CN103039404B - 耐热肉牛的选育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种耐热肉牛的选育方法，包括以下操作：(1)通过杂交获得婆墨云杂交牛；(2)对所述婆墨云杂交牛母牛进行卵母细胞采集；(3)利用操作(2)中采集的卵母细胞和所述婆墨云杂交牛公牛的精子进行体外胚胎生产，得到牛胚胎；(4)将所述牛胚胎移植进入婆墨云及其它黄母牛体内，经发育成熟后生产。经过本发明方法选育出的肉牛不仅耐热抗蜱，而且生长快，繁殖率高，适应性强。
Description
技术领域
本发明涉及一种动物育种的方法，尤其是涉及一种耐热肉牛的育种方法。
背景技术
耐热肉牛是指能够在热带、亚热带气候下饲养的肉牛。例如，云南黄牛，其适应性较强，在热带、亚热带气候下均能良好生长。但是云南黄牛个体小、产肉量低和育肥性能差，不适应现代市场需求的标准。为此，云南省曾先后从国外引入西门塔尔牛、海福特牛、安格斯牛、婆罗门牛、沙希华牛、短角牛、墨累灰牛等体型较大，产肉率较高的肉牛品种。但不同的肉牛品种是在不同的环境条件下培育形成的，其生产性能和对环境的要求也不相同，因此上述引进的肉牛在引进后由于生长环境的改变，分别存在繁殖率不高、生长不迅速，难以适应云南省所处的热带亚热带气候等问题。
发明内容
为此，本发明提出了一种耐热肉牛的选育方法，通过该选育方法获得的肉牛耐热抗蜱、产肉率高且适应性较强。
根据本发明的一个方面，提供了一种耐热肉牛的选育方法，包括以下操作：
(1)通过杂交获得婆墨云杂交牛；
(2)对所述婆墨云杂交牛母牛进行卵母细胞采集；
(3)利用操作(2)中采集的卵母细胞和所述婆墨云杂交牛公牛的精子进行体外胚胎生产，得到牛胚胎；
(4)将所述牛胚胎移植进入婆墨云牛及其它黄母牛体内，经发育成熟后生产。
经过本发明方法选育出的肉牛耐热抗蜱的，生长迅速，繁殖率高，适应性强，且产肉性能好，肌肉间脂肪分布均匀，肉质细嫩，口感好。
附图说明
通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本发明的限制。而且在整个附图中，用相同的参考符号表示相同的部件。在附图中：
图1为本发明耐热肉牛选育方法的流程示意图；以及
图2为本发明耐热肉牛选育方法中体外胚胎生产的流程示意图。
具体实施方式
下面结合附图和具体的实施方式对本发明作进一步的描述。
本发明提供了一种耐热肉牛的选育方法，包括以下操作：
(1)通过杂交获得婆墨云杂交牛；
(2)对所述婆墨云杂交牛母牛进行卵母细胞采集；
(3)利用操作(2)中采集的卵母细胞和所述婆墨云杂交牛公牛的精子进行体外胚胎生产，得到牛胚胎；
(4)将所述牛胚胎移植进入婆墨云牛及其它黄母牛体内，经发育成熟后生产。
图1示出了本发明耐热肉牛选育方法的流程示意图。如图1所示，首先通过杂交手段，获得婆墨云杂交牛品种；接着对所述婆墨云杂交牛母牛进行卵母细胞采集；然后利用采集的卵母细胞与所述婆墨云杂交牛公牛的精子进行体外胚胎生产，得到牛胚胎；所述牛胎盘培育一定时间后，将其移植进入婆墨云杂牛及其它黄母牛体内，在母牛体内经发育成熟后生产，得到的牛即为耐热肉牛。
所述婆墨云杂交牛是指婆罗门牛、墨累灰牛和云南黄牛的杂交品种牛。可以以婆罗门牛为父本，墨云杂交牛为母本进行杂交得到婆墨云杂交牛，也可以以婆墨杂交牛为父本，婆云杂交牛为母本进行杂交得到婆墨云杂交牛。上述墨云杂交牛是指墨累灰牛和云南黄牛杂交得到的杂交品种牛，婆云杂交牛是指婆罗门牛和云南黄牛杂交得到的杂交品种牛。
婆罗门牛是由四种印度瘤牛和一些纯种英国牛杂交培育而成的肉牛品种，是适于热带、亚热带饲养的优良肉牛品种，耐热、抗焦虫病及抗体内寄生虫病的能力较强，而且其出肉率高，胴体品质好。据研究资料表明，普通黄牛主要导入50％婆罗门牛血液其后代就能充分体现婆罗门牛的品种特征。婆罗门牛与血缘较远的普通牛品种间有较好的杂种优势，尤其在贫瘠、干旱地区条件下，婆罗门牛的生产性能远远超过其它品种牛，它们在极端高温下仍然具备繁殖后代的能力。云南省南部和中部地区属热带亚热带气候类型，比较适于引入婆罗门牛进行杂交改良。因此，本发明以婆罗门牛、墨累灰牛与云南黄牛进行杂交，经优选，获得耐热抗蜱，繁殖能力高且适应性强的婆墨云杂交牛，并利用现代胚胎工程技术进行选育，以建立耐热肉牛快速扩繁技术体系。
本发明所述选育方法中，在对婆墨云杂交牛母牛进行卵母细胞采集时，优选采用活体采卵方法。活体采卵能有效地克服用屠宰卵巢采卵的诸多不足，如从卵巢采集到运至实验室的时间难以确定以及供体的遗传背景资料不清楚等。同时，这种方法可对幼龄牛、老龄牛、妊娠牛和繁殖障碍牛进行活体采卵，每周可采卵1-2次，而且，重复采卵对母牛生殖机能和健康不会造成不良影响。活体采卵技术与体外受精等技术结合，可极大地提高优良母牛的利用率，生产系谱齐全、遗传背景清楚的胚胎及其后代。
采集卵母细胞时，选择年龄3-10岁，健康、中等膘情、体重380-480kg，产后60d以上，性周期正常、经直肠检查或B超检查表明卵巢形态和机能正常的经产母牛作为采集对象。采集频率可以为每周一次、每周两次或不定期采集。在采集前，可以对母牛注射卵泡刺激素(FSH)，以提高采集的卵子数量。
