CN102917703B

CN102917703B - 新型ep4激动剂

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Publication number: CN102917703B
Application number: CN201180013010.3A
Authority: CN
Inventors: 村田隆彦; 天川昌洋; 寺平晋; 松村靖; 小西克彦
Original assignee: Asahi Glass Co Ltd; Kaken Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: AGC Inc
Priority date: 2010-03-08
Filing date: 2011-03-08
Publication date: 2015-08-19
Anticipated expiration: 2031-03-08
Also published as: JPWO2011111714A1; TW201139421A; PL2545917T3; ES2593229T3; CN102917703A; AU2011225259A1; MX2012010483A; PT2545917T; RU2012142653A; EP2545917B1; RU2564414C2; CA2792403A1; BR112012022632B1; HUE030206T2; AU2011225259B2; DK2545917T3; EP2545917A1; BR112012022632A2; KR101760970B1; KR20130018753A

Abstract

本发明提供代谢稳定性优异、且选择性地结合至EP4受体的化合物、以及含有其的药剂。已经发现式(1)所示的化合物或其药学上可接受的盐：其中，R¹和R²各自独立地为氢原子或碳原子数1至3的直链烷基，R³为氢原子、碳原子数1至4的烷基、烷氧基烷基、芳基、卤素原子或卤代烷基，具有不同于已知PGI₂类的选择性EP4激动剂作用，因此，含有该化合物的药剂可用于预防和/或治疗免疫疾病、心血管疾病、心脏疾病、呼吸道疾病、眼科疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、骨疾病、消化道疾病、神经疾病、皮肤疾病等。

Description

新型EP4激动剂

技术领域

本发明涉及7,7-二氟前列腺素I₂衍生物、或其药学上可接受的盐、其药物组合物、及其制药用途，其中，前列腺素(以下称作PG)的C-1位的羧基被四唑基取代，并且两个氟原子键合于PG的C-7位。更具体地，本发明涉及7,7-二氟前列腺素I₂衍生物，其是对于预防或治疗免疫疾病、心血管疾病、心脏疾病、呼吸道疾病、眼科疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、骨疾病、消化道疾病、神经疾病、皮肤疾病等有用的EP4激动剂。

技术背景

天然PG类各自会与它们的特异性受体结合，并展现出特征性作用。PGI₂、PGE₂、PGD₂、PGF₂α和血栓素A₂ (TXA₂)各自的受体分别被称为IP、EP、DP、FP和TP。进而，EP进一步具有四个亚型，EP1、EP2、EP3和EP4。这些PG受体在器官和细胞中显示不同的表达模式，即便该受体是在相同细胞中表达，由此所显示的作用也不同。

尽管天然PG类的衍生物会受到原始碳骨架的影响，但它们会随着结构变化而结合至各种受体(非专利文献1和2)。

代替前列腺素的C-1位的羧基而具有四唑基的PG衍生物已在下述专利文献1-4、非专利文献2等中被报道。进而，还报道了7,7-二氟PGI₂类及其制造方法(专利文献5和6)。此外，7,7-二氟PGI₂类被记载可用作心血管疾病的预防或治疗剂(专利文献5)。7,7-二氟PGI₂类不仅强结合至IP，而且还弱结合至EP1-4(非专利文献4和5)。然而，选择性EP4激动剂尚未被报道，所述选择性EP4激动剂是7,7-二氟PGI₂类之一，显示出对IP、EP1、EP2和EP3的弱结合亲和力，以及仅强且选择性地与EP4结合。

EP4表达于免疫细胞、炎症细胞、消化器官、血管、神经细胞、眼、肾、骨等中，EP4激动剂被研究和开发为免疫疾病、消化道疾病、心血管疾病、心脏疾病、神经疾病、眼科疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、骨疾病等的药剂。

该EP4激动剂抑制TNF-α产生、促进IL-10产生、抑制炎症反应和免疫反应，并且被认为可用作预防和/或治疗免疫疾病或炎症疾病，比如自身免疫疾病(即，肌萎缩侧索硬化症、多发性硬化症、斯耶格伦氏综合征、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮)、移植后的排斥反应等、哮喘、神经细胞死亡、关节炎、肺损伤、肺纤维化、肺气肿、支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、肝病、急性肝炎、肾炎(急性肾炎、慢性肾炎)、肾衰竭、全身炎症反应综合征、败血症、噬红细胞综合征、巨噬细胞活化综合征、斯蒂尔氏病、川崎病、烧伤、全身性肉芽肿、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、透析时的高细胞因子血症、多器官衰竭、休克和银屑病。

EP4激动剂被认为可用于预防和/或治疗动脉硬化，因为其抑制巨噬细胞的活化(非专利文献6)。

EP4激动剂被认为可用作心绞痛或心肌梗塞的预防和/或治疗剂，因为其对心脏缺血-再灌流损伤具有保护作用(非专利文献7)。

EP4激动剂被认为还可用作由脑出血、脑梗塞、蛛网膜下腔出血等造成的脑失调的预防和/或治疗剂，因为其对脑的缺血-再灌流损伤也具有保护作用(非专利文献8)。

EP4激动剂被认为还可用作肝的缺血-再灌流损伤的预防和/或治疗剂(非专利文献9)。

EP4激动剂被认为可用作青光眼的预防和/或治疗剂，因为其具有降低眼内压作用(非专利文献10)。

EP4激动剂被认为还可用于预防和/或治疗肾小球肾炎和糖尿病肾炎，因为EP4大量表达在肾小球中(非专利文献11)。

EP4激动剂被认为可用于预防和/或治疗秃头、脱发等，因为EP4还参与头发生长和头发恢复(非专利文献12)。

EP4激动剂被认为可用作促宫颈成熟(促进)剂，因为EP4还参与促宫颈成熟(非专利文献13)。

EP4激动剂被认为可用作骨质疏松症的预防和/或治疗剂、或用作骨折的治愈促进剂，因为EP4还参与成骨作用(非专利文献14和15)。

因为EP4表达于血管中，EP4激动剂使血管松弛并有助于增大血流量，因而其被认为可用于预防和/或治疗肺动脉高血压、外周动脉闭塞(闭塞性动脉硬化和血栓闭塞性血管炎)以及归因于外周循环障碍的各种症状(伴随于腰椎椎管狭窄的间歇性跛行、下肢麻痹、雷诺氏综合征、勃起功能障碍、痔疮等)(非专利文献16-20)。

EP4表达于成纤维细胞中，EP4激动剂被认为促进碱性成纤维细胞生长因子的表达，且可用于促进褥疮和创伤的治愈(非专利文献21)。

已报道了EP4表达于耳蜗中，EP4激动剂还可用于预防和/或治疗由声响诱发的听力障碍(非专利文献22)。

消化道的炎症可见于口腔、食道、胃、小肠、大肠和肛门，且包括急性炎症和慢性炎症。粘膜上皮受到物理或化学刺激的影响或者被细菌或病毒感染时会诱发炎症，并取决于该炎症的程度而发生糜烂或溃疡病变。紧张所致的胃酸过度分泌会导致胃炎、胃溃疡或十二指肠溃疡。此外，酒精的过量摄入会引起粘膜血流淤积或者胃动力下降所致的胃酸倒流，因而导致胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡或食道炎。长期服用非甾体抗炎药的整形外科患者、类风湿性关节炎患者等会患上药源性胃溃疡或十二指肠溃疡。此外，癌症患者会产生伴随放射疗法而发病的放射性肠炎或者伴随抗癌药物治疗而发病的药源性肠炎。而且，患有结核病、阿米巴痢疾等的患者会产生比如肠结核或阿米巴性结肠炎的感染性肠胃炎。除此以外，还会由于血流阻塞所致的缺血而产生缺血性肠炎等。如果患有消化道炎症的患者的免疫异常，则即使除去了病因，器官的修复仍然受阻而使病症变成慢性。在这些消化道炎症性疾病中，广义上将肠道中有炎症的疾病称为炎症性肠疾病。

另一方面，还存在着原因不明的炎症性肠道疾病。溃疡性结肠炎和克罗恩氏病是两种众所周知的疾病，它们是狭义上的炎症性肠疾病。而且，炎症性肠道疾病也包括如肠道白塞氏病和单纯性溃疡的相似疾病。它们是伴随反复的缓解和复发的难治性慢性胃肠道疾病，其中，认为该疾病的主要病因是肠道上皮的防御力下降、或者对进入肠道组织中的肠道细菌的异常肠道免疫反应。

溃疡性结肠炎是从直肠开始在大肠粘膜中连续地形成糜烂和溃疡的慢性结肠疾病，其症状包括腹痛、腹泻、血便、发烧等。另一方面，在克罗恩氏病中，可以在从口腔到大肠及肛门的任意消化道中发生病变。该疾病的特征是胃肠道中的不连续纵向溃疡和鹅卵石样外观，其症状包括腹痛、腹泻、发烧、营养物吸收障碍所致的营养不良、贫血等。

对于预防和/或治疗消化道炎症性疾病中的炎症，在已知病因的情况下则去除或抑制病因。例如，对胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡等中的炎症使用抗酸剂、抗胆碱剂、组胺H2受体拮抗剂、质子泵抑制剂等，以抑制胃酸的分泌和作用。另外，对于由非甾体抗炎药(其抑制PGE2产生)所诱发的炎症，使用PGE衍生物等以补充PGE₂。然而，不使用PGI₂衍生物。

另一方面，狭义上的炎症性肠疾病的预防或治疗包括药物疗法、营养(饮食)疗法和手术疗法。对于药物疗法，使用5-胺基水杨酸制剂(喷他沙、柳氮磺吡啶)、类固醇(泼尼松龙)、免疫抑制剂(硫唑嘌呤、巯基嘌呤和他克莫司)、抗TNF-α抗体(英夫单抗)等。最近报道了EP4激动剂对于炎症性肠疾病有效(非专利文献23-25)。

另外，因为EP4还参与粘膜保护作用，EP4激动剂被认为可用于预防和/或治疗比如胃溃疡、十二指肠溃疡等的胃肠道损伤和口腔炎(非专利文献26)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:DE 2405255

专利文献2:WO 03/103664

专利文献3:WO 00/24727

专利文献4:USP No.7402605

专利文献5:JP-A-7-330752

专利文献6:JP-A-2004-256547

非专利文献

非专利文献1:Biochim.Biophys.Acta, 1483:285-293 (2000).

非专利文献2:Br. J. Pharmacol., 122:217-224 (1997).

非专利文献3:J. Med.Chem., 22:1340-1346 (1979).

非专利文献4:Prostaglandins, 53:83-90 (1997).

非专利文献5:Br. J. Pharmacol., 134:313-324 (2001).

非专利文献6:J. Biol.Chem., 283:9692-9703 (2008).

非专利文献7:Cardiovasc.Res., 81:123-132 (2009).

非专利文献8:Neurosci.Lett., 438:210-215 (2008).

非专利文献9:Transplant.Proc., 37:422-424 (2005).

非专利文献10:Exp.Eye Res., 89:608-617 (2009).

非专利文献11:Kidney Int., 70:1099-1106 (2006).

非专利文献12:Biochem.Biophys.Res.Commun., 290:696-700 (2002).

非专利文献13:Biol.Reprod., 75:297-305 (2006).

非专利文献14:Proc.Natl.Acad.Sci.U S A., 99:4580-4585 (2002).

非专利文献15:Expert Opin.Investig Drugs., 18:746-766 (2009).

非专利文献16:Hypertension, 50:525-530 (2007).

非专利文献17:Br. J. Pharmacol., 154:1631-1639 (2008)

非专利文献18:Am. J. Respir.Crit.Care Med., 178:188-196 (2008).

非专利文献19:Spine, 31:869-872 (2006).

非专利文献20:Br. J. Pharmacol., 136:23-30 (2002)

非专利文献21:Kobe J. Med.Sci., 47:35-45 (2001).

非专利文献22:Neuroscience, 160:813-819 (2009).

非专利文献23:J. Clin Invest., 109:883-893 (2002).

非专利文献24:Scand.J. Immunol., 56:66-75 (2002).

