CN102892748A - 用于治疗过度增生性疾病的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及在需要治疗的对象中治疗过度增生性疾病的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的：(a)增加神经酰胺的维甲酸类例如芬维A胺或其可药用的盐；和(b)至少一种(在某些实施方式中为至少两种)选自以下的化合物：(i)非18碳链长度的L-苏式-二氢神经鞘氨醇或其可药用的盐，(ii)葡糖基神经酰胺或葡糖基(二氢)神经酰胺合成抑制剂，和(iii)鞘磷脂或二氢鞘磷脂合酶抑制剂。优选的L-苏式-二氢神经鞘氨醇是碳链长度为17个碳、19个碳和20个碳的L-苏式-二氢神经鞘氨醇。优选的葡糖基神经酰胺或葡糖基(二氢)神经酰胺合成抑制剂是D-苏式-1-苯基-2-棕榈酰氨基-3-吗啉代-1-丙醇。优选的鞘磷脂或二氢鞘磷脂合成抑制剂是D-苏式-1-苯基-2-棕榈酰氨基-3-吗啉代-1-丙醇。优选的过度增殖性疾病是脑癌。

Description

用于治疗过度增生性疾病的组合物和方法
技术领域
本发明涉及新的鞘氨基醇碱(sphingoid base)的组合及其在用于治疗过度增生性疾病的化疗方案中的应用。
背景技术
结合过度增生性疾病治疗中的新方法描述了背景技术，但不限制所公开方法的范围。
二氢神经鞘氨醇构成了一组相关的长链脂肪族2-氨基-1，3-二醇，其中18碳长度的二氢神经鞘氨醇D-赤式-二氢神经鞘氨醇(即D-赤式-二氢鞘氨醇＝(2S，3R)-2-氨基十八烷-1，3-二醇＝D-赤式-2-氨基-1，3-十八烷二醇＝(2S，3R)-2-氨基-1，3-十八烷二醇)是在哺乳动物中最常见的天然存在的二氢神经鞘氨醇。20碳链长度的D-赤式-二氢神经鞘氨醇也以受限的量用于哺乳动物中，并且一般限于中枢神经系统。通过二氢神经鞘氨醇的C2氨基基团与不同链长度、通常是14碳到30碳链长度的脂肪酸的酰化，二氢神经鞘氨醇被转化为二氢神经酰胺。通过二氢神经鞘氨醇骨架的碳4与碳5之间键的脱饱和，例如放置碳-碳双键，二氢神经酰胺被进一步转化为神经酰胺。神经酰胺主要用于制成更高次序的神经鞘脂即蜡，用于细胞膜的制造和修复，以及作为信号分子。在历史上，术语“神经酰胺”指的是二氢神经酰胺和神经酰胺两者。碳4，5双键也区分二氢神经鞘氨醇与神经鞘氨醇。在历史上，二氢神经鞘氨醇和神经鞘氨醇统称为“鞘氨基醇碱”。所有天然存在的哺乳动物的二氢神经鞘氨醇和神经鞘氨醇在C2-碳氨基基团和C3-碳羟基基团的手性方面均为D-赤式立体化学。
沙芬戈(Safingol)是天然的18碳链长度的D-赤式-二氢神经鞘氨醇的人造L-苏式-立体化学(非对映异构体)变体。沙芬戈也被不同地命名为L-苏式-二氢神经鞘氨醇＝L-苏式二氢神经鞘氨醇(2S，3S)＝L-苏式-二氢鞘氨醇＝L-苏式-2-氨基-1，3-十八烷二醇＝(2S，3S)-2-氨基-1，3-十八烷二醇。据报道，沙芬戈增加维甲酸类(维生素A的衍生物)、芬维A胺的抗癌活性。
目前认为，芬维A胺[HPR；全反式-N-(4-羟基苯基)维甲酰胺；CAS登记号65646-68-6]通过产生活性氧物类以及通过增加二氢神经酰胺而在癌细胞中引起细胞毒性。参见例如D.Delia等，Carcinogenesis 18943-948(1997)；N.Oridate等，J.Natl.Cancer Inst.89，1191-1198(1997)。
Gibbs的美国专利No.4,665,098描述了可用于治疗乳腺癌和膀胱癌的芬维A胺的药物组合物。
Gupta等的专利No.7,169,819描述了适用于治疗过度增生性疾病、包括癌症的芬维A胺的药物组合物。
Schwartz等的美国专利No.5,821,072提供了用于筛选能够增强肿瘤细胞中的凋亡的蛋白激酶C抑制剂、包括沙芬戈的方法，以及用于筛选抗肿瘤治疗剂的方法，所述抗肿瘤治疗剂适合于与能够增强肿瘤细胞中的凋亡的蛋白激酶C抑制剂联合治疗。
Maurer等的美国专利No.6,352,844提供了通过用产生神经酰胺的维甲酸类例如芬维A胺以及沙芬戈治疗需要治疗的患者来治疗过度增生性疾病、包括癌症的方法。
本发明提出了用于治疗过度增生性疾病的新方法。
发明内容
因此，本发明提供了治疗过度增生性疾病的方法。
本发明涉及由下式I表示的非18碳链长度(即排除沙芬戈)的L-苏式-二氢神经鞘氨醇组合物：
(其中R＝直链的饱和C6-26烃链，但不包括14碳链长度，并且其中组合物是L-苏式立体化学的组合物，即在C2-氨基和C3-羟基基团方面为(2S，3S)构型的组合物)。
此类L-苏式-二氢神经鞘氨醇组合物的实例包括但不限于L-苏式-C20-二氢神经鞘氨醇，也称作L-苏式-二十碳二氢神经鞘氨醇＝L-苏式-二十碳烷二氢神经鞘氨醇＝L-苏式-2-氨基-1，3-二十碳烷二醇＝(2S，3S)-2-氨基-1，3-二十碳烷二醇＝L-苏式-2-氨基-1，3-二十碳烯二醇＝(2S，3S)-2-氨基-1，3-二十碳烯二醇＝(2S，3S)-2-氨基-1，3-二羟基-二十碳烷＝(2S，3S)-2-氨基-1，3二羟基二十碳烷；L-苏式-C19-二氢神经鞘氨醇，也称作L-苏式-2-氨基-1，3-十九碳烷二醇＝(2S，3S)-2-氨基-1，3-十九碳烷二醇；和L-苏式-C17-二氢神经鞘氨醇，也称作L-苏式-2-氨基-1，3-十七碳烷二醇＝(2S，3S)-2-氨基-1，3-十七碳烷二醇。
本发明进一步涉及意外的发现，即，此类L-苏式-二氢神经鞘氨醇增加芬维A胺在人癌细胞系中的抗癌特性。因此，通过相邻施用此类L-苏式-二氢神经鞘氨醇，可以提高芬维A胺和其它增加神经酰胺(即二氢神经酰胺或神经酰胺)的此维甲酸类酸衍生物的抗过度增生性疾病、例如癌症的活性。这种施用可以是相继施用，即在施用增加神经酰胺的维甲酸类或芬维A胺之前施用L-苏式-二氢神经鞘氨醇；或同时施用，即在施用增加神经酰胺的维甲酸类或芬维A胺的一部分或全部期间施用L-苏式-二氢神经鞘氨醇；或在施用增加神经酰胺的维甲酸类或芬维A胺之后施用L-苏式-二氢神经鞘氨醇，只要能实现有益效果即可。本发明还涉及过度增生性疾病的治疗，其中与所述增加神经酰胺的维甲酸类或芬维A胺、以及操控神经酰胺产生的细胞毒性的细胞代谢和细胞控制的其他试剂(例如神经酰胺降解抑制剂)一起施用此类L-苏式-二氢神经鞘氨醇。这种试剂包括葡糖基神经酰胺和葡糖基(二氢)神经酰胺合酶抑制剂以及鞘磷脂和(二氢)鞘磷脂合酶抑制剂，并且所述试剂可以单独施用或与另一种联合施用。下面给出了具体实例。优选地，给予有效量的维生素A酸衍生物或芬维A胺以在肿瘤细胞中产生坏死、凋亡、自噬、或其他诱导死亡的过程，并在伴有或没有神经酰胺降解抑制剂的情况下，给予有效量的L-苏式-二氢神经鞘氨醇以增加肿瘤细胞中的坏死、凋亡、自噬、或其他诱导死亡的过程，使其超过由维生素A酸衍生物或芬维A胺单独所产生的坏死、凋亡、自噬、或其他诱导死亡的过程，或在分开给予时预期由维生素A酸衍生物或芬维A胺与L-苏式-二氢神经鞘氨醇在有或没有神经酰胺降解抑制剂的情况下的总和所产生的坏死、凋亡、自噬、或其他诱导死亡的过程。
本发明还涉及在需要治疗的对象中治疗过度增生性疾病的方法，所述方法包括向对象联合施用治疗有效量的：(a)增加二氢神经酰胺或神经酰胺的维生素A酸衍生物，例如芬维A胺或其可药用的盐；和(b)非18碳链长度的L-苏式-二氢神经鞘氨醇或其可药用的盐，以及任选的(c)葡糖基神经酰胺或葡糖基(二氢)神经酰胺合成抑制剂(包括其可药用的盐)，例如D-苏式-1-苯基-2-棕榈酰氨基-3-吗啉代-1-丙醇或其可药用的盐，以及任选的(d)鞘磷脂或(二氢)鞘磷脂合酶抑制剂。施用有效量的合成抑制剂以提高维生素A酸衍生物和L-苏式-二氢神经鞘氨醇的活性，使得化合物合在一起具有有效的活性。优选地，给予有效量的维生素A酸衍生物和L-苏式-二氢神经鞘氨醇以在肿瘤细胞中产生坏死、凋亡、自噬、或其他细胞死亡过程，并给予有效量的合成抑制剂以增加肿瘤细胞中产生的坏死、凋亡、或自噬、或其他细胞死亡过程，使其超过预期由维生素A酸衍生物和L-苏式-二氢神经鞘氨醇联合所产生的坏死、凋亡、自噬、或其他细胞死亡过程，或在分开给予时预期由维生素A酸衍生物和L-苏式-二氢神经鞘氨醇的组合与合成抑制剂的总和所产生的坏死、凋亡、自噬、或其他细胞死亡过程。还可以施用其它化合物，包括本文所述的化合物。
