CN102978208A - 用于进行种子植物物种鉴定的特异引物对及其应用 - Google Patents

用于进行种子植物物种鉴定的特异引物对及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN102978208A
CN102978208A CN2012105340941A CN201210534094A CN102978208A CN 102978208 A CN102978208 A CN 102978208A CN 2012105340941 A CN2012105340941 A CN 2012105340941A CN 201210534094 A CN201210534094 A CN 201210534094A CN 102978208 A CN102978208 A CN 102978208A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dna
species
sequence
single stranded
spermatophyte
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2012105340941A
Other languages
English (en)
Inventor
周世良
董文攀
徐超
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Botany of CAS
Original Assignee
Institute of Botany of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Botany of CAS filed Critical Institute of Botany of CAS
Priority to CN2012105340941A priority Critical patent/CN102978208A/zh
Publication of CN102978208A publication Critical patent/CN102978208A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于进行种子植物物种鉴定的特异引物对及其应用。本发明提供了一对特异引物，由单链DNA甲和单链DNA乙组成；所述单链DNA甲为15-40bp且具有序列表的序列1所示的DNA片段的DNA片段；所述单链DNA乙为15-40bp且具有序列表的序列2所示的DNA片段的DNA片段。本发明还保护以待测植物的ycf1b基因为模板，用所述特异引物对进行PCR扩增得到的DNA片段。所述DNA片段可用于辅助进行种子植物物种鉴定。利用本发明提供的特异引物对，可开发通用试剂盒，有效鉴别陆地植物物种，推动植物DNA条形码发展和服务社会。

Description

用于进行种子植物物种鉴定的特异引物对及其应用
技术领域
本发明涉及一种用于进行种子植物物种鉴定的特异引物对及其应用。
背景技术
很多社会场合需要知道材料的物种名称，例如药材、待检样品、种子、木材等等，因为只有知道了物种名称，人们才能了解材料。然而，在许多场合下，一般的形态解剖特征不能准确鉴定物种，必须依靠分辨率更高，更准确的遗传信息。用DNA条形码技术鉴别物种正在成为一项常规技术，美国食品与药品监督管理局已经将DNA条形码技术列为应用技术之一。要让DNA条形码技术真正服务于社会，降低技术难度与成本，提高鉴别能力是当务之急。寻找合适的DNA条形码是科学家的神圣使命。对植物来说，虽然植物学家已经付出了巨大努力，但由于植物本身的复杂性和现有数据的缺乏，一些更适合作为DNA条形码的高分辨率基因资源有待于挖掘。
DNA条形码技术（DNA barcoding）是一种利用生物遗传物质DNA序列进行物种鉴定的新技术，具有快速鉴定、准确性强、对被鉴定材料完整性的要求低等特点，已成为物种鉴别重要方法之一。DNA条形码技术的关键是DNA条形码（DNA Barcode）。一个理想的DNA条形码应该具有如下属性：（1）鉴别能力高，即种内变异小而种间变异大；（2）引物通用性好，适合没有DNA序列信息的类群且扩增与测序效果好；（3）片段长短合适，最好单向测序能测通，双向测序能准确评估序列的质量并发现错误。
在动物中，线粒体上的编码基因片段CO1基本符合上述标准。但在植物中，目前还没有发现完全符合上述标准的基因片段。因此，许多系统发育分析常用的叶绿体基因片段，如atpF-H、matK、psbK-I、rbcL、rpoB、ropC1、trnH-psbA、trnL-F和核基因片段ITS或者他们的组合被建议作为植物DNA条形码。2009年在墨西哥召开的第三届国际DNA条形码大会上，matK和rbcL被建议作为植物的候选DNA条形码予以评估，trnH-psbA和ITS作为补充条码。2011年，ITS被建议考虑为候选DNA条形码。