非专利文献25:J. Pharmacol.Exp.Ther., 320:22-28 (2007).

非专利文献26:World J. Gastroenterol., 15:5149-5156 (2009)。

发明内容

发明要解决的技术问题

本发明的目的是提供一种化合物，其是新型前列腺素I₂衍生物，代谢稳定性优异，并且选择性地结合至特定的前列腺素受体。

用于解决技术问题的方法

为了解决上述问题，本发明人已合成出赋予有氟原子的特异性质的新型PG类，并进行了研究以明确其性质和生理活性。结果，本发明人发现，前列腺酸骨架的C-1位羧基被四唑基取代且键合了两个氟原子的新型7,7-二氟PGI₂衍生物的性质和药理作用优异，令人意外地，尽管其为PGI₂衍生物, 但其具有选择性EP4激动剂活性并且显著丧失可见于C-1羧酸体中的IP激动剂活性，并且由于该激动剂作用，其是作为药剂的优异化学品，从而完成了本发明。该选择性EP4激动剂可成为降低了经由其它受体的副作用的药剂的活性成分。

就本发明人所知，PG的C-1位是四唑基且在PG的C-7位存在两个氟原子的PGI₂类的合成例、性质、生理活性等完全未被公开。

因此，本发明提供作为选择性EP4激动剂的下式(1)所示的7,7-二氟PGI₂衍生物(以下，有时简称为本发明的化合物(1))、其药学上可接受的盐以及含有它们作为活性成分的药剂，并且涉及下述。

[1] 式(1)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，R¹和R²各自独立地为氢原子或碳原子数1至3的直链烷基，R³为氢原子、碳原子数1至4的烷基、烷氧基烷基、芳基、卤素原子或卤代烷基。

[2] [1]所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R¹为甲基。

[3] [1]或[2]所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R³为甲基。

[4] [1]至[3]的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R²为氢原子。

[5] [1]至[4]的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R¹为甲基，并且R²为氢原子。

[6] [1]-[5]的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R³为间甲基。

[7] [1]所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R¹为甲基，R²为氢原子，并且R³为甲基。

[8] [1]所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R¹为氢原子，R²为甲基，并且R³为甲基。

[9] 4-[(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4RS)-3-羟基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-羟基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛烷-3-亚基]-1-(四唑-5-基)丁烷或其药学上可接受的盐。

[10] 4-[(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-羟基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-羟基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛烷-3-亚基]-1-(四唑-5-基)丁烷或其药学上可接受的盐。

[11] 4-[(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4S)-3-羟基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-羟基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛烷-3-亚基]-1-(四唑-5-基)丁烷或其药学上可接受的盐。

[12] 药剂，其包含[1]至[11]的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

[13] 用于预防或治疗消化道疾病的药剂，其包含[1]至[11]的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

[14] [13]所述的药剂，其中，所述消化道疾病是消化道的炎症性疾病或溃疡性疾病。

[15] [14]所述的药剂，其中，所述消化道的炎症性疾病是炎症性肠疾病。

[16] [15]所述的药剂，其中，所述炎症性肠疾病是溃疡性结肠炎或克罗恩氏病。

[17] [15]所述的药剂，其中，所述炎症性肠疾病是肠道白塞氏病或单纯性溃疡。

[18] [14]所述的药剂，其中，所述消化道的溃疡性疾病是食管炎、食管溃疡、胃炎或胃溃疡。

[19] [18]所述的药剂，其中，所述胃炎或胃溃疡是药物诱发的胃炎或胃溃疡。

[20] [19]所述的药剂，其中，所述药物诱发的胃炎或胃溃疡是由非甾体抗炎药诱发的。

[21] [18]所述的药剂，其中，所述胃炎或胃溃疡是由酒精诱发的。

[22] [14]所述的药剂，其中，所述消化道的溃疡性疾病是小肠溃疡。

[23] [22]所述的药剂，其中，所述小肠溃疡是药物诱发的小肠溃疡。

[24] [23]所述的药剂，其中，所述药物诱发的小肠溃疡是由非甾体抗炎药诱发的。

[25] [22]所述的药剂，其中，所述小肠溃疡是由酒精诱发的。

[26] EP4激动剂，其包含[1]至[11]的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

[27] 药剂，其包含[26]所述的EP4激动剂作为活性成分。

[28] [27]所述的药剂，其用于预防或治疗涉及EP4的疾病。

[29] [28]所述的药剂，其用于预防或治疗其症状可通过选择性EP4激动剂作用减轻的疾病。

[30] [29]所述的药剂，其中，所述其症状可通过选择性EP4激动剂作用减轻的疾病是免疫疾病、心血管疾病、心脏疾病、呼吸道疾病、眼科疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、骨疾病、消化道疾病、神经疾病或皮肤疾病。

[31] [30]所述的药剂，其中，所述免疫疾病是肌萎缩侧索硬化症、多发性硬化症、斯耶格伦氏综合征、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、移植后的排斥反应、关节炎、全身炎症反应综合征、败血症、噬红细胞综合征、巨噬细胞活化综合征、斯蒂尔氏病、川崎病、透析时的高细胞因子血症、多器官衰竭、休克或银屑病。

[32] [30]所述的药剂，其中，所述心血管疾病或心脏疾病是动脉硬化、心绞痛、心肌梗塞、由脑出血造成的脑失调、由脑梗塞造成的脑失调、由蛛网膜下腔出血造成的脑失调、肺动脉高血压、外周动脉闭塞(闭塞性动脉硬化和血栓闭塞性血管炎)或归因于外周循环障碍的各种症状(由腰椎椎管狭窄造成的间歇性跛行或下肢麻痹、雷诺氏综合征、勃起功能障碍、痔疮等)。

[33] [30]所述的药剂，其中，所述呼吸道疾病是哮喘、肺损伤、肺纤维化、肺气肿、支气管炎或慢性阻塞性肺疾病。

[34] [30]所述的药剂，其中，所述眼科疾病是青光眼或高眼压症。

[35] [30]所述的药剂，其中，所述肾脏疾病是肾小球肾炎、糖尿病肾病、IgA肾病或缺血-再灌流肾损伤。

[36] [30]所述的药剂，其中，所述肝脏疾病是肝炎、肝病或缺血-再灌流肝损伤。

[37] [30]所述的药剂，其中，所述骨疾病是骨质疏松症、骨折或骨切开术后的术后恢复期。

[38] [30]所述的药剂，其中，所述神经疾病是神经细胞死亡。

[39] [30]所述的药剂，其中，所述皮肤疾病是褥疮或创伤。

[40] [28]所述的药剂，其中，所述涉及EP4的疾病是选自秃头、脱发、促宫颈成熟障碍和听力障碍中的疾病。

发明效果

本发明提供的新型7,7-二氟PGI₂衍生物可提供一种药剂，其通过肠胃外给药或口服给药而长期维持血药浓度并展现药理作用，并且其用于预防或治疗炎症性肠疾病中的消化道炎症或腹泻或血便的发病、或者用于预防或治疗胃炎或胃溃疡、小肠溃疡等中的溃疡。进而，由于EP4激动剂作用，还可提供一种药剂，其用于预防或治疗免疫疾病、心血管疾病、心脏疾病、呼吸道疾病、眼科疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、骨疾病、消化道疾病、神经疾病、皮肤疾病等。在临床上，对于EP4激动剂可奏效的疾病组来说，本发明的化合物被期待显示相同的功效，同时由于其对循环系统的弱IP 激动剂作用，因而对比如出血、低血压、心悸和颜面潮红的副作用的担心降低。特别是，本发明的化合物基于EP4激动剂作用，对于免疫相关的消化道的炎症、药物诱发的消化道粘膜损伤、粘膜再生障碍所致的消化道损伤和治愈延迟、眼科疾病、肾脏疾病和肝脏疾病有效。具体地，该化合物可用于炎症性肠疾病比如溃疡性结肠炎和克罗恩氏病、酒精性胃炎、胃溃疡和小肠溃疡、肾炎、青光眼、高眼压症、肝炎等。

附图说明

图1A显示对小鼠血压的效果。

图1B显示对小鼠心率的效果。

图2A显示对小鼠(BALB/c)DSS结肠炎模型的异常大便的效果。

图2B显示对小鼠(BALB/c)DSS结肠炎模型的结肠短缩的效果。

图3A显示对小鼠(C57BL/6)DSS结肠炎模型的异常大便的BPS的效果。

图3B显示对小鼠(C57BL/6)DSS结肠炎模型的异常大便的效果。

图3C显示对小鼠(C57BL/6)DSS结肠炎模型的结肠短缩的BPS的效果。

图3D显示对小鼠(C57BL/6)DSS结肠炎模型的结肠短缩的效果。

图4A显示对大鼠DSS结肠炎模型的异常大便的效果。

图4B显示对大鼠DSS结肠炎模型的结肠短缩的效果。

图4C显示对大鼠DSS结肠炎模型的结肠组织损伤的效果。

图5显示对小鼠DSS结肠炎缓解/复发模型的异常大便的效果。

图6A显示对小鼠T细胞转入结肠炎模型中大便稠度评分的效果。

图6B显示对小鼠T细胞转入结肠炎模型中便潜血评分的效果。

图6C显示对小鼠T细胞转入结肠炎模型中体重降低评分的效果。

图6D显示对小鼠T细胞转入结肠炎模型中DAI评分的效果。

图7显示对大鼠乙醇诱发的胃粘膜损伤模型的胃溃疡的效果。

图8显示对大鼠消炎痛诱发的小肠损伤模型的小肠溃疡的效果。

图9A显示对大鼠抗Thy-1抗体诱发的肾小球肾炎模型中的尿量的效果。

图9B显示对大鼠抗Thy-1抗体诱发的肾小球肾炎模型中的尿蛋白量的效果。

图9C显示对大鼠抗Thy-1抗体诱发的肾小球肾炎模型中的相对肾重量的效果。

图9D显示对大鼠抗Thy-1抗体诱发的肾小球肾炎模型中的肾组织病理学(总肾小球细胞计数)的效果。

图9E显示对大鼠抗Thy-1抗体诱发的肾小球肾炎模型中的肾组织病理学(系膜区)的效果。

图9F显示对大鼠抗Thy-1抗体诱发的肾小球肾炎模型中的肾组织病理学(PCNA-阳性肾小球细胞计数)的效果。

图10显示对兔眼压的效果。

图11显示小鼠伴刀豆球蛋白A诱发的肝炎模型中的预防效果。

具体实施方式

(定义)

本说明书中，“选择性EP4激动剂” 意指相对于通常可见于PGI₂类中的激动剂作用，对PGI₂受体(IP)显示弱的激动剂作用(药理活性)，并且与IP激动剂作用相比对PGE₂受体亚型EP4具有显著优异的激动剂作用的化合物。该EP4激动剂作用可以根据下述实施例19中记载的激动剂活性的测定方法来进行测定。该IP激动剂作用可以根据实施例20中记载的方法来进行测定。化合物是否为选择性EP4激动剂可以根据实施例18中记载的测定方法，通过测定同种类种的EP4与IP的结合抑制常数Ki值之比(IP/EP4比率)来进行评价。选择性EP4激动剂的实例包括上述比率不小于5、优选不小于10、更优选不小于50、最优选不小于100的化合物。

本说明书中，“前列腺素I₂衍生物”意指基于天然型PGI₂，通过有机化学中通常的技术进行结构修饰而得的化合物。以下，对本发明的化合物进行说明。

(本发明化合物的定义)

在本说明书中的化合物的命名中，用于表示PG骨架中的位置的数字与前列腺酸骨架中的数字相对应。本说明书中，烷基中的氢原子被取代的基团也被称为取代烷基。这同样适用于其它基团。

此外，比如烷基等的“低级”有机基团意指其碳原子数为1至6。“低级”有机基团的碳原子数优选为1至4。

“烷基”可以为直链或支链。除非另有说明，否则烷基优选为碳原子数1至6的低级烷基，特别优选为碳原子数1至4的低级烷基。所述烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。