作用理论是，L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人和犬类过度增生性疾病中对于增加神经酰胺的维甲酸类的有益效果是，这种维甲酸类在易感的过度增生性疾病、例如癌症中增加细胞的D-赤式-二氢神经酰胺，而L-苏式-二氢神经鞘氨醇被代谢转化成L-苏式-二氢神经酰胺来实现它们的有益作用。不能推断在所有哺乳动物、例如啮齿动物中都可以观察到有益效果，在啮齿动物中，L-苏式-二氢神经鞘氨醇被代谢转化成L-苏式-神经酰胺。不排除L-苏式-二氢神经鞘氨醇执行了一定的功能，所执行的功能促成了本发明的功能，并且不同于其转化成L-苏式-二氢神经酰胺。因此，非18碳链长度的L-苏式-二氢神经鞘氨醇、和执行该功能的其它化合物在本发明中是有活性的并被包括在本发明中，而不将申请人约束于本发明的特定基础理论。事实上，所有哺乳动物的神经鞘脂都是使用C-18和C-20碳长度的鞘氨基醇骨架制成的，因此不会期望任何立体化学的非C18和C20二氢神经鞘氨醇全部都会起作用。另外，没有以任何可察觉的量在CNS之外发现C-20骨架神经鞘脂，因此不会期望C-20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇会像本文所证实的、实际所观察到的那样发挥作用。
用于执行前述治疗的制剂也是本发明的一方面，所述制剂在单一的药物载体或介质中包含化合物的上述组合中的一部分。前述化合物用于制备执行上述治疗的药剂的应用也是本发明的一方面。
前述内容是对本发明的说明，而不应理解为是对本发明的限制。本发明通过权利要求进行限定，其中权利要求的等价物被包括在本发明中。总之，本发明公开了用于治疗过度增生性疾病的改善的方法。
附图说明
为了更全面地理解本发明，现在参考本发明的详细描述以及附图，其中：
图1是在耐药的CHLA-90神经母细胞瘤癌细胞系中，与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图2是在2％氧气中的CHLA-266脑癌(PNET)细胞系中，与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图3是在GBM2胶质母细胞瘤脑癌细胞系中，与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图4是在2％氧气中的HT-29结肠癌细胞系中，与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图5是在5％氧气中的COG-LL-317急性淋巴细胞性白血病(ALL)癌细胞系中，与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图6是在MOLT-4ALL白血病细胞系中，与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图7是在耐药的CHLA-90神经母细胞瘤癌细胞系中，与芬维A胺组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图8是在2％氧气中的CHLA-266脑癌(PNET)细胞系中，与芬维A胺组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图9是在GBM2胶质母细胞瘤脑癌细胞系中，与芬维A胺组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图10是在HT-29结肠癌细胞系中，与芬维A胺组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图11是在5％氧气中的COG-LL-317 ALL白血病细胞系中，与芬维A胺组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图12是在耐药的CHLA-90神经母细胞瘤癌细胞系中，与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图13是在2％氧气中的CHLA-266脑癌(PNET)细胞系中，与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图14是在GBM2胶质母细胞瘤脑癌细胞系中，与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图15是在HT-29结肠癌细胞系中，与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图16是在2％氧气中的MCF-7/ADR(OVCAR-8/ADR)卵巢癌细胞系中，与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图17是在5％氧气中的COG-LL-317 ALL细胞系中，与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下表现出细胞毒性的剂量-响应。
图18是在2％氧气中的GBM2脑癌细胞系中，与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在大多数剂量下表现出协同性增加的细胞毒性的剂量-响应。
图19是在2％氧气中的GBM2脑癌细胞系中，与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在大多数剂量下表现出协同性增加的细胞毒性的剂量-响应。
图20是在2％氧气中的GBM2脑癌细胞系中，与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在大多数剂量下表现出协同性增加的细胞毒性的剂量-响应。
图21是在20％氧气中的HT-29结肠癌细胞系中，与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在大多数剂量下表现出协同性增加的细胞毒性的剂量-响应。
图22是在20％氧气中的HT-29结肠癌细胞系中，与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在大多数剂量下表现出协同性增加的细胞毒性的剂量-响应。
图23是在2％氧气中的HT-29结肠癌细胞系中，与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在大多数剂量下表现出协同性增加的细胞毒性的剂量-响应。
图24是在2％氧气中的MOLT-4ALL白血病细胞系中，与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在大多数剂量下表现出协同性增加的细胞毒性的剂量-响应。
图25是在2％氧气中的MOLT-4ALL白血病细胞系中，与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在大多数剂量下表现出协同性增加的细胞毒性的剂量-响应。
图26是在2％氧气中的MOLT-4ALL白血病细胞系中，与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在大多数剂量下表现出协同性增加的细胞毒性的剂量-响应。
图27A-27D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在正常人类成纤维细胞(正常皮肤细胞)的细胞系CRL-2091和CRL-2076中的测试结果。
图28A-28D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类多发性骨髓瘤(血液和骨髓的癌症)细胞系RPMI-8226中的测试结果。
图29A-29D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类多发性骨髓瘤(血液和骨髓的癌症)细胞系U-266中的测试结果。
图30A-30D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类多形性胶质母细胞瘤(脑癌)细胞系A-172中的测试结果。
图31A-31D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类胶质母细胞瘤(脑癌)细胞系U-118中的测试结果。
图32A-32D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类多形性胶质母细胞瘤(脑癌)细胞系T98G中的测试结果。
图33A-33D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类多形性胶质母细胞瘤(脑癌)细胞系SJ-GBM2中的测试结果。
图34A-34D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类胶质母细胞瘤(脑癌)细胞系SJ-G2中的测试结果。
