CN103044363B - 紫杉醇衍生物及其制备与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了抗肿瘤药紫杉醇衍生物及其制备与应用。所述衍生物包括化合物I(WLM01)和化合物II(WLM02)。并提供了本发明紫杉醇衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，本发明紫杉醇衍生物对黑色素瘤A375、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞BGC-823、人肝癌细胞BEL-7404、人宫颈癌细胞HeLa、人卵巢癌细胞HO8910、人乳腺癌细胞MCF-7、人乳腺癌细胞MDA-MB-435、人胰腺癌细胞株PC-3、人脑瘤细胞株SF763、人脑胶质瘤U8的抗肿瘤作用试验，结果显示有一定的抗肿瘤活性，可以用于制备抗肿瘤药物。本发明提供了紫杉醇衍生物的制备方法。化合物I(WLM01)

Description

紫杉醇衍生物及其制备与应用

技术领域

本发明涉及药物化学，具体涉及抗肿瘤药紫杉醇衍生物及其制备与应用。

背景技术

紫杉醇为红豆杉植物的次生代谢产物,其药用价值研究与开发始于20世纪50年代末期,历时30余年,1992年美国FDA正式批准其作为治疗晚期卵巢癌新药Paclitaxael上市。目前，紫杉醇作为一种广谱、高效、毒副作用小的抗癌药物,已在40多个国家应用,并在临床上广泛运用于治疗卵巢癌、子宫颈癌、乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃癌、喉癌、肝癌、食道癌、膀胱癌等恶性肿瘤。由于具有独特的抗癌机理和神奇的抗癌功效,紫杉醇被誉为近30年来天然抗癌药物研究领域最重大的发现。

虽然紫杉醇已经在临床上得到了应用，但由于其水溶性差，导致其难以通过静脉给药。为了解决这一难题，目前最普遍的方法是在注射剂中加入表面活性剂聚氧乙烯蓖麻油。聚氧乙烯蓖麻油虽然能增加紫杉醇的水溶性，但会引起多种不良反应，如过敏反应、中毒性肾损伤神经毒性、心血管毒性等。为避免严重的过敏反应,在临床上,紫杉醇注射给药前常预先注射皮质醇类(如地塞米松),苯海拉明和H2受体拮抗剂(如西咪替丁、雷尼替丁)。但这些针剂的使用仍不能有效彻底防止所有患者的不良反应,仍会导致部分患者注射紫杉醇后发生过敏反应。(Kim SC,et al.J Controlled Release,2001,72(1-3):191.)

因此，对紫杉醇进行结构修饰，通过改善其水溶性和稳定性，增加抗肿瘤活性，并降低其毒副作用，将有效提高其临床应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服紫杉醇的上述不足之处，对紫杉醇进行结构优化，研究开发改善水溶性，提高其活性和稳定性好的紫杉醇衍生物。

本发明提供了一种紫杉醇衍生物，如式A表示：

其中，

为化合物WLM01；

为化合物WLM02

Ⅱ

本发明所述紫杉醇衍生物包括化合物Ⅰ(WLM01)和化合物Ⅱ(WLM02)，本发明化合物为全新结构。

本发明提供了一种5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯]化合物Ⅰ，如下式Ⅰ表示：

分子式C₅₇H₆₅NO₂₂

分子量：1116.12。

本发明还提供了一种5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯]化合物Ⅱ，如下式Ⅱ表示：

分子式：C₅₇H₆₅N0₂₂

分子量：1116.12。

本发明的另一目的是提供了上述一种紫杉醇衍生物化合物Ⅰ的制备方法。该方法包括下列步骤：

(1)原苯甲酸-[1,3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯(化合物3a)制备：

将肌醇(5g，27.8mmol)和樟脑磺酸(129mg，0.556mmol)在15mL DMSO(二甲基亚砜)中搅拌并加热至65℃时,滴加原苯甲酸三甲酯(5ml，29.1mmol)到反应液中，反应液在70℃下反应16小时，得到化合物3a；

(2)3,5-二苄基-原苯甲酸-[1,3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯(化合物4c)制备：

化合物3a(3.5g，13.16mmol)溶于无水12mlDMF(N,N-二甲基甲酰胺)，氩气保护下冷至0℃，氢化钠(60％,1.05g,26.32mmol)加入上述溶液中，并在0℃下搅拌20分钟，然后将溴化苄(3.4ml,27.64mmol)滴加到上述溶液中，反应液在0℃下搅拌半小时，得到化合物4c；

(3)4-水杨酸对叔丁基苯酯-2,6-二苄基-原苯甲酸-[1,3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯(化合物5d)制备：

化合物4c(1.2g,2.7mmol)和TBS(叔丁基二甲基氯硅烷)(814mg,5.4mmol)溶于10ml二氯甲烷中，(0.8ml,5.4mmol)DBU(1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯)加入其中，反应液在室温下搅拌10分钟，得到化合物5d；

(4)4-水杨酸对叔丁基苯酯-2,6-二苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯(化合物6d)制备：

