CN102911900A - 紫金牛叶杆菌RC6b及其在土壤修复中的应用 - Google Patents
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Abstract
紫金牛叶杆菌RC6b及其在土壤修复中的应用，该菌株已在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2012年09月25日，保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.6621。该根际促生菌具有较强的重金属抗耐性和吸附能力，可以显著地促进植物的生长，降低重金属对植物的毒性，同时提高土壤中重金属的植物有效性。因此，可直接用于提高植物修复效率，并且在重金属污染土壤的生物修复中具有较好的应用前景。
Description
一、技术领域
本发明涉及紫金牛叶杆菌，具体涉及一种根际促生（Plant growth promoting rhizobacteria,PGPR）紫金牛叶杆菌RC6b及其在重金属污染土壤修复中的应用。
二、背景技术
重金属是环境中普遍存在的一类无机污染物，由于其在环境中相对稳定不能降解，使得重金属污染治理十分困难。特别是土壤重金属污染，不仅影响农作物的产量和品质，同时也使地下水体受到污染，并通过食物链的“生物放大”作用对人类健康造成极大的威胁。修复重金属污染土壤，恢复其原有功能，一直是国际研究的热点和难点。目前，重金属污染修复主要有两种途径：1.改变重金属的存在状态，使其固化或钝化，将重金属的活性降低，减少它们在土壤中的迁移性和生物可利用性；2.利用特殊植物吸收土壤中的重金属，然后将植物除去，再经过淋洗、收集，以达到回收重金属和减少土壤污染的双重目的。就植物修复而言，土壤中过量的重金属会阻碍一般植物的正常生长。相比之下，大多超富集植物虽然对重金属的抗耐、积累能力强，但其生长缓慢且生物量小，导致实际修复效率很低，制约了植物修复技术的应用。
近年来，植物根际细菌引起了国内外研究者的极大关注，尤其在根际细菌、重金属和植物三者的相互作用方面。研究发现，根际细菌可以通过以下途径，来提高植物修复效率：1.细菌自身吸附降低重金属对植物的毒性；2.分泌植物生长调节剂，促进植物生长发育；3.多种渠道影响土壤中重金属的植物有效性。然而，能够同时具备以上三种能力的微生物资源还很少。目前，有关叶杆菌属的研究主要集中在其提高土壤肥力,促进农作物的生长方面，至今还未报道能够自身吸附重金属、提高重金属植物有效性的叶杆菌。此外，环境中通常以多种重金属同时存在，呈现其复合污染的现象。目前还没有发现能够同时吸附几种重金属的微生物资源。
三、发明内容
解决的技术问题：本发明旨在针对生产实践中的实际问题和需求，提供了一种能够自身吸附重金属并促进重金属污染土壤植物修复效率的微生物资源，该微生物为植物根际促生菌：紫金牛叶杆菌RC6b CGMCC No.6621，该菌对重金属镉、锌、铅均具有较强的抗性，分别可达到350、1000和4500mg L-1，并能够在200mg L-1含镉、锌、铅的液体培养基中很好的生长；可以分泌促进植物生长的物质，比如1-氨基环丙烷-1-羧酸（1-aminocyclopropane-1-carboxylate,ACC）脱氨酶、吲哚乙酸（indole-3-acetic acid）、铁载体（Siderophore），并能溶解土壤中难溶性磷酸盐（Phosphate）；可以自身吸附溶液中的重金属镉、锌、铅；能够显著促进修复植物在重金属污染条件下的生长；可使污染土壤中修复植物对镉、锌、铅的吸收量分别提高138％，90%，46%。因此，该菌株在重金属污染土壤的生物修复中具有良好的应用前景。
技术方案：一株紫金牛叶杆菌（Phyllobacterium myrsinacearum）RC6b，该菌种已在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2012年09月25日，保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.6621。紫金牛叶杆菌RC6b在修复重金属污染土壤中的应用。紫金牛叶杆菌RC6b的抗重金属且具ACC脱氨酶活性的促生菌分离培养基，即ADF培养基（1L），其组成为DF母液（每升含4g KH2PO4,6g Na2HPO4,0.2g MgSO4·7H2O，0.001g FeSO4·7H2O,2g葡萄糖,2g葡萄糖酸,2g柠檬酸,2g(NH4)2SO4，微量元素溶液0.1mL）加ACC（终浓度为3nmol L-1）为唯一氮源的培养基，琼脂20g，pH 7.2，重金属50-4500mg L-1。上述重金属分别为镉、锌、铅。