图35A-35B示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类原始神经外胚层肿瘤(PNET)(脑癌)细胞系CHLA-266中的测试结果。
图36A-36D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类结直肠腺癌(结肠癌)细胞系HT-29中的测试结果。
图37A-37D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类黑色素瘤(皮肤癌)细胞系A-2058中的测试结果。
图38A-38B示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类肺腺癌(肺癌)细胞系NCI-H-1792中的测试结果。
图39A-39D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类肺腺癌(肺癌)细胞系A-549中的测试结果。
图40A-40D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类乳腺癌(乳癌)细胞系MCF-7和MDA-MB-231中的测试结果。
图41A-41D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类卵巢腺癌(卵巢癌)细胞系OVCAR-8中的测试结果。
图42A-42B示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类前列腺腺癌(前列腺癌)细胞系LNCaP中的测试结果。
图43A-43D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类前列腺腺癌(前列腺癌)细胞系PC-3中的测试结果。
图44A-44D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类胰腺腺癌(胰腺癌)细胞系PANC-1中的测试结果。
图45A-45D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类食道腺癌(食道癌)细胞系OE-19和OE-33中的测试结果。
图46A-46D示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类急性淋巴细胞性白血病(小儿ALL，血癌)细胞系COG-LL-317和MOLT-4中的测试结果。
图47A-47B示出了芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇在人类小儿神经母细胞瘤(神经相关的实体肿瘤癌)细胞系CHLA-90中的测试结果。
发明详述
本文公开的内容是新的鞘氨基醇碱及其在用于治疗过度增生性疾病的联合化疗方案中的应用。将具体参考多个实施方式(作为实施例，而非限制性的)来描述本发明的大量创新性教导。
一般性地描述了所公开的新的鞘氨基醇碱的组合及在用于治疗过度增生性疾病的化疗方案中的应用，其中将实施例整合作为本发明的具体实施方式并说明本发明的实践和优势。可以理解的是，实施例是以说明的方式给出的，并不旨在以任何方式限制说明书或权利要求。
本发明的方法利用了维生素A酸衍生物例如芬维A胺与本文所述作为增效剂的新的鞘氨基醇碱结合的联合效应，来操控神经酰胺产生的毒性的细胞代谢和细胞控制，从而抑制或防止肿瘤、癌症、赘生组织以及其他恶变前和非赘生性过度增生性疾病的生长，所有这些在本文中统称为过度增殖性或增生性疾病。本文所采用的治疗可用于在靶细胞中，通常是在过度增殖的细胞(包括肿瘤、癌症、和赘生组织，以及恶变前和非赘生性或非恶性过度增生性疾病)中，抑制生长和/或诱导细胞毒性(通过坏死或凋亡机理，或通过两种)。
本发明可以治疗的肿瘤、癌症和赘生组织的实例包括但不限于恶性疾病，例如乳腺癌；骨肉瘤；血管肉瘤；纤维肉瘤和其他肉瘤；白血病；淋巴瘤；窦肿瘤；卵巢、子宫颈、输尿管、膀胱、前列腺和其他泌脲生殖器的癌症；结肠、食道和胃的癌症以及其他胃肠道的癌症；肺癌；骨髓瘤；胰腺癌；肝癌；肾癌；内分泌癌；皮肤癌；以及脑或中枢和外周神经(CNS)系统的恶性或良性肿瘤，包括神经胶质瘤和神经母细胞瘤。
恶变前以及非赘生性或非恶性过度增生性疾病的实例包括但不限于骨髓增生异常性疾病；子宫颈原位癌；家族性肠息肉，例如Gardner综合征；口腔粘膜白斑病；组织细胞增多病；瘢痕瘤；血管瘤；过度增殖性动脉狭窄、炎性关节炎；角化过度和丘疹鳞屑性发疹，包括关节炎。还包括病毒诱导的过度增殖性疾病，例如疣和EBV诱导的疾病(即传染性单核细胞增多症)、疤痕形成等。本文公开的治疗方法可用于已知或怀疑携带有本文所定义的过度增生性疾病或具有发展成本文所定义的过度增生性疾病的风险的任何对象。
在本文中使用时，过度增生性疾病的“治疗”指的是杀死、抑制或减缓过度增殖细胞团或群的生长或尺寸的增加或者肿瘤或癌性生长，减少过度增殖细胞的数量，或防止扩散到其他解剖部位，以及降低过度增殖性生长的大小或过度增殖细胞的数量的方法。在本文中使用时，“治疗”不一定表示意味着治愈或完全消除过度增生性生长。在本文中使用时，治疗有效量是指这样的量，其有效地引起杀死过度增殖细胞、减缓过度增殖细胞的生长速率、降低过度增殖细胞团的大小、和/或减少过度增殖细胞的数量。所包含的增效剂(或试剂)的量足以增强第一种化合物的活性，因此，两种(或更多种)化合物合在一起具有比单独给予的单个化合物更好的治疗功效(例如由于协同的相互作用、降低的联合毒性等)。
在本文中使用时，“联合”施用两种或更多种化合物指的是在时间上充分接近地施用两种化合物，以致一种化合物的存在改变了另一种化合物的生物效应。可以同时(一起)或相继施用两种化合物。执行同时施用可以通过在施用之前将化合物混合，或通过在相同的时间点、但在不同的解剖部位或利用不同的施用途径来施用化合物。
在本文中使用时，短语“同时施用”或“联合施用”指的是在相同的时间点施用化合物，或者在另一种化合物后立即施用化合物。在后一种情况下，在充分接近的时间下施用两种化合物，以致观察到的结果与在相同时间点施用化合物时得到的结果是无法区分的。
本发明的方法所治疗的对象包括人类对象和适用于兽医目的的动物对象两种。动物对象优选为哺乳动物对象，包括马、牛、狗、猫、兔、羊等。
已知有多种细胞内分子触发或抑制细胞死亡(S.Rowan和D.Fisher，Leukemia 11，457(1997)；K.Saini和N.Walker，Mol.CellBiochem.178，9(1998))。目前大多数的工作致力于阐明程序性细胞死亡(凋亡)的通路，其中凋亡的触发剂(例如DNA损伤)可激活各种不同通路(例如p53、Fas等)，所述通路还可受到其他分子(例如促和抗凋亡蛋白的Bcl-2家族)的调节，其中caspase活化是在导致凋亡细胞死亡的最终事件中的晚期步骤。然而，不是所有的细胞死亡都是经由凋亡而发生的，由4-HPR诱导的细胞死亡涉及凋亡和坏死两种(J.Clifford等，Cancer Res.59，14(1999))或自噬(Zheng，W.等，BiochimBiophys Acta.1758：1864-84(2006)；Tiwari，M.等，Carcinogenesis29：600-9，(2008)；Fazi，B.等，Autophagy.4：435-41，(2008))。已知细胞内的脂质神经酰胺介导凋亡(L.Obeid等，Science 259，1769(1993)(图1)和坏死(Guo等，Am.J.Physiol.276，F390(1990)；Condorelli等，Br.J.Pharmacol.137，75(1999))。已表明，它引起诱导凋亡的线粒体膜通透性改变(S.Susin等，J.Exp.Med.186，25(1997))、通过线粒体复合物III的抑制引起诱导凋亡的ROS产生(A.Quillet-Mary等，J.Biol.Chem.272，21388(1997))、并激活促死亡的JNK/SAPK通路(S.Basu等，Oncogene 17，3277(1998)；T.Okazaki等，Cell.Signal.10，685(1998)；W.Jarvis，Curr.Opin.Oncol.10，552(1998))。神经酰胺还激活蛋白激酶(CAPK)(S.Mathias等，Biochem.J.335(Pt 3)，465(1998)和磷酸化酶(PP2A)(L.Leoni等，Biochem.Pharmacol.55，105(1998))，并可导致核转录因子NF-κB的活化(L.Johns等，J.Immunol.152，5877(1998)；C.Gamard等，J.Biol.Chem.272，1682(1997))。癌细胞避开神经酰胺的细胞毒效应的机制可包括代谢成其他形式，包括无毒的葡糖基神经酰胺(Y.Lavie等，J.Biol.Chem.272，1682(1997)；Y.Lavie等，J.Biol.Chem.271，19530(1996)；L.Yong-Yu等，J.Biol.Chem.274，1140(1999))和神经鞘氨醇-1-磷酸酯。神经鞘氨醇-1-磷酸酯通过激活促生存的ERK1/2通路来对抗神经酰胺诱导的细胞死亡(O.Cuvillieret等，Nature 381，800(1996)；O.Cuvillieret等，J.Biol.Chem.273，2910(1998))。因此，调节神经酰胺的代谢，提供了用于增强4-HPR(芬维A胺)和其他产生神经酰胺的维甲酸类的细胞毒功效的途径。
