CN102890135B - 一种检测烘烤制品中儿茶素含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种烘烤食品中儿茶素含量的检测方法，包括如下步骤：(1)制备供试品溶液；(2)制备对照品溶液；(3)制作标准曲线；(4)测定供试品溶液；(5)根据标准曲线和供试品溶液的峰面积计算供试品中总儿茶素的含量。

Description

一种检测烘烤制品中儿茶素含量的方法

技术领域

本发明涉及一种检测烘烤制品中儿茶素含量的方法，尤指一种检测含有茶或茶提取物的烘烤食品中的儿茶素含量的方法，属于食品分析领域。

背景技术

现代研究表明茶叶抗菌、降脂、防癌等保健功能是多种成分综合作用的结果，其中起主要作用的有两大类物质，一类是多酚类化合物(简称茶多酚)，另一类是脂多糖类化合物(简称茶多糖)。

儿茶素作为茶多酚主要成分，不仅是赋予茶叶感官品质的主要品质成分，同时也是最主要的茶叶药效成分。S.Valcic等比较了6种儿茶素单体(没食子酸，儿茶素，表儿茶素，表没食子儿茶素，表儿茶素没食子酸酯，表没食子儿茶素没食子酸酯)对多种癌细胞(乳腺癌细胞MCF-7、克隆癌细胞HT-29、肺癌细胞A-427和黑色素瘤细胞UACC-375)生长的影响，发现EGCG、GC、EGC对四种癌细胞生长均有显著的抑制作用，EGCG对乳腺癌细胞MCF-7、克隆癌细胞HT-29和黑色素瘤细胞UACC-375的抑制作用均高于其他几种儿茶素单体。LevitesY等人对帕金森小鼠模型的研究中发现茶多酚可升高纹状体中超氧化物酶(SOD)水平，降低过氧化氢酶活性，从而抑制多巴胺黑质损伤，抑制纹状体多巴胺衰竭，提高谷氨酸氢化酶水平。朱善瑾研究发现，茶多酚对福氏痢疾杆菌、宋氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、副伤寒及大肠杆菌的抑菌圈大于16mm的质量分数分别为1％、3％、5％，黄洋等考察单体儿茶素对大肠杆菌抑菌效果的影响，其抑菌圈大小为EGCG＞ECG＞EGC＞EC。

由于茶具有较好的保健功效，茶多酚是天然的抗氧化剂，将茶或茶提取物加入到面包中，不仅可以延长保质期，让人们在享用美食的同时也能起到保健功效。但对烘烤产品进行有效成分含量检测时，而由于其提取液中含有油脂、糖类、可溶性蛋白等物质，给检测带来困扰。

目前测定茶叶和速溶茶粉中的儿茶素采用GB8313-2008方法，但该方法在检测烘烤食品如茶面包中的儿茶素含量时，只能测定出两种儿茶素单体和咖啡碱，影响了检测结果的准确性。

发明内容

本发明的目的是提供一种准确测定含有茶或茶提取物的烘烤制品(如面包)中儿茶素含量的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种检测烘烤制品中儿茶素含量的方法，包括如下步骤：

(1)制备供试品溶液；

(2)制备对照品溶液；

(3)制作标准曲线；

(4)测定供试品溶液；

(5)根据标准曲线和供试品溶液的峰面积计算供试品中总儿茶素的含量。

所述步骤(1)制备供试品溶液是指：准确称取5-15g(优选10g)粉碎的烘烤食品样品于50-200ml(优选100ml)提取液中，在60-80℃(优选70℃)水浴锅中振荡水浴20-40min(优选30min)，冷却至室温后，摇匀，倒入离心管中，在室温3000-4000r/min(优选3500r/min)离心5-15min(优选10min)；收集上清液，并用0.45μm滤膜过滤，所得滤液作为供试品溶液；