“烷氧基”优选为碳原子数1至6的低级烷氧基，特别优选为碳原子数1至4的烷氧基。该烷氧基可以为直链或支链。所述烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。

“烷氧基烷基”是被烷氧基取代的烷基。该烷氧基烷基中的烷氧基优选为碳原子数1至4的低级烷氧基，且烷氧基烷基的烷基优选为碳原子数1至4的低级烷基。该烷氧基烷基优选为低级烷氧基烷基(即，整个烷氧基烷基的碳原子数为1至6)，更优选碳原子数为1至4的低级烷氧基烷基。所述烷氧基烷基的实例包括甲氧基甲基、乙氧基甲基、丙氧基甲基、乙氧基乙基等。

“芳基”是任选具有取代基的一价芳烃基。作为无取代基的芳基，优选苯基。

作为“取代芳基”(具有取代基的芳基)，优选芳基中的一个或多个氢原子被低级烷基、卤素原子、卤代(低级烷基)基、低级烷氧基等取代的芳基。取代芳基的优选实例包括取代苯基，其特别优选的实例包括单卤代苯基(例如，氯苯基、氟苯基、溴苯基等)、(卤代低级烷基)取代苯基(例如，三氟甲基苯基等)、和(低级烷氧基)苯基(例如，甲氧基苯基、乙氧基苯基等)。

“卤素原子”为氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。

“卤代烷基”为烷基中的一个或多个氢原子被卤素原子取代的烷基，优选碳原子数1至6的低级卤代烷基。该卤代烷基的实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氟乙基、五氟乙基、氯甲基、溴甲基等。

作为本发明的化合物(1)，从药理活性和物性方面出发，优选下述化合物。

即，R¹和R²各自独立地为氢原子或者碳原子数1至3的直链烷基，且优选各自独立地为氢原子或者甲基。特别优选R¹和R²中的一方为氢原子，另一方为甲基。

R³ 为氢原子、碳原子数1至4的烷基、烷氧基烷基、芳基、卤素原子或卤代烷基，且优选为氢原子、碳原子数1至4的烷基、比如甲氧基甲基等的低级烷氧基烷基、比如氯原子、氟原子等的卤素原子、或比如低级氟代烷基等的低级卤代烷基。特别优选氢原子、碳原子数1至4的烷基、氯原子或碳原子数1至4的卤代烷基。作为碳原子数1至4的烷基，优选甲基和乙基，作为碳原子数1至4的卤代烷基，优选三氟甲基。

作为R³，最优选氢原子、甲基或三氟甲基。

此外，R³可在相对于前列腺素骨架的主链被苯环取代的位置的邻位(o)、间位(m)和对位(p)中的任意位置被取代。特别优选R³在间位(m)被取代。

(本发明的优选化合物的实施方式)

此外，本发明化合物(1)中的 R¹、R²和R³的优选组合如下。

R¹为氢原子，R²为氢原子，R³为氢原子。

R¹为氢原子，R²为氢原子，R³为甲基。

R¹为氢原子，R²为氢原子，R³为氯原子。

R¹为氢原子，R²为氢原子，R³为三氟甲基。

R¹为甲基，R²为氢原子，R³为氢原子。

R¹为甲基，R²为氢原子，R³为甲基。

R¹为甲基，R²为氢原子，R³为氯原子。

R¹为甲基，R²为氢原子，R³为三氟甲基。

R¹为氢原子，R²为甲基，R³为氢原子。

R¹为氢原子，R²为甲基，R³为甲基。

R¹为氢原子，R²为甲基，R³为氯原子。

R¹为氢原子，R²为甲基，R³为三氟甲基。

R¹为甲基，R²为甲基，R³为氢原子。

R¹为甲基，R²为甲基，R³为甲基。

R¹为甲基，R²为甲基，R³为氯原子。

R¹为甲基，R²为甲基，R³为三氟甲基。

此外，上述中的优选组合如下，因为选择性EP4激动剂作用高。

R¹为甲基，R²为氢原子，R³为甲基。

R¹为氢原子，R²为甲基，R³为甲基。此外，最优选组合如下。

R¹为甲基，R²为氢原子，R³为间-甲基。

R¹为氢原子，R²为甲基，R³为间-甲基。

(本发明的化合物(1)的制造方法)

本发明的化合物(1)例如可以基于与本发明人所完成发明相关的JP-A-07-324081和JP-A-08-217772中记载的方法来制造。例如，使用科里内酯(Corey lactone)作为起始原料，首先导入ω链，并通过氟化将该内酯转变为含ω链的二氟科里内酯。然后，通过使用在末端具有四唑基的有机金属试剂的加成反应和脱水反应、或者通过使用在末端具有四唑基的鏻盐的维蒂希反应等，而导入α链单元，并根据需要对羟基进行脱保护，由此可以合成化合物(1)。

可选地，以科里内酯作为起始原料通过氟化获得二氟科里内酯。然后，通过使用在末端具有四唑基的有机金属试剂的加成反应和脱水反应、或者通过使用在末端具有四唑基的鏻盐的维蒂希反应等而导入α链单元，导入ω链，并根据需要对羟基进行脱保护，由此可以合成化合物(1)。

可选地，化合物(1)还可以通过将JP-A-07-324081中记载的羧酸衍生物的羧基转化为氰基，并将该衍生物转化为四唑衍生物来进行合成。

使用下述化学式来具体说明这些制造方法中的代表性方法。

例如，使用科里内酯(7)作为起始原料，首先导入ω链，对所得含ω链的科里内酯衍生物(6)进行氟化反应，制造在羰基的α-位具有两个氟原子的含ω链的二氟科里内酯衍生物(3)。接着，使该二氟内酯衍生物(3)与正膦衍生物(4)反应以导入α链单元，由此获得羟基被保护的PGI₂衍生物(2)。然后，对羟基的保护基进行脱保护，而获得本发明的化合物(1)。

该正膦衍生物(4)可以由鏻盐衍生物(5)获得。

除了R¹ - R³为特定取代基时，上述内酯衍生物(6)为已知化合物。R¹ - R³为特定取代基的上述新型内酯衍生物(6)，可以通过与已知内酯衍生物(6)相似的方法来制造。例如，新型内酯衍生物(6)可以通过使3-芳基-2-氧代烷基膦酸二酯与具有甲酰基的科里内酯反应来制造。这里，烷基膦酸的烷基链的碳原子数不小于3。

R⁴、R⁵和R⁷各自独立地为羟基保护基。R⁴、R⁵和R⁷可以为相同的保护基。作为保护基，可以使用“Shin Jikken Kagaku Koza (New Courses in Experimental Chemistry) 14, 有机化合物的合成和反应(V)” (Maruzen Company, Limited), “Protective Groups in Organic synthesis” (T.W. Greene著, J. Wiley & Sons) 等中记载的羟基保护基。具体地,可举出三有机甲硅烷基、烷氧基烷基、具有环醚结构的一价基等。作为三有机甲硅烷基，优选选自烷基、芳基、芳烷基、和烷氧基中的3个基团键合到硅原子上的甲硅烷基，特别优选3个低级烷基或芳基键合到硅原子上的基团。作为保护基的具体例，优选四氢吡喃基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、或三异丙基甲硅烷基等。特别优选四氢吡喃基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基等。

可以容易地对羟基保护基进行脱保护。被保护羟基的脱保护方法可以是常规方法。例如，可以采用“Shin Jikken Kagaku Koza (New Courses in Experimental Chemistry) 14, 有机化合物的合成和反应(I)、(II)和(V)” (Maruzen Company, Limited), “Protective Groups in Organic synthesis” (T.W. Greene著, J. Wiley & Sons) 等中记载的方法。

对于通过氟化反应将内酯衍生物(6)转化为二氟内酯衍生物(3)，可以应用各种已知的氟化方法。例如，可以采用包括在惰性溶剂中与各种亲电氟化剂反应的方法。也可以通过与本发明人完成的发明相关的JP-A-07-324081和JP-A-09-110729中记载的方法来进行氟化。

在内酯衍生物(6)的氟化反应中，优选使用亲电氟化剂。作为亲电氟化剂，可以使用已知或公知的亲电氟化剂。例如可举出：北爪智也、石原孝、田口武夫等著“Chemistry of fluorine ”(Kodansha Scientifics Ltd.)中记载的亲电氟化剂。具体地，可举出N-氟代磺酰胺类、N-磺酰亚胺衍生物、乙酰次氟酸酯、氟气等。

优选在惰性溶剂存在下使用亲电氟化剂。作为惰性溶剂，可举出醚溶剂、烃溶剂、极性溶剂、或它们的混合溶剂等。

然后，将通过氟化反应获得的二氟内酯衍生物(3)与正膦衍生物(4)反应，而提供羟基被保护了的PGI₂衍生物(2)。在惰性溶剂中在碱存在下，由相应的鏻盐衍生物(5)制备正膦衍生物(4)，优选将形成的正膦衍生物(4)不进行分离而直接用于与二氟内酯衍生物(3)的维蒂希反应。作为正膦衍生物(4)和鏻盐衍生物(5)的制造方法，可以采用DE2242239、DE2405255等中所记载的方法。作为正膦衍生物(4)或鏻盐衍生物(5)中的R⁶，优选比如苯基、甲苯基等的芳基，特别优选苯基。作为惰性溶剂，可举出醚溶剂、烃溶剂、极性溶剂、水性溶剂、醇溶剂、或它们的混合溶剂等。

从由上述方法获得的PGI₂衍生物(2)去除羟基保护基而获得化合物(1)。

因为本发明的化合物(1)在其结构中具有不对称碳，所以存在各种立体异构体和光学异构体。本发明涵盖所有这些立体异构体、光学异构体、及它们的混合物。

本发明的化合物(1)的具体例包括由下式(8)所示的化合物。

(本发明的化合物(1)的实例)

可举出在式(8)中R¹、R²和R³具有下表1中所示结构的化合物。

表 1

	R¹	R²	R³
				化合物 A	H	H	H
化合物 B	H	H	Me
				化合物 C	H	H	Cl
化合物 D	H	H	CF₃
				化合物 E	Me	H	H
化合物 F	Me	H	Me
				化合物 G	Me	H	Cl
化合物 H	Me	H	CF₃
				化合物 I	H	Me	H
化合物 J	H	Me	Me
				化合物 K	H	Me	Cl
化合物 L	H	Me	CF₃
				化合物 M	Me	Me	H
化合物 N	Me	Me	Me
				化合物 O	Me	Me	Cl
化合物 P	Me	Me	CF₃

(本发明的化合物(1)的特性)

本发明的化合物(1)是在体内不易被代谢并且提高了稳定性的PGI₂衍生物。因为PG骨架的羧基被转化为四唑基，所以该衍生物不易通过β-氧化而被代谢，所述β-氧化已知为前列腺素等脂肪酸的一般代谢途径。因此，与PG骨架中具有羧基的化合物相比，其具有延长的血浆半衰期，且可以长时间维持有效血浆浓度。因为以这种方式提高了代谢稳定性，所以可以提高药物的生物利用度。

本发明的化合物(1)或其药学上可接受的盐显示选择性EP4激动剂的作用。显示该作用的优选化合物(1)的实例与上述化合物(1)的优选实例相同。

(含有本发明的化合物(1)或其药学上可接受的盐作为活性成分的药剂)

本发明的药剂含有化合物(1)和/或化合物(1)的药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体，和某些情况下的其它治疗成分。

本发明的药剂含有化合物(1)和/或化合物(1)的药学上可接受的盐、或其水合物，以及药学上可接受的载体，和某些情况下的其它治疗成分。

在将本发明的预防或治疗剂给予患者时，每日的剂量取决于患者的年龄和体重、病状和严重程度等。通常，理想的是一次或分数次给予0.0001～10 mg，优选0.01～1 mg的该药剂。例如，对于口服给药，优选0.001～3mg，特别优选0.001～0.5mg。对于静脉内给药，优选0.0001～1mg，特别优选0.001～0.1mg。可以取决于疾病和及其病症适当改变剂量。作为给药方式，药剂的注射品可理想地通过连续滴注给药。