本发明提供一种自身吸附重金属并能促进重金属污染土壤植物修复效率的优势菌种。该菌种保藏号为CGMCC No.6621，经鉴定为紫金牛叶杆菌（Phyllobacterium myrsinacearum）。该菌株在Luria-Bertani（LB）平板上生长48h后呈灰褐色半透明，菌落直径约为1～4mm，表面皱褶且凹陷，边缘较整齐（见图1）。经染色镜检，该菌为革兰氏阴性，杆状。
该菌具有较强吸附重金属、促进植物生长、提高土壤中重金属植物有效性的能力。将Phyllobacterium myrsinacearum RC6b CGMCC No.6621菌株接种于LB液体培养基中，振荡培养至对数期；将上述培养好的菌悬液按2%的接种量接入250mL三角瓶，含不同重金属镉、锌、铅浓度均为200mg L-1LB液体培养基中生长36h，结果发现该菌株在重金属浓度较高的液体培养基中可以很好地生长，其生长曲线与该菌对镉、锌、铅的抗性结果呈现一定的对应关系；重金属离子对菌株RC6b的毒害顺序为镉>锌>铅（见图3）。
将RC6b CGMCC No.6621菌株分别接种于浓度为150mg L-1，pH值为4.0的CdCl2、ZnSO4、Pb(NO3)2溶液，并放入20℃恒温培养箱中，吸附2、4、6、8h，然后过滤，收集上清液，用原子吸收分光光度计测定溶液中残余Cd2+、Zn2+、Pb2+的浓度，并计算细菌对重金属离子的吸附量。结果发现，RC6b菌株对Cd2+、Zn2+、Pb2+三种重金属离子的吸附强弱顺序为Zn2+（10.79mg kg-1干重）>Cd2+（5.82mg kg-1干重）>Pb2+（3.12mg kg-1干重）（见图4）。这很可能与重金属的离子半径直接相关。由于Cd2+的离子半径
Zn2+ 
Pb2+ 
具有较小离子半径的重金属可以很容易被吸附到细菌表面。
将RC6b CGMCC No.6621菌株接种于LB液体培养基中，振荡培养至对数期；将上述菌悬液按10％的接种量接入重金属污染土壤中，28℃避光培养5d后发现，与对照相比，污染土壤中重金属镉、锌、铅的可溶解性呈显著增加趋势。其中，土壤中重金属镉的可溶解性提高了16.7倍，锌为4.6倍，铅为5.7倍（见图5）。
将RC6b CGMCC No.6621菌株接种到表面消毒的油菜种子，培养45d后，在不含重金属的培养基中，植物根长、茎叶长、鲜重、干重均明显高于不接菌的对照处理。此外，含5、10mL Cd2+L-1培养基虽然表现出较强的毒性，抑制了油菜的生长。但在用RC6b菌浸种的处理中，植物的生物量也明显高于不接菌的对照处理（见图6）。
此外，在植物修复过程中，接种紫金牛叶杆菌RC6b不仅可以大大促进超富集植物伴矿景天的生长，还可以显著地提高伴矿景天对重金属镉、锌、铅的吸收量（p<0.05），其中增幅最高的是镉（138％），其次是锌（90％）和铅（46％）（见图7）。
本发明提供的CGMCC No.6621菌，能在以ACC为唯一碳源和能源的培养基上生长并能自身吸附重金属离子，促进重金属污染土壤上植物的生长，提高土壤中重金属植物有效性。
有益效果：该根际促生菌具有较强的重金属抗耐性和吸附能力，可以显著地促进植物的生长，降低重金属对植物的毒性，同时提高土壤中重金属的植物有效性。因此，可直接用于提高植物修复效率，并且在重金属污染土壤的生物修复中具有较好的应用前景。
四、附图说明：
图1为菌株RC6b在固体培养基上的菌落形态；
图2基于16S rRNA序列同源性的菌株RC6b和相关细菌的系统发育树；
图3为菌株RC6b在含重金属的液体培养基中的生长曲线；
图4为培养8小时内菌株RC6b对溶液中重金属的吸附量；
图5为培养5天后菌株RC6b对土壤中重金属的活化情况；
图6为菌株RC6b对含镉营养琼脂培养基上植物生长的影响；
图7接种菌株RC6b对植物重金属镉、锌、铅吸收量的影响。