然而，最近几年的大量评估研究均发现matK和rbcL具有很有限的鉴别能力或者引物通用性不理想。trnH-psbA虽然进化快，但在有的类群中存在倒位和SSR位点等结构，造成测序难和鉴别结果不可靠等问题。ITS是一个比较理想的候选DNA条形码，特别适合较低分类等级的区分，但存在如下问题：（1）有的类群协调进化不完全（incomplete concerted evolution），旁系同源拷贝可能造成错误；（2）现存引物不能消除真菌污染；（3）引物通用性不好，PCR扩增和测序均难。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于进行种子植物物种鉴定的特异引物对及其应用。
本发明提供了一对特异引物，由单链DNA甲和单链DNA乙组成；所述单链DNA甲为15-40bp且具有序列表的序列1所示的DNA片段的DNA片段；所述单链DNA乙为15-40bp且具有序列表的序列2所示的DNA片段的DNA片段。所述单链DNA甲具体可为序列表的序列1所示的DNA片段。所述单链DNA乙具体可为序列表的序列2所示的DNA片段。
本发明提供的特异引物对的的特点是，是基于多个物种总结设计的，能扩增不同物种，且每个物种的扩增效果均好。
所述特异引物对可用于辅助进行种子植物物种鉴定。
本发明还保护所述特异引物对在制备试剂盒中的应用。所述试剂盒的用途为辅助进行种子植物物种鉴定。本发明还保护一种包含所述特异引物对的试剂盒。所述试剂盒的用途为辅助进行种子植物物种鉴定。
本发明还保护以待测植物的ycf1b基因为模板，用所述特异引物对进行PCR扩增得到的DNA片段(分子标记ycf1)。
所述DNA片段可用于辅助进行种子植物物种鉴定。
以上任一所述种子植物可为被子植物。以上任一所述种子植物具体可为杏属植物、蜡梅科植物、定鸢尾属植物或芍药科牡丹组植物。
虽然目前有不少基因片段在不同的时期被不同的人建议为候选的植物DNA条形码，但真正在物种鉴定上没有一个能达到这个目的，尤其是亲缘关系近的物种鉴别。究其原因，要么序列太短，要么变异性低，均不能提供鉴别物种所需的信息。一些基因间隔区，如atpB-rbcL，trnH-psbA，atpF-H，psbK-I，trnL-F，虽然进化快，但由于属于非编码序列，不能用三联体密码子的方法提高序列比对的可靠性，实现序列错误的内部自动校正和同源性检验。编码基因，如rbcL，序列进化慢，不能提供足够的信息。本发明采用杏属植物、蜡梅科植物、定鸢尾属植物或芍药科牡丹组植物等作为例子，与其他被建议作为植物DNA条形码的基因作对比，充分说明分子标记ycf1优于其他基因。
既然分子标记ycf1是最优秀的候选植物DNA条形码，为什么一直没有得到应有的重视？引物的通用性可能是ycf1被忽视的最主要原因。由于ycf1的全长超出了PCR的最适扩增范围，基于其侧翼保守序列设计的引物不能有效扩增ycf1，而其内部的高变异又不能设计出通用引物。其实，这只是由于可用序列少，人们对ycf1缺乏了解的假象。经过发明人增加序列后设计的引物具有非常好的通用性，扩增成功率高达95.81%，明显高于matK的通用引物。
利用本发明提供的特异引物对，可开发通用试剂盒，有效鉴别陆地植物物种，推动植物DNA条形码发展和服务社会。
附图说明
图1为至图9为实施例2中的测序结果。图10为实施例2中的系统发育树。图11为至图19为实施例3中的测序结果。图20为实施例3中的系统发育树。图21为至图29为实施例4中的测序结果。图30为实施例4中的系统发育树。图31为至图39为实施例5中的测序结果。图40为实施例5中的系统发育树。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
实施例2至实施例5中，分别将rbcL基因片段、matK基因片段、psbA-trnH基因片段、atpB-rbcL基因片段、trnL-F基因片段、atpF-H基因片段、psbK-I基因片段作为本发明提供的特异片段的对照（对照片段）。
用于扩增rbcL基因的引物对如下：上游引物：5’ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC-3’；下游引物：5’-TTGGAAATGGGAAGATCTAGG-3’。用于扩增matK基因的引物对如下：上游引物：5’-CGATCTATTCATTCAATATTTC-3’；下游引物：5’-TCTAGCACACGAAAGTCGAAGT-3’。用于扩增psbA-trnH基因的引物对如下：上游引物：5’-CGCGCATGGTGGATTCACAATCC-3’；下游引物：5’-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3’。用于扩增atpB-rbcL基因的引物对如下：上游引物：5’-ACATCKARTACKGGACCAATAA-3’；下游引物：5’-AACACCAGCTTTRAATCCAA-3’。用于扩增trnL-F基因的引物对如下：上游引物：5’-CGAAATCGGTAGACGCTACG-3’；下游引物：5’-ATTTGAACTGGTGACACGAG-3’。用于扩增atpF-H基因的引物对如下：上游引物：5’-ACTCGCACACACTCCCTTTCC-3’；下游引物：5’-GCTTTTATGGAAGCTTTAACAAT-3’。用于扩增psbK-I基因的引物对如下：上游引物：5’-TTAGCCTTTGTTTGGCAAG-3’；下游引物：5’-AGAGTTTGAGAGTAAGCAT-3’。
实施例1、用于鉴定被子植物种属的特异引物对的发现
发明人研究植物叶绿体全基因组后发现，叶绿体基因组中存在比已知标志基因进化更快的区域，适合用于系统发育分析和DNA条形码。其中，进化最快的是ycf1基因（又称Ycf1基因）。