作为药剂使用时，可以通过口服给药和肠胃外给药(例如，血管内(静脉内、动脉内)给药、皮下给药、直肠给药等)对生物体进行给药。剂型的实例包括，口服剂型比如片剂、胶囊剂、糖浆剂等，胃肠外剂型如液体注射剂(溶液剂、乳剂、混悬剂等)、输液剂、栓剂、滴鼻剂、贴剂和吸入剂。特别优选口服制剂。

上述剂型的制剂可通过将本发明的化合物(1)或其药学上可接受的盐与制剂所必需的添加物如常规的载体、赋形剂、粘合剂和稳定剂进行混合，并将该混合物以常规方法制剂来制造。例如，当制剂是粉剂、颗粒剂、片剂等时，可以通过使用优选用于制造固体剂型的任何药用载体，例如赋形剂、润滑剂、崩解剂、粘合剂等来制造。

这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙、或磷酸钠；造粒剂和崩解剂如玉米淀粉、或海藻酸；粘合剂如淀粉、明胶、或阿拉伯胶，以及润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石。片剂可以不包衣或通过已知技术进行包衣，以延迟在胃及肠道中的崩解和吸收，由此确保更长时间的持续释放。例如，可以使用延时材料如甘油单硬脂酸酯、或甘油二硬脂酸酯。

本发明的化合物(1)可以提供为硬明胶胶囊，其含有与惰性固体稀释剂，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土的混合物。可选地，也可以提供为软明胶胶囊，其含有与水溶性溶剂如丙二醇、聚乙二醇和乙醇，或者油类如花生油、液体石蜡和橄榄油的混合物。

当制剂是糖浆剂或液体剂时，例如，可以适当选择使用稳定剂、助悬剂、矫味剂、芳香物质等用于制造。对于注射剂制造，将活性成分连同pH调节剂如盐酸、氢氧化钠、乳糖、乳酸钠、乙酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，和等渗剂如氯化钠和葡萄糖，溶解于注射用蒸馏水中，并无菌地制备注射剂。也可使用惰性的非水性稀释剂，如丙二醇、聚乙二醇、橄榄油、乙醇和聚山梨醇酯80用于制剂的配制。此外，也可添加甘露醇、糊精、环糊精、明胶等，再将混合物真空冻干，而制为在使用前溶解的注射剂。此外，为了稳定性和改善药物对病灶的传递性，可通过已知方法配制脂质体制剂或脂质乳剂并用作注射剂。

此外，也可以通过使用栓剂基质如可可脂、脂肪酸甘油三酯、脂肪酸甘油二酯、脂肪酸单甘油酯和聚乙二醇来制造直肠给药制剂。而且，可将水溶性基质如聚乙二醇、聚丙二醇、甘油和甘油明胶，油性基质如白凡士林、硬脂、石蜡、液体石蜡、Plastibase、羊毛脂和精制羊毛脂等调整为适当的粘度，而制造直肠内给药用软膏。

本发明的化合物(1)或其药学上可接受的盐可以局部给药至皮肤或粘膜，即，经皮给药或经粘膜给药。作为用于此目的的常用剂型，可举出凝胶、水凝胶、洗剂、溶液剂、乳膏、软膏、喷雾剂、修饰剂、泡沫制剂、膜剂、皮肤贴剂、扁囊剂(oblate)、埋植剂、海绵剂、纤维、绷带、和微乳等。作为常用的载体，可举出醇、水、矿物油、液体石蜡、白凡士林、甘油、聚乙二醇、和丙二醇等。

为了在上述任一剂型中使用和提高溶解度、溶解速率、生物利用度和稳定性，可以将本发明的化合物(1)与环糊精或其适当的衍生物或如含聚乙二醇的聚合物的水溶性聚合物单体混合。例如，已证实药物-环糊精复合物等一般可用于大部分的剂型和给药途经。可以使用包合复合物和非包合复合物中的任一种。作为与药物直接复合的其它方法，也可以将环糊精用作辅助性添加剂，即载体、赋形剂或增溶剂。为达到这些目的，通常使用α-、β-和γ-环糊精等。

(本发明的化合物(1)的药学上可接受的盐)

本发明的化合物(1)的药学上可接受的盐，是衍生物的四唑基的部分与碱性物质的盐，其是四唑基的氢原子被阳离子取代的化合物。

阳离子的实例包括如Na⁺和K⁺的碱金属阳离子、如1/2 Ca²⁺、1/2 Mg²⁺、1/2 Zn²⁺和1/3 Al³⁺的金属阳离子(非碱金属阳离子)、NH₄ ⁺、如三乙醇胺、二乙醇胺、乙醇胺、氨基丁三醇、赖氨酸和精氨酸的有机胺和氨基酸的铵阳离子等。优选的阳离子是钠离子或钾离子。

更具体地，可接受的盐是由如无机碱和有机碱的药学上可接受的无毒性碱所制备的盐。作为衍生自药学上可接受的无毒性无机碱的盐，除上述钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、锌盐、铝盐、铵盐等以外，还可举出锂盐、铜盐、正铁盐、亚铁盐、正锰盐、亚锰盐等。这些盐中，优选钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铵盐，特别优选钠盐和钾盐。衍生自药学上可接受的无毒性有机碱的盐包括与伯胺、仲胺和叔胺、包括天然产生的取代胺的取代胺、环胺、和碱性离子交换树脂的盐。除上述有机胺和氨基酸的实例以外，可举出异丙胺、二乙胺、三乙胺、三甲胺、三丙胺、乙二胺、N,N’-二苄基乙二胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、吗啉、N-乙基吗啉、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、甜菜碱、咖啡因、胆碱、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、甲基葡糖胺、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱等。

(含有本发明的化合物(1)或其药学上可接受的盐作为活性成分的药剂的用途)

含有本发明的化合物(1)或其药学上可接受的盐作为活性成分的药剂可应用于涉及EP4的疾病、优选选择性EP4激动剂作用可减轻症状的疾病。具体地，其可用于免疫疾病、消化道疾病、心血管疾病、心脏疾病、呼吸道疾病、神经疾病、眼科疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、骨疾病、皮肤疾病等。

本发明中的免疫疾病包括自身免疫疾病比如肌萎缩侧索硬化症、多发性硬化症、斯耶格伦氏综合征、类风湿性关节炎和全身性红斑狼疮；移植后的排斥反应等；以及炎症性疾病比如哮喘、神经细胞死亡、关节炎、肺损伤、肺纤维化、肺气肿、支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、肝病、急性肝炎、肾炎(急性肾炎、慢性肾炎)、肾衰竭、全身炎症反应综合征、败血症、噬红细胞综合征、巨噬细胞活化综合征、斯蒂尔氏病、川崎病、烧伤、全身性肉芽肿、透析时的高细胞因子血症、多器官衰竭、休克和银屑病。

本发明中的消化道疾病包括消化道的炎症性疾病和溃疡性疾病，该疾病是指由物理性刺激、比如胃液所致的化学性刺激、比如非甾体抗炎药和类固醇的药物所致的刺激、未知原因的免疫性疾病和自身免疫性疾病、精神疾病等所造成的消化道的上皮、粘膜、粘膜下层组织中具有炎症或溃疡、或者粘膜上皮的异常增生或功能障碍的疾病。

消化道的炎症性疾病包括炎症性肠疾病，特别是溃疡性结肠炎、克罗恩氏病(伴随纤维化或溃疡的非特异性肉芽肿性炎症性疾病)、肠道白塞氏病和单纯性溃疡。本发明的消化道的溃疡性疾病包括口腔炎、口疮性口腔炎、食管炎、食管溃疡、胃炎、胃溃疡、小肠溃疡。

此外，胃炎和胃溃疡包括药物诱发的胃炎、胃溃疡、酒精性胃炎和胃溃疡，该药源性胃炎和胃溃疡包括由非甾体抗炎药导致的胃炎和胃溃疡。

小肠溃疡包括药物诱发的小肠溃疡和酒精性小肠溃疡，该药物诱发的小肠溃疡包括由非甾体抗炎药导致的小肠溃疡。

具体地，本发明的药剂可用作溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、胃炎、胃溃疡或小肠溃疡的预防或治疗剂。

所述心血管疾病和心脏疾病包括动脉硬化、心绞痛、心肌梗塞、由脑出血造成的脑失调、由脑梗塞造成的脑失调、由蛛网膜下腔出血造成的脑失调、肺动脉高血压、外周动脉闭塞(闭塞性动脉硬化和血栓闭塞性血管炎)以及归因于外周循环障碍的各种症状(具有腰椎椎管狭窄的间歇性跛行、下肢麻痹、雷诺氏综合征、勃起功能障碍、痔疮等)。

呼吸道疾病包括哮喘、肺损伤、肺纤维化、肺气肿、支气管炎和慢性阻塞性肺疾病。

神经疾病包括神经细胞死亡、肌萎缩侧索硬化症、多发性硬化症和脑失调(由脑出血、脑梗塞和蛛网膜下腔出血造成的脑失调)。

眼科疾病包括青光眼和高眼压症。

肾脏疾病包括肾小球肾炎、糖尿病肾炎、IgA肾病和缺血-再灌流肾损伤。

肝脏疾病包括肝炎、肝失调和缺血-再灌流肝损伤。

骨疾病包括骨质疏松症、骨折和骨切开术后的术后恢复期。

皮肤疾病包括褥疮和创伤。

此外，含有本发明的化合物(1)或其药学上可接受的盐作为活性成分的药剂也可用作脱发、秃头或听力障碍(即，声响造成的听力障碍)的预防和/或治疗剂、或促宫颈成熟(促进)剂。

以下参照具体实例对本发明进行详细说明，但本发明并不局限于这些具体实例。

[实施例 1]

(2R)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯的合成

向(2R)-2-(间甲苯基)丙酸(12.45g)中加入甲醇(14.83g)和浓硫酸(6.46g)，在回流下将混合物搅拌6小时。接着，用10%碳酸钠水溶液将混合物中和，用己烷进行提取。在用硫酸镁干燥后，对残留物进行减压浓缩，而获得标题化合物(12.79g)。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ 1.49(d, J=7.0 Hz, 3H), 2.33(s, 3H), 3.64(s, 3H), 3.69(dd, J=14.4, 7.3 Hz, 1H), 7.06-7.22(m, 4H)。

[实施例 2]

(3R)-2-氧代-3-(间甲苯基)丁基膦酸二甲酯的合成

向甲基膦酸二甲酯(1.97g)中加入四氢呋喃(THF)(25ml)，将混合物冷却至78℃。加入正丁基锂(1.5M己烷溶液)(10ml)，将混合物搅拌1小时。然后，在-78℃下加入实施例1中合成的甲基酯{(2R)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯}(1.34g)的THF(3.8ml)溶液，将混合物搅拌2小时。用25 mL饱和碳酸氢钠水溶液终止反应，用乙酸乙酯对混合物进行提取。用硫酸镁干燥提取物，并在减压下进行浓缩。利用硅胶柱层析法(己烷/乙酸乙酯＝5:1～1:5)对残留物进行纯化而获得标题化合物(1.63g)。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ 1.39(d, J=6.7 Hz, 3H), 2.34(s, 3H), 2.84(ddd, J=22.3, 14.1, 0.6 Hz, 1H), 3.18(dd, J=22.3, 14.1 Hz, 1H), 3.76(dd, J=19.3, 11.1 Hz, 6H), 4.00(dd, J=13.8, 7.0 Hz, 1H), 7.01-7.24(m, 4H)。

[实施例 3]

(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,4R)-3-氧代-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-苯甲酰氧基-2-氧杂二环[3.3.0]辛-3-酮的合成