五、具体实施方案
实施例1：紫金牛叶杆菌RC6b（Phyllobacterium myrsinacearum RC6b CGMCC No.6621）的分离、鉴定及其特性
1.1供试土壤
采自浙江某铅锌矿区生长的锌镉超富集植物伴矿景天的根际土壤。其基本理化性质为：pH 7.6，有机质13.6g kg-1，铜全量1826.7mg kg-1，锌全量991.9mg kg-1，镉全量91.3mg kg-1，铅全量14207.4mg kg-1。新鲜土壤样品过2mm筛，于暗处4℃保存。
1.2供试重金属
CdCl2·2.5H2O、ZnSO4·7H2O和Pb(NO3)2均购自Sigma公司（美国），均为分析纯。
1.3培养基类型
①Luria-Bertani（LB）培养基：每升含5g酵母抽提物,10g蛋白胨,10gNaCl;②具ACC脱氨酶活性的促生菌分离培养基，即ADF培养基（1L）；Dworkin and Foster（DF）母液加ACC（终浓度为3nmol L-1）为唯一氮源的培养基，琼脂20g，pH 7.2。DF母液每升含4g KH2PO4,6g Na2HPO4,0.2g MgSO4·7H2O，0.001g FeSO4·7H2O,2g葡萄糖,2g葡萄糖酸,2g柠檬酸,2g(NH4)2SO4，微量元素溶液0.1mL（其组成为：100mL蒸馏水中溶解,124.6mg ZnSO4，78.2mg CuSO4，10mg MoO3，10mg H3BO3，11.2mg MnSO4）；③含重金属的具ACC脱氨酶活性的促生菌分离培养基：配制50mg mL-1CdCl2、ZnSO4和Pb(NO3)2储液，经高压蒸汽灭菌后加入上述配方的具ACC脱氨酶活性的促生菌分离培养基，制成重金属浓度变化在50-4500mg L-1一系列培养基。
1.4根际促生菌的分离与纯化
称取1g上述新鲜供试土壤，加入装有50mL SLP液体培养基的三角瓶中，28℃下200rmin-1振荡培养24h。然后，转移1mL菌悬液至另一50mL SLP培养液中，同等条件下培养24h。第3d，从SLP培养液中转移1mL菌悬液至50mL DF液中，相同条件下培养48h，用于含ACC脱氨酶活性细菌的分离纯化。最后，吸取0.1mL ADF培养液稀释不同梯度涂布于ADF固体平板，28℃恒温箱中培养72h，划线分离，纯化后-80℃保存。为避免重复筛选，观察比较菌落形态，每样本仅挑取占优势的单菌落作为研究用途的含ACC脱氨酶活性细菌。最后，再将含ACC脱氨酶活性的细菌菌液接种到含重金属的磷酸盐琼脂培养基中，28℃培养3d，能够抑制细胞生长的最低浓度为该菌株的最低抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration,MIC）。
1.5菌种形态观察及鉴定
将已充分活化的菌株接种到LB液体培养基中，28℃培养24h，革兰氏染色后在光学显微镜下观察该菌株。经染色镜检，该菌为革兰氏阴性，杆状。将活化菌种在LB培养基平皿上划线接种，28℃培养箱中倒置培养2d，观察菌落形态，并测量菌落大小。经显微镜检，在LB平板上生长48h后呈灰褐色半透明，菌落直径约为1～4mm，表面皱褶且凹陷，边缘较整齐（见图1）。
1.616S rDNA的PCR扩增、序列分析和系统发育树的构建
利用Biospin细菌基因组DNA提取试剂盒（杭州博日科技有限公司）提取细菌DNA。用于16S rDNA PCR反应的引物为一对通用引物。正向引物为FAM27f：5′-GAGTTTGATCMTGGCTCAG-3′；反向引物为1492r：5′-GGYTACCTTGTTACGACTT-3′。PCR反应条件：94℃3min；94℃1min，56℃1min，72℃2min，循环33次；72℃10min。琼脂糖凝胶电泳检测。PCR产物的测序由上海博亚生物技术有限公司完成。植物根际促生菌RC6b的16S rDNA序列通过Blast程序与GenBank中核酸数据进行比对分析。然后利用MEGA5.1软件构建系统发育树，采用Neighbor-Joining法进行系统发育分析（见图2）。
1.7菌悬液的制备
在无菌条件下将菌株接种于LB液体培养基中，28℃下200r min-1振荡培养18h，离心收集菌体，并用磷酸盐缓冲液反复洗涤3次，再用磷酸盐缓冲液将菌液调节吸光度（OD600）至1备用，含菌量为1.5×108CFU mL-1。