化合物5d(1.3g,2.3mmol)溶于10ml无水二氯甲烷，并在氩气保护下冷却至0℃，(1M,4.6ml,4.6mmol)DIBAL-H(二异丁基氢化铝)的甲苯溶液滴加到上述溶液中，反应液在0℃下搅拌40分钟，1.4mL DIBAL-H(二异丁基氢化铝)的甲苯溶液(1mol/L)缓慢滴加到上述溶液中。反应液在0℃下搅拌30分钟。所得反应液倒入由15mL酒石酸钠钾的饱和水溶液和15mL氯化铵的饱和水溶液组成的混合液中，并在室温下搅拌1小时，得到化合物6d；

(5)4-水杨酸对叔丁基苯酯-1,2,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯(化合物7d)制备：

化合物6d(1.02g,1.81mmol)溶于无水5ml无水DMF(N,N-二甲基甲酰胺)中，并在氩气保护下冷至0℃，氢化钠(60％,145mg,3.63mmol)加入其中，在0℃下搅拌20分钟，溴化苄(0.21ml,2.18mmol)滴加入上述溶液中，反应液在0℃下搅拌30分钟，得到化合物7d；

(6)1,2,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯(化合物8d)制备：

化合物7d(1.12g,1.72mmol)溶于17mlTHF(四氢呋喃)中，加入TBAF(氟化四丁基铵)(898mg,3.44mmol)，反应液在室温下搅拌2小时，得到化合物8d；

(7)5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-1,2,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯](化合物9d)制备：

化合物8d(923mg,1.72mmol)和化合物1(2g,2.1mmol)(2’-丁二酸紫杉醇)溶于30ml无水二氯甲烷，并于氩气保护下冷至0℃，DCC(1，3－二环己基碳化二亚胺)(709mg,3.44mmol)和DMAP(二甲基氨基吡啶)(420mg,3.44mmol)加入上述溶液，室温，搅拌18小时，得到化合物9d；

(8)5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-1,2,6-三苄基-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯](化合物10d)制备：

化合物9d(750mg,0.475mmol)溶于80ml 80％的AcOH(醋酸)溶液中，并在室温下搅拌16小时，得到化合物10d；

(9)5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯]化合物Ⅰ制备：

将化合物10d(450mg.0.32mmol)溶于8ml甲醇后加入高压釜，然后投入Pd(OH)₂/C(20％,400mg,0.57mmol)，反应液在8个大气压的氢气下反应50小时，过滤，在旋转蒸发仪上旋干溶剂，得到化合物Ⅰ的粗品，粗品用制备HPLC反复纯化，得到化合物Ⅰ。

本发明的又一目的是提供了上述一种紫杉醇衍生物化合物Ⅱ的制备方法。该方法反应式：

包括下列步骤：

(1)化合物3a制备：

肌醇(5g,27.8mmol)和樟脑磺酸(129mg,0.556mmol)加到15ml DMSO(二甲基亚砜)中，混合物加热到65℃，滴加原苯甲酸三甲酯(5ml,29.1mmol)到反应液中，反应液在70℃下反应16小时，得到化合物3a；

(2)2,4,6-三苄基-原苯甲酸-[1,3,5-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环己醇]酯(化合物4b)制备：

化合物3a(1.5g,5.64mmol)溶于无水40mlDMF(N,N-二甲基甲酰胺)中，溶液于氩气保护下冷至0℃，氢化钠(60％,1.13g,28.2mmol)加入其中，在0℃下搅拌20分钟，滴加溴化苄(2.8ml,22.5mmol)，反应液在0℃下搅拌半小时，得到化合物4b；

(3)2,4,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环己醇]酯(化合物5b)制备：

化合物4b(0.5g，0.933mmol)溶于10ml无水二氯甲烷，并在氩气保护下冷却至0℃，DIBAL－H(二异丁基氢化铝)的甲苯溶液(1M,3ml,3mmol)滴加到其中反应液中，在0℃下搅拌5分钟，所得反应液倒入由10mL酒石酸钠钾的饱和水溶液和10mL氯化铵的饱和水溶液组成的混合液中，并在室温下搅拌1小时,得到化合物5b；

(4)化合物6b：5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R,3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-2,4,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯](化合物6b)制备：

化合物5b(538mg,1mmol)和化合物1(2’-丁二酸紫杉醇，1.431g,1.5mmol)溶于20mL干燥的二氯甲烷中，并于氩气保护下冷至0℃，DCC(二环己基碳二亚胺，412mg,2mmol)和DMAP(4-二甲氨基吡啶，244mg,2mmol)加入其中，然后反应液自然升温搅拌18小时，得到化合物6b；

(5)5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R,3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-2,4,6-三苄基-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯](化合物7b)制备：

化合物6b(850mg,0.567mmol)溶于130ml 80％的醋酸水溶液中，并于室温下搅拌14小时，得到化合物7b；

(6)化合物Ⅱ：5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R,3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[(4’-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯](化合物Ⅱ)制备：

化合物7b(590mg,0.426mmol)溶于15ml甲醇，Pd(OH)₂/C(20％,1g,1.43mmol)加入，反应液在8个大气压氢气下，反应48小时，过滤，旋干溶剂，得到化合物Ⅱ的粗品，粗品用制备HPLC反复纯化，得到化合物Ⅱ。