将氢化钠(55%)(8.75g)分散于1,2-二甲氧基乙烷(DME)(300ml)中，将混合物冰冷却。加入实施例2中合成的膦酸酯{(3R)-2-氧代-3-(间甲苯基)丁基膦酸二甲酯}(54.7g)的DME(50ml)溶液，将混合物搅拌1小时。向上述溶液中加入(1S,5R,6R,7R)-6-甲酰基-7-苯甲酰氧基-2-氧杂二环[3.3.0]辛-3-酮(50.0克)的DME(400ml)溶液，将混合物搅拌1小时。用350ml的10%盐水终止反应，用乙酸乙酯对混合物进行提取。用硫酸镁干燥提取物，并在减压下浓缩残留物。由叔丁基甲基醚对浓缩的粗产物进行重结晶，而获得标题化合物(64.7g)。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ 1.39(d, J=7.0 Hz, 3H), 2.20-2.28(m, 1H), 2.30(s, 3H), 2.34-2.41(m, 1H), 2.49-2.57(m, 1H), 2.76-2.85(m, 3H), 3.80(q, J=7.0 Hz, 1H), 5.03(t, J=5.3 Hz, 1H), 5.23(q, J=5.3 Hz, 1H),6.19(d, J=15.5 Hz, 1H), 6.69(dd, J=15.6, 7.6 Hz, 1H), 6.94-7.19(m, 4H), 7.42-7.95(m, 5H)。

[实施例 4]

(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-羟基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-苯甲酰氧基-2-氧杂二环[3.3.0]辛-3-酮的合成

将实施例3中合成的烯酮{(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,4R)-3-氧代-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-苯甲酰氧基-2-氧杂二环[3.3.0]辛-3-酮}(147.0g)的THF(1480 mL)溶液冷却至-40℃，加入(-)-B-二异松蒎基氯硼烷((-)-B-chlorodiisopinocampheylborane)(1.7M己烷溶液)(721 mL)，将混合物在冰冷却下搅拌20小时。加入丙酮(183ml)，将混合物搅拌3小时。加入碳酸氢钠水溶液，用叔丁基甲基醚对混合物进行提取。用硫酸镁干燥提取物，在减压下浓缩而获得粗制的标题化合物(649.9g)。

[实施例 5]

(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-羟基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-羟基-2-氧杂二环[3.3.0]辛-3-酮的合成

将实施例4中合成的粗制的醇、{(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-羟基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-苯甲酰氧基-2-氧杂二环[3.3.0]辛烷-3-酮}(649.9g)溶解于甲醇(740 mL)，加入碳酸钾(116.3g)，在室温下将混合物搅拌17小时。加入乙酸将pH值调节至7，然后蒸馏除去甲醇，加入水，用乙酸乙酯对混合物进行提取。利用硅胶柱层析法(己烷/乙酸乙酯＝4:1～0:1)对提取物进行纯化而获得标题化合物(22.3 g)。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ 1.33(d, J=7.0 Hz, 3H), 1.70(s, 1H(OH)), 1.86(ddd, J=11.3, 7.8, 3.2 Hz, 1H), 2.07(d, J=4.4 Hz, 1H(OH)), 2.13-2.23(m, 2H), 2.34(s, 3H), 2.35-2.44(m, 3H), 2.47(d, J=3.8 Hz, 1H), 2.56(dd, J=18.2, 9.7 Hz, 1H), 2.80(q, J=7.0 Hz, 1H), 3.79-3.85(m, 1H), 4.12-4.16(m, 1H), 4.81(dt, J=7.0, 3.2 Hz, 1H), 5.27(ddd, J=15.7, 8.5, 0.6 Hz, 1H), 5.50(dd, J=15.2, 6.8 Hz, 1H), 6.94-7.20(m, 4H)。

[实施例 6]

(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-叔丁基二甲基甲硅烷基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-氧杂二环[3.3.0]辛-3-酮的合成

在室温下，向实施例5中合成的二醇{(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-羟基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-羟基-2-氧杂二环[3.3.0]辛-3-酮}(988mg)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(10 mL)溶液中加入叔丁基二甲基氯硅烷(1.17g)和咪唑(1.08g)，将混合物搅拌2.5小时。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用己烷/乙酸乙酯=2/1混合物对混合物进行提取。用硫酸镁干燥提取物，在减压下浓缩，以硅胶柱层析法(己烷/乙酸乙酯＝20:1～10:1)进行纯化，而获得标题化合物(1.56g)。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ-0.09(d, J=6.4 Hz, 6H), 0.02(d, J=2.4 Hz, 6H), 0.86(s, 9H), 0.89(s, 9H), 1.27(d, J=7.0 Hz, 3H), 1.86-1.92(m, 1H), 1.96-2.02(m, 1H), 2.32(s, 3H), 2.31-2.47(m, 3H), 2.62-2.73(m, 2H), 3.82(q, J=4.7 Hz, 1H), 4.05(t, J=6.4 Hz, 1H), 4.86(dt, J=8.0, 2.4 Hz, 1H), 5.16(dd, J=15.5, 7.4 Hz,1H), 5.30(dd, J=15.7, 6.3 Hz, 1H), 6.90-7.16(m, 4H)。

[实施例 7]

(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-叔丁基二甲基甲硅烷基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛-3-酮的合成

将溴化锰(1.48g)和N-氟代苯磺酰亚胺(2.48g)加入到四氢呋喃(THF)(19 mL)中，将混合物搅拌30分钟，然后冷却至-78℃。添加实施例6中合成的内酯{(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2-氧杂二环[3.3.0]辛-3-酮}(0.5g)的THF(5 mL)溶液，添加双(三甲基甲硅烷基)氨基钾的甲苯溶液(0.5M，13 mL)，用3.5小时将混合物升温至0℃。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用己烷/乙酸乙酯=1/1混合物对混合物进行提取。用硫酸镁干燥提取物，在减压下浓缩，以硅胶柱层析法(己烷/乙酸乙酯 20:1)进行纯化，而获得标题化合物(0.32 g)。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ-0.08-0.03(m, 12H), 0.82(s, 9H), 0.89(s, 9H), 1.28(d, J=7.0 Hz, 3H), 1.70-1.77(m, 1H), 1.96-2.04(m, 1H), 2.31(s, 3H), 2.60-2.91(m, 3H), 3.82-3.87(m, 1H), 3.99-4.23(m, 1H), 5.00(t, J=6.4 Hz, 1H), 5.06(dd, J=15.7, 7.8 Hz, 1H), 5.33(ddd, J=15.9, 6.7, 1.2 Hz, 1H), 6.88-7.16(m, 4H)。

¹⁹F-NMR(CDCl₃):-113.1(d, J=279.3 Hz), -91.0(dd, J=279.3, 25.9 Hz)。

[实施例 8]

4-[(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-叔丁基二甲基甲硅烷基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛烷-3-亚基]-1-(四唑-5-基)丁烷的合成

向4-(四唑-5-基)丁基三苯基溴化鏻(14.0g)的甲苯(390 mL)混悬液中加入双(三甲基甲硅烷基)氨基钾的甲苯溶液(0.5M，120 mL)，在60℃下将混合物搅拌1小时。在-10℃下加入实施例7中合成的二氟内酯{(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛-3-酮}(4.32g)的甲苯(130ml)溶液，将混合物升温至室温的同时搅拌18小时。加入碳酸氢钠水溶液来终止反应，用己烷/乙酸乙酯=1/1混合物进行提取。用硫酸镁干燥提取物，在减压下浓缩，以硅胶柱层析法(己烷/乙酸乙酯＝5/1～0/1)进行纯化，而获得标题化合物(4.1 g)。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ-0.14-0.01(m, 12H), 0.82(s, 9H), 0.89(s, 9H), 1.23-1.27(m, 3H), 1.82-2.09(m, 5H), 2.21-2.28(m, 1H), 2.31(s, 3H), 2.45-2.53(m, 1H), 2.64-2.73(m, 2H), 2.93-2.97(m, 2H), 3.90(dd, J=11.7, 5.3Hz, 1H), 4.08-4.09(m, 1H), 4.84-4.87(m, 2H), 5.27(dd, J=15.5, 7.8 Hz, 1H), 5.44(dd, J=15.6, 6.2 Hz, 1H), 6.92-7.16(m, 4H)。

¹⁹F-NMR(CDCl₃):-112.3(d, J=253.4 Hz), -81.4(dd, J=253.4, 18.7 Hz)。

[实施例 9]

4-[(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-羟基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-羟基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛烷-3-亚基]-1-(四唑-5-基)丁烷的合成

将THF(81 mL)、水(81 mL)、乙酸(244 mL)加入到实施例8中合成的化合物(4.1g)中，在35℃下将混合物搅拌46小时。加入水(500ml)，用氯仿对混合物进行提取。用硫酸镁干燥提取液，在减压下浓缩，以硅胶柱层析法(己烷/乙酸乙酯=1/5～0/1)进行纯化，由乙醚进行重结晶，而获得标题化合物(1.1g)。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CD₃OD):δ 1.30(d, J=7.0 Hz, 3H), 1.69(dddd, J=14.6, 7.6, 3.0, 2.6 Hz, 1H), 1.82-1.95(m, 2H), 2.10-2.16(m, 2H), 2.29(s, 3H), 2.31-2.41(m, 2H), 2.48-2.56(m, 1H), 2.72(q, J=7.0 Hz, 1H), 2.93(t, J=7.6 Hz, 2H), 3.78(q, J=7.6 Hz, 1H), 4.04-4.10(m, 1H), 4.69(dt, J=6.48, 2.96 Hz, 1H), 4.79(dt, J=7.6, 5.0 Hz, 1H), 5.36-5.46(m, 2H), 6.95-7.13(m, 4H)。

¹⁹F-NMR(CD₃OD):-116.6(d, J=250.5 Hz), -84.8(ddd, J=251.9, 17.3, 14.4 Hz)。

[实施例 10]

2-氧代-3-(间甲苯基)丁基膦酸二甲酯的合成

使用2-(间甲苯基)丙酸的外消旋体，以与实施例1～2中的方法同样的方式合成出标题化合物。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ 1.39(d, J=7.2 Hz, 3H), 2.34(s, 3H), 2.83(dd, J=22.4, 14.4 Hz, 1H), 3.18(dd, J=22.4, 14.0 Hz, 1H), 3.76(dd, J=19.6, 11.2 Hz, 6H), 3.99(dd, J=14.0, 6.8Hz, 1H), 7.01-7.27(m, 4H)。

[实施例 11]

(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4RS)-3-叔丁基二甲基甲硅烷基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-氧杂二环[3.3.0]辛-3-酮的合成

使用2-氧代-3-(间甲苯基)丁基膦酸二甲酯的外消旋体，以与实施例3～6中的方法同样的方式合成出标题化合物。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ -0.20-0.10(m, 12H), 0.80-0.90(m, 18H), 1.18-1.28(m, 3H), 1.85-2.20(m, 2H), 2.31(s, 3H), 2.30-2.80(m, 5H), 3.80-4.15(m, 2H), 4.81-4.95(m, 1H), 5.12-5.42(m, 2H), 6.88-7.20(m, 4H)。

[实施例 12]

(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4RS)-3-叔丁基二甲基甲硅烷基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛-3-酮的合成

使用实施例11中合成的(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4RS)-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2-氧杂二环[3.3.0]辛-3-酮，以与实施例7中的方法同样的方式合成出标题化合物。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ -0.20-0.05(m, 12H), 0.80-0.90(m, 18H), 1.19-1.29(m, 3H), 1.70-2.10(m, 2H), 2.31(s, 3H), 2.60-3.05(m, 3H), 3.84-4.12(m, 2H), 4.95-5.50(m, 3H), 6.85-7.20(m, 4H)。

¹⁹F-NMR(CDCl₃):-113.6 - -112.8(m), -91.7 - -90.6(m)。

[实施例 13]

4-[(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4RS)-3-叔丁基二甲基甲硅烷基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛烷-3-亚基]-1-(四唑-5-基)丁烷的合成

使用实施例12中合成的(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4RS)-3-叔丁基二甲基甲硅烷基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛-3-酮，以与实施例8中的方法同样的方式合成出标题化合物。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ -0.15-0.05(m, 12H), 0.80-0.89(m, 18H), 1.20-1.28(m, 3H), 1.80-3.05(m, 14H), 3.90-4.15(m, 2H), 4.85-4.95(m, 2H), 5.23-5.58(m, 2H), 6.90-7.20(m, 4H)。

¹⁹F-NMR(CDCl₃):-113.0 - -111.3(m), -82.0 - -80.7(m)。

[实施例 14]