ycf1基因是叶绿体基因组中少数功能尚不清楚的基因之一。ycf1基因位于SSC区和IR区，其中位于IR区的部分比较短，一般小于1KB，序列变异较小。分别位于IRb的拷贝常假基因化或在一些类群中丢失。ycf1基因进化快，碱基替代率高，变异程度高于matK基因，可用于系统发育分析。由于ycf1基因较长(如在烟草叶绿体基因组中为5706bp)，根据两侧翼保守序列设计的引物扩增不理想，基因内部由于变异过大不能根据其他类群设计中间引物，致使GenBank中序列很少，对该基因的开发利用造成影响。发明人在前期研究的基础上，通过获取大量具有广泛代表性的序列，认真分析不同区域的变异式样，发现ycf1基因内部存在保守区域，可以设计通用引物，可以考虑开发ycf1基因为陆生植物最佳DNA条形码。
在被子植物中，ycf1基因存在两个高变的区，分别位于ycf1基因总长位置的1-2kb之间（命名为ycf1b基因片段）和3-4kb之间（命名为ycfla基因片段）。由于ycfla基因片段有polyA会影响测序效果，加上3’端序列存在较多的插入缺失事件，两翼的序列保守性也较差，ycf1b基因片段比ycf1a基因片段更适合作为候选DNA条形码。
基于以上前期研究，设计一对用于鉴定种子植物种属的特异引物对如下：
ycf1bF（上游引物，序列1）：5’-TCTCGACGAAAATCAGATTGTTGTGAAT-3’；
ycf1bR（下游引物，序列2）：5’-ATACATGTCAAAGTGATGGAAAA-3’。
ycf1b基因片段的进化速率是是matK基因的1.27倍，是rbcL基因的3.18倍。中性检验显示ycf1b基因片段为进化中性（Tajima's D=1.0554），适用于系统发育、进化和DNA条形码。
实施例2、应用实施例1设计的特异引物对鉴定杏属植物
本实施例采用的杏属植物如下：Prunus armeniaca L.；Prunus holosericea(Batalin)Kostina；Prunus sibirica L.；Prunus mume Sieb.；Prunus zhengheensis J.Y.Zheng etM.N.Lu。具体材料信息见表1。
表1本实施例采用的杏属植物的具体材料信息
Figure BDA00002564620700031
1、取植物叶片并提取基因组DNA。
2、以步骤1提取的基因组DNA为模板，用ycf1bF和ycf1bR组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
PCR反应体系（25ul）：由2.5μL dNTP(2.5mmol/L)、2.5μL10×PCR缓冲液(含Mg2+)、上游引物和下游引物各1.25μL(5μmol/L)、0.25U聚合酶、2μL基因组DNA(20-30ng)和水组成。
PCR反应程序：94℃变性4min；94℃变性30s、55℃退火40s、72℃延伸1min，34个循环；最后72℃延伸10min。
3、将步骤2的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。结果表明，采用ycf1bF和ycf1bR组成的引物对，杏属植物均在同一位置显示特异性条带。
4、回收步骤3的特异性条带并使用ABI3730测序仪（Applied Biosystems Co.,USA）进行测序。测序结果见图1至图9，将图1至图9自左向右依次排列。
5、数据分析。有关PCR扩增效果和测序效果采用简单的统计方法。序列校对和拼接用Sequencher4.7，比对用Clustal X、MUSCLE和Se-Al2.0来完成。序列分辨率用PAUP*4.0的Neighbor-joining算法，拓扑结构的可靠性用1000次重复（Replicates）的自展分析（Bootstrap）来评估。
用采用ycf1bF和ycf1bR组成的引物对进行PCR扩增得到的特异片段构建的系统发育树见图10，用各个对照片段构建的系统发育树见图10。结果表明，对于杏属植物中扩增得到的ycf1b片段来说，该片段品种间的多态位点数明显高于其他基因，能鉴别五个物种，各个物种之间的支持率都大于50%。
实施例3、应用实施例1设计的特异引物鉴定蜡梅科植物
本实施例采用的蜡梅科植物如下：Calycan thus chinensis;Calycan thusfloridus；Calycan thus occiden talis;Chimonan thus campanula tus;Chimonan thus gramma tus;Chimonan thusnitens;Chimonan thus praecox;Chimonan thus zhejiangensis;Chimonan thus salicifolius;Idiospermum aus traliense。具体材料信息见表2。
表2本实施例采用的蜡梅科植物的具体材料信息
Figure BDA00002564620700041
检测方法同实施例2。
测序结果见图11至图19，将图11至图19自左向右依次排列。
用采用ycf1bF和ycf1bR组成的引物对进行PCR扩增得到的特异片段构建的系统发育树见见图20。结果显示，蜡梅科植物扩增得到的ycf1b片段可以很好的鉴定蜡梅科植物。
实施例4、应用实施例1设计的特异引物鉴定芍药科牡丹组
