CN102988373A - 用于治疗炎性肠病的磷脂与含有5-氨基水杨酸之药物的制备物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了用于治疗炎性肠病(IBD)的5-氨基水杨酸(5ASA)和磷脂的独特组合物，其中所述组合物可以是混合物、分子缔合复合物或者通过重氮连接共价键合在一起的5ASA和活性磷脂的共价化合物。本发明还涉及施用所述组合物以治疗IBD症状的方法。

Description

用于治疗炎性肠病的磷脂与含有5-氨基水杨酸之药物的制备物

本申请是2007年7月19日提交的申请号为200780027211.2(PCT/US2007/016341)之申请“用于治疗炎性肠病的磷脂与含有5-氨基水杨酸之药物的制备物”的分案申请。

相关申请

本申请要求2006年7月19日提交的美国临时专利申请60/831,843的临时优先权，其全部内容通过引用并入本文。

背景技术

1.技术领域

本发明涉及用于治疗炎性肠病(IBD)例如溃疡性结肠炎的独特的制剂，其包含5-氨基水杨酸(5ASA)和磷脂。

本发明涉及含有5ASA和磷脂物质的独特的组合物，其适于在远端小肠和/或结肠中释放5ASA以提高5ASA的抗炎功效，其中在所述远端小肠和/或结肠中存在由结肠炎或炎性肠病(IBD)引起的损伤。在某些实施方案中，所述磷脂组合物包含在生物相容性载体和/或树脂中的约15重量％至约95重量％的之磷脂酰胆碱(PC)。本发明还涉及用于制备本发明组合物以及口服、经肠和/或直肠施用本发明组合物的方法。

2.相关技术描述

关于磷脂和抗炎药物的背景技术，读者可参照美国专利No：4,918,063、5,043,329、4,950,656、5,032,585、5,763,422和5,955,451以及PCT/US01/51605，其通过引用并入本文。

炎性肠病(IBD)代表了一类溃疡性疾病，其包括影响结肠和远端小肠的溃疡性结肠炎和克罗恩病。这些疾病表现为胃肠道(GI)出血、腹泻、发热、感染的发作，并且在大多数晚期病例中，GI成瘘(GIfistulation)表现为穿孔和癌症。5ASA已用于医治患IBD的患者，尽管其缓解患者症状的效力是有限的。

虽然5ASA是有效的治疗剂，但是本领域中还需要功效提高的5ASA制备物用于治疗IBD以及缓解患者症状。

发明概述

本发明提供了含有磷脂(PL)和5-氨基水杨酸(5ASA)的组合物。

本发明还提供了含有源自大豆的磷脂组分和含5-氨基水杨酸之组分(5ASA)的组合物，所述含5-氨基水杨酸的组分包括例如美沙拉明、柳氮磺胺吡啶、奥沙拉嗪、巴沙拉嗪或其混合物。所述组合物还可包含另外的组分例如树脂(例如

S)以促进含有5ASA的组分在远端肠道中释放。

本发明还提供了含有源自大豆的磷脂酰胆碱(PC)组分和含5-氨基水杨酸(5ASA)之组分的组合物，所述含5-氨基水杨酸的组分包括例如美沙拉明、柳氮磺胺吡啶、奥沙拉嗪、巴沙拉嗪或其混合物，其中将PC和含有5ASA的组分用树脂(例如

S)围绕或包封或包埋在其中以促进该组分在远端肠道中释放。

本发明提供了用于制备含有5ASA组分和磷脂组分之制剂的方法。

本发明还提供了用于制备含有5ASA和富含PC之磷脂组分的制剂的方法。

本发明提供了用于口服、经肠或直肠施用5ASA/PL制剂的方法，其中所述施用可以是单次施用、定期施用、间歇施用或者根据任何施用方案进行施用(根据处方施用，例如每日一次，每日两次等)。

本发明提供了治疗IBD患者的方法，其通过将本发明组合物直接施用至IBD损伤部位上来降低炎症，同时：(1)减少或预防损伤的溃疡，(2)减少或预防损伤的进一步溃疡，(3)减少或愈合损伤的溃疡，(4)或者维持与远端肠相关的疏水性膜和/或层的完整性。