上述方法中的中间体化合物1可以通过下列方法制备：

5g紫杉醇(taxol)和645mg琥珀酸酐溶于60mL吡啶中。反应液于氩气保护下在室温下搅拌过夜。补加65mg琥珀酸酐后再在室温下搅拌一小时。旋干溶剂，残留物溶于100ml氯仿和100ml二氯甲烷中，并用0.3M的盐酸溶液洗涤4次，用饱和食盐水洗涤1次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，旋转蒸发仪上旋干溶剂，残留物用90ml乙酸乙酯和30ml石油醚重结晶，得到5.28g化合物1(白色固体)，收率：95％。

本发明再有一个目的是提供了上述一种紫杉醇衍生物A在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明紫杉醇衍生物化合物Ⅰ(WLM01)和化合物Ⅱ(WLM02)对黑色素瘤A375、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞BGC-823、人肝癌细胞BEL-7404、人宫颈癌细胞HeLa、人卵巢癌细胞HO8910、人乳腺癌细胞MCF-7、人乳腺癌细胞MDA-MB-435、人胰腺癌细胞株PC-3、人脑瘤细胞株SF763、人脑胶质瘤U8的抗肿瘤作用试验，结果显示WLM01和WLM02对人胃癌细胞BGC-823有强效的抗肿瘤作用；WLM01和WLM02对人肝癌细胞BEL-7402有强效的抗肿瘤作用；WLM01和WLM02对人宫颈癌细胞Hela有强效的抗肿瘤作用；WLM01和WLM02对人乳腺癌细胞MDA-MB-435有强效的抗肿瘤作用；WLM02对人脑胶质瘤细胞U87有高效抗肿瘤活性。

对OVCAR-3细胞：WLM01的IC₅₀为8.62±1.55nM，WLM02的IC₅₀为6.83±1.07nM，略低于紫杉醇的IC₅₀1.61±1.13nM。对MDA-MB-435S细胞:WLM01的IC₅₀为34.84±1.08nM，WLM02的IC₅₀为34.40±1.14nM；低于紫杉醇的IC₅₀2.28±1.07nM。对ZR-75-1细胞：WLM01的IC₅₀为26.12±1.33nM，WLM02的IC₅₀为22.56±1.25nM，低于紫杉醇的IC₅₀4.93±1.38nM。

WLM01对人卵巢癌HO-8910裸小鼠移植瘤有较强生长抑制作用。

因此，上述两个紫杉醇衍生物有一定的抗肿瘤活性，可以用于制备抗肿瘤药物。

所述药物为紫杉醇衍生物A在制备抗黑色素瘤、肺癌、胃癌、肝癌、宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌及脑胶质瘤药物中的应用。

本发明所述药物由紫杉醇衍生物A作为活性成分与常规药用辅料组成的药物组合物。

本发明所述药物由化合物Ⅰ作为活性成分与常规药用载体组成的药物组合物。

本发明所述药物由化合物Ⅱ作为活性成分与常规药用载体组成的药物组合物。

本发明化合物溶解性测试表明紫杉醇衍生物A的水溶性强于紫杉醇，化合物稳定性好，可以进一步开发成新的抗肿瘤药物，有较好的临床应用前景。

附图说明

图1化合物1的液相质谱图(结构)

图2化合物3a的氢谱图图谱

图3化合物4c的氢谱图图谱

图4化合物5d的氢谱图图谱

图5化合物6d的氢谱图图谱

图6化合物7d的氢谱图图谱

图7化合物8d的氢谱图图谱

图8化合物9d的氢谱图图谱

图9化合物10d的氢谱图图谱

图10化合物WLM01的氢谱及质谱图图谱

图11化合物4b的氢谱图图谱

图12化合物5b的氢谱图图谱

图13化合物7b的氢谱图图谱

图14化合物WLM02的质谱图及高效液相色谱图图谱

具体实施方式

实施例1中间体化合物1的制备

5g紫杉醇(taxol)和645mg琥珀酸酐溶于60mL吡啶中。反应液于氩气保护下在室温下搅拌过夜。补加65mg琥珀酸酐后再在室温下搅拌一小时。旋干溶剂，残留物溶于100ml氯仿和100ml二氯甲烷中，并用0.3M的盐酸溶液洗涤4次，用饱和食盐水洗涤1次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，旋转蒸发仪上旋干溶剂，残留物用90ml乙酸乙酯和30ml石油醚重结晶，得到5.28g化合物1(白色固体)，收率：95％。由液质联用确认为化合物1，分子量为954。

实施例2紫杉醇衍生物化合物Ⅰ(WLM01)的制备

(1)化合物3a：原苯甲酸-[1,3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯

将5g肌醇和129mg樟脑磺酸投入15mL DMSO后，搅拌并升温至65℃。将5mL原苯甲酸三甲酯缓慢的滴加到反应液中。反应液在70℃下反应16小时，反应液冷却至室温(20℃)并用三乙胺碱化(pH6.5)。旋转蒸发仪上旋干溶剂，残留物溶于热60℃乙酸乙酯30mL并过滤，将溶液快速滤过硅胶层析柱(100-200目柱层析硅胶)，然后在旋转蒸发仪上将所得溶液旋干得5.39g化合物3a(白色固体)收率：72％。

