度200r/min~220r/min,初始pH7.0~7.2,通气比为1.1:1~1.2:1,摇床种子培养液接种量为培养基体积的3%~4%,30℃~32℃温度下发酵24h~28h;培养基组成为:玉米淀粉1.8%~2.0%,工业蛋白胨1.0%~1.2%,MnSO40.02%,CaCl20.02%~0.03%,K2HPO40.012%,KH2PO40.025%,其余为水;每次发酵芽孢数在1.8×1010cfu/mL~2.5×1010cfu/mL之间; 
2.侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)CGMCC No.6885菌液的制备 
新鲜斜面菌种制备,其条件为:LB培养基,35℃,28h; 
挑取斜面菌种进行摇床种子液培养:pH7.0~7.2、温度32℃~35℃,转速180r/min~200r/min,培养14h~16h;培养基的组成为:蛋白胨10g,NaCl5g,牛肉膏3g,蒸馏水定容 至1L; 
液体发酵条件为:20L发酵罐培养基装量为12L,搅拌速度180r/min~200r/min,初始pH7.0~7.2,通气比1:1~1.1:1,摇床种子培养液接种量为培养基体积的3%~4%,32℃~35℃温度下发酵28h~36h;培养基组成为:葡萄糖2.0%~2.2%,酵母膏0.9%~1.1%,MnSO40.02%,CaCl20.02%~0.03%,KH2PO40.01%,MgSO40.005%,其余为水;每次发酵芽孢数在8×109cfu/mL~1.02×1010cfu/mL之间; 
3.酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.6884菌液的制备 
新鲜斜面菌种制备,其条件为:PDA培养基,28℃,36h~48h; 
挑取斜面菌种进行摇床种子液培养:pH自然、温度26℃~28℃,转速180r/min~200r/min,培养24h~28h;培养基的组成为葡萄糖20g,酵母膏10g,蛋白胨10g,蒸馏水定容至1L; 
液体发酵条件为:20L发酵罐培养基装量为12L,搅拌速度180r/min~200r/min,初始pH6.0~6.5,通气比为0.9:1~1:1,摇床种子培养液接种量为培养基体积的4%~5%,26℃~28℃温度下发酵28h~36h;培养基组成为蔗糖2%~2.5%,硫酸铵1%~1.5%,氯化钙0.5%~0.8%,生物素0.01%,磷酸二氢钾0.01%,氯化钠0.01%,硫酸镁0.03%~0.06%,其余为水;酿酒酵母的发酵菌数达7.4×108cfu/mL~9.5×108cfu/mL; 
4.水产用微生态净水剂的复配 
将经检验合格的上述3种菌液按体积比1:1:1移入已灭菌的储罐中搅拌混匀,搅拌速度50r/min~80r/min,搅拌时间10min~30min,然后在无菌罐装间进行罐装。制得的成品活菌数不低于9×109cfu/mL。 
实施例2: 
水产用微生态制剂安全性评价 
微生态制剂应用于水产养殖中,对水产动物的首要条件是安全、无毒害作用,为了确保应用安全,本发明从溶血性试验、小鼠急性毒性试验和斑马鱼急性毒性试验三个方面,探讨评价该制剂的安全性,为其进一步开发应用提供安全实验数据。 
溶血性试验结果表明,各菌株及微生态制剂的溶血率均低于5%,表明各菌株及微生态制剂不会引起红细胞的明显凝集和溶血,安全性较好。小鼠急性毒性试验结果表明微生态制剂的口服半数致死剂量(LD50)大于75000mg/kg小鼠体质量。斑马鱼急性毒性试验结果表明微生态制剂对斑马鱼的96h-LD50大于10000mg/L。以上试验结果表明该微生态制剂安全无毒,可以用于养殖水体。 
实施例3: 
水产用微生态净水剂的应用 
在实验室配制养殖废水,初始水质条件为COD:162.75mg/L;氨氮:12.05mg/L;亚硝酸盐:5.33mg/L;溶解氧:4.62mg/L;pH:7.53。养殖废水分别置于1000mL锥形瓶中,试验分5组,试验组1按添加量1mL/L加入蜡状芽孢杆菌CGMCC No.4918菌液,试验组2按添加量1mL/L加入侧孢芽孢杆菌CGMCC No.6885菌液,试验组3按添加量1mL/L加入酿酒酵母CGMCC No.6884菌液,试验组4按添加量1mL/L加入本发明水产用微生态净水剂,对照组加入1000mL废水,不加任何菌液。每3d测量一次COD、氨氮、亚硝酸盐、溶解氧的含量及pH的变化,试验时间15d。每组三个平行,试验数据取平均值。氨氮的测定采用纳氏试剂分光光度法;亚硝酸盐的测定采用盐酸萘乙二胺分光光度法;COD采用重铬酸钾法进行测定;分别采用溶氧仪和pH计测定DO值和pH值。 