附图说明

参照以下详细描述以及所附的示意图可以更好地理解本发明，所述附图中同样的元件编号相同。

图1图示：用含有浓度增加的(0％至4％)葡聚糖硫酸钠(DSS)的饮用水处理小鼠4天，导致结肠炎症增加(其由单位长度的结肠组织重量增加所指示)。

图2图示：在4天期间将饮用水中DSS浓度增加，导致小鼠GI出血的剂量依赖性增加(其通过粪便血红蛋白浓度所测量)。

图3表明分别食用单独含有5ASA(100mg/kg体重)的食物或者含有以重量比1∶1与三种不同的大豆PC制备物P35、P53或P75(分别含35％、53％或75％PC)组合的5ASA的食物之小鼠的食物消耗。除了标记为Sal/Sal(盐水/盐水)的一组以外，其它所有组均通过饮用含3％DSS的饮用水来诱导结肠炎。

图4表明结肠炎症的变化，其通过食用试验食物并用含3％DSS的饮用水处理而引发结肠炎的小鼠中单位长度结肠组织的重量增加所示。

图5表明食用试验食物并用含3％DSS的饮用水处理而引发结肠炎的小鼠中粪便失血的变化。

图6表明食用试验食物并用含3％DSS的饮用水处理而引发结肠炎的小鼠中结肠髓过氧物酶(MPO)的变化。

图7使用从0(正常)至4(完全缺失粘膜腺结构)的评分表明食用试验食物并用含3％DSS的饮用水处理而引发结肠炎的小鼠中结肠粘膜的组织学变化。

图8图示了在DSS诱导结肠炎后的6天恢复期期间针对盐水、5ASA和两种PC:5ASA制剂在Sprague Dawley雄性大鼠中血细胞比容水平的变化。

图9图示了在DSS诱导结肠炎后的6天恢复期期间针对盐水、5ASA和两种PC:5ASA制剂在Sprague Dawley雄性大鼠中粪便失血的变化。

图10图示了在DSS诱导结肠炎后的6天恢复期期间针对盐水、5ASA和两种PC:5ASA制剂在Sprague Dawley雄性大鼠中结肠组织水肿的变化。

图11图示了在DSS诱导结肠炎后的6天恢复期期间针对盐水、5ASA和两种PC:5ASA制剂在Sprague Dawley雄性大鼠中结肠MPO活性的变化。

图12图示了在DSS诱导结肠炎后的6天恢复期期间针对盐水、5ASA和两种PC:5ASA制剂在Sprague Dawley雄性大鼠中结肠粘膜下层的固有层中炎性细胞数的变化。

图13图示了在DSS诱导结肠炎后的6天恢复期期间针对盐水、5ASA和两种PC:5ASA制剂在Sprague Dawley雄性大鼠中经组织学评估的结肠粘膜损伤变化。

图14表明了在DSS诱导结肠炎后的恢复期期间针对饮用水中不含DSS的盐水，饮用水中含有DSS的盐水、5ASA和PC:5ASA制剂在Sprague Dawley雄性大鼠中单位长度结肠组织重量的变化。

图15图示了在DSS诱导结肠炎后的恢复期期间针对饮用水中不含DSS的盐水，饮用水中含有DSS的盐水、5ASA和PC:5ASA制剂在Sprague Dawley雄性大鼠中结肠MPO活性的变化。

图16图示了在DSS诱导结肠炎后的恢复期期间针对饮用水中不含DSS的盐水，饮用水中含有DSS的盐水、5ASA和PC:5ASA制剂在Sprague Dawley雄性大鼠中结肠接触角的变化。

图17图示了在DSS诱导结肠炎后的恢复期期间针对饮用水中不含DSS的盐水，饮用水中含有DSS的盐水、5ASA和PC:5ASA制剂在Sprague Dawley雄性大鼠中红细胞比容水平的变化。

图18图示了在DSS诱导结肠炎后的恢复期期间针对饮用水中不含DSS的盐水，饮用水中含有DSS的盐水、5ASA和PC:5ASA制剂在Sprague Dawley雄性大鼠中粪便血红蛋白的变化。

发明详述

本发明人发现，使用啮齿动物结肠炎模型，5-氨基水杨酸(5ASA)和基于5ASA的药物与磷脂的组合物具有增进啮齿动物中结肠炎缓解的活性。在某些实施方案中，所述磷脂是源于大豆和其它来源的磷脂。在另一些实施方案中，所述磷脂是富含磷脂酰胆碱(PC)或磷脂酰胆碱衍生物的磷脂。这些5ASA/PC制剂能够口服、经肠或直肠(灌肠法)施用用于治疗或改善GI炎症、溃疡、出血以及与炎性肠病(IBD)相关的其它症状，及其相关后遗症(腹泻、发热和疼痛)。含有5ASA和磷脂的本发明组合物增强了5ASA的抗炎益处并加强了受影响粘膜的疏水屏障性，该疏水屏障性在IBD中被削弱。