采集完卵母细胞后，可以根据卵丘覆盖度，卵细胞质均匀度对卵母细胞等级进行评价，分为四级：I级：卵母细胞质色泽均匀，卵母细胞周围包围≥4层卵丘细胞，卵丘-卵母细胞复合体(COCs)完整；II级：卵母细胞质色泽均匀、卵母细胞周围包围3层卵丘细胞，COCs完整；III级：卵母细胞质色泽基本均匀、卵母细胞周围包围1-2层卵丘细胞，COCs基本完整；IV级：卵母细胞质色泽基本均匀，卵丘细胞扩散或半裸、裸卵和闭锁卵。可以选择I、II、III级及IV级卵质较好的半裸、裸卵用于后续的成熟培养，以提高成熟卵子的质量。
本发明所述选育方法中，所述体外胚胎生产过程包括：对操作(2)中采集的卵母细胞进行体外成熟培养，得到成熟卵母细胞；采用婆莫云杂交牛公牛的精子对所述成熟卵母细胞进行体外受精，得到受精卵；将受精卵进行体外培养。
图2示出体外胚胎生产的流程示意图。如图2所示，体外胚胎生产包括卵母细胞体外成熟培养、体外受精和受精卵体外培养。本发明中，采用微滴培养法对卵母细胞进行成熟培养。例如，在培养皿中做成多个100μl的成熟培养液的微滴，在每个微滴中放入20-30枚卵母细胞，覆盖石蜡油，然后置于38.5℃、95％空气、5％CO2、饱和湿度条件的培养箱中培养18-24h，优选为培养20-22h。经成熟培养的卵母细胞在倒置显微镜下观察形态判断其是否成熟。以细胞质均匀、没有空泡、其周围的卵丘细胞发生扩展，去掉卵丘细胞后可见到位于卵周间隙的第一极体为成熟标志，或者通过染色后观察到第一极体排出者为成熟。
卵母细胞经培养成熟后，对其进行体外受精以获得受精卵。在本发明中，将培养成熟后的卵母细胞经洗涤3次后放入100μl的精子培养液微滴中，每微滴中放入15-20枚卵母细胞，在5％CO2、95％空气、38.5℃的饱和湿度条件的培养箱内培养5-20h。培养结束后，精卵有效结合，形成受精卵。所述培养时间优选为5-10h，这样不仅提高体外受精效果，还可以最大程度地缩短体外胚胎生产过程。
获得受精卵后，对其进行体外培养，即，将受精卵放入发育培养液中之后置于培养箱中培养7-8d，培养条件为38.5℃、95％空气、5％CO2、饱和湿度。分别在第3天和第7天统计卵裂数和囊胚数。在倒置显微镜下观察胚胎形态，按国际胚胎移植学会描述的胚胎分级标准分级，选择质量好的早期囊胚和囊胚供移植。本发明所述的体外培养过程中，采用的发育培养液是含5％胎牛血清(FCS)的合成输卵管液(SOF)和含5％FCS的CR1aa培养液。
经过本发明所述选育方法获得的肉牛具有耐热抗蜱，繁殖性能高且适应性强的特点。该耐热肉牛体型细致紧凑，各部结合良好，成年母牛体重可达450Kg，成年公牛体重可达700Kg左右，而且其产肉性能好，优质肉产量高，经济价值高。
应该注意的是，上述实施例对本发明进行说明而不是对本发明进行限制，并且本领域技术人员在不脱离所附权利要求的范围的情况下可设计出替换实施例。在权利要求中，不应将位于括号之间的任何参考符号构造成对权利要求的限制。单词“包含”不排除存在未列在权利要求中的元件或步骤。位于元件之前的单词“一”或“一个”不排除存在多个这样的元件。单词第一、第二、以及第三等的使用不表示任何顺序。可将这些单词解释为名称。
Claims (8)
1.一种耐热肉牛的选育方法，包括以下操作：
(1)通过杂交获得婆墨云杂交牛；
(2)对所述婆墨云杂交牛母牛进行卵母细胞采集；
(3)利用操作(2)中采集的卵母细胞和所述婆墨云杂交牛公牛的精子进行体外胚胎生产，得到牛胚胎；
(4)将所述牛胚胎移植进入婆墨云杂交牛母牛体内，经发育成熟后生产；
所述体外胚胎生产过程包括：对操作(2)中采集的卵母细胞进行体外成熟培养，得到成熟卵母细胞；采用婆墨云杂交牛公牛的精子对所述成熟卵母细胞进行体外受精，得到受精卵；将受精卵进行体外培养；
所述受精卵的体外培养过程中，将受精卵放入发育培养液中之后置于培养箱中培养7-8d，培养条件为38.5℃、95％空气、5％CO2、饱和湿度，采用的发育培养液是含5％胎牛血清的合成输卵管液和含5％胎牛血清的CR1aa培养液。
2.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：所述操作(1)中，婆墨云杂交牛是以婆罗门牛为父本，墨云杂交牛为母本进行杂交得到的。
3.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：所述操作(1)中，婆墨云杂交牛是以婆墨杂交牛为父本，婆云杂交牛为母本进行杂交得到的。
4.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：所述操作(2)中，采用活体采卵方法对所述婆墨云杂交牛母牛进行卵母细胞采集。
5.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：所述卵母细胞的体外成熟培养过程中，将卵母细胞放入成熟培养液中之后置于培养箱中培养18-24h，培养条件为38.5℃、95％空气、5％CO2、饱和湿度。
6.根据权利要求5所述的选育方法，其特征在于：所述卵母细胞在培养箱中培养20-22h。
7.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：所述体外受精过程中，将成熟卵母细胞放入精子培养液中之后置于培养箱中培养5-20h，培养条件为38.5℃、95％空气、5％CO2、饱和湿度。
