CN102941073A

CN102941073A - 一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法及用途

Info

Publication number: CN102941073A
Application number: CN2012104057851A
Authority: CN
Inventors: 江正瑾; 刘正华; 彭咏波; 于沛; 王婷婷; 周证印
Original assignee: Jinan University
Current assignee: Jinan University
Priority date: 2012-10-22
Filing date: 2012-10-22
Publication date: 2013-02-27
Anticipated expiration: 2032-10-22
Also published as: CN102941073B

Abstract

本发明属于有机聚合材料色谱研究领域，公开了一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法及其应用。该方法包括以下步骤：将含磷酸胆碱结构的化合物、交联剂、致孔剂和引发剂混合，超声脱气后，灌入经过预处理的石英毛细管柱内，然后将石英毛细管柱的两端封口，放入水浴中反应，反应完毕后除去石英毛细管中的未反应物，得到仿生磷脂膜整体柱。该仿生磷脂膜整体柱可以应用于分离小分子和整体蛋白，也可应用于制备细胞膜亲和整体色谱柱。

Description

一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法及用途

技术领域

本发明属于有机聚合材料色谱研究领域，特别涉及一种磷脂有机整体分离介质的制备方法及应用，即为一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法及应用。

背景技术

磷脂膜色谱又称固定化人工膜色谱（Immobilized Artificial Membrane,IAM），是新药研究中广泛使用的一种模拟生物膜色谱法，由于固定相结构跟细胞膜磷脂层类似，具有很好的仿生特性，已成功应用于预测药物的小肠吸收、血脑屏障通透性、透皮吸收、体内分布、药效活性等方面[ValkóKL,Nunhuck SB,Hill AP.Estimating unbound volume of distribution and tissue binding by in vitroHPLC-based human serum albumin and immobilised artificial membrane-bindingmeasurements.J Pharm Sci.2011;100(3):849-862；Liu YY,Li LL,Dai RJ,Qu F,Geng LN,Li XM,Deng YL.Assessment of the Enzymatic Activity and Inhibitionusing HPFA with a Microreactor,Trypsin,Absorbed on Immobilized ArtifcialMembrane.J Chromatogr Sci.2010;48(2):150-155]。目前，商业化磷脂膜色谱柱只有磷脂酰胆碱（Phosphatidyl cholines，PC）的填充柱（Regis Chem Co,MortonGrove，IL，USA），主要制备策略是通过双链的酯键、单链的醚键或者删除甘油骨架的单链将磷脂酰胆碱极性官能团键合到硅胶表面，可以很好地用于蛋白质分离和预测药物的膜渗透性等。但目前的IAM填充柱存在如色谱柱填充制备复杂、磷脂类型单一、细胞膜仿生性不强、pH适应范围窄等不足，严重限制了磷脂膜色谱柱在药物研发中的应用。

有机聚合物整体色谱柱（monolithic column）是由单体、交联剂、致孔剂和引发剂等组成的混合物通过原位聚合得到的连续均一的棒状聚合物，它具有制备过程简单、渗透性好、传质速度快、生物兼容性好、耐酸碱性好、单体种类多等优点，可实现快速、高效、高通量的分离，近年来已引起人们的热切关注[Smith NW，Jiang Z.Developments in the use and fabrication of organicmonolithic phases for use with high-performance liquid chromatography andcapillary electrochromatography.J ChromatogrA2008,1184(1-2):416-440;JiangZ,Smith NW，Liu Z.Preparation and application of hydrophilic monolithic columns.J Chromatogr A2011,1218(17):2350-2361.]。针对不同的分析客体和目的，设计合成新型的单体，并制备相关的特殊结构的整体柱，一直是整体色谱柱研究的热点。本课题组[Jiang Z,Reilly J,Everatt B,Smith NW.Novel zwitterionicpolyphosphorylcholine monolithic column for hydrophilic interactionchromatography.J Chromatogr A.2009;1216(12):2439-48.]用2-甲基丙烯酰羟乙基磷酰胆碱（MPC）为单体，成功制备了含2个碳链磷酸胆碱官能团的毛细管整体柱，具有良好通透性、机械强度和孔径分布，但与细胞膜磷脂层的18个碳链长度连接磷酸胆碱官能团的结构相差较大。鉴此，制备与细胞膜磷脂双分子层高度接近的有机聚合物，开发出制备简单、重现性和稳定性好、选择性强、预测准确性高的新型磷脂膜整体色谱柱和以此为母体基质制备成的细胞膜亲和整体柱，可为新药研发中预测与药物膜相互作用、细胞膜渗透性、药物磷脂沉积安全性等有关的药理作用提供有效的技术支撑。目前，相关的磷脂膜整体色谱柱的研究尚未见文献报导。