神经酰胺在细胞内的生成是通过活化神经酰胺合酶、从头合成途径，或通过活化中性或酸性鞘磷脂酶，导致鞘磷脂的分解。神经酰胺被葡糖基神经酰胺合酶代谢成无细胞毒性的葡糖基神经酰胺；被碱性或酸性神经酰胺酶转化成细胞毒性的神经鞘氨醇。神经鞘氨醇被神经鞘氨醇激酶进一步转化成抗凋亡的神经鞘氨醇-1-磷酸酯。我们在下面示出了，调节这些通路可以增强、甚至协同性增强产生神经酰胺的维甲酸类例如4-HPR(芬维A胺)的细胞毒性。
下面详细描述了可用于执行本发明的化合物及其制剂以及施用所述制剂的方式。
1.产生神经酰胺的维甲酸类
可用于执行本发明的产生神经酰胺的维甲酸类或维生素A酸衍生物，是那些在它们所施用的宿主细胞中产生神经酰胺的维甲酸类或维生素A酸衍生物，并包括在Gander的美国专利No.4,190,594中描述的那些(本文所引用的所有专利文献的公开内容通过参考结合于此)。产生神经酰胺的维甲酸类包括全反式维生素A酸(ATRA)和维生素A酸衍生物，包括但并不限于：
(A)具有下式II的全反式维生素A酸的酯：
Figure BPA00001609570500141
其中X是选自式III和IV、2-环己基乙基、10-甲酯基癸基、4-羟基丁基、胆固醇基、混和的间和对乙烯基苄基、和4-溴苄基的成员：
Figure BPA00001609570500142
(B)具有下式V的全反式维生素A酸的酯：
Figure BPA00001609570500143
其中Y是选自胆固醇基氧基、苯基、4-溴苯基、4-甲氧基苯基、4-硝基苯基、4-羟基苯基、4-甲基苯基、4-氰基苯基、4-乙氧基苯基、4-乙酰氧基苯基、2-萘基、4-联苯基、2，5-二甲氧基苯基、2，4-二氯苯基、2，4-二甲基苯基、3，4-二乙酰氧基苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、和2，4，6-三甲基苯基的成员；以及
(C)具有下式VI的全反式维生素A酸的酰胺：
Figure BPA00001609570500151
其中Z是选自正丙基氨基、叔丁基氨基、1，1，3，3-四甲基丁氨基、1-吗啉代、4-羟基苯氨基、4-甲酯基-2-羟基苯氨基、β-(3，4-二甲氧基苯基)-乙氨基、2-苯并噻唑基氨基、1-咪唑基、1-(2-烟酰基肼基)、1-苯并三唑基、1-(1，2，4-三唑基)的成员(式VII、VIII和IX)；
Figure BPA00001609570500152
特别优选的是全反式N-(4-羟基苯基)维甲酰胺，也称作芬维A胺，CAS登记号为65646-68-6，并具有如下结构(式X)：
Figure BPA00001609570500153
前述化合物可根据已知技术进行制备。参见例如Gander等的美国专利No.4,190,594、Gibbs的美国专利No.4,665,098。
可用于执行本发明的其它维生素A酸衍生物包括N-(4-羟基苯基)维甲酰胺-O-葡萄糖苷酸的C-糖苷类似物。这种化合物及其制备是已知的，并被描述在Curley等的两个美国专利No.5,663,377和5,599,953中，所述专利的公开内容通过参考全部结合于此。这种化合物可具有如下通式(式XI)：
Figure BPA00001609570500161
其中R是COOH、CH2OH、或H，n是0或1。
这种化合物的具体实例包括：4-(维甲酰胺基)苯基-C-葡萄糖苷酸、4-(维甲酰胺基)苯基-C-葡萄糖苷、4-(维甲酰胺基)苯基-C-木糖苷、4-(维甲酰胺基)苄基-C-葡萄糖苷酸、4-(维甲酰胺基)苄基-C-葡萄糖苷、4-(维甲酰胺基)苄基-C-木糖苷、1-(β-D-吡喃葡糖基)维甲酰胺、和1-(D-glucopyranosyluronosyl)维甲酰胺。
2.葡糖基神经酰胺合成抑制剂
可以使用抑制葡糖基神经酰胺或葡糖基(二氢)神经酰胺合成的任何化合物，特别是葡糖基神经酰胺合酶抑制剂。这种化合物的实例包括但不限于具有下式(式XII)的化合物：
Figure BPA00001609570500162
其中R是芳香环例如苯基、环己基基团、或具有10到15个碳原子的脂肪族基团，R1是胺基团，例如吗啉代基团；且n是4到18的整数(包括功能性同系物、异构体及其可药用的盐。优选地，n是4、6、8、10、12或14，并且这种化合物的D对映体是优选的。这种化合物是已知的，并被公开在例如Shayman和Radin的美国专利No.5,302,609、Radin等的美国专利No.5,041,441、Inokuchi等的美国专利No.5,707,649中。葡糖基神经酰胺合酶抑制剂的具体实例包括：1-苯基-2-酰氨基-3-吗啉代-1-丙醇，其中n是6到12；1-苯基-2-癸酰氨基-3-吗啉代-1-丙醇(PDMP)；和1-苯基-2-棕榈酰氨基-3-吗啉代-1-丙醇(PPMP)；
3.其它活性化合物和筛选
其它活性化合物可通过已知技术产生，包括合理药物设计技术和/或随机药物设计技术(或组合化学技术)。
在与受体相互作用的活性化合物中，相互作用发生在稳定的三维分子中表面易接近的位点处。通过将关键性的结合位点残基安排成合适的构象，可以设计并根据已知技术合成模拟活性化合物结合区域的必要表面特征的化合物。其表面区域具有与活性化合物的结合表面相同的分子拓扑的分子，将能够模拟活性化合物与其相应受体的相互作用。用于确定活性化合物的三维结构以及产生其活性类似物的方法是已知的，并被称作合理药物设计技术。参见例如Chen的美国专利No.5,593,853、Balaji等的美国专利No.5,612,895和5,331,573、Geysen的美国专利No.4,833,092、Nestor的美国专利No.4,859,765、Pantoliano的美国专利No.4,853,871、和Blalock的美国专利No.4,863,857(本文引用的所有美国专利文献的公开内容通过参考结合于此)。
在组合化学(或随机药物设计)技术中，大型的候选化合物组合库被用于筛选其中的活性化合物。可以通过多种裂分合成法中的任何方法产生用于执行本发明的库。裂分合成法也称作共合成法，其中，将可释放的标签与目的有机化合物一起附着到粒子上。已知有多种这样的方法。参见例如A.Furka等，J.Pept.Protein Res.37，487(1991)；K.Lam等，Nature 354，82(1991)；R.Zuckermann等，Int.J.pept.Protein Res.40，498(1992)；F.Sebestyen等，Bioorg.Med.Chem.Lett.3，413(1993)；K.Lam等，Bioorg.Med.Chem.Lett.3，419(1993)。例如，所述库可以是有机金属化合物的库，其中所述化合物是金属-配体络合物。络合物中的金属可以是高、低、或零氧化态的前或后过渡金属。金属也可以是任何主族金属、碱金属、碱土金属、镧系或锕系金属。金属-配体络合物中的配体可以由手性或非手性形式的下列化合物构成、或衍生自手性或非手性形式的下列化合物：环戊二烯、氨基酯、噁唑烷酮、羟基酸、羟基酯、羟基酰胺、吡啶、稠合的吡啶、氮杂环、噁唑、咪唑、吡咯、冠醚、穴状配体、盒状配体、膦、二膦、多膦、奎宁环、奎宁、生物碱、糊精、环糊精、salen、卟啉、联芳、磺胺类、席夫碱、茂金属、单醇、二醇、多醇、胺、二胺、多胺、铵盐、肽、蛋白质、核酸等。
作为第二种实例，所述库可以是非金属化合物的库，包括但不限于手性或非手性形式的环戊二烯、氨基酯、噁唑烷酮、羟基酸、羟基酯、羟基酰胺、吡啶、稠合的吡啶、氮杂环、噁唑、咪唑、吡咯、冠醚、穴状配体、盒状配体、膦、二膦、多膦、奎宁环、奎宁、生物碱、糊精、环糊精、salen、卟啉、联芳、磺胺类、席夫碱、茂金属、单醇、二醇、多醇、胺、二胺、多胺、铵盐、肽、蛋白质、核酸等。