本发明涉及制备用于治疗IBD的包含磷脂(在某些实施方案中，所述磷脂是富含磷脂酰胆碱(PC)的磷脂)和5ASA或含有5ASA的药物制剂之组合物的方法。这些制剂可如下制备：取包含5ASA(例如美沙拉明、柳氮磺胺吡啶、奥沙拉嗪、巴沙拉嗪或其混合物)或经由重氮键与活性5ASA共价结合的较大分子的粉末，并简单地与磷脂相混合。在某些实施方案中，将含有5ASA的组分简单地与油基磷脂组分(如含有PC的大豆卵磷脂油(例如Phosphal 35 SB(P35)))相混合。通常，5ASA与磷脂的重量比为约1∶10至约10∶1。在某些实施方案中，重量比为约1∶5至约5∶1。在另一些实施方案中，重量比为约2∶1至约1∶2。在又一些实施方案中，重量比为约1∶1。

在一些实施方案中，通过加热以及混合组分以促进制剂制备来制备所述组合物。可替代的方法是将磷脂和5ASA加热至足以将5ASA熔化在所述磷脂中的温度，通常良好的混合使得紧密混合并在分子水平形成5ASA和磷脂的缔合复合物。该方法可以在不存在空气下于高温溶剂或生物相容性油中进行以促进形成5ASA/磷脂缔合复合物而不被氧化降解。制备所述制剂的一个替代性方法是制备含有5ASA的水性制剂，然后将该水性溶液加至涂有干燥PC脂质膜的容器，然后剧烈混合、涡旋、超声或进行其它方式的搅拌以制备5ASA/PC的脂质混悬液。另一种方法是将5ASA和磷脂溶解在可溶解这两种物质的溶剂中。加热或不加热而混合该溶液，然后使溶剂蒸发。然后可将所得物质磨碎并用树脂包封用于在远端肠道中延迟释放。

使5ASA和磷脂(PL)组合的另一种方法是在5ASA的氨基和活性磷脂(PL)(例如磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸或其它活性磷脂)之间经由重氮键将所述分子共价结合在一起，其中使用标准技术来形成重氮键。与另一些5ASA前体(例如柳氮磺胺吡啶、奥沙拉嗪或巴沙拉嗪)类似，结肠中的细菌酶水解所述重氮键，释放5ASA和活性PL(例如PE)。继而，所释放的5ASA可产生其预期治疗作用，而所释放的磷脂有助于维持或恢复远端肠道的受影响粘膜之疏水性屏障，抑制炎症并促进愈合。

迄今为止的临床前研究显示磷脂(如PC)增强了5ASA治疗结肠炎的功效。

合适的试剂

用于本发明的合适的磷脂包括但不限于下述通式的磷脂：

其中R₁和R₂是饱和的和/或不饱和的8至32个碳原子的取代基，其中一个或多个碳原子可被氧原子、硫原子、氮原子或其它主族元素(例如B、C、Si、P、S、Ge和Ga)取代；R₃是H或CH₃，X是H或COOH；R₄是O或H₂。所述通式的兼性离子型磷脂的混合物和组合。

式(II)的兼性离子型磷脂的实例包括但不限于：磷脂酰胆碱类，例如磷脂酰胆碱(PC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、其它二饱和的磷脂酰胆碱或不饱和的磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、鞘磷脂或其它神经酰胺、或多种其它的兼性离子型磷脂、含有磷脂的油(例如富含ω-3脂肪酸的海生油和/或鱼油、源自大豆的卵磷脂油)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二亚油酰磷脂酰胆碱(DLL-PC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、大豆磷脂酰胆碱(大豆PC或PC_s)以及卵磷脂酰胆碱(卵PC或PC_E)。在DPPC(一种饱和磷脂)中，饱和的脂肪族取代基R₁和R₂是CH₃-(CH₂)₁₄，R₃是CH₃，X是H。在DLL-PC(一种不饱和磷脂)中，R₁和R₂是CH₃-(CH₂)₄-CH＝CH-CH₂-CH＝CH-(CH₂)₇，R₃是CH₃，X是H。在卵PC(其是不饱和磷脂的混合物)中，R₁主要含有饱和脂肪族取代基(例如棕榈酸或硬脂酸)，R₂主要是不饱和的脂肪族取代基(例如油酸或花生四烯酸)。在大豆PC中，除了饱和磷脂(棕榈酸和硬脂酸)以外，其是不饱和磷脂(油酸、亚油酸和亚麻酸)的混合物。在源自海生动物(例如磷虾、鲑鱼)的PC中，R₁和R₂基团可构成ω-3脂肪酸：二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。优选的兼性离子型磷脂包括但不限于二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱或其混合物。