(2)化合物4c：3,5-二苄基-原苯甲酸-[1,3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯

3.5g化合物3a溶于12mL无水DMF(二甲基甲酰胺)，用氩气置换空气3次。溶液于氩气保护下冷至0℃。1.05g氢化钠加入上述溶液中，并在0℃下搅拌20分钟。然后将3.4mL溴化苄缓慢滴加到上述溶液中。反应液在0℃下搅拌半小时。将反应液倒入冰水(150mL)中，用乙酸乙酯萃取(50mL)，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤。在旋转蒸发仪上旋干溶剂，残留物用石油醚﹕乙酸乙酯＝15﹕1至3﹕1过柱(100-200目柱层析硅胶)，得3g化合物4c(白色固体)，收率：51.7％。

(3)化合物5d：4-水杨酸对叔丁基苯酯-2,6-二苄基-原苯甲酸-[1,3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯

1.2g化合物4c和814mg叔丁基二甲基氯硅烷溶于10mL二氯甲烷中，0.8mLDBU(二氮杂二环)加入其中。反应液在室温(20℃)下搅拌10分钟。在旋转蒸发仪上旋干溶剂，残留物用石油醚﹕乙酸乙酯＝50﹕1过柱(100-200目柱层析硅胶)。得到1.32g化合物5d(白色固体)，收率：88％。

(4)化合物6d：4-水杨酸对叔丁基苯酯-2,6-二苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯

1.3g化合物5d溶于10mL无水二氯甲烷，并在氩气保护下冷却至0℃。4.6mLDIBAL－H的甲苯溶液(1mol/L)缓慢滴加到上述溶液中。反应液在0℃下搅拌40分钟之后，1.4mL DIBAL－H(二异丁基氢化铝)的甲苯溶液(1mol/L)缓慢滴加到上述溶液中。反应液在0℃下搅拌30分钟。所得反应液倒入由15mL酒石酸钠钾的饱和水溶液和15mL氯化铵的饱和水溶液组成的混合液中，并在室温(20℃)下搅拌1小时。用乙酸乙酯15ml萃取一次，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并在旋转蒸发仪上旋干溶剂，残留物用石油醚﹕乙酸乙酯＝20﹕1至10﹕1过柱(100-200目柱层析硅胶)，得1.04g化合物6d(白色固体)，收率：80％。

(5)化合物7d：4-水杨酸对叔丁基苯酯-1,2,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯

1.02g化合物6d溶于5mL无水DMF中，并在氩气保护下冷至0℃。145mg氢化钠加入其中，在0℃下搅拌20分钟。0.21mL溴化苄缓慢加入上述溶液中。反应液在0℃下搅拌30分钟后倒入冰水(150mL)中，用乙酸乙酯50mL萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤后再用无水硫酸钠干燥。过滤，在旋转蒸发仪上旋干溶剂，残留物用石油醚﹕乙酸乙酯＝50﹕1过柱(100-200目柱层析硅胶)，得到1.12g化合物7d，收率：96.5％。

(6)化合物8d：1,2,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯

1.12g化合物7d溶于17mL THF(四氢呋喃)中，加入898mg四丁基氟化铵。反应液在20℃下搅拌2小时。在旋转蒸发仪上旋干溶剂，残留物用石油醚﹕乙酸乙酯＝20﹕1至5﹕1过柱(100-200目柱层析硅胶)，得到900mg化合物8d(白色固体)，收率：97.4％。

(7)化合物9d：5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-1,2,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯]

923mg化合物8d和2g化合物1溶于30mL无水二氯甲烷，并于氩气保护下冷至0℃。709mg DCC和420mg DMAP加入上述溶液。加完后，将反应液自然升温至20℃，搅拌18小时。所得混合液过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，收集滤液并在旋转蒸发仪上旋干溶剂。残留物用石油醚﹕乙酸乙酯＝3﹕2至1﹕1过柱(100-200目柱层析硅胶)，得800mg化合物9d(白色固体)，收率：32％。

(8)化合物10d：5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-1,2,6-三苄基-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯]

750mg化合物9d溶于80mL 80％的醋酸溶液中，并在20℃下搅拌16小时。将反应液倒入水(160mL)中，用NaHCO₃调节PH到7至8。将混悬液抽滤，所得固体水洗，真空干燥(45℃)。得500mg化合物10d。(白色固体)收率：76％。(也可在旋转蒸发仪上旋干大部分溶剂，残留物倒入水(160mL)中，析出固体，抽滤，真空干燥(45℃)，得到500mg化合物10d。)

(9)化合物Ⅰ：5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯]

将450mg化合物10d溶于8mL甲醇(98％浓度)后加入高压釜，然后投入400mgPd(OH)2/C。氢气置换3次后，反应液在8个大气压的氢气下反应50小时。过滤，在旋转蒸发仪上旋干溶剂。得到化合物Ⅰ的粗品。(Lot#MC08078-13-1)粗品用制备HPLC反复纯化(C₁₈柱，样品溶解于5ml 40％乙腈水溶液后上柱，用洗脱剂(80％乙腈水溶液)洗脱5次)，得到化合物Ⅰ(200mg)。