4-[(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4RS)-3-羟基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-羟基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛烷-3-亚基]-1-(四唑-5-基)丁烷的合成

使用实施例13中合成的4-[(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4RS)-3-叔丁基二甲基甲硅烷基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛烷-3-亚基]-1-(四唑-5-基)丁烷，以与实施例9中的方法同样的方式合成出标题化合物。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CDCl₃):δ 1.15-1.35(m, 3H), 1.80-3.00(m, 11H), 2.29(s, 3H), 4.05-4.20(m, 2H), 4.75-4.85(m, 2H), 5.35-5.70(m, 2H), 6.95-7.25(m, 4H)。

¹⁹F-NMR(CDCl₃):-114.5 - -112.7(m), -83.5 - -81.8(m)。

[实施例 15]

5-[(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4RS)-3-羟基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-羟基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛烷-3-亚基]戊酸(羧酸体)的合成

使用实施例12中合成的(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4RS)-3-叔丁基二甲基甲硅烷基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛-3-酮和(4-羧基丁基)三苯基溴化鏻，以与实施例8-9的方法同样的方式合成出标题化合物。其结构特性如下所述。

¹H-NMR(CD₃OD):δ 1.17-1.30(m, 3H), 1.63-2.79(m, 11H), 2.29(s, 3H), 3.75-4.12(m, 2H), 4.66-4.85(m, 2H), 5.40-5.58(m, 2H), 6.95-7.15(m, 4H)。

¹⁹F-NMR(CD₃OD):-118.3 - -117.7(d, J=250.4Hz), -86.1 - -85.3(m)。

[实施例 16]

本发明的化合物的体外代谢稳定性

对表1中记载的本发明的化合物F与化合物J的混合物(F:J= 52:41，实施例14中合成)、以及化合物F与化合物J的C-1位的四唑基分别被羧酸取代化合物的混合物(称为羧酸体，F:J=54:34，实施例15中合成)进行试验。

首先，按照下述文献A由大鼠肝脏制备线粒体级分。然后，参考下述文献B和C中由YAMAGUCHI等人所描述的方法，对NADPH非依赖性β氧化反应进行研究。反应在37℃下进行30分钟，并用含有适当内标物的甲醇溶液中止。利用高效液相色谱-核磁共振装置(LC-MS/MS)通过内标法对各化合物进行定量。将化合物F、J及其各羧酸体在代谢反应后在大鼠线粒体级分中的化合物残留率，以3次实验的平均±标准偏差的方式示于下表2。

表2 β-氧化反应后的母体化合物的残留率

化合物	残留率 (%)
		化合物 F	91.6±6.8
化合物 J	90.1±6.9
		化合物 F的羧酸体	27.8±2.2
化合物 J的羧酸体	44.1±2.1

由上表2可知，本发明的代表性化合物F和化合物J在线粒体级分中未受到β氧化。

文献

A) The Japanese Biochemical Society, ed., Biochemical Experiment Course 12 energy metabolism and biological oxidation (vol. 1), Tokyo Kagaku Dojin, p. 217-218, 第1版，第2次印刷，1979年7月11日发行.

B) Drug Metabolism And Disposition 23(11):1195-1201 (1995).

C) Xenobiotica 26(6):613-626 (1996)。

[实施例 17]

大鼠静脉内给药后的血浆药代动力学

为了确认本发明的化合物的体内代谢稳定性，在给大鼠静脉内给药后对血浆药代动力学进行评价。对雄性大鼠(6周龄，体重160～180g)进行1周驯化，使用判断为健康的动物。将表1中记载的本发明的化合物F与化合物J的混合物(F:J=52:41)、化合物F和化合物J的羧酸体的混合物(F:J=54:34)、以及化合物F(实施例9中合成)溶解于少量乙醇中，添加生理盐水，而制备试验化合物溶液。在轻微乙醚麻醉下以1 mL/kg从非禁食大鼠的股静脉瞬时静脉内给予该试验化合物溶液。在给药后5、15、30、45、60、90和120分钟，从尾静脉抽取静脉血。将血液与肝素混合，进行离心分离(3000rpm，4℃，15分钟)而获得血浆。利用LC-MS/MS通过内标法测定血浆化合物浓度。利用此方法的测定范围为0.1至100 ng/mL。以模型非依赖性方式利用药代动力学分析软件WinNonlin(3.3版)对由各大鼠得到的化合物浓度进行分析，各组得到3只动物的平均±标准偏差。将消除相中的表观半衰期(t_1/2)示于下述表3中。

表3 对大鼠静脉内给药后化合物的消除相的表观半衰期

试验化合物	剂量	t_1/2 (分钟)
			作为与异构体的混合物进行给药的化合物 F	50 μg/kg (与异构体的混合物)	115±31
作为与异构体的混合物进行给药的化合物 J	50 μg/kg (与异构体的混合物)	77±19
			化合物 F	300 μg/kg	158±15
作为与异构体的混合物进行给药的化合物 F的羧酸体	50 μg/kg (与异构体的混合物)	9.6±1.7
			作为与异构体的混合物进行给药的化合物 J的羧酸体	50 μg/kg (与异构体的混合物)	8.9±0.3

由上述表3可知，本发明的化合物F和化合物J的t_1/2值约为1～2小时，这与羧酸体的小于10分钟相比显著地延长。这表明本发明的化合物F和化合物J具有优异的代谢稳定性。

[实施例 18]

受体亲和力

对本发明的化合物F和化合物J的PG受体亲和力进行了评价。所用的化合物 F是实施例9中合成的化合物F，化合物J是通过使用柱对实施例14中合成的化合物进行分离和纯化而制备的(下述实施例中使用了相同的制备物)。将COS-7细胞转染小鼠EP4、人EP1-4或人IP的基因，以过量表达受体，然后收集细胞膜。作为标记配体，对于EP类使用氚标记PGE₂；对于IP使用氚标记伊洛前列素。以常规方法获得离解常数Kd值，并测定各试验化合物的抑制常数Ki值。作为参考对照，对于EP类使用PGE₂；对于IP使用贝前列素钠(beraprost sodium，BPS)。

结果，离解常数与文献值大致相同。如表4所示，PGE₂等同地结合至EP1-4，且未观察到其对于EP亚型的选择性。BPS选择性地结合至IP。化合物F和J结合至小鼠和人EP4。化合物F结合至人EP4的亲和力要比其结合至人EP1、EP2和EP3受体的高60倍以上，并且比结合至IP的高100倍以上。化合物J对人EP4的结合亲和力比结合至人IP的高40倍。

[表4]

表4 试验化合物对各种受体的结合亲和力

[实施例 19]

激动剂活性

以常规方法对本发明的化合物F和化合物J的EP4激动剂活性进行了评价。简而言之，将人EP4基因和CRE-LUC报道基因转染至COS-7细胞中。一天后将该细胞用试验化合物处理，并孵育3小时。洗涤该细胞，添加荧光基质，测定荧光强度以用于激动剂活性。作为参考对照，使用PGE₂并将PGE₂的最大活性作为100%。计算50%有效浓度(EC₅₀)，比较试验化合物的激动剂活性。

结果，如表5所示，化合物F和J为EP4激动剂。

[表5]

表试验化合物的EP4激动剂活性

各值为三次测定的几何平均值。

[实施例 20]

对血小板凝集的抑制效果

评价了化合物F和J、及其羧酸体对血小板凝集的抑制效果。该羧酸体通过利用柱分离和纯化实施例15中合成的化合物来制备。使用柠檬酸钠作为抗凝剂，由3名健康志愿者采集血液，制备富血小板血浆。将该富血小板血浆用生理盐水或试验化合物处理，2分钟后用二磷酸腺苷(ADP, 终浓度 10 μmol/L)诱发血小板凝集，并用血小板凝集测定装置(比浊法)进行记录。将生理盐水处理组的最大凝集作为100%，计算其50%抑制(IC₅₀)所需的浓度，评估抑制效果。

结果，如表6所示，化合物F和J与IP激动剂(BPS和羧酸体)相比，对凝集具有显著弱的抑制效果。

[表6]

表6 试验化合物对人血小板凝集的抑制效果

试验化合物	IC₅₀ (nmol/L)
		BPS	36
化合物 F	917
		化合物 J	2725
化合物 F的羧酸体	120
		化合物 J的羧酸体	190

各IC₅₀值是三个志愿者的几何平均值。

[实施例 21]

对小鼠的血压和心率的效果

购入雄性ICR小鼠(5周龄，日本SLC)，驯化饲养6天，用于试验。利用加热控制器(ATC-402, Unique Medical Co., Ltd.)将体温保持于37℃的同时，在异氟烷吸入麻醉下(以2.5%导入麻醉，维持于1.8-2.1%)对动物进行处理和测定。将试验化合物的给药用导管插入左股静脉，将另一导管插入右股动脉并连接至压力换能器以记录血液动力学的各参数。

将化合物F、化合物F的羧酸体以及BPS以0.01 mg/5 mL/kg的剂量静脉内给药，并用血液动力学分析用计算机软件(Fluclet, Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd.)评价对平均血压和心率的效果。将溶剂以5 mL/kg以相同方式向对照组静脉内给药。结果表示为给药前后各参数的变化率。各组使用了3至6只动物，结果表示为平均±标准偏差。

结果，溶剂未影响平均血压，而化合物F的羧酸体和BPS在给药1分钟后显著地降低了血压，此时最大降低率分别为45%和38%(图1A)。该降低的血压在10分钟内恢复，但心率则在上升中并且在10分钟后也保持高值(图1B)。化合物F所致的最大降低率为16.2%，不具有显著性(图1A)。此外，化合物F对心率几乎没有效果(图1B)。因此，与羧酸体和BPS(IP激动剂)相比，化合物F对血压和心率的效果极弱。

[实施例 22]

对炎症性细胞因子产生的抑制效果

使用人外周血，对化合物F和J的体外抗炎症效果进行了研究。从3名健康志愿者采集血液，制备CD4阳性T细胞。添加抗CD3抗体和抗CD28抗体，24小时后通过ELISA测定释放在培养基中的IL-2和TNFα的量。此外，将采集的全血用培养基稀释，用吲哚美辛处理以抑制内源性PGE₂的产生，添加脂多糖。利用ELISA测定48小时释放至培养基中的IP-10的量。各情形中，试验化合物均是在刺激30分钟前添加的。将溶剂对照组的产生量作为100%，确定其50%抑制(IC₅₀)所需的浓度。

结果，如表7所示，PGE₂和化合物F即便在极低浓度下也强烈地抑制炎症性细胞因子IL-2、TNFα和IP-10的产生。尽管与化合物F相比要弱，化合物J也抑制细胞因子产生。各化合物的效果反映其EP4亲和力和EP4激动剂活性。

如上所述，尽管包括化合物F的本发明的化合物是PGI₂衍生物，但它们也是与可见于C-1位羧酸体中的活性相比具有极其降低的IP激动剂活性的EP4选择性激动剂。本发明的化合物被期待在EP4激动剂起效的疾病组中显示同样的临床功效。与之相反，因为IP激动剂作用所致的其对循环系统的效果也弱，因而该化合物引起较少的副作用，比如出血、低血压、心脏心悸和颜面潮红。例如，在具有肠道出血的炎症性肠疾病的治疗中，重要的是使该IP激动剂作用减弱。使用化合物F，在比如炎症性肠疾病的各种动物模型中确认了本发明的化合物的功效。

[表7]

表7 试验化合物对细胞因子产生的抑制性效果

各值是三个志愿者的几何平均值。

[实施例 23]

对小鼠葡聚糖硫酸钠诱发结肠炎模型的预防效果

在葡聚糖硫酸钠诱发结肠炎模型中，检验化合物F对溃疡性结肠炎的预防效果。该动物模型显示局限于大肠的炎症，导致腹泻和血便，这与临床上的溃疡性结肠炎的病理状态类似(参照:文献D和E)。