实施例

组合物的制备

将Phosal 35 SB(含有约35重量％磷脂酰胆碱(PC)的大豆卵磷脂油)置于玻璃烧杯中，在适度加热下(约40℃)将5ASA(或含有5ASA的药物)加入所述玻璃烧杯中，搅拌直至达到1∶1的重量比。用pH敏感型聚合物(例如MultiSal^TM或

-S)对所得的油基制剂进行包衣，以形成聚合物包封的5ASA/PC组合物微球。这些包封微球的形成使得5ASA和PC只在药物到达远端肠道(其中pH为7或更高，并且所述聚合物包衣发生降解)时释放。然后将该制剂加入用于评估的小鼠或大鼠的食物中。将小鼠或大鼠用含有3％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液的饮用水进行处理以诱导结肠炎。

制备上述油基制剂的替代性方法是将5ASA或含有5ASA的药物混悬在水或合适的水性溶液中。然后将所述水性溶液加至涂有干燥PC脂质膜的第二容器中。随后对所得混合物进行剧烈混合、涡旋、超声或进行其它方式的搅拌以形成用于口服、经肠或直肠(灌肠法)施用的水性脂质混悬剂。

在啮齿动物结肠炎模型中使用C57BL/6小鼠的实施例

将分组的C57BL/6小鼠(每组4只)暴露于含有不同量葡聚糖硫酸钠(DSS)的饮用水4天时间。然后对所述小鼠处以安乐死，并测量每组小鼠的单位长度结肠组织重量。现参照图1，DSS处理导致结肠炎症或水肿，其通过单位长度结肠组织重量的增加来测量，其中3％DSS显示引起重量比长度测量值的增加最多。

将分组的C57BL/6小鼠暴露于含有不同量葡聚糖硫酸钠(DSS)的饮用水4天时间。在第4天结束时测量小鼠的粪便血红蛋白。现参照图2，DSS处理导致随其饮用水中DSS浓度增加而粪便血红蛋白增加，其中4％DSS显示出最高的粪便血红蛋白。

将分组的C57BL/6小鼠暴露于不同的食物4天时间，并测量其每日食物消耗(克/天)。第1组代表接受不含DSS的盐水以及不含有任何含5ASA制剂的常规食物的对照组。第2组代表接受含3％DSS的盐水以及不含有任何含5ASA制剂的常规食物的DSS对照。第3组代表接受含3％DSS的盐水以及含有MultiSal^TM包封的5ASA微球的食物之5ASA处理组。第4组至第6组设计为对5ASA与三种油基5ASA/PC制剂进行比较。第4组代表接受含3％DSS的盐水以及含有MultiSal^TM包封的5ASA/P35微球之食物的5ASA/P35(1∶1重量比的5ASA和

35SB，所述

35SB是含有约35重量％PC的油基大豆卵磷脂产品)处理组。第5组代表接受含3％DSS的盐水以及含有MultiSal^TM包封的5ASA/P53微球之食物的5ASA/P35(1∶1重量比的5ASA和

53MCT，所述

53MCT是含有约53重量％PC的油基大豆卵磷脂产品)处理组。第6组代表接受含3％DSS的盐水以及含有MultiSal^TM包封的5ASA/P75微球之食物的5ASA/P35(1∶1重量比的5ASA和

75SA，所述

75SA是含有约75重量％PC的油基大豆卵磷脂产品)处理组。现参照图3，用上述食物处理的小鼠的食物消耗(克/天)。前3个柱显示食物中不存在和存在5ASA时正常小鼠的进食模式，而后3个柱显示5ASA/PC制剂存在时小鼠的进食模式。图3表明所述活性物质不显著影响小鼠的进食模式。