分子式C₅₇H₆₅NO₂₂

分子量：1116.12。

¹H-NMR(400MHz,MeOD)δ:8.16～7.29(15H,m,Ar-H),6.48(1H,s,H-10),6.07(1H,m,H-13),5.86(1H,d,J＝8.0Hz,H-2’),5.67(1H,d,J＝8.5Hz,H-2),5.52(1H,t,J＝9.04.5Hz,H-5),5.04(1H,d,J＝11.0Hz,H-3’),4.76(1H,t,J＝12.012.0Hz,H-4〞),4.39(1H,m,H-7),4.21(2H,brs,H₂-20),3.98(1H,dd,J＝7.0,2.0Hz,H-6〞),3.84(1H,d,J＝8.5Hz,H-3),3.76(2H,m,H-1〞+H-3〞),3.50(1H,d,J＝1.5Hz,H-5〞),3.40(2H,m,H-5〞+-CH₂-上的1个H),2.85(4H,m,H₂-14+-CH₂-),2.72(5H,s,OH×5),2.50(1H,m,-CH₂-上的1个H),2.43(3H,s,OAc-10),2.25(4H,m,OAc-4+H-6α),1.94(3H,s,Me-18),1.90(2H,m,H-6β+OH×1),1.67(3H,s,Me-19),1.40(1H,s,OH×1),1.15(3H,s,Me-16),1.15(3H,s,Me-17)。

实施例3紫杉醇衍生物化合物Ⅱ(WLM02)的制备

(1)化合物3a：

5g肌醇和129mg樟脑磺酸加到15mLDMSO中，混合物加热到65℃。5mL原苯甲酸三甲酯缓慢的滴加到反应液中，反应液在70℃下反应16小时。反应液冷至20℃，并用5滴三乙胺碱化。旋干溶剂，残留物溶于热的(60℃)乙酸乙酯(30mL)并过柱(100-200目柱层析硅胶)，所得溶液旋干得到5.39g化合物3a，收率：72％。

(2)化合物4b：2,4,6-三苄基-原苯甲酸-[1,3,5-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环己醇]酯

1.5g化合物3a溶于40mL无水DMF中。用氩气置换3次。溶液于氩气保护下冷至0℃。1.13g氢化钠加入其中，在0℃下搅拌20分钟，2.8mL溴化苄缓慢的滴加入，反应液在0℃下搅拌半小时，倒入冰水(150mL)中，析出固体，抽滤，固体溶于丙酮(50mL)中并用无水硫酸钠干燥过夜。滤除硫酸钠，旋干溶剂得到3.02g化合物4b，收率：99％。

(3)化合物5b：2,4,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环己醇]酯

化合物4b(0.5g，0.933mmol)溶于10ml无水二氯甲烷，并在氩气保护下冷却至0℃，DIBAL－H(二异丁基氢化铝)的甲苯溶液(1M,3ml,3mmol)滴加到其中反应液中，在0℃下搅拌5分钟，所得反应液倒入由10mL酒石酸钠钾的饱和水溶液和10mL氯化铵的饱和水溶液组成的混合液中，并在室温下搅拌1小时,再用乙酸乙酯萃取(80mL)，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并旋干溶剂，残留物用石油醚﹕乙酸乙酯＝15﹕1到3﹕1过柱(100-200目柱层析硅胶)。得到0.31g化合物5b，收率：61.7％。

(4)化合物6b：5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R,3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-2,4,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯]

538mg化合物5b和1.431g化合物1溶于20mL干燥的二氯甲烷中，并于氩气保护下冷至0℃。412mgDCC和244mgDMAP加入其中。然后让反应液自然升温20℃搅拌18小时。所得混合液过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，滤液旋干。残留物用石油醚﹕乙酸乙酯＝3﹕2到1﹕1过柱(100-200目柱层析硅胶)，得到732mg化合物6b，收率：50％。

(5)化合物7b：5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R,3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-2,4,6-三苄基-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯]

0.85g化合物6b溶于130mL80％的醋酸水溶液中，并于20℃下搅拌14小时。倒入水(300mL)中，析出固体，抽滤。所得固体用石油醚﹕乙酸乙酯＝1﹕1到2﹕3过柱(100-200目柱层析硅胶)得到0.6g化合物7b，收率：76％。

(6)化合物Ⅱ：5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R,3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[(4’-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯]

590mg化合物7b溶于15mL甲醇，1gPd(OH)₂/C(20％)加入。用氢气置换3次。反应液在8个大气压的氢气下反应48小时。过滤，旋干溶剂，得到化合物Ⅱ的粗品。用制备HPLC反复纯化(C₁₈柱，样品溶解于5ml 40％乙腈水溶液，洗脱剂(80％乙腈水溶液)洗脱5次)，得到化合物297mgⅡ。

分子式：C₅₇H₆₅N0₂₂

(SIGMA)；DMSO(GISMA)；

细胞株：人黑色素瘤A375、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞BGC-823、人肝癌细胞BEL-7404、人宫颈癌细胞HeLa、人卵巢癌细胞HO8910、人乳腺癌细胞MCF-7、人乳腺癌细胞MDA-MB-435、人胰腺癌细胞株PC-3、人脑瘤细胞株SF763、人脑胶质瘤U87

化合物：实施例2和3制备的化合物Ⅰ(WML01)和化合物Ⅱ(WML02)用于本实施例。紫杉醇，市售100mg每瓶。

[方法]