1.8菌株在含重金属的液体培养基中的生长
为了测定每种重金属离子对菌株生长的毒害顺序，在250mL三角瓶内分别配制各种重金属离子浓度皆为200mg L-1LB液体培养基，终体积为50mL。将上述方法制备好的RC6b菌悬液以2%接种量分别接种，28℃下200r min-1振荡培养36h，在不同时段（0、4、8、12、16、20、24、28、32、36h）定时取样，4℃冷冻保存。同时在不含重金属离子的液体培养基中接种菌株作为对照（CK），每个处理设3个重复。最后，测定OD600值，观察菌株的生长，比较不同重金属离子对RC6b菌株生长的影响。
1.9生长菌体对溶液中重金属的吸附
将菌株RC6b接种于含1%wt NaCl的LB液体培养基中，振荡培养24h后，离心，弃去上清液，用离心管（10mL）收集细菌，用去离子水洗涤菌体两遍，弃去上清液。预留装有细菌的离心管，菌体经80℃干燥至衡重后称量，计算细菌干重。分别配制浓度为150mg L-1，pH值为4.0的CdCl2溶液，然后用5mL的移液枪将该溶液分装于装有细菌的离心管中。接着将离心管全部放入20℃恒温培养箱中，吸附2、4、6、8h，然后过滤，收集上清液，用原子吸收分光光度计测定溶液中残余Cd2+的浓度，并做两个平行样，计算菌体吸附量（菌体吸附前后培养基中重金属离子浓度差除以吸附前细菌的干重)。见下式:菌体吸附量（mg g-1）=[对照溶液起始浓度（mg L-1）-实测终浓度（mg L-1）]×溶液体积（L）×稀释倍数/菌体质量（g）。同样配制浓度为150mg L-1的ZnSO4和Pb(NO3)2溶液，重复如上操作，进行生长菌体的吸附实验。
1.10菌株对土壤中重金属的活化
将该菌接种量为10％wt的菌悬液（1mL）添加到装有1g供试土壤的试管中，以加无菌蒸馏水的处理作为对照（CK），每个处理设3个重复。用牛皮纸包裹所有试管，并称重，28℃下200r min-1避光振荡。培养7天后，再次对试管称重，并以等量的无菌水补偿水分的蒸发量。然后，用10mL无菌蒸馏水加入到每个试管，用于提取土壤中水溶性重金属。将土壤悬浮液离心7000rpm 10min并过滤。最后，用原子吸收分光光度计（AAS）测定土壤溶液中Cd2+、Zn2+、Pb2+的浓度。AAS为美国热电公司SOLAAR S4型，含Varian SpectrAA 220FS型火焰，220Z型石墨炉。
1.11菌株对含镉营养琼脂培养基上植物生长的影响
用0.5％植物琼脂（Phytagar）混合浓度分别为5、10mL L-1Cd2+1/4Hoagland’s营养液，高温灭菌，以不含重金属的处理作为对照（CK），每个处理设3个重复。将油菜种子于70%wt酒精中浸泡1min，无菌水冲洗1次，再用3%NaClO浸泡3min，无菌水冲洗5-6次，备用。将表面消毒的植物种子放入上述方法配置的RC6b菌悬液中浸泡2h，然后接种到盛有25mL营养琼脂培养基的150mL试管中，每根试管中加入6个种子，并用棉塞封口，放置在生长室中。45d后，将植物从试管中移除，用无菌蒸馏水清洗植物根部3-5次，以除去根部附着的植物琼脂。测定植物的鲜重和干重，并用AAS测定重金属离子在植物体内的总含量。
2.1根际促生菌的菌落形态、细胞形态及生理生化特征及序列分析
该紫金牛叶杆菌RC6b CGMCC No.6621具有以下特征：（1）菌落形态特征：在LB培养基平板上培养48h的菌落大小为直径1～4mm，菌落呈圆形，表面皱褶且凹陷，边缘较整齐，呈灰褐色半透明（见图1）。（2）菌体形态特征：该菌为革兰氏阴性，杆状。（3）生理生化特征：好氧生长，氧化酶为阳性，能利用ACC为唯一碳源和能源生长；能分泌吲哚乙酸（indole-3-acetic acid）、铁载体（Siderophore）；能溶解土壤中难溶性磷酸盐（Phosphate）；不能水解淀粉、果胶和纤维素。该菌的16S rDNAPCR产物约1.5kb左右，16S rRNA序列同源性比对（见图2）表明，该菌株16S rRNA序列与Phyllobacterium myrsinacearum细菌的16SrRNA序列相似性高达99％。结合上述的形态鉴定与16S rDNA分析结果将此菌株鉴定为紫金牛叶杆菌，其编号为RC6b。