比较5ASA和5ASA:PL制剂治疗诱导结肠炎的小鼠数据

先前的实施例表明包含含有3％葡聚糖硫酸钠(DSS)的盐水的饮用水能诱导小鼠结肠炎型病症。现在，可以对5ASA:PL制剂和5ASA在治疗小鼠结肠炎型病症中的作用进行比较。将几组小鼠用包含含有3％DSS的盐水的饮用水处理4天以诱导结肠炎型病症，然后利用本发明的组合物进行处理。通过测量单位长度的结肠组织重量来测定所处理组合物的功效。现参照图4，当将盐水、5ASA、5ASA:P35、5ASA:P53和5ASA:P75与DSS联用并施用到小鼠的食物中(其中一组为未用DSS处理的小鼠，并且正常进食)进行处理时，结肠炎症(通过测量指定长度的结肠组织重量增加所显示)表现出部分逆转。数据表明，3种5ASA:PL制剂在逆转组织炎症(通过结肠组织重量比长度的增加所测量)中优于单独的5ASA。

将分组的小鼠用包含含有3％DSS的盐水的饮用水处理4天以诱导结肠炎型病症，然后利用本发明的组合物进行处理。测量血液的出现(通过粪便中血红蛋白含量增加所指示)来确定5ASA对比5ASA:PL制剂的功效。现参照图5，与用盐水/DSS和5ASA/DSS处理相比，用含有5ASA:P35制剂和5ASA:P75的食物处理之小鼠的粪便中血红蛋白含量显著降低。

将分组的小鼠用包含含有3％DSS的盐水的饮用水处理4天以诱导结肠炎型病症，然后利用本发明的组合物进行处理。测量结肠炎症(通过组织髓过氧物酶(MPO)的增加所指示)来确定盐水、5ASA和5ASA:PC35的功效。现参照图6，用含有5ASA:P35制剂的食物处理小鼠的结肠炎症有所降低。

将分组的小鼠用包含含有3％DSS的盐水的饮用水处理4天以诱导结肠炎型病症，然后利用本发明的组合物处理。通过光学显微镜观察结肠粘膜并利用评分系统进行组织学评分，其中0代表正常的结肠粘膜，4代表结肠腺结构的完全丧失。现参照图7，5ASA:P35制剂显著降低了用含有5ASA/P35的食物处理的小鼠中结肠粘膜的微观损伤。

啮齿动物的数据清楚地显示，当所施用制剂包含磷脂时5ASA在远端肠道内的功效正向增强。

比较5ASA和5ASA:PL制剂治疗诱导结肠炎的大鼠数据

将大鼠用含有4％葡聚糖硫酸钠(DSS)的饮用水处理5天20小时以诱导结肠炎，之后向它们提供正常的饮用水。然后，向所述动物经胃内施用以下物质，每天2次，连续6天：(a)盐水(DSS对照)；(b)100mg/kg剂量的5ASA；(c)1∶1重量比的5ASA和Phosal 35SB(一种油基制剂)；或(d)1∶2重量比的5ASA和Phospholipon 90G(一种水性脂质混悬液)，5ASA的剂量同为100mg/kg，每日两次。制剂(c)和(d)是缔合有磷脂酰胆碱(PC)的5ASA制剂，其中PC和5ASA是在分子水平缔合的。设计这些处理用以比较5ASA以及两种不同PC-5ASA制剂的功效。

在第1、3和6天，将大鼠处以安乐死，并收集结肠组织、血液和粪便物质用于生化和组织学分析以评估结肠炎症和GI出血。一个单独组的大鼠未用DSS处理，其作为“正常对照”。

现参照图8，测量安乐死的大鼠在6天恢复期期间红细胞比容的变化。红细胞比容水平的变化表示对各组在6天恢复期期间的贫血和肠(GI)出血的间接评估。应当理解，尽管与无DSS或“正常对照”的红细胞比容水平相比，在暴露于DSS后的所有组中均观察到红细胞比容水平的中度下降(＜10％)，然而各测试组之间在6天恢复期期间的该参数无显著差异。

图9显示粪便血红蛋白的变化。可以看出，在恢复期的第一天在大多数测试组中均检测到粪便血液(对比正常对照值)，这提示5ASA±90G可能对降低粪便失血具有有益的作用。