固体载体可以是彼此分开的，或者可以是在整体式基体的表面部分上的不连续区域，所述整体式基体的表面部分可位于界面处，使得许多不连续区域位于界面处。这种“芯片型(chip-type)”或“钉型(pin-type)”固体载体是已知的。参见例如Ellman的美国专利No.5,288,514(基于钉的载体(pin-based support))、Fodor等的美国专利No.5,510,270(基于芯片的载体(chip-based support))。目前，分开的不连续载体(例如粒子或珠子)是优选的。可以根据已知技术，例如美国专利No.5,565,324(其公开内容通过参考全部结合于此)中描述的，或其对于本领域技术人员来说是显而易见的变体，来执行催化剂库的合成以及将其连接于不连续的固体载体。
通过任何途径、包括但并不限于上面描述的那些途径所选择的化合物，可以针对它们在提高、包括累加性和协同性提高、但优选协同性提高产生神经酰胺的维甲酸类在肿瘤细胞(或其它过度增殖细胞)中抑制细胞生长的活性或细胞毒活性方面的活性对它们进行筛选，筛选方法包括：(a)将第一对照肿瘤细胞与一定量的产生神经酰胺的维甲酸类(例如，本身可以或不可以有效地抑制所述肿瘤细胞生长的量)接触；(b)将第二对照肿瘤细胞与一定量的测试化合物(例如，本身可以或不可以有效地抑制所述肿瘤细胞生长的量)接触；以及(c)将实验肿瘤细胞与上述步骤(a)中所述量的产生神经酰胺的维甲酸类和上述步骤(b)中所述量的测试化合物两者接触；以及(d)确定上述步骤(a)、(b)和(c)中所述肿瘤细胞的生长抑制；然后(e)将步骤(c)的实验肿瘤细胞中的生长抑制或细胞毒活性与步骤(a)和(b)的对照肿瘤细胞的生长抑制进行比较，在步骤(c)的实验肿瘤细胞中确定的生长抑制程度高于步骤(b)和(c)的对照肿瘤细胞的相加的生长抑制程度，表明测试化合物增强了产生神经酰胺的维甲酸类的活性。
比较步骤的执行可以通过任何适合的途径，例如通过计算联合指数，其中，值小于1(例如小于0.9)表明所述化合物是协同性的。可以使用任何肿瘤细胞，包括但并不限于神经母细胞瘤、肺、黑色素瘤、前列腺、白血病、结肠、乳腺和胰腺肿瘤细胞。可以使用任何产生神经酰胺的维甲酸类例如芬维A胺。可以使用其它过度增殖细胞包括恶变前和非恶性细胞来代替肿瘤细胞，正如上面在论及治疗病症中所指出的。在优选的实施方式中，测试化合物是神经酰胺降解抑制剂，或操控神经酰胺产生的细胞毒性的细胞代谢或细胞控制的其它试剂。确定步骤的执行一般来说可以通过寻找生长抑制或细胞毒性，或者通过具体确定坏死、凋亡、或两者。该方法可用于鉴定出是神经酰胺降解抑制剂的活性化合物、操控神经酰胺产生的细胞毒性的细胞代谢或细胞控制的其它化合物、或除了本文所描述的那些机制外，还通过其它机制生效的化合物。
除了本文所描述的神经酰胺降解抑制剂以外，或代替本文所描述的神经酰胺降解抑制剂，可以制备、配制、并在本文所描述的方法中使用以前未知可以与产生神经酰胺的维甲酸类联合用在治疗过度增殖性疾病的方法中的化合物(包括其可药用的盐)。取决于被选择用于筛选的化合物，这种化合物可以是新的化合物，可以是已知的但以前未知其医疗或药物用途的化合物，可以是以前已知其医疗或药物用途、但以前不知道可与本文所描述的产生神经酰胺的维甲酸类联合使用的化合物。
4.制剂和施用
可以将上述活性化合物配制成在单个药物载体或在单独的药物载体中施用，用于治疗多种病症。在制备本发明的药物制剂中，通常将活性化合物、包括其生理上可接受的盐、或其酸衍生物与可接受的载体等混和。当然，从与制剂中的任何其它成分相容这个意义上来说，所述载体必须是可接受的，并且所述载体必须是对患者无害的。载体可以是固体或液体或两者，并优选与化合物配制成单位剂量的制剂，例如片剂，片剂可以含有0.5重量％到95重量％的活性化合物。可以将一种或多种活性化合物并入本发明的制剂中，可以通过任何公知的制药技术制备本发明的制剂，所述制药技术主要由混和组分构成，所述组分任选包括一种或多种辅助成分。
本发明的制剂包括那些适合于口服、直肠、局部、口腔(例如舌下)、阴道、肠胃外(例如皮下、肌内、皮内、或静脉内)、局部(例如皮肤和粘膜表面，包括呼吸道表面)和经皮施用的制剂，但是在任何给定的实例中，最适合的途径将取决于所治疗的病症的性质和严重性以及所使用的具体活性化合物的性质。
适合于口服施用的制剂可以以离散的单位存在，例如胶囊、扁囊、菱锭、或片剂，每个都含有预定量的活性化合物；例如粉末或颗粒；例如在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；或者例如水包油或油包水乳剂。这种制剂可以通过任何适合的制药方法进行制备，所述制药方法包括将活性化合物与适合的载体(如上所述，其可包含一种或多种辅助成分)组合的步骤。一般来说，制备本发明的制剂是通过将活性化合物与液体或细碎的固体载体、或两者均匀并紧密地混和，然后，如果需要的话，将所得混合物成形。例如，可以通过将含有活性化合物以及任选的一种或多种辅助成分的粉末或颗粒压缩或成型来制备片剂。压缩片剂的制备可通过在适合的机器中，将自由流动形式的化合物，例如任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂和/或表面活性/分散剂混和的粉末或颗粒压缩。成型片剂的制备可通过在适合的机器中，将用惰性液体粘合剂润湿的粉末状化合物成型。
适合于口腔(舌下)施用的制剂包括菱锭，菱锭在调味基质、通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶中包含活性化合物；和锭剂，锭剂在惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中包含所述化合物。
适合于肠胃外或阴道施用的本发明制剂方便地包括活性化合物的无菌水性制剂，所述制剂优选与目的接受者的血液等渗。这些制剂可通过皮下、静脉内、肌内或皮内注射施用。通过将化合物与水或甘氨酸缓冲液混和并使所得溶液无菌且与血液等渗，可以方便地制备这种制剂。
适合于直肠施用的制剂优选以单位剂量栓剂存在。通过将活性化合物与一种或多种常规固体载体、例如可可脂混和，然后将所得混合物成形，可以制备这些制剂。
适合于局部施加到皮肤上的制剂优选采取的形式为软膏、乳膏、洗剂、糊剂、凝胶、喷雾剂、气雾剂、或油。可使用的载体包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇类、透皮促进剂，以及其中两种或更多种的组合。
适合于经皮施用的制剂可以以不连续的贴剂存在，所述贴剂适合于与接受者的表皮保持一段长时间的紧密接触。适合于经皮施用的制剂还可以通过离子电渗疗法递送(例如参见Pharmaceutical Research 3(6)：318(1986))，并且通常采取的形式为活性化合物的任选缓冲水溶液。适合的制剂包含柠檬酸盐或bistris缓冲液(pH 6)或乙醇/水，并含有0.1到0.2M的活性成分。
如上所述，本发明提供了在可药用的载体中包含活性化合物(包括其可药用的盐)、并用于口服、直肠、局部、口腔、肠胃外、肌内、皮内、或静脉内，以及经皮施用的药物制剂。
其用途在本发明范围内的任何一种活性剂的治疗有效剂量将随着化合物与化合物、患者与患者的不同而略有变化，并将取决于例如患者的状况以及递送途径这些因素。根据本领域技术人员已知的常规药理学程序，特别是根据本文提供的公开内容，可以确定这种剂量。
对于芬维A胺，对于系统治疗来说，将采用使血浆水平达到约1、2或3μM到10或20μM的剂量；通常(对于口服给药来说)为50或100到500或1000、2000或3000mg/m2体表面积/天。
在以下非限制性一般实施例、然后是更具体的实施例中更详细地解释本发明。
实施例A1-A26
细胞毒性分析：采用数字成像显微镜(DIMSCAN)，利用基于荧光的分析来确定细胞系中的细胞毒性(根据Fragala等，Mol Cancer Ther，6：886-897，2007)。DIMSCAN测定选择性积聚荧光素二乙酸酯的活细胞的数量，并能够在利用数字阈值和曙红Y淬灭消除背景荧光之后，通过对每孔的总荧光(与活的克隆形成细胞成比例)进行定量，来测定在4-5log动态范围内的细胞毒性。简而言之，在每孔100L完全培养基(10-20％血清)中将细胞系接种于96孔板中。将细胞在2％、5％、或20％氧气(室内空气)中孵育过夜，然后加入在50L体积的完全培养基中的药物，形成各种不同的药物终浓度，每个浓度重复12个孔。在采用D-苏式-PPMP的分析中，各孔中使用的PPMP均为固定的、最低毒性的10μM终浓度。对照孔接受在完全培养基中的相当于药物处理孔中的乙醇最大终浓度的乙醇(终浓度＝0.12％-0.20％)。将板孵育在各种不同的氧浓度下，以模拟生理性缺氧(即，2％氧气＝典型的实体瘤氧气水平；5％＝白血病的骨髓氧气水平；20％室内空气＝用于与典型的实验室培养条件进行比较的超生理氧气)。在开始药物暴露后3-4天时，对板进行分析，其中药物暴露时间取决于各细胞系的生长特性，以允许有最大的细胞死亡和存活细胞的生长。为了测定细胞毒性，以每孔50L完全培养基加入FDA(1mg/ml的DMSO储存液)，终浓度为10g/ml。将板在37C下另外孵育15-30分钟，然后每孔加入30L曙红Y(0.5％，在生理盐水中)。然后利用数字成像显微镜测定各孔的总荧光。