取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶，加入0.05％的胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，计数2～4×10⁴个/ml，制成细胞悬液。取细胞悬液接种于96孔板上，180μl/孔，置恒温CO2培养箱中培养24小时。换液，加入受试药物(实施例6制得)，20μl/孔，培养72个小时。将MTT加入96孔板中，20μl/孔，培养箱中反映4小时。吸去上清液，加入DMSO，150μl/孔，平板摇床上振摇5分钟。用酶联免疫检测仪在波长为570nm处测定每孔的吸光值，并计算细胞抑制。

2筛选结果

分子量：1116.12。

¹H-NMR(400MHz,MeOD)δ:8.16～7.29(15H,m,Ar-H),6.48(1H,s,H-10),6.09(1H,m,H-13),5.86(1H,d,J＝8.0Hz,H-2’),5.67(1H,d,J＝8.5Hz,H-2),5.52(1H,t,J＝9.04.5Hz,H-5),5.04(1H,d,J＝11.0Hz,H-3’),4.76(1H,t,J＝12.012.0Hz,H-4〞),4.39(1H,m,H-7),4.21(2H,brs,H₂-20),3.98(1H,dd,J＝7.0,3.5Hz,H-6〞),3.84(1H,d,J＝8.5Hz,H-3),3.76(2H,m,H-1〞+H-3〞),3.51(1H,d,J＝2.0Hz,H-2〞),3.40(2H,m,H-5〞+-CH₂-上的1个H),2.85(4H,m,H₂-14+-CH₂-),2.72(5H,s,OH×5),2.52(1H,m,-CH₂-上的1个H),2.43(3H,s,OAc-10),2.25(4H,m,OAc-4+H-6α),1.94(3H,s,Me-18),1.91(2H,m,H-6β+OH×1),1.67(3H,s,Me-19),1.40(1H,s,OH×1),1.15(3H,s,Me-16),1.15(3H,s,Me-17)。

上述制得的化合物Ⅰ(WLM01)和Ⅱ(WLM02)理化性质的确定

⑴溶解性的测试(Taxol(紫杉醇)，市售100mg每瓶)

注：溶液1:50ml乙醇和26.35mg蓖麻油.

溶液2:5ml吐温和15ml乙醇溶液(130g 95％乙醇溶于1000g蒸馏水)

由上述结果可以看出，所合成的两个紫杉醇衍生物WLM01及WLM02的水溶性强于紫杉醇的水溶性。

实施例4MTT法检测WLM01和WLM02的抗肿瘤活性

1材料与方法

[材料]

仪器：酶联免疫检测仪(美国BIO-RAD)

试剂：RPMI 1640(GIBCO)；DMEM(GIBCO)；胰蛋白酶(SIGMA)；胎牛血清(GIBCO)；MTT

3结论

①WLM01和WLM02对人胃癌细胞BGC-823有强效的抗肿瘤作用；

②WLM01和WLM02对人肝癌细胞BEL-7402有强效的抗肿瘤作用；

③WLM01和WLM02对人宫颈癌细胞Hela有强效的抗肿瘤作用；

④WLM01和WLM02对人乳腺癌细胞MDA-MB-435有强效的抗肿瘤作用；

⑤WLM01对人脑胶质瘤细胞U87有中效抗肿瘤活性，WLM02对人脑胶质瘤细胞U87有高效抗肿瘤活性。

实施例5CCK-8法检测WLM01和WLM02的抗肿瘤活性

材料和方法

[材料]

仪器：台式酶标仪SpectraMa M5Microplate Reader(Molecular Devices)

试剂：Cell Counting Kit-8(Cat#CK04-13,Dojindo)；胎牛血清(Cat#10099-141,GIBICO)；培养基(Invitrogen)(英杰公司)

细胞株：OVCAR-3卵巢癌细胞系(中科院细胞生物研究所)，MDA-MB-435S乳腺癌高转移细胞系(中科院细胞生物研究所)，ZR-75-1乳腺癌细胞系(中科院细胞生物研究所)

化合物：实施例2和3制备的化合物Ⅰ(WML01)和化合物Ⅱ(WML02)用于本实施例。紫杉醇，市售100mg每瓶。

[方法]

收集对数生长期细胞，计数，用完全培养基重新悬浮细胞，调整细胞浓度至合适浓度，接种96孔板，每孔加90μl细胞悬液(ZR-75-1、5000个/孔；0VCAR-3及MDA-MB-435S：6000个/孔)；细胞在37℃,100％相对湿度，5％CO₂培养箱中孵育24小时，待细胞完全贴壁后，在各孔中加入各浓度的待测药物溶液10μl(1μl药物加9μl培养基混匀，最高浓度为640nM,4倍稀释，9个浓度梯度)；37℃，100％相对湿度，5％CO₂培养箱中孵育72小时；使用新鲜培养基配置CCK-8工作液(CCK-8试剂：新鲜培养基为1:9)替换原有培养液并置于37℃培养箱中孵育72小时；轻轻震荡后在SpectraMax M5Microplate Reader台式酶标仪上测定450nm波长处的吸光度，以650nm处吸光度作为参比；使用GraphPad Prism 5软件拟合计算化合物的IC₅₀。

化合物WLM01、WLM02及紫杉醇对OVCAR-3、MDA-MB-435S、ZR-75-1细胞系的IC₅₀如下表所示：

实施例六WLM01和WLM02的体内抗肿瘤活性研究

材料与方法

1[材料]