本实施例采用的芍药科牡丹组植物的物种如下：Peaoniacathayana;Peaoniaostii;Peaonia decomposi ta;Peaonia rockii;Peaoniajishanensis;Peaonia qiui;Peaoniadelavayi;Peaoniaobovata(外类群)。具体材料信息见表3。
表3本实施例采用的芍药科牡丹组植物的具体材料信息
编号 物种信息 凭证标本 采集地点
BOP001030 P. qiui H04041.4 美国，华盛顿
BOP001444 P. decomposita MEK.H6010-2 四川马尔康红心桥
BOP001481 P. ostii BZ.CV072 安徽亳州十九里
BOP001533 P.rockii DB07 四川理县朴头乡四南村
BOP001538 P. decomposita MEK486 四川马尔康县松岗山坡
BOP001585 P.jishanensis HY449 陕西华阴市华山小西峰飞龙瀑布
BOP001643 P.jishanensis JS058 山西稷山县西社镇马家沟村见坡
BOP001735 P.jishanensis YJ150 山西永济县城西区水峪口村屹斗南
BOP001888 P.rockii TS448 甘肃天水市秦州区李子林场长河工区
BOP001903 P.rockii LY936 陕西略阳县白水江乡白洋沟
BOP001981 P. qiui BR04 湖北保康后坪镇九池村
BOP001985 P. qiui BQ-02 湖北保康后坪镇九池村
BOP002046 P.delavayi NL.817 云南宁蒗县泸沽湖幽谷
BOP002056 P.delavayi H06015-3 西藏波密古乡村
BOP002139 P.delavayi WH03 云南昆明西山
BOP002185 P.delavayi SW14 四川木里沙湾
BOP002190 P.delavayi J03 云南香格里拉县哈拉村
BOP002201 P.delavayi R01 云南香格里拉县哈拉村
BOP003923 P.cathayana P44 河南嵩县
BOP003948 P. decomposita KD.090520 康定大河沟村悬崖上
BOP003950 P.rockii GQ170 甘泉
BOP000902 P.obovata 902 中国，黑龙江省，塔河县，县城植物园
BOP000915 P.obvata 915 中国，吉林，桦甸
检测方法同实施例2。
测序结果见图21至图29，将图21至图29自左向右依次排列。
系统发育树见图30。结果表明，对于芍药科牡丹组植物中扩增得到的ycf1b片段来说，利用ycf1b基因片段可以很好的鉴定牡丹组的7个物种，并且各个分支的支持率均大于50%。
实施例5、应用实施例1设计的特异引物鉴定鸢尾属植物
本实施例采用的鸢尾属32个物种如下：Iris sanguinea;Iris ensata;Iris laeyigata;Irismandshurica;Iris uniflora;Iris pseudacorus;Iris tec torum;Iris anguifuga;Iris sibirica;Irisdarvarica;Belamcandachinensis;Iris lac t ea var.chinensis;Irisruthenica var.nana;Iris pandura ta;Iris Ioczyi;Iris tigricia;Iris decora;Irischrysograghes;Iris coIIettii;Iris pseudacorus;Irisspeculatrix;Iris germanica;Iris scariosa;Iris scariosa;Iris bloudowii;Iris collettii;Iris dela vayi;Irisforres tii;Iris subdicho toma;Iris tigri dia;Iris dic toma;Iris sanguinea;Irisensata;Iris rossii;Iris uniflora;Iris delavayi;Iris bulleyana var.alba;Irisse tosa;Iris tigri dia;Irisforres tii;Iris speculatrix;Iris bulleyana;Irischrysographes;Iris dichotoma;Iris latistyla.。具体材料信息见表4。
表4本实施例采用的鸢尾属植物的具体材料信息
Figure BDA00002564620700051
Figure BDA00002564620700061
检测方法同实施例2。测序结果见图31至图39，将图31至图39自左向右依次排列。
系统发育树见图40。结果显示,对于鸢尾属植物中扩增得到的ycf1b片段来说，序列多态性比较高，能很好的鉴别本实施例中绝大部分鸢尾，并且各个物种之间的支持率大于50%。
综上所述，ycf1b是鉴别鸢尾的一个很好的DNA条形码。
Figure IDA00002564621500011

Claims (7)