购入雌性BALB/c小鼠(6周龄，日本SLC)，驯化饲养1周，用于研究。除了正常组之外，使小鼠自由饮用制备成2.2 w/v%的葡聚糖硫酸钠(缩写为DSS，MP Biochemicals, M.W. 36,000 - 50,000, Lot No. 3439J)溶液9天，以诱发结肠炎。从开始饮用DSS之日(第0天)起到剖检(第9天)前一天，一天1次，以0.1、0.3和1mg/kg的剂量每天口服给予化合物F。对于对照组，以10ml/kg以同样的方式口服给予溶剂(1 vol%乙醇溶液)。

我们的预备性研究已显示，小鼠粪便的含水量与其形状之间具有相关性。因此，为了确定腹泻的程度，将大便分为6个等级：正常(0分)、球状便不少于50%(1分)、香蕉状便少于50%(2分)、香蕉状便不少于50%(3分)、泥状便(4分)、水样便(5分)(大便稠度评分)。利用便潜血载玻片5 Shionogi II(盐野义制药)将便潜血分为6个等级：阴性(载玻片颜色从黄色未变化，0分)、弱阳性(浅蓝绿色，1分)、阳性(蓝绿色，2分)、中度阳性(清楚蓝绿色，3分)、强阳性(使用发色剂颜色瞬间变为深蓝色，4分)，和直肠出血(5分)。将大便稠度评分与潜血评分的总和定义为大便评分。各组使用了8至10只动物，结果表示为平均±标准偏差。在剖检日，在乙醚麻醉下开腹和采血后，将小鼠失血致死。然后，从盲肠正下方直至肛门摘出大肠并测定其长度。

结果，在研究期间体重逐渐增加，并且没有组间差异。从饮用DSS的第4天开始，对照组中显示明显的松软大便及大便中的潜血。在剖检日(第9天)，大肠长度明显地短于正常组。化合物F剂量依赖性地抑制大便评分中的上升，在0.1mg/kg下是抑制倾向，在0.3和1mg/kg下是显著性的(图2A)。同样地，化合物F对大肠缩短显示剂量依赖性的抑制效果(图2B)。因此，化合物F明显预防溃疡性结肠炎的发病。

文献

D) Lab.Invest.69(2):238-249 (1993).

E) Inflamm.Res.45(4):181-191 (1996)。

[实施例 24]

IP激动剂对小鼠葡聚糖硫酸钠诱发结肠炎模型的效果

使用选择性IP激动剂、BPS来确定IP激动剂对该结肠炎模型是否具有效果。

购入雌性C57BL/6小鼠(6周龄，日本SLC)，驯化饲养1周，用于研究。除了正常组，使小鼠自由地饮用3或2 w/v% DSS (分别为MP Biochemicals, Lot No. 5653H和5464H)溶液1周，以诱发结肠炎。从开始饮用DSS之日(第0天)起到剖检(第9天)前一天，一天一次，以0.3 mg/kg的剂量口服给予BPS，以0.3和1 mg/kg的剂量口服给予化合物F。对于对照组，以10ml/kg以同样的方式口服给予溶剂(1 vol%乙醇溶液)。将大便稠度分级为0至4分，其中，普通(0)、部分稀便(1)、稀便(2)和腹泻(4)。将血便也分级为0至4分，其中，普通(0)、部分血便(1)、血便(2)和血便加直肠出血(4)。将两级别的总和定义为大便评分(最大值8)。进而，以与实施例23相同的方式测定大肠的长度。各组使用了6至10只动物，结果以平均值±标准偏差表示。

结果，IP激动剂BPS没有起效，反而显示大便评分恶化的趋势。另外，其对大肠短缩也未显示效果(图3A和3C)。然而，化合物F以与可见于实施例23中的相同方式对结肠炎的发作显示了优异的预防效果(图3B和3D)。因此，治疗效果是由EP4激动剂作用带来，并且有时被IP激动剂作用减弱。如此，重要的是选择性EP4激动剂。

[实施例 25]

对大鼠葡聚糖硫酸钠诱发结肠炎的预防效果

在大鼠中也研究了化合物F对结肠炎的预防效果。购入7周龄体重约为210g～240g的雄性SD大鼠(Charles River)，驯化饲养1周，用于试验。除正常组以外，让大鼠自由饮用制备成5.5 w/v%的DSS(MP Biochemicals，M.W. 36,000～50,000，批号4556J)溶液8天，以诱发结肠炎。从开始饮用DSS之日的前一天到剖检前一天(第7天)，一天一次，每天以0.3、1和3mg/kg的剂量口服给予化合物F。对于对照组，以5ml/kg口服给予溶剂(1 vol%乙醇溶液)。

在开始饮用DSS的第8天，以0.2ml/100g从尾静脉给予1.25 w/v%的伊文思蓝溶液。30分钟后，在乙醚麻醉下将大鼠开腹并放血致死。然后，从盲肠正下方至肛门摘出大肠，并用卡尺测定其长度。在将大肠内容物除去后，用生理盐水对距肛门7cm长度的结肠组织进行3次清洗，用真空泵干燥一夜。次日，测量干重，添加甲酰胺(2ml)，在50℃下进行一夜色素提取，在620nm处测定其浓度。用伊文思蓝标准溶液制作标准曲线，并计算1g结肠组织中的伊文思蓝的量(mg)，从而评价结肠组织损伤的程度。

为了表示腹泻的程度，将大便形状分为6个等级，其中，正常(0分)、棒状便少于50%(1分)、棒状便不少于50%(2分)、棒状便和部分泥状便(3分)、泥状便(4分)和水样便(6分)(大便稠度评分)。以与实施例23中所述相同的方法对潜血评分进行分级。将大便稠度评分与潜血评分的总和作为大便评分。各组使用了7至10只动物，结果以平均值±标准偏差表示。

结果，对照组的体重始终逐渐增加，但该增加显著低于正常组。从饮用DSS的第1天起，对照的大便评分显著地增加。在剖检日(第8天)，改日的大肠显示明显的组织损伤和显著性的短缩。与之相反，发现以1mg/kg和3mg/kg给予化合物F对这些项目显示出抑制倾向或显著性抑制效果(图4A、4B、4C)。即，化合物F预防大肠中的溃疡发生，并使器官功能正常化，由此抑制腹泻和血便的症状。

[实施例 26]

对小鼠葡聚糖硫酸钠诱发结肠炎的缓解/复发模型的治疗效果

接着，在慢性模型中研究了化合物F对结肠炎的治疗效果。购入6周龄体重约为20g的雌性BALB/c小鼠(日本SLC)，驯化饲养1周，用于试验。将小鼠分为结肠炎诱发组和正常组。使结肠炎诱发组自由饮用2.6 w/v%的DSS(MP Biochemicals，M.W. 36,000-50,000，批号4556J)溶液，以诱发结肠炎。在第8天，当结肠炎诱发组的大便评分(实施例23中定义)达到约4.5时，将小鼠细分为对照组、化合物F的1mg/kg给药组、和柳氮磺胺吡啶(SIGMA，批号085K1930，以下简称为SASP)100mg/kg给药组。然后将DSS溶液更换为蒸馏水让小鼠自由饮用9天(缓解期)。在分组后，每3～4天对大便评分进行评价。当对照组的评分达到约为1时，让小鼠再次饮用DSS溶液以引起复发(复发期)。将缓解和复发作为1个周期，重复5次。但是，对于第5个周期仅实施缓解期。

从初次缓解期(开始饮用2.6 w/v%的DSS起的第8天)到第5缓解期(从开始饮用2.6 w/v%的DSS起的第57天)，一天1次，50天每天以1mg/kg的剂量口服给予化合物F并以100mg/kg的剂量口服给予SASP。对于对照组，以10ml/kg口服给予溶剂(1 vol%乙醇溶液)。如果在各缓解期的最后一天小鼠的大便稠度评分和隐血评分均达到0分，则将该小鼠视作“缓解中”。以各组中缓解中的小鼠的比率来计算缓解率(%)。各组使用8至10只小鼠，结果用平均值来表示。

A结果，对照组的大便评分在复发期上升，在缓解期下降。该评分在几乎整个研究期内显著性地高于正常组(图5)。以5个缓解期的平均计，其缓解率为35.5%(表8)。化合物F在缓解期的早期使大便评分降低，并在复发期抑制评分的上升。其缓解率在任一缓解期中均不小于60%，平均为66.0%，这显然高于对照组。另一方面，在缓解期或者复发期的任一者中，SASP对大便评分均未显示明显的效果。在第1、第3和第4周期中，其缓解率略高于对照组，但在第2和第5周期则相反地低于对照组，缓解率的平均值与对照组相等。

如上所示，化合物F不仅提供预防效果而且提供治疗效果，以及缓解维持效果。此外，在临床使用中，其效果被认为远优于SASP。

[表8]

表8 小鼠DSS诱发结肠炎的缓解/复发模型中的缓解率

[实施例 27]

对小鼠CD4⁺CD25^- T细胞转入结肠炎模型的预防效果

研究了对另一种炎症性肠疾病即克罗恩氏病的效果。T细胞转入模型作为克罗恩氏病的模型是众所周知的，其发生慢性胃炎或肠炎(参照：文献F、G、H)。此外，也可以把它视为伴有T细胞的活化的患有类似肠道溃疡的肠道白塞氏病或单纯性溃疡的动物模型(参照：文献I、J)。

购入6 周龄体重为19～23g的雌性BALB/cA Jcl小鼠(CLEA Japan, Inc.)和6周龄的雌性C.B-17/Icr-scid小鼠(CLEA Japan, Inc.)，驯化饲养1周，用于研究。

在乙醚麻醉下对BALB/cA Jcl小鼠进行开腹，然后由腹部大动脉和腔静脉放血致死，分离出脾脏。由脾脏制备脾细胞，然后利用CD4⁺ T细胞分离试剂盒(No.130-090-860，Milky Biotech Co., Ltd.)和CD25-生物素抗体(No.130-092-569，Milky Biotech Co., Ltd.)来制备CD4⁺CD25^- T细胞。利用自动MACS分离器(Milky Biotech Co., Ltd.)将细胞分离。将分离的CD4⁺CD25^- T细胞悬浮于生理磷酸盐缓冲液中，并对C.B-17/Icr-scid小鼠腹腔内给予每只动物2.5×10⁵细胞，以诱发结肠炎。

将1mg/kg的化合物F或泼尼松龙，在转入CD4⁺CD25^- T细胞的5小时前初次给予，并在以后20天，一天1次，每天口服给予。对于对照组，以10ml/kg口服给予溶剂(1 vol%乙醇溶液)。临床终点为大便稠度评分(0～5分)、便潜血评分(0～4分)和体重减少评分(0～5分)的总和，将其称为疾病活动指数评分(以下，简称为DAI评分：最高评分14分)。按大便的硬度为正常(0分)、略软(1分)、部分软(2分)、软(3分)、相当软(4分)和腹泻(5分)对大便稠度评分进行分级。以与实施例23中同样的方式，对便潜血评分进行评价。按照体重变化为增加(0分)、小于3%的减少(1分)、不小于3%且小于6%的减小(2分)、不小于6%且小于9%的减少(3分)、不小于9%且小于12%的减少(4分)、和不小于12%的减少(5分)对体重减少评分进行分级。各组使用8至10只小鼠，结果表示为平均值。

结果，对照组的大便稠度评分和便潜血评分从T细胞转入12天后起显示有明显增加，在第19天体重减少评分显示明显增加，所有项目在21天后均达到几乎最大值。分别如图6A和6B中所示，化合物F将大便稠度评分和便潜血评分的增加抑制至大致一半，并如图6C所示将体重减少评分的增加几乎完全抑制。另一方面，尽管泼尼松龙以与如图6B所示的化合物F给药几乎相同的程度抑制便潜血评分的增加，但如图6A所示，在第21天对大便稠度评分未显示明显效果。此外，如图6C中所示，在整个研究期间，与对照组相比体重减少评分始终保持于更高数值，泼尼松龙明显使该评分变差。如图6D所示，DAI评分显示化合物F综合地优于泼尼松龙。

因此，化合物F可以比现有药物更有效地抑制克罗恩氏病、肠道白塞氏病和单纯性溃疡以及溃疡性结肠炎的病症。

文献

F) Immunol Rev. 182:190-200 (2001).