试剂：0.9％氯化钠注射液：250ml，批号G090509,四川科伦药业股份有限公司。

化合物：实施例2和3制备的化合物Ⅰ(WML01)和化合物Ⅱ(WML02)用于本实施例。紫杉醇，市售100mg每瓶。

动物：雌性BALB/cA裸小鼠，日龄35-40天，体重18-22g，由上海斯莱克提供,合格证号：SCXK(沪)2007-0005。

2[方法]

溶液配置

使用时取样品，先加1.23ml蓖麻油，摇匀溶解,再加入1.23ml无水乙醇，摇匀溶解，浓度为6.0mg/ml。每次给药时取母液0.4ml，加入2.0mlNS，摇匀，配制成浓度为1.0mg/ml，给药时每只给0.4ml。

移植瘤模型

紫杉醇衍生物对人乳腺癌MDA-MB-435裸小鼠移植瘤的作用采用人乳腺癌MDA-MB-435细胞株接种于裸小鼠皮下而建立。细胞接种量为3×10⁶，接种形成移植瘤后再在裸小鼠体内传3代后使用。

紫杉醇衍生物对人卵巢癌HO-8910裸小鼠移植瘤的作用采用人卵巢癌HO-8910细胞株接种于裸小鼠皮下而建立。细胞接种量为3×10⁶，接种形成移植瘤后再在裸小鼠体内传3代后使用。

具体试验方法

取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm³左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100～300mm³后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每周3次,每次测量同时还需称鼠重。WLM01、WLM02及紫杉醇均通过静脉给药，给药剂量20mg/kg，每周给药1次。空白组同时静脉注射等体积蓖麻油。

3检测指标及计算方法

(1)肿瘤体积(tumor volume，TV)，计算公式为：

TV＝1/2×a×b²

其中a、b分别表示长宽。

(2)相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：

RTV＝TV_t/TV₀。

其中TV₀为分笼给药时(即d₀)肿瘤体积，TV_t为每一次测量时的肿瘤体积。

(3)相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式为：

$T/C(\%)\frac{T_{\mathrm{RTV}}}{C_{\mathrm{RTV}}}\×100$

T_RTV：治疗组的RTV；C_RTV：阴性对照组的RTV。

试验结果以相对肿瘤增殖率T/C(％)作为抗肿瘤活性的评价指标。

4统计方法

实验数据以平均值和标准差表示，统计方法采用t-检验。

5结果

实验结果表面，化合物WLM01对HO-8910卵巢癌模型有较强的抑制作用，与紫杉醇相当。具体结果见下表。

表一 紫杉醇衍生物对人乳腺癌MDA-MB-435裸小鼠移植瘤的实验治疗

d0:分笼给药时间P给药组的RTV与control组的RTV对比*:P<0.05**:P<0.01

表二.紫杉醇衍生物对人卵巢癌HO-8910裸小鼠移植瘤的实验治疗

d0:分笼给药时间P给药组的RTV与control组的RTV对比**:P<0.01

Claims (13)

1.一种紫杉醇衍生物，如式A表示：

其中，

为化合物Ⅰ；

为化合物Ⅱ。

2.根据权利要求1所述紫杉醇衍生物，其特征在于，所述紫杉醇衍生物为5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[(4’-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯]化合物Ⅰ，如下列结构式：

分子式C₅₇H₆₅NO₂₂

分子量：1116.12。

3.根据权利要求1所述紫杉醇衍生物，其特征在于，所述紫杉醇衍生物为5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[(4’-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯]化合物Ⅱ，如下列结构式：

分子式：C₅₇H₆₅N0₂₂

分子量：1116.12。

4.如权利要求2所述紫杉醇衍生物化合物Ⅰ的制备方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

(1)原苯甲酸-[1,3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯化合物3a制备：

将肌醇27.8mmol和樟脑磺酸0.556mmol在DMSO中搅拌，65℃滴加原苯甲酸三甲酯29.1mmol到反应液中，反应液在70℃下反应16小时，得到化合物3a；

(2)3,5-二苄基-原苯甲酸-[1,3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯化合物4c制备：

化合物3a 13.16mmol溶于无水DMF，氩气保护下冷至0℃，氢化钠60％,26.32mmol加入上述溶液中，并在0℃下搅拌20分钟，然后将溴化苄27.64mmol滴加到上述溶液中，反应液在0℃下搅拌半小时，得到化合物4c；

(3)4-水杨酸对叔丁基苯酯-2,6-二苄基-原苯甲酸-[1,3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯化合物5d制备：

化合物4c 2.7mmol和TBS 5.4mmol溶于二氯甲烷中,5.4mmol DBU加入其中，反应液在室温下搅拌10分钟，得到化合物5d；

(4)4-水杨酸对叔丁基苯酯-2,6-二苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯化合物6d制备：

化合物5d 2.3mmol溶于无水二氯甲烷，并在氩气保护下冷却至0℃，4.6mmol DIBAL－H的甲苯溶液滴加到上述溶液中，反应液在0℃下搅拌40分钟，1.4mmol DIBAL－H的甲苯溶液缓慢滴加到上述溶液中,反应液在0℃下搅拌30分钟所得反应液倒入由15ml酒石酸钠钾和15ml氯化铵的饱和水溶液组成的混合液中，并在室温下搅拌1小时，得到化合物6d；