试验结果表明,试验15d后,各试验组的COD、氨氮、硝态氮的浓度都有不同程度的降低,溶解氧有不同程度的提升,其中试验组4对水质的改良效果最好。试验15d后,试验组4COD终浓度为11.93mg/L,降解率达92.3%;氨氮终浓度为1.92mg/L,降解率达84.1%;亚硝酸盐终浓度为0.63mg/L,降解率达88.1%;溶解氧浓度为6.17mg/L,提升了33.5%。而对照组COD终浓度为153.1mg/L,降解率仅5.9%;氨氮终浓度为10.68mg/L,降解率仅11.3%;亚硝酸盐终浓度4.92mg/L,降解率仅7.6%;溶解氧浓度几乎维持不变。复合菌制剂较单一菌株微生态制剂的作用效果更好,可能是各优势菌种之间有协同作用,在生理功能和遗传信息上具互补性,因而具更高的生物活性。各试验组与对照组的pH值无显著差异,在试验的15d内,模拟水体的pH值在7.18~7.68之间,该pH值适宜大多数水产品的养殖。 
实施例4: 
水产用微生态净水剂对鱼塘水质及草鱼生长性能的影响 
现场试验在岳阳市临湘黄盖湖千亩养殖场进行,试验动物为草鱼。试验设一个对照组,一个试验组,每组3个重复。试验塘只加入微生态净水剂(添加量为1mL/L),不添加抗生素和其他药物。对照塘不加微生态净水剂,按照常规养殖。养殖场为水泥池(3.0m×2.5m×1.2m),共6口,平均水深0.7m;每池放鱼12尾,共72尾。实验期,每日投喂2次;8:00、17:00,投饲率为鱼体重2%左右,各组保持基本一致投饲量水平,并根据生长、摄食情况调整。养殖池24h不间断充气。养殖期间水温24~28℃,pH7.6±0.5,溶解氧6.7~7.4mg/L。每30d取微生态净水剂均匀泼洒全塘,然后每10d取样带回实验室测定各塘的COD、氨氮及亚硝酸盐浓度。每塘设3个取样点(在每口鱼塘的东南西北方向取3个点A、B、C,其中B点为鱼塘的中心点,A和C点均位于B点到对角的中点位置)取平均值。试验当天计为0d, 试验周期60d。 
检测方法参见实施例3,所有样品测定3次,取平均值。养殖结束后,鱼体饥饿24h,称每池鱼总重,计算增重率、饲料系数、成活率;每池随机取3尾体质量相近草鱼,测量其体高、体长、体重,解剖后称内脏重、肝重,计算肥满度、内脏比、肝比重、体长体高比。 
本次试验表明,本实验室研制的微生态净水剂具有良好的净水效果:对养殖水体中的氨氮、亚硝酸盐和COD降解效果良好。试验结束后,氨氮从初始浓度2.82mg/L降为0.16mg/L,亚硝酸盐从初始浓度0.52mg/L降为0.12mg/L,COD从初始浓度63.4mg/L降为9.1mg/L,溶解氧从初始浓度4.25mg/L提升为5.81mg/L,pH值稳定在7.2左右。并且微生态净水剂提高了养殖动物的生长性能:水体中泼洒微生态净水剂的试验组与对照组相比有提高增重率、降低饲料系数的趋势;各组草鱼在形体指标方面,包括体长体高比、内脏比、肝重比及肥满度,均无显著差异(P>0.05)。 

Claims (7)

1.一种水产用微生态净水剂的制备方法,其特征在于,由蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC No.4918、侧孢芽孢杆菌(bacillus laterosporus)CGMCC No.6885和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.6884,这3种菌的发酵菌液按1:1:1的体积比配制而成。
2.根据权利要求1所述的水产用微生态净水剂的制备方法,其特征在于,
1)蜡状芽孢杆菌发酵菌液的制备依次包括以下步骤
新鲜斜面菌种制备,其条件为:LB培养基,30℃,24h;