1.特异引物对，由单链DNA甲和单链DNA乙组成；所述单链DNA甲为15-40bp且具有序列表的序列1所示的DNA片段的DNA片段；所述单链DNA乙为15-40bp且具有序列表的序列2所示的DNA片段的DNA片段。
2.如权利要求1所述的特异引物对，其特征在于：所述单链DNA甲为序列表的序列1所示的DNA片段；所述单链DNA乙为序列表的序列2所示的DNA片段。
3.权利要求1或2所述特异引物对在辅助进行种子植物物种鉴定中的应用。
4.权利要求1或2所述特异引物对在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为辅助进行种子植物物种鉴定。
5.包含权利要求1或2所述特异引物对的试剂盒；所述试剂盒的用途为辅助进行种子植物物种鉴定。
6.以待测植物的ycf1b基因为模板，用权利要求1或2所述特异引物对扩增得到的DNA片段。
7.权利要求6所述DNA片段在辅助进行种子植物物种鉴定中的应用。
CN2012105340941A 2012-12-11 2012-12-11 用于进行种子植物物种鉴定的特异引物对及其应用 Pending CN102978208A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012105340941A CN102978208A (zh) 2012-12-11 2012-12-11 用于进行种子植物物种鉴定的特异引物对及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012105340941A CN102978208A (zh) 2012-12-11 2012-12-11 用于进行种子植物物种鉴定的特异引物对及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102978208A true CN102978208A (zh) 2013-03-20

Family

ID=47852546

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2012105340941A Pending CN102978208A (zh) 2012-12-11 2012-12-11 用于进行种子植物物种鉴定的特异引物对及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102978208A (zh)

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104404629A (zh) * 2014-05-06 2015-03-11 广州白云山和记黄埔中药有限公司 一种溪黄草及纤花线纹香茶菜的dna鉴别方法
CN104404131A (zh) * 2014-09-17 2015-03-11 南京市产品质量监督检验院 一种鉴别红木及其制品的dna条形码技术及其使用方法
CN105603103A (zh) * 2016-03-11 2016-05-25 中国中医科学院中药研究所 一种鉴别鱼腥草与百部还魂的方法
CN105779634A (zh) * 2016-05-17 2016-07-20 中国林业科学研究院资源昆虫研究所 一种用于檀香分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法
CN106834471A (zh) * 2017-02-17 2017-06-13 丽水市农业科学研究院 Dna条形码鉴别畲药食凉茶基原物种及其近缘易混种的方法
CN107130038A (zh) * 2017-06-07 2017-09-05 苏州市李良济健康产业有限公司 一种用于鉴定中药当归的引物对及其应用
CN107190090A (zh) * 2017-07-19 2017-09-22 福建农林大学 一种半边莲与通泉草的分子鉴别引物及方法
CN109439787A (zh) * 2018-11-14 2019-03-08 黑龙江省农业科学院草业研究所 一种鉴别禾本科牧草的分子标记方法
CN111133117A (zh) * 2017-07-28 2020-05-08 美国康宝莱国际公司 从膳食补充剂中分离出的植物dna的鉴定
CN111424110A (zh) * 2020-05-29 2020-07-17 天津中医药大学 一种鉴别皂荚的试剂盒及鉴别和定量方法
CN113186338A (zh) * 2020-09-14 2021-07-30 中国科学院植物研究所 用于进行被子植物物种鉴定的通用引物及其应用
CN113621729A (zh) * 2021-08-11 2021-11-09 河北师范大学 一种适用于杜鹃花属物种鉴定的matK引物及方法
CN113913544A (zh) * 2021-10-15 2022-01-11 重庆大学 鉴定有毒植物的dna条形码及其检测方法
CN113957168A (zh) * 2021-09-02 2022-01-21 天津中医药大学 一种用于鉴定赤芍的基原植物的试剂盒及鉴定方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KURT M ET AL: "Primer development for the plastid region ycf1 in Annonaceae and other magnoliids", 《AM J BOT》 *