(5)4-水杨酸对叔丁基苯酯-1,2,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯化合物7d制备：

化合物6d 1.81mmol溶于无水DMF中，并在氩气保护下冷至0℃，氢化钠60％, 3.63mmol加入其中，在0℃下搅拌20分钟，溴化苄2.18mmol滴加入上述溶液中，反应液在0℃下搅拌30分钟，得到化合物7d；

(6)1,2,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环己醇]酯化合物8d制备：

化合物7d 1.72mmol溶于THF中,加入TBAF 3.44mmol，反应液在室温下搅拌2小时，得到化合物8d；

(7)5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-1,2,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯]化合物9d制备：

化合物8d 1.72mmol和化合物12.1mmol2’-丁二酸紫杉醇溶于无水二氯甲烷，并于氩气保护下冷至0℃，DCC3.44mmol和DMAP 3.44mmol加入上述溶液，室温，搅拌18小时，得到化合物9d；

(8)5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-1,2,6-三苄基-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯]化合物10d制备：

化合物9d 0.475mmol溶于80ml 80％的AcOH溶液中，并在室温下搅拌16小时，得到化合物10d；

(9)5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯]化合物Ⅰ制备：

将化合物10d 0.32mmol溶于8ml甲醇后加入高压釜，然后投入Pd(OH)₂/C 20％0.57mmol，反应液在8个大气压的氢气下反应50小时，过滤，在旋转蒸发仪上旋干溶剂，得到化合物Ⅰ的粗品，粗品用制备HPLC反复纯化，得到化合物Ⅰ。

5.如权利要求3所述紫杉醇衍生物化合物Ⅱ的制备方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

(1)化合物3a制备：

肌醇27.8mmol和樟脑磺酸0.556mmol加到DMSO中，混合物加热到65℃，滴加原苯甲酸三甲酯29.1mmol到反应液中，反应液在70℃下反应16小时，得到化合物3a；

(2)2,4,6-三苄基-原苯甲酸-[1,3,5-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环己醇]酯化合物4b制备：

化合物3a 5.64mmol溶于无水DMF中，溶液于氩气保护下冷至0℃，氢化钠60％28.2mmol加入其中，在0℃下搅拌20分钟，滴加溴化苄22.5mmol，反应液在0℃下搅拌半小时，得到化合物4b；

(3)2,4,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环己醇]酯化合物5b制备：

化合物4b溶于无水二氯甲烷，并在氩气保护下冷却至0℃，DIBAL－H的甲苯溶液1M,3mmol滴加到其中反应液中，在0℃下搅拌5分钟，所得反应液倒入由10mL酒石酸钠钾的饱和水溶液和10mL氯化铵的饱和水溶液组成的混合液中，并在室温下搅拌1小时，得到化合物5b；

(4)5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R,3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-2,4,6-三苄基-原苯甲酸-[3,5-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯]化合物6b制备：

化合物5b1mmol和化合物1 1.5mmol 2’-丁二酸紫杉醇溶于干燥的二氯甲烷中，并于氩气保护下冷至0℃，DCC 2mmol和DMAP 2mmol加入其中，然后反应液自然升温搅拌18小时，得到化合物6b；

(5)5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R,3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[4’-2,4,6-三苄基-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯]-异丝氨酸酯]化合物7b制备：

化合物6b 0.567mmol溶于80％的醋酸水溶液中，并于室温下搅拌14小时，得到化合 物7b；

(6)5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R,3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[(4’-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯](化合物Ⅱ)制备：

化合物7b 0.426mmol溶于甲醇，Pd(OH)₂/C 20％,1.43mmol加入其中，反应液在8个大气压氢气下，反应48小时，过滤，旋干溶剂，得到化合物Ⅱ的粗品，粗品用制备HPLC反复纯化，得到化合物Ⅱ。

6.根据权利要求5所述的化合物Ⅱ的制备方法，其特征在于，所述化合物1通过下列方法制备：

紫杉醇和琥珀酸酐溶于吡啶中，反应液于氩气保护下在室温下搅拌过夜，补加琥珀酸酐后，再在室温下搅拌一小时，旋干溶剂，残留物溶于氯仿和二氯甲烷中，并用0.3M的盐酸溶液洗涤，用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，旋转蒸发仪上旋干溶剂，残留物用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到化合物1。

7.如权利要求1所述的紫杉醇衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述紫杉醇衍生物为5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[(4’-(1a,2e,3e,4e,5e,6e-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯]Ⅰ。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述紫杉醇衍生物为5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基-2-丁二酸[(4’-(1e,2a,3a,4e,5a,6a-六羟基)环已醇]酯-异丝氨酸酯]Ⅱ。

10.根据权利要求7-9中任一项的应用，其特征在于，所述应用为在制备抗黑色素瘤、肺癌、 胃癌、肝癌、宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、及脑胶质瘤药物中的应用。

11.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物为由紫杉醇衍生物化合物Ⅰ或化合物Ⅱ作为活性成份与药用载体组成的药物组合物。

12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述药物为由化合物Ⅰ作为活性成份与药用载体组成的药物组合物。

13.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述药物为由化合物Ⅱ作为活性成份与药用载体组成的药物组合物。