通过测量多个生化和组织学指标来评估结肠炎症和损伤。首先，通过测量单位长度的组织湿重来评估组织水肿。图10中所示的这些结果表明在盐水处理的对照中DSS处理后3天小肠水肿最严重，这种炎性变化被5ASA降低(不显著)，在利用两种PC-[5ASA]制剂处理的大鼠中进一步降低(显著)。在DSS处理后6天，各组中该参数之间无显著性差异，一定程度上显示用5ASA联合90G处理的动物出现炎症发作回弹。

测量结肠髓过氧物酶(MPO)活性(嗜中性粒细胞浸润组织的生化标志物)作为另一个炎症标志物。图11中所示的结果表明了与上述变化相似但更显著的变化，其中5ASA显示在第3天降低并且两种PC-[5ASA]制剂进一步降低MPO活性至几乎检测不到的水平。除了用5ASA联合90G处理的组以外，所有组中的MPO活性在6天内返回到正常对照水平。

针对损伤和炎症的体征对组织进行组织学评分(在不知情的条件下)。为了评价炎症，我们使用从1(正常)至4(高度发炎)的评分系统对结肠粘膜下层的固有层中炎性细胞数进行评分。图12中所示的这些结果表明5ASA处理的大鼠的炎性细胞数降低，5ASA/P35在第3天和第6天显示出相当的或更好的抗炎活性，90G与5ASA的联合在第6天再次引起炎症回弹。

为了评价结肠粘膜损伤，使用了组织学评分系统，其中：0＝正常粘膜；1＝表面损伤；2＝损伤扩展至中腺区(mid glandular region)；3＝损伤扩展至深腺区(deep glandular region)；以及4＝损伤扩展至浆膜(肌肉)层。图13显示在DSS处理后1天所有组中粘膜损伤的增加，在3天内，用5ASA±PC治疗的大鼠中出现恢复，其中5ASA/P35显示出比90G更稳定的粘膜保护作用。

结论

上述一系列实验中所用的方案证明是评价5ASA和PC-5ASA制剂促进实验(DSS)诱导性结肠炎恢复的治疗功效的非常有用的啮齿动物模型系统。令人感兴趣的是，在撤除DSS(结肠炎诱导剂)后的前3天，炎症似乎在发展，并在第6天消退。通过使用多种生化和组织学标志物，似乎5ASA(剂量为100mg/kg)与盐水处理对照值相比在DSS处理后3天显著降低了结肠炎症和组织损伤。在4个炎症标志物中有2个，油基5ASA/P35SB制剂显示进一步增进结肠炎的恢复(与单独使用5ASA对比)。相反地，5ASA/90G制剂具有双相作用(biphasic effect)，在DSS处理后6天出现炎症回弹。我们推荐使用更低有效剂量的5ASA(50mg/kg，每日两次)利用上述模型系统重复该恢复实验，并且我们关注于用油基5ASA/P35制剂来测定：我们的PC-5ASA测试制剂与单独的5ASA相比是否可表明更清楚且可信的抗炎功效提高。

比较5ASA和5ASA:PL制剂治疗诱导结肠炎的大鼠数据

设计下述实验以比较5ASA对比5ASA:PC制剂在治疗大鼠中的功效，通过向其饮用水中添加4％葡聚糖硫酸钠(DSS)5天以上(5天，20小时)然后再使用正常饮用水来诱发所述大鼠的结肠炎。然后，在DSS诱导结肠炎后3天，在PL组分不存在或存在下，用5ASA以低于之前研究的剂量(50mg/kg，每日两次(BID))来处理大鼠。

本研究中使用32只健康雄性大鼠。将在方案、供应者、性别和重量方面可比较的大鼠连续分成4组。向第1组给予未添加DSS的饮用水。第2组至第4组接受含4％DSS的饮用水6天。在第6天，第2组经胃内接受1mL盐水，一天两次。第3组经胃内接受5ASA(50mg/kg)，一天两次。第4组经胃内接受5ASA(50mg/Kg)∶Phosal 35SB∶MCT油(1∶1∶0.3)，上文称为5ASA:PC，一天两次，其中MCT＝中链甘油三酯。

在第9天，将大鼠处以安乐死并测量以下指标：(a)红细胞比容，(b)粪便血红蛋白，(c)结肠重量/长度，(d)结肠髓过氧物酶(MPO)，(e)结肠表面疏水性以及(f)结肠组织学。

在该研究中，将大鼠用常规饮用水处理(第1组)，或者用含4％DSS的水处理然后经胃内施用盐水(第2组)、5ASA(第3组)(剂量50mg/kg，一天两次)或5ASA:PC(P35SB，重量比1∶1)(第4组)3天，此时观察到下述变化。