发明内容

为了解决上述现有技术中存在的不足之处，本发明的首要目的在于提供一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法。

本发明的另一目的在于提供上述方法制备得到的仿生磷脂膜整体柱。

本发明的再一目的在于提供上述仿生磷脂膜整体柱的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法，包括以下操作步骤：以含磷酸胆碱结构的化合物为功能单体，将其与交联剂、生孔剂和引发剂混合，进行热催化反应，在经过预处理的石英毛细管内原位聚合成仿生磷脂膜整体柱。

所述经过预处理的石英毛细管是按以下操作步骤制备得到：用1mol/L的NaOH溶液冲洗石英毛细管15min，再将石英毛细管两端封口放在100℃水浴锅反应2h；然后用去离子水冲洗石英毛细管，直至流出来的液体pH为7；接着用甲醇冲洗石英毛细管后用氮气干燥4h；干燥完毕后，把体积比为1:1的甲醇和3-（异丁烯酰氧）丙基三甲氧基硅烷（γ-MAPs）混合液打进石英毛细管中，两端封口且放在60℃水浴锅内反应12h；最后分别用甲醇和水各冲洗30min，氮气干燥12h，即得经过预处理的石英毛细管；通过上述操作，在石英毛细管表面的硅醇基与γ-MAPs（3-（异丁烯酰氧）丙基三甲氧基硅烷）反应，γ-MAPs键合在硅醇上。

所述含磷酸胆碱结构的化合物为2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱（MDPC），其结构式如下式所示：

其中n=10。

上述的一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法，具体包括以下操作步骤：将含磷酸胆碱结构的化合物、交联剂、致孔剂和引发剂混合，超声脱气后，灌入经过预处理的石英毛细管柱内，然后将石英毛细管柱的两端封口，放入水浴中反应，反应完毕后除去石英毛细管中的未反应物，得到仿生磷脂膜整体柱。

所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA），所述生孔剂为质量比为70：30～90：10的异丁醇与1,4-丁二醇的混合物，所述引发剂为偶氮二异丁腈（AIBN）。

所述反应的温度为60℃，时间为2～24h；所述含磷酸胆碱结构的化合物与交联剂的质量比为50：50～70：30；所述引发剂的质量为含磷酸胆碱结构的化合物与交联剂总质量的0.5%～1%；所述含磷酸胆碱结构的化合物与交联剂的质量之和，与生孔剂的质量比为30：70～10：90。

所述超声脱气的时间为5分钟；所述除去石英毛细管中的未反应物是按照以下步骤进行操作：将石英毛细管的一端与高压泵连接，用有机溶剂进行冲洗，所述有机溶剂为甲醇、乙腈和丙酮中的至少一种。

一种根据上述方法制备得到的仿生磷脂膜整体柱，该色谱柱具有连续的整体的多孔结构。

上述的仿生磷脂膜整体柱在分离小分子和整体蛋白中的应用。

上述的仿生磷脂膜整体柱在制备细胞膜亲和整体色谱柱中的应用。

上述的仿生磷脂膜整体柱在预测药物相关的跨膜转运参数的研究中的应用。

本发明采用的原料为2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱（MDPC），其一端具有磷酸胆碱结构，另一端具有可供聚合反应的丙烯酸脂类结构。本发明以MDPC为功能单体，混合交联剂和生孔剂及引发剂，经过热催化反应，在石英毛细管内原位聚合成多孔的磷脂膜整体色谱柱，其材料表面具有仿生的磷酸胆碱结构，可以有效的模拟药物与细胞膜的相互作用，预测药物跨膜转运的相关参数及以此基质而制备磷脂膜-细胞膜亲和整体色谱柱。

本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：本发明所得磷脂膜整体柱及以此为基质母体制备成的细胞膜亲和整体柱，将类似细胞膜磷脂结构的磷酸胆碱结构功能单体通过共聚的方式，与交联剂EDMA，硅烷化试剂γ-MAPs（3-（异丁烯酰氧）丙基三甲氧基硅烷）形成稳定的高聚材料，并与毛细管壁紧密结合，既具有细胞膜的仿生功能（磷酸胆碱功能单体）和生物兼容性好，又具有良好的通透性、机械强度、耐酸碱性好，可很好地应用于蛋白、多肽和小分子化合物的富集分离和预测与药物膜相互作用、细胞膜渗透性、药物磷脂沉积安全性等有关的药理作用研究。