图1到26说明要求保护的发明的效果(实施例A1到A26)，并利用本文所公开的程序来执行。
图1是与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在耐药的CHLA-90神经母细胞瘤癌细胞系中，C 17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图2是与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在2％氧气中的CHLA-266脑癌(PNET)细胞系中，C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图3是与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在GBM2胶质母细胞瘤脑癌细胞系中，C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图4是与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在2％氧气中的HT-29结肠癌细胞系中，C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图5是与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在5％氧气中的COG-LL-317急性淋巴细胞性白血病(ALL)癌细胞系中，C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图6是与芬维A胺组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在MOLT-4 ALL白血病细胞系中，C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图7是与芬维A胺组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在耐药的CHLA-90神经母细胞瘤癌细胞系中，C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图8是与芬维A胺组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在2％氧气中的CHLA-266脑癌(PNET)细胞系中，C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图9是与芬维A胺组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在GBM2胶质母细胞瘤脑癌细胞系中，C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图10是与芬维A胺组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在HT-29结肠癌细胞系中，C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图11是与芬维A胺组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在5％氧气中的COG-LL-317 ALL白血病细胞系中，C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图12是与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在耐药的CHLA-90神经母细胞瘤细胞系中，C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图13是与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在2％氧气中的CHLA-266脑癌(PNET)细胞系中，C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图14是与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在GBM2胶质母细胞瘤脑癌细胞系中，C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图15是与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在HT-29结肠癌细胞系中，C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图16是与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在2％氧气中的MCF-7/ADR(OVCAR-8/ADR)卵巢癌细胞系中，C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图17是与芬维A胺组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。通过Chou等的联合指数方法评估协同性。在5％氧气中的COG-LL-317ALL细胞系中，C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇在一个或多个剂量下协同性增强(C.I.＜1)芬维A胺的细胞毒性；
图18是与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。三种药物的组合使用固定的、最低毒性的浓度的D-苏式-PPMP(10μM)，D-苏式-PPMP是葡糖基神经酰胺合酶和鞘磷脂合酶的抑制剂。通过Chou等的联合指数分析方法表明，在2％氧气中的GBM2脑癌细胞系中，PPMP在大多数剂量下协同性增加了芬维A胺+L-苏式-二氢神经鞘氨醇的细胞毒性(C.I.＜1)；
图19是与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。三种药物的组合使用固定的、最低毒性的浓度的D-苏式-PPMP(10μM)，D-苏式-PPMP是葡糖基神经酰胺合酶和鞘磷脂合酶的抑制剂。通过Chou等的联合指数分析方法表明，在2％氧气中的GBM2脑癌细胞系中，PPMP在大多数剂量下协同性增加了芬维A胺+L-苏式-二氢神经鞘氨醇的细胞毒性(C.I.＜1)；
图20是与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。三种药物的组合使用固定的、最低毒性的浓度的D-苏式-PPMP(10μM)，D-苏式-PPMP是葡糖基神经酰胺合酶和鞘磷脂合酶的抑制剂。通过Chou等的联合指数分析方法表明，在2％氧气中的GBM2脑癌细胞系中，PPMP在大多数剂量下协同性增加了芬维A胺+L-苏式-二氢神经鞘氨醇的细胞毒性(C.I.＜1)；
图21是与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。三种药物的组合使用固定的、最低毒性的浓度的D-苏式-PPMP(10μM)，D-苏式-PPMP是葡糖基神经酰胺合酶和鞘磷脂合酶的抑制剂。通过Chou等的联合指数分析方法表明，在20％氧气中的HT-29结肠癌细胞系中，PPMP在大多数剂量下协同性增加了芬维A胺+L-苏式-二氢神经鞘氨醇的细胞毒性(C.I.＜1)；
图22是与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。三种药物的组合使用固定的、最低毒性的浓度的D-苏式-PPMP(10μM)，D-苏式-PPMP是葡糖基神经酰胺合酶和鞘磷脂合酶的抑制剂。通过Chou等的联合指数分析方法表明，在20％氧气中的HT-29结肠癌细胞系中，PPMP在大多数剂量下协同性增加了芬维A胺+L-苏式-二氢神经鞘氨醇的细胞毒性(C.I.＜1)；
图23是与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。三种药物的组合使用固定的、最低毒性的浓度的D-苏式-PPMP(10μM)，D-苏式-PPMP是葡糖基神经酰胺合酶和鞘磷脂合酶的抑制剂。通过Chou等的联合指数分析方法表明，在2％氧气中的HT-29结肠癌细胞系中，PPMP在大多数剂量下协同性增加了芬维A胺+L-苏式-二氢神经鞘氨醇的细胞毒性(C.I.＜1)；