现参照图14，显示了结肠重量/长度。当对DSS盐水处理组(第2组)与绝对对照(无DSS，第1组)进行比较时，粘膜水肿的该测量值显著增加。该DSS诱导的粘膜水肿被5ASA(剂量50mg/kg，一天两次，第3组)部分逆转，在5ASA:PC组(第4组)中完全逆转，其中第4组的大鼠与第2组和第3组的大鼠相比具有显著性的差异，但是与第1组的大鼠不具有显著性差异。

现参照图15，显示了MPO蛋白质数据。该炎症生化测量显示与上述相同的模式，与对照组1(无DSS)相比，DSS诱导MPO活性显著增加，该炎症分别被5ASA和5ASA:PC部分以及完全逆转。第4组的大鼠与第2组和第3组的大鼠相比具有显著性差异(p＜0.05)，但是与第1组的大鼠不具有显著性差异。

现参照图16，显示了结肠接触角分析数据。各组之间未观察到结肠粘膜表面疏水性的差异，这可能是因为该表面性质在DSS诱导结肠炎后3天完全恢复。

现参照图17，显示了红细胞比容数据。在用DSS处理的实验组与对照(无DSS)，由GI出血引起的该贫血测量之间无显著性差异，但是倾向于在DSS处理组更低，但施用5ASA:PC的组(第4组)(显著更高)除外。

现参照图18，显示了粪便血红蛋白数据。该活动性GI出血的直接测量表明，与对照(无DSS)组(第1组)相比，用盐水处理的DSS组(第2组)的GI出血有所增加。DSS诱导的GI粪便失血增加被5ASA施用部分地逆转，被5ASA:PC施用完全逆转。第4组与第2组和第3组相比具有显著性差异(p＜0.05)，但是与第1组不具有显著性差异。

在DSS处理后3天，DSS诱导的大鼠结肠炎症和出血依然明显。以50mg/kg剂量每日两次经胃内单独施用5ASA促进组织从DSS诱导的结肠炎中恢复并且减少GI出血。当以与活性5ASA相同剂量经胃内施用PC-5ASA时，其使得粘膜从DSS诱导结肠炎中完全恢复，并且有少量GI出血或无GI出血迹象。

本文所引用的所有参考文献通过引用并入本文。虽然本发明公开了其优选实施方案，但是本领域技术人员通过阅读该说明书应理解可进行不背离上述和以下要求保护的本发明之范围和精神的改变和改动。