附图说明

图1为实施例2共聚反应的示意图。

图2为实施例3制备的仿生磷脂膜整体柱的扫描电镜图，其中a为放大至4800倍左右电镜图，b为放大至7500倍左右电镜图。

图3为实施例3制备的仿生磷脂膜整体柱的液相保留行为图，其中纵坐标表示流动相中乙腈的体积百分比，横坐标表示两种化合物的保留因子。

图4为实施例3制备的仿生磷脂膜整体柱在反相模式下对六种芳香酮类化合物的分离图，其中峰1为苯乙酮，峰2为苯丙酮，峰3为苯丁酮，峰4为苯戊酮，峰5为苯庚酮，峰6为苯辛酮。

具体实施方式

下面结合具体的实例与附图对本发明作进一步详细的叙述，但本发明的实施方法灵活，不仅仅限于此例所述的具体操作方式。

实施例2～8所使用的经过预处理的石英毛细管是按以下操作步骤制备得到：用1mol/L的NaOH溶液冲洗石英毛细管15min，再将石英毛细管两端封口放在100℃水浴锅反应2h；然后用去离子水冲洗石英毛细管，直至流出来的液体pH为7；接着用甲醇冲洗石英毛细管后用氮气干燥4h；干燥完毕后，把体积比为1:1的甲醇和3-（异丁烯酰氧）丙基三甲氧基硅烷（γ-MAPs）混合液打进石英毛细管中，两端封口且放在60℃水浴锅内反应12h；最后分别用甲醇和水各冲洗30min，氮气干燥12h，即得经过预处理的石英毛细管。

实施例1：2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱（MDPC）的合成

（1）在干燥的三口烧瓶中，加入25g 1,12-十二烷二醇、300mL干燥的四氢呋喃和4mL干燥的吡啶，搅拌得无色溶液；将5mL甲基丙烯酰氯溶于50mL干燥的四氢呋喃中，充分溶解，滴加到三口烧瓶中，1h滴加完毕；反应20h后，过滤除去生成的白色吡啶盐酸盐；减压蒸馏除去溶剂，得到白色固体；加入160mL环己烷回流溶解，室温过夜，有白色固体析出，过滤除去；减压蒸馏除去环己烷，得到粗产物，过硅胶柱纯化，得到7.6克油状产物。油状产物的NMR鉴定为：1H NMR(400MHz,CDCl3).19–1.42(m,16H),1.50–1.72(m,4H),1.94(m,3H),3.64(t,J=6.6Hz),4.13(t,J=6.7Hz,2H),5.53–5.56(m,1H),6.08–6.11(m,1H)。

（2）在三口烧瓶中加入4g步骤（1）得到的油状产物、50mL干燥的四氢呋喃、15.6g N，N-二异丙基乙胺和5.9g氯亚磷酸乙烯酯，置于-20℃低温搅拌反应20min后，加入3mL甲醇，搅拌15min，接着加入7.4g溴气，搅拌反应5min，接着加入5mL水，室温反应；待反应完成，减压蒸馏除去溶剂，得到的固体溶于30mL的乙腈/异丙醇/三氯甲烷（1.5/1.5/0.9，v/v/v）的混合溶剂中，加入45%（质量分数）的三甲胺的水溶液，室温过夜反应，加压蒸馏除去溶剂，得到的固体用四氢呋喃/水（9:1，v/v）混合溶剂溶解，用离子交换树脂初步纯化，得到的粗产物过硅胶柱纯化，得到2.8g目标产物。目标产物的NMR鉴定为1H NMR(400MHz,CD3OD)1.25–1.35(m,8H,),1.32–1.41(m,4H),1.33–1.44(m,4H),1.60–1.67(m,2H),1.63–1.71(m,2H),1.92–1.93(m,3H),3.23(s,9H),3.64(dt,2H),3.87(m,2H),4.14(t,2H),4.22–4.29(m,2H),5.59–5.62(m,1H),6.06–6.08(m,1H,)，可确定所得目标产物的结构为

其中n=10。

实施例2：仿生磷脂膜整体柱制备工艺一

将实施例1合成的2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱，与交联剂（乙二醇二甲基丙烯酸酯，EDMA）、致孔剂（异丁醇与1,4丁二醇混合）和引发剂（偶氮二异丁腈，AIBN）混匀，超声脱气5分钟，灌入经过预处理的石英毛细管柱内，反应温度为60℃，反应12h（反应示意图如图1所示），接高压泵，用甲醇冲洗，即得仿生磷脂膜整体柱。其中2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂的质量比为65:35，致孔剂中异丁醇与1,4丁二醇的质量比为80:20，2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和，与致孔剂的质量比为30:70，引发剂的质量为2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和的1%。