图24是与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C17-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。三种药物的组合使用固定的、最低毒性的浓度的D-苏式-PPMP(10μM)，D-苏式-PPMP是葡糖基神经酰胺合酶和鞘磷脂合酶的抑制剂。通过Chou等的联合指数分析方法表明，在2％氧气中的MOLT-4ALL白血病细胞系中，PPMP在大多数剂量下协同性增加了芬维A胺+L-苏式-二氢神经鞘氨醇的细胞毒性(C.I.＜1)；
图25是与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C19-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。三种药物的组合使用固定的、最低毒性的浓度的D-苏式-PPMP(10μM)，D-苏式-PPMP是葡糖基神经酰胺合酶和鞘磷脂合酶的抑制剂。通过Chou等的联合指数分析方法表明，在2％氧气中的MOLT-4 ALL白血病细胞系中，PPMP在大多数剂量下协同性增加了芬维A胺+L-苏式-二氢神经鞘氨醇的细胞毒性(C.I.＜1)；
图26是与芬维A胺和D-苏式-PPMP组合的C20-L-苏式-二氢神经鞘氨醇的剂量-响应。在+96小时时通过DimScan方法进行分析。三种药物的组合使用固定的、最低毒性的浓度的D-苏式-PPMP(10μM)，D-苏式-PPMP是葡糖基神经酰胺合酶和鞘磷脂合酶的抑制剂。通过Chou等的联合指数分析方法表明，在2％氧气中的MOLT-4 ALL白血病细胞系中，PPMP在大多数剂量下协同性增加了芬维A胺+L-苏式-二氢神经鞘氨醇的细胞毒性(C.I.＜1)。
实施例B1-B21
细胞毒性分析：再一次，利用DIMSCAN分析系统确定细胞毒性(R.Proffitt等，Cytometry 24，204-213(1996)；T.Frgala等，Mol CancerTher.6：886-97，2007)。该系统采用数字成像显微镜对活细胞进行定量，活细胞选择性积聚荧光素二乙酸酯，成为有亮荧光的。通过利用曙红Y淬灭死亡的和即将死亡的细胞的残余荧光，并利用数字阈值定量活细胞的总荧光，该系统能够测定在4-5log动态范围内的细胞毒性。测得的荧光与活细胞的数量成正比。药物处理过的细胞群的总荧光与类似数量的未处理过的细胞的荧光比较产生存活分数。简而言之，在0.1mL完全培养基中将2000到10,000个细胞/孔(取决于大小和生长速率)重复接种于96孔组织培养板的60个孔中，并使其贴壁过夜。然后加入在0.05mL完全培养基中的药物，达到指定的终浓度。所测试的药物(芬维A胺和各种不同链长度的L-苏式-二氢神经鞘氨醇)为单个试剂和3∶1比率的芬维A胺∶二氢神经鞘氨醇两种。还测试了C18-L-苏式-二氢神经鞘氨醇或“沙芬戈”，所示结果供参考用。每个药物浓度处理12个孔。12个孔仅接受药物介质达到适合的终浓度，并作为板的对照。将细胞在37℃下在具有5％CO2的环境空气中孵育96小时。然后在0.05mL介质中将荧光素二乙酸酯加入到每个孔中，终浓度为8微克/mL。将细胞在37℃下进一步孵育15分钟，并将0.03mL的0.5％曙红Y加入到每个孔中。然后通过数字成像显微镜测定活细胞的总荧光。将结果作为药物处理孔与无药物处理的对照孔的荧光比率(即存活分数)进行作图。所有测试至少进行两次。示出了代表性的结果。
实施例还示出了含有联合指数(CI)的表，利用CalcuSyn 2.0版软件，BIOSOFT
Figure BPA00001609570500291
，Cambridge，UK，(Chou-Talalay“剂量-效应”分析(Chou-Talalay“dose-effect”analysis)，Trends Pharmacol.Sci.4，450-454，1983，Chou，Cancer Res；70：440-446，2010)计算得到联合指数，并作为所测试的L-苏式-二氢神经鞘氨醇与芬维A胺的药物协同性的度量。联合指数(CI)是用于描述基于两种药物联合细胞毒性(细胞死亡)的药理学效应的数学建模的术语。细胞毒性的“协同性”被定义为与单个试剂单独的细胞毒性的简单乘积(即“累加性”效应)所预期的效应相比，更大的细胞死亡效应。通过Chou-Talalay分析，在受影响的分数(“Fa”，即被杀死的细胞的分数)上CI＜0.9表明协同性，数字越小表明协同性越大；CI为0.9-1.1表示累加性效应或近似累加性效应；以及CI＞1.1表示药物联合是拮抗的。
值得注意的是，在p53缺失或突变的细胞系中以及在对烷化剂高度耐受的细胞系中获得了多log的细胞毒性。
结果证明，尽管在所有人癌细胞系中并不全都具有相同的活性，但是，在宽范围的人癌细胞类型，包括实体和造血性癌症、以及成人和小儿癌症两者中，所有非C18-L-苏式-二氢神经鞘氨醇均可增加芬维A胺的细胞毒性，或者是累加性的或者是协同性的。
实施例B1
在正常人类成纤维细胞(正常皮肤细胞)的细胞系CRL-2091和CRL-2076中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示L-苏式-二氢神经鞘氨醇与芬维A胺的组合在正常人类细胞中具有最小的细胞毒性。参考示出了结果的图27A-27D，所述结果报告在下面的表1.1和1.2中。
Figure BPA00001609570500301
表1.1
Figure BPA00001609570500302
表1.2
实施例B2
在人类多发性骨髓瘤(血液和骨髓的癌症)细胞系RPMI-8226中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图28A-28D，所述结果报告在下面的表2.1中。
Figure BPA00001609570500311
表2.1
实施例B3
在人类多发性骨髓瘤(血液和骨髓的癌症)细胞系U-266中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图29A-29D，所述结果报告在下面的表3.1中。
Figure BPA00001609570500312
表3.1
实施例B4
在人类多形性胶质母细胞瘤(脑癌)细胞系A-172中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图30A-30D，所述结果报告在下面的表4.1中。
Figure BPA00001609570500321
表4.1
实施例B5
在人类胶质母细胞瘤(脑癌)细胞系U-118中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图31A-31D，所述结果报告在下面的表5.1中。
表5.1
实施例B6
在人类多形性胶质母细胞瘤(脑癌)细胞系T98G中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图32A-32D，所述结果报告在下面的表6.1中。
Figure BPA00001609570500331
表6.1
实施例B7
在人类多形性胶质母细胞瘤(脑癌)细胞系SJ-GBM2中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图33A-33D，所述结果报告在下面的表7.1中。
Figure BPA00001609570500332
表7.1
实施例B8
在人类胶质母细胞瘤(脑癌)细胞系SJ-G2中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图34A-34D，所述结果报告在下面的表8.1中。
Figure BPA00001609570500333
表8.1
实施例B9
在人类原始神经外胚层肿瘤(PNET)(脑癌)细胞系CHLA-266中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图35A和35B，所述结果报告在下面的表9.1中。
Figure BPA00001609570500341
表9.1
实施例B10
在人类结直肠腺癌(结肠癌)细胞系HT-29中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图36A-36D，所述结果报告在下面的表10.1中。
Figure BPA00001609570500342
表10.1
实施例B11
在人类黑色素瘤(皮肤癌)细胞系A-2058中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图37A-37D，所述结果报告在下面的表11.1中。