2.2RC6b在含重金属的液体培养基中的生长曲线
RC6b在含有200mg L-1重金属的液体培养基中的生长曲线见图3。该菌株从接种到第36h生长曲线与该菌对镉、锌、铅的抗性结果呈现一定的对应关系；重金属离子对菌株RC6b的毒害顺序为镉>锌>铅。在初始的8h，细菌细胞数目开始有所增加，其中增长速度最快的是对照。镉、锌、铅的存在初始抑制了细菌的生长。但是，几小时以后RC6b恢复了其在重金属溶液中的生长能力。从8h到20h，细胞数目急剧增加，处于指数生长期；第20h到28h，OD600值变化不大，细胞处于稳定期；32h到36h，细胞数目有所减少，进入衰亡期。
2.3RC6b菌株对溶液中重金属的吸附特性分析
RC6b菌株对溶液中重金属镉、锌、铅的吸附量随时间的变化情况如图4所示。RC6b菌株对培养液中的重金属Cd2+、Zn2+、Pb2+具有很强的吸附能力。在初始4h内，RC6b对Cd2+、Zn2+、Pb2+的吸附能力较强。第8h，RC6b对Cd2+、Zn2+、Pb2+吸附量分别达到最高。其中，RC6b对这三种重金属离子的吸附强弱顺序为Zn2+（10.79mg kg-1干重）>Cd2+（5.82mg kg-1干重）>Pb2+（3.12mg kg-1干重）。这很可能与重金属的离子半径直接相关。由于Cd2+的离子半径
Zn2+ 
Pb2+ 具有较小离子半径的重金属可以很容易被吸附到细菌表面。
2.4RC6b菌株对土壤中重金属的活化特性分析
微生物能够对重金属生物有效性的影响越大，在生物修复中的利用价值就越大。因此，微生物提高土壤中重金属溶解性是生物修复时选择微生物的重要因素。图5所示的是接种RC6b 5d后对土壤中重金属镉、锌、铅离子溶解性的影响情况。从图中可以看出，接种RC6b菌株的土壤中，镉、锌、铅的溶解性均明显高于对照。此外，RC6b对土壤中镉离子溶解性的影响远远大于其它重金属。接种RC6b的土壤中，镉的溶解性提高了16.7倍，锌为4.6倍，铅为5.7倍。以上结果表明该菌能有效地促进镉、锌、铅在土壤中的溶解性，且对镉溶解性/植物可利用性的影响最强。本研究中利用ACC生长的RC6b表现出较好地促进土壤中重金属镉、锌、铅溶解性的能力。
2.5RC6b菌株对含镉培养基上植物生长的促进作用分析
图6所示的是接种RC6b菌株对含镉营养琼脂培养基上油菜生长的影响情况。从图中可以看出，将RC6b CGMCC No.6621菌株接种到表面消毒的油菜种子，培养45d后，在不含重金属的培养基中，植物根长、茎叶长、鲜重、干重均明显高于不接菌的对照处理。此外，含5、10mL Cd2+L-1培养基虽然表现出较强的毒性，抑制了油菜的生长。但在用RC6b菌浸种的处理中，植物的生物量也明显高于不接菌的对照处理。
实施例2：紫金牛叶杆菌RC6b（Phyllobacterium myrsinacearum RC6b CGMCC No.6621）的生物修复效应
1.1供试土壤
采自浙江某重金属污染农田土壤。土壤的基本理化性质为：pH 7.3，有机质16.0g kg-1，铜全量203.0mg kg-1，锌全量736.2mg kg-1，镉全量5.9mg kg-1，铅全量153.3mg kg-1。新鲜土壤样品过2mm筛后，于暗处4℃保存。
1.2培养基类型
①Luria-Bertani（LB）培养基：每升含5g酵母抽提物,10g蛋白胨,10gNaCl;②具ACC脱氨酶活性的促生菌分离培养基，即ADF培养基（1L）；Dworkin and Foster（DF）母液加ACC（终浓度为3nmol L-1）为唯一氮源的培养基，琼脂20g，pH 7.2。DF母液每升含4g KH2PO4,6g Na2HPO4,0.2g MgSO4·7H2O，0.001g FeSO4·7H2O,2g葡萄糖,2g葡萄糖酸,2g柠檬酸,2g(NH4)2SO4，微量元素溶液0.1mL（其组成为：100mL蒸馏水中溶解,124.6mg ZnSO4，78.2mg CuSO4，10mg MoO3，10mg H3BO3，11.2mg MnSO4）；③含重金属的具ACC脱氨酶活性的促生菌分离培养基：配制50mg mL-1CdCl2、ZnSO4和Pb(NO3)2储液，经高压蒸汽灭菌后加入上述配方的具ACC脱氨酶活性的促生菌分离培养基，制成重金属浓度变化在50-4500mg L-1一系列培养基。