用扫描电子显微镜观察上述制备的仿生磷脂膜整体柱的微观形貌，可以知道整体材料具有微米级的通孔和微米级的三维连续骨架。

实施例3：仿生磷脂膜整体柱制备工艺二

将实施例1合成的2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱，与交联剂（乙二醇二甲基丙烯酸酯，EDMA）、致孔剂（异丁醇与1,4丁二醇混合）和引发剂（偶氮二异丁腈，AIBN）混匀，超声脱气5分钟，灌入经过预处理的毛细管柱内，反应温度为60℃，反应时间为12h，接高压泵，用乙腈冲洗，即得仿生磷脂膜整体柱。其中2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂的质量比为65:35，致孔剂中异丁醇与1,4丁二醇的质量比为80:20，2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和，与致孔剂的质量比为20:80，引发剂的质量为2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和的1%。

用扫描电子显微镜观察上述制备的仿生磷脂膜整体柱的微观形貌，如图2所示，可以知道整体材料具有微米级的通孔和微米级的三维连续骨架。

实施例4：仿生磷脂膜整体柱制备工艺三

将实施例1合成的2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱，与交联剂（乙二醇二甲基丙烯酸酯，EDMA）、致孔剂（异丁醇与1,4丁二醇混合）和引发剂（偶氮二异丁腈，AIBN）混匀，超声脱气5分钟，灌入经过预处理的毛细管柱内，反应温度为60℃，反应12h，接高压泵，用丙酮冲洗，即得仿生磷脂膜整体柱。其中2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂的质量比为65:35，致孔剂中异丁醇与1,4丁二醇的质量比为80:20，2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和，与致孔剂的质量比为10:90，引发剂的质量为2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和的1%。

实施例5：仿生磷脂膜整体柱制备工艺四

将实施例1中合成的2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱，与交联剂（乙二醇二甲基丙烯酸酯，EDMA）、致孔剂（异丁醇与1,4丁二醇混合）和引发剂（偶氮二异丁腈，AIBN）混匀，超声脱气5分钟，灌入经过预处理的毛细管柱内，反应温度为60℃，反应12h，接高压泵，用丙酮冲洗，即得仿生磷脂膜整体柱。其中2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂的质量比为70:30，致孔剂中异丁醇与1,4丁二醇的质量比为80:20，2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和，与致孔剂的质量比为30:70，引发剂的质量为2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和的1%。

实施例6：仿生磷脂膜整体柱制备工艺五

将实施例1合成的2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱，与交联剂（乙二醇二甲基丙烯酸酯，EDMA）、致孔剂（异丁醇与1,4丁二醇混合）和引发剂（偶氮二异丁腈，AIBN）混匀，超声脱气5分钟，灌入经过预处理的毛细管柱内，反应温度为60℃，反应12h，接高压泵，用甲醇冲洗，即得仿生磷脂膜整体柱。其中2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂的质量比为50:50,致孔剂中异丁醇与1,4丁二醇的质量比为80:20，2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和，与致孔剂的质量比为20:80，引发剂的质量为2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和的1%。

实施例7：仿生磷脂膜整体柱制备工艺六

将实施例1合成的2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱，与交联剂（乙二醇二甲基丙烯酸酯，EDMA）、致孔剂（异丁醇与1,4丁二醇混合）和引发剂（偶氮二异丁腈，AIBN）混匀，超声脱气5分钟，灌入经过预处理的毛细管柱内，反应温度为60℃，反应2h，接高压泵，用乙腈冲洗，即得仿生磷脂膜整体柱。其中2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂的质量比为65:35,致孔剂中异丁醇与1,4丁二醇的质量比为90:10，2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和，与致孔剂的质量比为20:80，引发剂的质量为2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和的1%。

实施例8：仿生磷脂膜整体柱制备工艺七

将实施例1合成的2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱，与交联剂（乙二醇二甲基丙烯酸酯，EDMA）、致孔剂（异丁醇与1,4丁二醇混合）和引发剂（偶氮二异丁腈，AIBN）混匀，超声脱气5分钟，灌入经过预处理的毛细管柱内，反应温度为60℃，反应24小时，接高压泵，用丙酮冲洗，即得仿生磷脂膜整体柱。其中单体混合物中，2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂的质量比为65:35，致孔剂中异丁醇与1,4丁二醇的质量比为70:30，2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和，与致孔剂的质量比为20:80，引发剂的质量为2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱与交联剂质量之和的1%。