KURT M,ET AL: "Phylogenetic utility of ycf1 in orchid:a plastid gene more variable than matK", 《PLANT SYST EVOL》 *
WENPAN DONG ET AL: "Highly Variable Chloroplast Markers for Evaluating Plant Phylogency at low Taxonomic Levels and for DNA Barcoding", 《PLOS ONE》 *

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104404629A (zh) * 2014-05-06 2015-03-11 广州白云山和记黄埔中药有限公司 一种溪黄草及纤花线纹香茶菜的dna鉴别方法
CN104404131A (zh) * 2014-09-17 2015-03-11 南京市产品质量监督检验院 一种鉴别红木及其制品的dna条形码技术及其使用方法
CN105603103A (zh) * 2016-03-11 2016-05-25 中国中医科学院中药研究所 一种鉴别鱼腥草与百部还魂的方法
CN105779634A (zh) * 2016-05-17 2016-07-20 中国林业科学研究院资源昆虫研究所 一种用于檀香分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法
CN106834471A (zh) * 2017-02-17 2017-06-13 丽水市农业科学研究院 Dna条形码鉴别畲药食凉茶基原物种及其近缘易混种的方法
CN107130038A (zh) * 2017-06-07 2017-09-05 苏州市李良济健康产业有限公司 一种用于鉴定中药当归的引物对及其应用
CN107190090A (zh) * 2017-07-19 2017-09-22 福建农林大学 一种半边莲与通泉草的分子鉴别引物及方法
CN111133117A (zh) * 2017-07-28 2020-05-08 美国康宝莱国际公司 从膳食补充剂中分离出的植物dna的鉴定
CN109439787A (zh) * 2018-11-14 2019-03-08 黑龙江省农业科学院草业研究所 一种鉴别禾本科牧草的分子标记方法
CN111424110A (zh) * 2020-05-29 2020-07-17 天津中医药大学 一种鉴别皂荚的试剂盒及鉴别和定量方法
CN111424110B (zh) * 2020-05-29 2022-10-18 天津中医药大学 一种鉴别皂荚的试剂盒及鉴别和定量方法
CN113186338A (zh) * 2020-09-14 2021-07-30 中国科学院植物研究所 用于进行被子植物物种鉴定的通用引物及其应用
CN113186338B (zh) * 2020-09-14 2022-07-26 中国科学院植物研究所 用于进行被子植物物种鉴定的通用引物及其应用
CN113621729A (zh) * 2021-08-11 2021-11-09 河北师范大学 一种适用于杜鹃花属物种鉴定的matK引物及方法
CN113621729B (zh) * 2021-08-11 2024-05-28 河北师范大学 一种适用于杜鹃花属物种鉴定的matK引物及方法
CN113957168A (zh) * 2021-09-02 2022-01-21 天津中医药大学 一种用于鉴定赤芍的基原植物的试剂盒及鉴定方法
CN113957168B (zh) * 2021-09-02 2024-04-12 天津中医药大学 一种用于鉴定赤芍的基原植物的试剂盒及鉴定方法
CN113913544A (zh) * 2021-10-15 2022-01-11 重庆大学 鉴定有毒植物的dna条形码及其检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102978208A (zh) 用于进行种子植物物种鉴定的特异引物对及其应用
Edwards et al. DNA barcoding of a large genus, Aspalathus L.(Fabaceae)
Torrecillas et al. Modularity reveals the tendency of arbuscular mycorrhizal fungi to interact differently with generalist and specialist plant species in gypsum soils
Gontcharov Phylogeny and classification of Zygnematophyceae (Streptophyta): current state of affairs
Samanta et al. Analysis of diversity of chromophytic phytoplankton in a mangrove ecosystem using rbcL gene sequencing