摇床种子培养,其条件为:pH7.2~7.5、温度30℃~32℃,转速200r/min~220r/min,培养10~12h;培养基的组成为蛋白胨10g,NaCl5g,牛肉膏3g,蒸馏水定容至1L;
液体发酵,其条件为:20L发酵罐培养基装量为12L,搅拌速度200r/min~220r/min,初始pH7.0~7.2,通气比为1.1:1~1.2:1,摇床种子培养液接种量为培养基体积的3%~4%,30℃~32℃温度下发酵24h~28h;培养基组成为:玉米淀粉1.8%~2.0%,工业蛋白胨1.0%~1.2%,MnSO40.02%,CaCl20.02%~0.03%,K2HPO40.012%,KH2PO40.025%,其余为水;每次发酵芽孢数在1.8×1010cfu/mL~2.5×1010cfu/mL之间;
2)侧孢芽孢杆菌发酵菌液的制备依次包括以下步骤:
新鲜斜面菌种制备,其条件为:LB培养基,35℃,28h;
摇床种子培养,其条件为:pH7.0~7.2、温度32℃~35℃,转速180r/min~200r/min,培养14h~16h;培养基的组成为:蛋白胨10g,NaCl5g,牛肉膏3g,蒸馏水定容至1L;
液体发酵,其条件为:20L发酵罐培养基装量为12L,搅拌速度180r/min~200r/min,初始pH7.0~7.2,通气比1:1~1.1:1,摇床种子培养液接种量为培养基体积的3%~4%,32℃~35℃温度下发酵28h~36h;培养基组成为:葡萄糖2.0%~2.2%,酵母膏0.9%~1.1%,MnSO40.02%,CaCl20.02%~0.03%,KH2PO40.01%,MgSO40.005%,其余为水;每次发酵芽孢数在8×109cfu/mL~1.02×1010cfu/mL之间;
3)酿酒酵母发酵菌液的制备依次包括以下步骤:
新鲜斜面菌种制备,其条件为:PDA培养基,28℃,36h~48h;
摇床种子培养,其条件为:pH自然、温度26℃~28℃,转速180r/min~200r/min,培养24h~28h;培养基的组成为葡萄糖20g,酵母膏10g,蛋白胨10g,蒸馏水定容至1L;
液体发酵,其条件为:20L发酵罐培养基装量为12L,搅拌速度180r/min~200r/min,初始pH6.0~6.5,通气比为0.9:1~1:1,摇床种子培养液接种量为培养基体积的4%~5%,26℃~28℃温度下发酵28h~36h;培养基组成为蔗糖2%~2.5%,硫酸铵1%~1.5%,氯化钙0.5%~0.8%,生物素0.01%,磷酸二氢钾0.01%,氯化钠0.01%,硫酸镁0.03%~0.06%,其余为水;酿酒酵母的发酵菌数达7.4×108cfu/mL~9.5×108cfu/mL。
3.根据权利要求2所述的水产用微生态净水剂的制备方法,其特征在于,
将三种菌的发酵菌液按体积比1:1:1搅拌混匀,搅拌速度50r/min~80r/min,搅拌时间10min~30min,制得水产用微生态净水剂,其成品活菌数不低于9×109cfu/mL。
4.一种水产用微生态净水剂,其特征在于,是由权利要求1-3任一项所述的方法制备而成的。
5.权利要求4所述的水产用微生态净水剂的应用方法,其特征在于,投入到水体中,用于净化水产用水体。
6.一种用于净化水产用水体的细菌,其特征在于,所述的细菌为侧孢芽孢杆菌(Bacilluslaterosporus),保藏编号CGMCC No.6885。
7.一种用于净化水产用水体的真菌,其特征在于,所述的真菌为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae),保藏编号CGMCC No.6884。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106630189A (zh) * 2016-12-15 2017-05-10 雷州市汇大生物科技有限公司 一种水产养殖用液体海洋红酵母水质改良剂及其制备方法
CN107319172A (zh) * 2017-07-06 2017-11-07 江苏农牧科技职业学院 一种家禽用微生态制剂及其制备方法
CN107459144A (zh) * 2017-07-31 2017-12-12 浦江县酉泽水产科技有限公司 水产养殖用水质处理剂