1.3供试菌株
紫金牛叶杆菌RC6b（Phyllobacterium myrsinacearum RC6b CGMCC No.6621）。
1.4菌液的制备
在无菌条件下将菌株RC6b接种于LB液体培养基中，28℃下200r min-1振荡培养至对数生长期，离心后收集菌体，并用磷酸盐缓冲液洗涤3次，再用磷酸盐缓冲液将菌液调节吸光度（OD600）至1备用，含菌量为1.5×108CFU mL-1。
1.5重金属污染土壤的生物修复试验
采自浙江淳安的伴矿景天幼苗，将野外植株移至温室生长繁殖，通过1/4Hoagland’s营养液水培方式预培育新植株。一周后，选择大小一致，长势良好的幼苗，备用。将幼苗于70%酒精中浸泡1min，无菌水冲洗1次，再用3%NaClO浸泡3min，无菌水冲洗5-6次，备用。然后，将表面消毒的植物幼苗根部放入上述方法配置的1.5×108mL-1CFU的RC6b菌悬液中浸泡2h，移植到盛有750g上述重金属污染土壤的花盆里，每盆6株植物幼苗，放置在生长室中，25±5℃下，16/8昼/夜。以不加菌的处理作为对照（CK），每个处理设5个重复。75d后，小心将植物从盆中移除，用灭菌的蒸馏水清洗植物根部3-5次，以除去根部附着的土壤。测定植物的干重，并用AAS测定植物根部及地上部分重金属离子的总含量（镉、锌、铅）。
1.6植物体内重金属的分析
称取0.2g风干后粉碎的植物样于聚四氟乙烯烧杯中，加入HCl-HNO3（优级纯，体积比4:1）消化，原子吸收分光光度计[Varian SpectrAA220FS（火焰）、220Z（石墨炉）]测定植物体内重金属含量。同时做空白对照，并采用国家标准参比物质GSS-4进行分析质量控制，测定结果均在标准物质浓度范围内。
2.1植物重金属吸收量的动态变化
植物修复效率最终取决于植物对重金属吸收总量的大小。微生物对重金属的植物吸收量的影响越大，在生物修复中就越能体现其价值。因此，微生物能否能显著提高植物对重金属的吸收是生物修复时选择微生物最直接的标准。在植物修复过程中，接种紫金牛叶杆菌RC6b不仅可以大大促进超富集植物伴矿景天的生长，还可以显著地提高植物对重金属吸收量。图7所示的是在生物修复过程中，接种紫金牛叶杆菌RC6b对超富集植物伴矿景天重金属镉、锌、铅吸收量的影响。从中可以看出，75d后，所有加菌的处理中植物对镉、锌、铅的吸收量均明显高于对照植物（p<0.05），其中增幅最高的是镉（138％），其次是锌（90％）和铅（46％）。
序列表
<110> 中国科学院南京土壤研究所
<120> 紫金牛叶杆菌RC6b及其在土壤修复中的应用
<130>
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gagtttgatc mtggctcag 19
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ggytaccttg ttacgactt 19
Claims (4)
1.紫金牛叶杆菌（Phyllobacterium myrsinacearum）RC6b，该菌株已在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2012年09月25日，保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No. 6621。
2.权利要求1所述的紫金牛叶杆菌（Phyllobacterium myrsinacearum）RC6b，该菌株在生物修复重金属污染土壤中的应用。
3.权利要求1所述的紫金牛叶杆菌（Phyllobacterium myrsinacearum）RC6b，该菌株在植物修复镉、锌、铅污染土壤中的应用。
4.权利要求1所述的紫金牛叶杆菌（Phyllobacterium myrsinacearum）RC6b修复重金属污染土壤的方法，其特征在于将RC6b CGMCC No. 6621菌株接种于LB液体培养基中，振荡培养至对数期；将上述菌悬液按土壤10％wt的接种量接入重金属污染土壤中，28℃避光培养。
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