Figure BPA00001609570500351
表11.1
实施例B12
在人类肺腺癌(肺癌)细胞系NCI-H-1792中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图38A-38B，所述结果报告在下面的表12.1中。
Figure BPA00001609570500352
表12.1
实施例B13
在人类肺腺癌(肺癌)细胞系A-549中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图39A-39D，所述结果报告在下面的表13.1中。
表13.1
实施例B14
在人类乳腺癌(乳癌)细胞系MCF-7和MDA-MB-231中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图40A-40D，所述结果报告在下面的表14.1和14.2中。
Figure BPA00001609570500362
表14.1
Figure BPA00001609570500363
表14.2
实施例B15
在人类卵巢腺癌(卵巢癌)细胞系OVCAR-8中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图41A-41D，所述结果报告在下面的表15.1中。
Figure BPA00001609570500371
表15.1
实施例B16
在人类前列腺腺癌(前列腺癌)细胞系LNCaP中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图42A-42B，所述结果报告在下面的表16.1中。
Figure BPA00001609570500372
表16.1
实施例B17
在人类前列腺腺癌(前列腺癌)细胞系PC-3中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图43A-43D，所述结果报告在下面的表17.1中。
Figure BPA00001609570500373
表17.1
实施例B18
在人类胰腺腺癌(胰腺癌)细胞系PANC-1中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图44A-44D，所述结果报告在下面的表18.1中。
Figure BPA00001609570500381
表18.1
实施例B19
在人类食道腺癌(食道癌)细胞系OE-19和OE-33中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图45A-45D，所述结果报告在下面的表19.1和19.2中。
Figure BPA00001609570500382
表19.1
Figure BPA00001609570500391
表19.2
实施例B20
在人类急性淋巴细胞性白血病(小儿ALL，血癌)细胞系COG-LL-317和MOLT-4中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图46A-46D，所述结果报告在下面的表20.1和20.2中。
Figure BPA00001609570500392
表20.1
Figure BPA00001609570500393
表20.2
实施例B21
在人类小儿神经母细胞瘤(神经相关的实体肿瘤癌)细胞系CHLA-90中测试芬维A胺和L-苏式-二氢神经鞘氨醇。结果显示至少一些L-苏式-二氢神经鞘氨醇累加性或协同性地增加了芬维A胺的细胞毒性，这取决于测试的药物浓度。参考示出了结果的图47A-47B，所述结果报告在下面的表21.1中。
Figure BPA00001609570500401
表21.1
前述内容是对本发明的说明，而不应理解为是对本发明的限制。本发明通过权利要求进行限定，其中权利要求的等价物被包含在本发明中。
为了促进对本发明的理解，许多术语可如下定义。本文所定义的术语具有本发明相关领域中普通技术人员通常所理解的含义。不带具体数量的指称并不旨在表示单数，而是包括用于说明的具体实例所属的一般种类。本文中的术语用于描述本发明的具体实施方式，但它们的使用并不限制公开的方法，但被概括在权利要求中的除外。
可以理解的是，本文所描述的具体实施方式是以说明性的方式示出的，而不是对本发明的限制。本发明的主要特征可用于各种不同的实施方式中，而没有背离本发明的范围。本领域技术人员会意识到，或仅仅利用常规实验就能确定本文中具体程序的多种等价物。这种等价物被认为是在本发明的范围之内并被权利要求所覆盖。
在说明书中提及的所有公布和专利申请是本发明所属领域中技术人员的水平的象征。所有公布和专利申请通过参考结合于此，其程度就如每个单独的公布或专利申请被具体或单独指出通过参考结合于此一样。
在权利要求中，所有过渡性用语例如“包括”、“包含”、“带有”、“具有”、“含”、“涉及”等应被理解为开放性的，即，表示包括但不限于。只有过渡性用语“由...组成”和“主要由...组成”分别为封闭式或半封闭式的过渡性用语。
鉴于本发明的公开内容，无需过多实验即可制成和实施本文中公开的和要求保护的所有组合物和方法。尽管从优选实施方式的角度描述了本发明的组合物和方法，但对于本领域技术人员来说显而易见的是，各种变化可以施加于仪器和/或方法以及本文所述方法的步骤或步骤顺序中，而不背离本发明的概念、精神和范围。
更特别来说，显而易见的是，形状和材料两者都相关的某些组分可代替本文所述组分，同时得到相同或相似的结果。所有这种对于本领域技术人员来说显而易见的类似替代物和修改，都被认为是在权利要求所限定的本发明的精神、范围和概念之内。

Claims (17)

1.非18碳链长度的L-苏式-二氢神经鞘氨醇及其药用盐。
2.在需要治疗的对象中治疗过度增生性疾病的方法，其包括向所述对象联合施用治疗有效量的：
(a)增加神经酰胺的维甲酸类或其可药用的盐；和
(b)非18碳链长度的L-苏式-二氢神经鞘氨醇或其可药用的盐。
3.权利要求2的方法，其中所述增加神经酰胺的维甲酸类是芬维A胺。
4.权利要求2的方法，其中所述L-苏式-二氢神经鞘氨醇是碳链长度为17个碳、19个碳或20个碳的L-苏式-二氢神经鞘氨醇。
5.权利要求2的方法，其中所述过度增生性疾病是癌症。
6.在需要治疗的对象中治疗过度增生性疾病的方法，其包括向所述对象联合施用治疗有效量的：
(a)增加神经酰胺的维甲酸类或其可药用的盐；和
(b)选自以下各组的至少一种化合物：(i)非18碳链长度的L-苏式-二氢神经鞘氨醇或其可药用的盐，和(ii)葡糖基神经酰胺或葡糖基(二氢)神经酰胺合成抑制剂。
7.权利要求6的方法，其中所述产生神经酰胺的维甲酸类是芬维A胺。
8.权利要求6的方法，其中所述L-苏式-二氢神经鞘氨醇是碳链长度为17个碳、19个碳或20个碳的L-苏式-二氢神经鞘氨醇。
9.权利要求6的方法，其中所述葡糖基神经酰胺或葡糖基(二氢)神经酰胺合酶抑制剂是1-苯基-2-棕榈酰氨基-3-吗啉代-1-丙醇。
10.权利要求9的方法，其中所述葡糖基神经酰胺或葡糖基(二氢)神经酰胺合酶抑制剂是D-苏式-1-苯基-2-棕榈酰氨基-3-吗啉代-1-丙醇。
11.权利要求6的方法，其中所述过度增生性疾病是癌症。
12.在需要治疗的对象中治疗过度增生性疾病的方法，其包括向所述对象联合施用治疗有效量的：
(a)增加神经酰胺的维甲酸类或其可药用的盐；和
(b)选自以下各组的至少一种化合物：(i)非18碳链长度的L-苏式-二氢神经鞘氨醇或其可药用的盐，和(ii)鞘磷脂或(二氢)鞘磷脂合成抑制剂。
13.权利要求12的方法，其中所述产生神经酰胺的维甲酸类是芬维A胺。
14.权利要求12的方法，其中所述L-苏式-二氢神经鞘氨醇由17个碳、19个碳或20个碳的碳链长度构成。
15.权利要求12的方法，其中所述鞘磷脂或(二氢)鞘磷脂合酶抑制剂是D-苏式-1-苯基-2-棕榈酰氨基-3-吗啉代-1-丙醇。
16.权利要求12的方法，其中所述过度增生性疾病是癌症。
17.权利要求2的方法，其中L-苏式-二氢神经鞘氨醇包括L-苏式-C20-二氢神经鞘氨醇＝L-苏式-二十碳烷二氢神经鞘氨醇＝L-苏式-二十碳二氢神经鞘氨醇＝L-苏式-2-氨基-1，3-二十碳烷二醇＝(2S，3S)-2-氨基-1，3-二十碳烷二醇＝L-苏式-2-氨基-1，3-二十碳烯二醇＝(2S，3S)-2-氨基-1，3-二十碳烯二醇＝(2S，3S)-2-氨基-1，3-二羟基-二十碳烷＝(2S，3S)-2-氨基-1，3二羟基二十碳烷，并且过度增生性疾病是脑癌。
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