CN108048338A (zh) * 2017-12-31 2018-05-18 武汉市天辰生物科技有限公司 一株酿酒酵母及其在水产养殖中的应用
CN108715843A (zh) * 2016-02-29 2018-10-30 常州爱上学教育科技有限公司 处理重金属废水用固定化细胞球的制备方法
CN110980942A (zh) * 2019-12-10 2020-04-10 浙江永续环境工程有限公司 一种厌氧生物菌剂及应用该菌剂的厌氧处理方法
CN115806349A (zh) * 2022-12-15 2023-03-17 鹤山市新的生物制品有限公司 提高养殖水体溶解氧含量的方法及专用培养基

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101109008A (zh) * 2006-07-18 2008-01-23 上海四季生物科技有限公司 一种含多种活性微生物的水体改良剂及其制备方法
CN101698539A (zh) * 2009-10-13 2010-04-28 王颖 净化水体的微生态制剂及其制备方法
CN102050524A (zh) * 2010-12-31 2011-05-11 东莞市保得生物工程有限公司 水质改良剂
CN102092860A (zh) * 2010-12-31 2011-06-15 东莞市保得生物工程有限公司 强效利水素

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101109008A (zh) * 2006-07-18 2008-01-23 上海四季生物科技有限公司 一种含多种活性微生物的水体改良剂及其制备方法
CN101698539A (zh) * 2009-10-13 2010-04-28 王颖 净化水体的微生态制剂及其制备方法
CN102050524A (zh) * 2010-12-31 2011-05-11 东莞市保得生物工程有限公司 水质改良剂
CN102092860A (zh) * 2010-12-31 2011-06-15 东莞市保得生物工程有限公司 强效利水素

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
陈谦 等: "用于水产养殖的微生态制剂的研究和应用进展", 《应用与环境生物学报》, vol. 18, no. 3, 31 March 2012 (2012-03-31), pages 524 - 530 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108715843A (zh) * 2016-02-29 2018-10-30 常州爱上学教育科技有限公司 处理重金属废水用固定化细胞球的制备方法
CN106630189A (zh) * 2016-12-15 2017-05-10 雷州市汇大生物科技有限公司 一种水产养殖用液体海洋红酵母水质改良剂及其制备方法
CN107319172A (zh) * 2017-07-06 2017-11-07 江苏农牧科技职业学院 一种家禽用微生态制剂及其制备方法
CN107459144A (zh) * 2017-07-31 2017-12-12 浦江县酉泽水产科技有限公司 水产养殖用水质处理剂
CN108048338A (zh) * 2017-12-31 2018-05-18 武汉市天辰生物科技有限公司 一株酿酒酵母及其在水产养殖中的应用
CN108048338B (zh) * 2017-12-31 2021-08-13 湖北至正天辰生物科技有限公司 一株酿酒酵母及其在水产养殖中的应用
CN110980942A (zh) * 2019-12-10 2020-04-10 浙江永续环境工程有限公司 一种厌氧生物菌剂及应用该菌剂的厌氧处理方法
CN115806349A (zh) * 2022-12-15 2023-03-17 鹤山市新的生物制品有限公司 提高养殖水体溶解氧含量的方法及专用培养基

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