8.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：所述操作(2)中，采集其卵母细胞的婆墨云杂交牛母牛是年龄3-10岁，健康、中等膘情、体重380-480kg，产后60d以上，性周期正常、经直肠检查或B超检查表明卵巢形态和机能正常的经产母牛。
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| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Huang Bizhi Inventor after: Kai Kai Xing Inventor after: Fu Meifen Inventor after: Yang Kai Inventor after: Yang Guorong Inventor after: Wang Ankui Inventor after: He Zhanxing Inventor after: Zhang Jicai Inventor after: Jin Xiandong Inventor after: Liu Jianyong Inventor after: Yuan Xiping Inventor after: Zhao Gang Inventor before: Huang Bizhi Inventor before: Yang Guorong Inventor before: Wang Ankui Inventor before: Yuan Xiping Inventor before: Zhang Jicai Inventor before: He Zhanxing |
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| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: HUANG BIZHI YANG GUORONG WANG ANKUI YUAN XIPING ZHANG JICAI HE ZHANXING TO: HUANG BIZHI YANG GUORONG WANG ANKUI HE ZHANXING ZHANG JICAI JIN XIANDONG LIU JIANYONG YUAN XIPING ZHAO GANG YU KAIXING FU MEIFEN YANG KAI |
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| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20170801 Address after: 650224 Yunnan city in Kunming province north of downtown Beijing Panlong Road extension line of lower Yunnan Hengye natatorium atrium first floor Patentee after: Yunnan golden grassland animal husbandry science and Technology Development Co.,Ltd. Address before: 650051 Xiao Xiang Township, Guandu District, Yunnan, Kunming Patentee before: YUNNAN ACADEME OF GRASSLAND AND ANIMAL SCIENCE |
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| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240625 Address after: 650212 Xiaoshao Township, Guandu District, Kunming City, Yunnan Province Patentee after: YUNNAN ACADEME OF GRASSLAND AND ANIMAL SCIENCE Country or region after: China Address before: 650224, Lower basement of the courtyard of Yunnan Hengye Swimming Pool, Beijing Road Extension Line, Beishi District, Panlong District, Kunming City, Yunnan Province, China Patentee before: Yunnan golden grassland animal husbandry science and Technology Development Co.,Ltd. Country or region before: China |