实施例9：仿生磷脂膜整体柱的液相保留行为

用实施例4所得的仿生磷脂膜整体柱，乙腈和水为流动相，甲苯和硫脲为测试化合物，测试它们在如下条件下的保留行为，结果如图3所示。

测试条件：

样品：甲苯，硫脲

流动相：乙腈/水

流速： 500nL/min

检测波长： 214nm

实施例10：反相模式下对六种芳香酮类化合物的分离

用实施例4所得的仿生磷脂膜整体柱，采用梯度的条件，测试一系列苯芳酮类同系物在整体柱上的分离效果，结果如图4所示。

测试条件：

样品：苯乙酮，苯丙酮，苯丁酮，苯戊酮，苯庚酮，苯辛酮

流动相：乙腈，50mM甲酸铵溶液，pH=＝7.4

流速： 600nL/min

梯度： 0%乙腈到100%乙腈，10min。

检测波长： 214nm

实施例11：以磷脂单体为基质制备细胞膜亲和色谱柱的制备。

将培养的目标细胞（乳腺癌细胞MDA-MB-435和前列腺癌PC3细胞），在冰浴中，匀浆和超声30min，4℃，3000g离心去掉细胞核内器官，获得细胞匀浆上清液；4℃，1000g离心10min，进一步去残留细胞内器官，吸取上清溶液；4℃，1000g离心20min，获得细胞膜沉淀。加入5～10ml体积的预冷生理盐水或等渗溶液，重悬得细胞膜备用溶液。

将细胞膜备用溶液吸入流动注射泵，恒速注入磷脂整体色谱柱中，旋转震动10～60min，4℃条件下反应6～24h，既可制备得磷脂单体-细胞膜亲和色谱柱，接入高效液相色谱仪，可进行药物筛选和蛋白质、多肽及小分子的分析。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：以含磷酸胆碱结构的化合物为功能单体，将其与交联剂、生孔剂和引发剂混合，进行热催化反应，在经过预处理的石英毛细管内原位聚合成仿生磷脂膜整体柱。

2.根据权利要求1所述的一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法，其特征在于：所述经过预处理的石英毛细管是按以下操作步骤制备得到：用1mol/L的NaOH溶液冲洗石英毛细管15min，再将石英毛细管两端封口放在100℃水浴锅反应2h；然后用去离子水冲洗石英毛细管，直至流出来的液体pH为7；接着用甲醇冲洗石英毛细管后用氮气干燥4h；干燥完毕后，把体积比为1:1的甲醇和3-（异丁烯酰氧）丙基三甲氧基硅烷混合液打进石英毛细管中，两端封口且放在60℃水浴锅内反应12h；最后分别用甲醇和水各冲洗30min，氮气干燥12h，即得经过预处理的石英毛细管。

3.根据权利要求1所述的一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法，其特征在于：所述含磷酸胆碱结构的化合物为2-甲基丙烯酰氧十二烷基磷酸胆碱，其结构式如下式所示：

其中n=10。

4.根据权利要求1所述的一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法，其特征在于具体包括以下操作步骤：将含磷酸胆碱结构的化合物、交联剂、致孔剂和引发剂混合，超声脱气后，灌入经过预处理的石英毛细管柱内，然后将石英毛细管柱的两端封口，放入水浴中反应，反应完毕后除去石英毛细管中的未反应物，得到仿生磷脂膜整体柱。

5.根据权利要求1～4任一项所述的一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法，其特征在于：所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯，所述生孔剂为质量比为70：50～90：10的异丁醇与1,4-丁二醇的混合物，所述引发剂为偶氮二异丁腈。

6.根据权利要求1～4任一项所述的一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法，其特征在于：所述反应的温度为60℃，时间为2～24h；所述含磷酸胆碱结构的化合物与交联剂的质量比为50：50～70：30；所述引发剂的质量为含磷酸胆碱结构的化合物与交联剂总质量的0.5%～1%；所述含磷酸胆碱结构的化合物与交联剂的质量之和，与生孔剂的质量比为30：70～10：90。

7.根据权利要求4所述的一种仿生磷脂膜整体柱的制备方法，其特征在于：所述超声脱气的时间为5分钟；所述除去石英毛细管中的未反应物是按照以下步骤进行操作：将石英毛细管的一端与高压泵连接，用有机溶剂进行冲洗，所述有机溶剂为甲醇、乙腈和丙酮中的至少一种。

8.一种根据权利要求1～7任一项所述方法制备得到的仿生磷脂膜整体柱，其特征在于：该色谱柱具有连续的整体的多孔结构。

9.根据权利要求8所述的仿生磷脂膜整体柱在分离小分子和整体蛋白中的应用。

10.根据权利要求8所述的仿生磷脂膜整体柱在制备细胞膜亲和整体色谱柱中的应用。