以下内容对应于母案申请的原始权利要求书：

1.一种组合物，其包含5-氨基水杨酸(5ASA)以及磷脂或含磷脂的油。

2.项1的组合物，其中所述5ASA治疗炎性肠病(IBD)的症状，所述磷脂增强5ASA的活性。

3.项1的组合物，其中所述5ASA与磷脂或含磷脂的油的重量比为约1∶10至约10∶1。

4.项1的组合物，其中所述5ASA与磷脂或含磷脂的油的重量比为约1∶5至约5∶1。

5.项1的组合物，其中所述5ASA与磷脂或含磷脂的油的重量比为约2∶1至约1∶2。

6.项1的组合物，其中所述5ASA与磷脂或含磷脂的油的重量比为1∶1。

7.项1的组合物，其中所述组合物采用树脂包封微球的形式，其在pH值为7或更高时能被释放。

8.项1的组合物，其中5ASA与磷脂在分子水平缔合形成复合物。

9.项1的组合物，其中5ASA与活性磷脂经由重氮连接共价键合。

10.项1的组合物，其中所述组合物采用树脂包封微球的形式，其在pH值为7或更高时能被释放。

11.治疗炎性肠病(IBD)的方法，其包括以下步骤：

向患有炎性肠病(IBD)的患者施用含有5-氨基水杨酸(5ASA)和磷脂的组合物。

12.项11的方法，其中所述5ASA治疗炎性肠病(IBD)的症状，所述磷脂增强5ASA的活性。

13.项11的方法，其中所述施用步骤是口服施用步骤、经肠施用步骤或直肠施用步骤。

14.项13的方法，其中所述施用步骤包括单次施用、定期施用、间歇施用或根据任何施用方案施用。

15.项11的方法，其中5ASA与磷脂或含磷脂的油的重量比为约1∶10至约10∶1。

16.项11的方法，其中5ASA与磷脂或含磷脂的油的重量比为约1∶5至约5∶1。

17.项11的方法，其中5ASA与磷脂或含磷脂的油的重量比为约2∶1至约1∶2。

18.项11的方法，其中5ASA与磷脂或含磷脂的油的重量比为1∶1。

19.项11的方法，其中所述组合物采用树脂包封微球的形式，其适于在pH值为7或更高时释放。

20.项11的方法，其中5ASA与磷脂在分子水平缔合形成复合物。

21.项11的方法，其中5ASA与活性磷脂经由重氮连接共价键合。

22.包含含有5ASA和活性磷脂之共价化合物的组合物，其中所述活性磷脂与所述5ASA经由重氮连接共价键合，由于存在催化所述重氮连接水解的细菌，其能够在远端肠道被释放。

Claims (22)

1.含有5-氨基水杨酸(5ASA)的组分和含磷脂的油在制备用于治疗炎性肠病(IBD)之药物中的用途，其特征在于所述含磷脂的油以提高所述5ASA之抗炎功效的量存在。

2.含有5-氨基水杨酸(5ASA)的组分以及磷脂或含磷脂的油在制备用于治疗炎性肠病(IBD)之非脂质体药物中的用途，其特征在于所述磷脂或含磷脂的油以提高所述5ASA之抗炎功效的量存在。

3.权利要求1或2的用途，其中5ASA与磷脂的重量比为1∶10至10∶1。

4.权利要求3的用途，其中5ASA与磷脂的重量比为1∶5至5∶1。

5.权利要求4的用途，其中5ASA与磷脂的重量比为2∶1至1∶2。

6.权利要求5的用途，其中5ASA与磷脂的重量比为1∶1。

7.权利要求1或2的用途，其中所述药物包含所述5ASA和磷脂组分的树脂包封微球，其能在pH值为7或更高时释放。

8.根据前述任一项权利要求的用途，其包括所述5ASA和所述磷脂或含磷脂的油组分的混合物。

9.权利要求1或2的用途，其中5ASA与磷脂在分子水平缔合形成复合物。

10.权利要求2的用途，其中5ASA与活性磷脂经由重氮连接共价键合，由于存在催化所述重氮连接水解的细菌，其能够在远端肠道被释放。

11.根据前述任一项权利要求的用途，其中所述药物用于直肠施用。

12.根据权利要求1-10中任一项的用途，其中所述药物用于口服施用。

13.根据前述任一项权利要求的用途，其中所述5ASA组分选自美沙拉明、柳氮磺胺吡啶、奥沙拉嗪、巴沙拉嗪及其混合物。

14.权利要求13的用途，其中所述5ASA组分是美沙拉明。

15.根据前述任一项权利要求的用途，其中所述磷脂组分是含磷脂酰胆碱的大豆卵磷脂油。

16.权利要求15的用途，其中所述磷脂组分是含35％～75％磷脂酰胆碱的大豆卵磷脂油。

17.权利要求16的用途，其中所述磷脂组分是含约35％磷脂酰胆碱的大豆卵磷脂油。

18.权利要求16或17的用途，其中5ASA与含磷脂酰胆碱之大豆卵磷脂油的重量比为1∶1。

19.权利要求2的用途，其中所述药物包含所述5ASA和磷脂组分的组合物，其制备方法如下：

将包含5ASA或经由重氮键与活性5ASA共价结合之较大分子的粉末简单地与磷脂相混合；

将所述含有5ASA的组分简单地与油基磷脂组分相混合；

加热以及混合所述组分，以促进制剂制备；

将所述磷脂和5ASA加热至足以将5ASA熔化在所述磷脂中的温度；或者

将所述5ASA和磷脂溶解在能溶解这两种物质的溶剂中，加热或不加热地混合该溶液，然后使所述溶剂蒸发。

20.权利要求19的用途，其中所述药物如权利要求3-8和11-14中任一项所定义。

21.包含在分子水平缔合形成复合物之5-氨基水杨酸(5ASA)和磷脂的组合物，其中5ASA与磷脂的重量比为1∶10至10∶1。

22.包含包括5ASA和活性磷脂之共价化合物的组合物，其中所述活性磷脂与所述5ASA经由5ASA之氨基基团和活性磷脂之间的重氮连接共价键合，所述连接能够被远端肠道中催化重氮连接水解的细菌所切割。

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