Liu et al. Species identification of Rhododendron (Ericaceae) using the chloroplast deoxyribonucleic acid PsbA-trnH genetic marker
Ren et al. DNA barcoding of Corydalis, the most taxonomically complicated genus of Papaveraceae
Jiang et al. Multi-scale factors affecting composition, diversity, and abundance of sediment denitrifying microorganisms in Yangtze lakes
Somaratne et al. Complete chloroplast genome sequence of Xanthium sibiricum provides useful DNA barcodes for future species identification and phylogeny
Wan et al. Study of genetic relationships and phylogeny of the native Populus in Southwest China based on nucleotide sequences of chloroplast trn T–trn F and nuclear DNA
Buczkowska et al. Allopolyploid speciation of Calypogeia sphagnicola (Jungermanniopsida, Calypogeiaceae) based on isozyme and DNA markers
CN104561332A (zh) 一种鉴定山杨性别的ssr分子标记及其应用
Dong et al. Genetic variation and gene flow in the endangered aquatic fern Ceratopteris pteridoides in China, and conservation implications
Liu et al. Identification of medical plants of 24 Ardisia species from China using the matK genetic marker
SÁnchez-Baracaldo Phylogenetic relationships of the subfamily Taenitidoideae, Pteridaceae
CN104004845A (zh) 鉴定待测品种是否为中棉所63的方法及其专用引物组
Ohga et al. Morphological and Anatomical Analyses of the Serpentine Ecotype of Adenophora triphylla var. japonica (Campanulaceae)
Du et al. DNA barcode assessment of Ceramiales (Rhodophyta) in the intertidal zone of the northwestern Yellow Sea
Lu et al. Molecular analyses of Ficus erecta and its allies within the subsection Frutescentiae (Moraceae)
Bhagwat et al. Evaluation of genetic variability in Symplocos laurina Wall. from two biodiversity hotspots of India
CN104774948A (zh) 河北白术pcr鉴定试剂盒及鉴定方法
Kadam et al. Revised molecular phylogeny, global biogeography, and diversification of palms subfamily Coryphoideae (Arecaceae) based on low copy nuclear and plastid regions
Cheng et al. Corydalis huangshanensis (Fumariaceae), a new species from Anhui, China
Neyland et al. A cladistic analysis of Monotropa uniflora (Ericaceae) inferred from large ribosomal subunit (26S) rRNA gene sequences
Chennaoui-Kourda et al. Phylogenetic relationships of Mediterranean Hedysarea species assessed by AFLP markers

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20130320