G) Int. Immunopharmacol.6(8):1341-1354 (2006).

H) J. Immunol.160(3):1212-1218 (1998).

I) Clin.Exp.Immunol.139(2):371-378 (2005).

J) Histopathology.45(4):377-383 (2004)。

[实施例 28]

对大鼠乙醇诱发胃粘膜损伤模型的效果

在大鼠乙醇诱发胃粘膜损伤模型中，研究了化合物F对胃粘膜损伤的抑制效果。此模型常被用作伴随充血性粘膜损伤的人急性胃炎的动物模型(文献K)。

由Oriental BioService Inc.购入雄性SD大鼠(7周龄，Charles River)，驯化饲养1周，用于研究。基于体重对大鼠进行分组，在研究前一天置于铺有金属丝网的清洁笼中，禁食19小时(最后3小时绝水)，在所有组中口服给予乙醇(特级，Nacalai Tesque，批号V8A5862，1.5ml)以诱发胃粘膜损伤。以0.01、0.1和1mg/kg的剂量在诱发胃粘膜损伤30分钟前以5ml/kg的体积口服给予化合物F。对于对照组，以5ml/kg以同样的方式口服给予溶剂(1 vol%乙醇溶液)。各组使用了8只动物。

在给予乙醇1小时后，在乙醚麻醉下从腹大动脉和腔静脉将大鼠放血致死，分离出胃。立刻用2 vol%的中性甲醛溶液(6ml)填充分离的胃，固定15分钟。从贲门部到幽门部沿着大弯的中线切开胃，并将其在聚氯乙烯板上伸展开。在立体显微镜下测定各溃疡的长度和宽度，计算面积，将其总和作为总溃疡面积。

结果，对照组的总溃疡面积的平均为103mm²。化合物F从0.01mg/kg开始以剂量依赖性方式显著性地减小总溃疡面积，并在1mg/kg剂量下几乎完全减小所述面积(图7)。因此，化合物F抑制了胃粘膜损伤。

文献

K) Dig Dis Sci.31(2 Suppl), 81S-85S (1986)。

[实施例 29]

对大鼠吲哚美辛诱发小肠损伤模型的效果

利用大鼠吲哚美辛诱发小肠损伤模型，研究了化合物F对小肠损伤的抑制效果。已知非甾体抗炎药(NSAID)的给药会引起人体小肠中的出血性损伤。该模型的特征在于由NSAID、吲哚美辛对大鼠给药所诱发的小肠粘膜损伤，显示与患者的NSAID诱发的小肠损伤或者克罗恩氏病相类似的病理(文献L和M)。

购入7周龄的雄性SD大鼠(Charles River)，驯化饲养1周，用于研究。基于体重对大鼠进行分组，以15mg/5ml/kg用吲哚美辛(SIGMA，批号19F0018)对所有组进行皮下给药，以诱发小肠损伤。以0.01、0.1和1mg/kg的剂量，在吲哚美辛皮下给药的30分钟前和6小时后以5ml/kg的体积口服给予化合物F。对于对照组，以5ml/kg以同样的方式口服给予溶剂(1 vol%乙醇溶液)。各组使用了8只动物。

在吲哚美辛给药23.5小时后，在乙醚麻醉下对大鼠静脉内给予2ml的10mg/ml伊文思蓝溶液。30分钟后，在乙醚麻醉下由腹大动脉和腔静脉放血致死大鼠，分离出小肠。用适当量(大约35ml)的2 vol%中性甲醛溶液填充分离的小肠，固定大约15分钟。然后，沿着肠系膜附着部位将整个小肠切开，在氯乙烯板上伸展开。在立体显微镜下测定各溃疡的长度和宽度，计算面积，将其总和作为总溃疡面积。

A结果，在对照组中，小肠的总溃疡面积约为730mm²。与之相反，化合物F给药组从0.1mg/kg的剂量开始剂量依赖性地显著性地减少溃疡面积，并在1mg/kg的剂量下将该面积完全减少(图8)。因此，化合物F强力抑制小肠损伤。

文献

L) Aliment Pharmacol Ther.7(1), 29-39 (1993).

M) Acta Gastroenterol Belg.57(5-6), 306-309 (1994)。

根据以上所述，化合物F对酒精等所致的对胃肠道粘膜的直接损伤以及NSAID等所致的粘膜再生障碍显示优异的抑制作用。因此，期待化合物F对于胃肠道粘膜损伤显示防御效果和组织修复效果。

如上述实施例中所示，并且由化合物F所认识到，本发明的化合物对于与免疫相关的消化道炎症、药物诱发的胃肠道粘膜损伤、药物诱发的粘膜再生障碍所致的胃肠道损伤和治愈延迟有效。具体地，其可用于炎症性肠疾病比如溃疡性结肠炎和克罗恩氏病、酒精性胃炎或胃溃疡、小肠溃疡等。这些作用基于EP4激动剂作用，且不限于所列疾病。

[实施例 30]

对大鼠抗Thy-1抗体诱发肾小球肾炎模型的效果

购入雄性Slc: Wistar大鼠 (6周龄，日本SLC)，驯化饲养1周，用于研究。除了正常组之外，对动物静脉内给予抗Thy-1抗体(小鼠抗CD90抗体 (UK-Serotech Ltd. Code:MCA47XZ, 克隆号: MRC OX-7, 批号0303))一次。从抗体给予日(第0天)至第6天，每日，一天两次(早上和晚上，各0.3 mg/kg)口服给予化合物F和化合物J的混合物(F:J = 52:41, 记为化合物F/J)。在给予抗体起3天后，采集1天的尿。在给予抗体的第7天，对动物进行剖检。分离出右肾，称重并用福尔马林固定。各组使用了5至8只动物，结果表示为平均±标准偏差。

结果，在给予抗体起1天后，与正常组相比对照组中体重增加受到抑制。然而，在3天后体重如正常组一样增加。化合物F/J处理组的体重显示与对照组相似的变化。对照组的24小时尿量与正常组相比增大。然而，化合物F/J处理组的24小时尿量与正常组为相同水平(图9A)。对照组中的24小时尿蛋白显著增加，然而却是比化合物F/J处理组中所见的对照低的值(图9B)。相对肾重量在对照组中显著增加，但却是比化合物F/J处理组中所见的对照低的且接近正常的值(图9C)。肾组织病理学评价揭示了对照组显著地增加肾小球中的总肾小球细胞、系膜区和PCNA阳性细胞。化合物F/J处理组显著地抑制了所有这些测定中的增加(图9D、9E、9F)。

因此，本发明的化合物将尿量正常化，并抑制肾小球的免疫反应和增殖反应，显示器对肾炎有效。

对兔眼压的效果

购入日本白兔(雄性，10周龄，BIOTEC Co., Ltd.)，驯化饲养1周，用于研究。利用微量移液枪以50 μL/眼的体积将化合物F溶液(0.01 w/v%)一次滴注至两眼的角膜上。测定右眼的眼内压，使用左眼评价对眼的局部刺激效果。在用氧化布拉洛尔(oxybupranol)(Benoxil 0.4%滴注溶液)表面麻醉后，使用气压式眼压计(Alcon Ltd.)测定滴眼前和滴眼1、2、3、4、6和8小时后眼内压。此外，通过对结膜充血、结膜浮肿、角膜混浊、虹膜充血、排泄物和闭眼动作进行评分，来评价对眼的局部刺激效果。对于该评价，使用磷酸盐缓冲液作为溶剂对照组，使用异丙基乌诺前列酮(Rescula滴眼剂，Santen Pharmaceutical Co., Ltd.)作为比较。各组使用6只动物，结果表示为平均值。

结果，溶剂对照组的眼内压在0时刻至滴注8后，在±2 mmHg范围内变化。化合物F组显示在滴注1小时后显示6.9 mmHg的降低，在2小时后显示9.3 mmHg的降低，在6小时后显示6.6 mmHg的降低，因此，维持眼内压的显著性降低。另一方面，Rescula滴眼剂组显示与化合物F组大致相似的眼内压降低曲线(图10)。

作为对眼的局部刺激效果，在滴注后1小时，在化合物F组的一些动物中观察到结膜浮肿和闭眼，但动物在之后恢复。在Rescula滴眼剂组中，在滴注后1小时，在一些动物中观察到结膜浮肿和闭眼，并且在给药后持续最多2小时。动物在之后恢复。

因此，本发明的化合物F显示与Rescula滴眼剂同等的眼内压降低效果和对眼的局部刺激效果，并且可用作青光眼和高眼压症的治疗剂。

[实施例 32]

预防效果对小鼠伴刀豆球蛋白A诱发肝炎模型的效果

利用伴刀豆球蛋白A(以下记为Con A)诱发肝炎模型，调查了化合物F对肝炎的预防效果。该模型是肝实质细胞以T细胞依赖性方式受到损伤的肝炎模型，表现出与自身免疫性肝炎或重症肝炎相似的临床病理(参见: 文献N、O和P)。

购入BALB/c小鼠(雌性，7周龄，日本SLC)，驯化饲养1周，用于研究。除了未诱发组之外，将溶解于盐水中的Con A(IV型，Sigma-Aldrich)由小鼠的尾静脉以12.5 mg/10 mL/kg的剂量进行给药，以诱发肝炎。二十小时后，将小鼠在乙醚麻醉下开腹。由尾侧腔静脉采集0.5 mL的血液样品，获得肝素化血浆以测定血浆ALT和AST活性。试验物质为化合物F (1 mg/10 mL溶液)、泼尼松龙(Nacalai Tesque, 5 mg/10 mL悬浮液(使用0.5 w/v%甲基纤维素))以及注射用水(给予对照组)，将其以10 mL/kg的体积在注射Con A 的1小时前口服给予。各组使用了7至9只动物。在数据的对数变换后，进行单向方差分析用于统计学评价。

结果，与未诱发组相比，对照组的血浆ALT和血浆AST活性显著增大。化合物F和泼尼松龙显著且强烈地抑制该增大。图11显示血浆ALT的数据。

因此，化合物F对于T细胞活化相关的肝损伤有效。

文献

N) Eur.J. Immunol.28(12):4105-4113 (1998).

O) Proc.Natl.Acad.Sci.97(10):5498-5503 (2000)

P) J. Exp.Med.191(1):105-114 (2000)。

产业实用性

本发明的化合物(1)可用作药剂的活性成分。含有本发明的化合物(1)作为活性成分的药剂可用于各自涉及EP4的免疫疾病、消化道疾病、心血管疾病、心脏疾病、呼吸道疾病、神经疾病、眼科疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、骨疾病、皮肤疾病等。具体地，其可用作用于预防或治疗溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、胃炎或胃溃疡、小肠溃疡、肾炎、青光眼或肝炎的药剂。

尽管以上已详细说明了本发明的一些实施方式，但本领域技术人员可在实质上不脱离本发明的教导和优点的范围内对所示的具体实施方式进行各种改变和变更。这样的改变和变更也涵盖在所附权利要求书所界定的本发明的主旨和范围中。

本申请基于在日本提出的母案申请No. 2010-51127和2010-246208，将其内容全部引入本文中。

Claims

1.式(1)所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗症状可通过选择性EP4激动剂作用减轻的疾病的药物中的用途，其中所述疾病为青光眼、高眼压、肾小球肾炎、糖尿病肾病、IgA肾病、缺血-再灌流肾损伤、肝炎或缺血-再灌流肝损伤，

其中，R¹是甲基，R²是氢，并且R³为氢原子或碳原子数1至4的烷基。

2.权利要求1所述的用途，其中R³为甲基。

3.权利要求1或2所述的用途，其中R³为间甲基。

4.权利要求1所述的用途，其中式(1)所示的化合物为4-[(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-[(1E,3R,4R)-3-羟基-4-(间甲苯基)-1-戊烯基]-7-羟基-2-氧杂-4,4-二氟-二环[3.3.0]辛烷-3-亚基]-1-(四唑-5-基)丁烷或其药学上可接受的盐。