其中提取液由体积百分比含量为60％-80％的甲醇、20％-40％的水和0.1％-0.5％的甲酸组成(优选由70％的甲醇、29.7％的水和0.3％的甲酸组成)。

所述步骤(2)制备对照品溶液是指：分别称取没食子酸3-8mg(优选5.00mg)，儿茶素3-8mg(优选5.00mg)，表儿茶素3-8mg(优选5.00mg)，表没食子儿茶素3-8mg(优选5.00mg)，表儿茶素没食子酸酯3-8mg(优选5.00mg)，表没食子儿茶素没食子酸酯3-8mg(优选5.00mg)溶于5-20ml(优选10ml)提取液中，其中提取液由体积百分比含量为60％-80％的甲醇、20％-40％的水和0.1％-0.5％的甲酸组成(优选由70％的甲醇、29.7％的水和0.3％的甲酸组成)。

所述步骤(3)制作标准曲线是指：取对照品溶液，注入HPLC色谱仪，按色谱条件测定峰面积，并以峰面积y对不同对照品浓度x，mg/ml进行线性回归。

回归方程为：Y＝a·X+b；式中：

Y为对照品溶液的峰面积；

X为对照品溶液的浓度(mg/ml)；

a，b为常数。

所述步骤(4)测定供试品溶液是指：精密吸取10-30μl(优选20μl)试品溶液，注入HPLC色谱仪，按照色谱条件，在250-300nm(优选270nm)下测定测定峰面积。

所述步骤(3)和步骤(4)中的色谱条件为：

采用Angile1200色谱仪，用AgilentSB-C18(4.6×250mm，5μm)作为固定相，

流动相：洗脱液A：0.1-0.3％(优选0.2％)乙酸乙腈溶液

洗脱液B：0.1-0.3％(优选0.2％)乙酸水溶液

测定波长：250-300nm(优选270nm)

柱温：30-40℃(优选35℃)

梯度洗脱条件：洗脱液A和洗脱液B的体积百分比如下

0-8min洗脱液A的体积百分比为2％-5％中的任一值，洗脱液B的体积百分比为98％-95％中的任一值

8-14min洗脱液A的体积百分比从2％-5％中的任一值匀速升至8％，洗脱液B的体积百分比从98％-95％中的任一值匀速降至92％

14-25min洗脱液A的体积百分比从8％匀速升至10％，洗脱液B的体积百分比从92％匀速降至90％

25-30min洗脱液A的体积百分比从10％匀速升至15％，洗脱液B的体积百分比从90％匀速降至85％

30-35min洗脱液A的体积百分比从15％匀速升至20％，洗脱液B的体积百分比从85％匀速降至80％

35-40min洗脱液A的体积百分比从20％匀速升至30％，洗脱液B的体积百分比从80％匀速降至70％

40-45min洗脱液A的体积百分比为30％，洗脱液B的体积百分比为70％

45-50min洗脱液A的体积百分比从30％匀速降至2％-5％中的任一值，洗脱液B的体积百分比从70％-匀速升至95％-98％中的任一值

50-55min洗脱液A的体积百分比为2％-5％中的任一值，洗脱液B的体积百分比为98％-95％中的任一值。

优选的梯度洗脱条件：洗脱液A和洗脱液B的体积百分比如下

0-8min洗脱液A的体积百分比为2％，洗脱液B的体积百分比为98％

8-14min洗脱液A的体积百分比从2％匀速升至8％，洗脱液B的体积百分比从98％匀速降至92％

14-25min洗脱液A的体积百分比从8％匀速升至10％，洗脱液B的体积百分比从92％匀速降至90％

25-30min洗脱液A的体积百分比从10％匀速升至15％，洗脱液B的体积百分比从90％匀速降至85％

30-35min洗脱液A的体积百分比从15％匀速升至20％，洗脱液B的体积百分比从85％匀速降至80％

35-40min洗脱液A的体积百分比从20％匀速升至30％，洗脱液B的体积百分比从80％匀速降至70％

40-45min洗脱液A的体积百分比为30％，洗脱液B的体积百分比为70％

45-50min洗脱液A的体积百分比从30％匀速降至2％，洗脱液B的体积百分比从70％-匀速升至98％

50-55min洗脱液A的体积百分比为2％，洗脱液B的体积百分比为98％。

更优选的梯度洗脱条件：洗脱液A和洗脱液B的体积百分比如下

0-8min洗脱液A的体积百分比为3％，洗脱液B的体积百分比为97％

8-14min洗脱液A的体积百分比从3％匀速升至8％，洗脱液B的体积百分比从97％匀速降至92％

14-25min洗脱液A的体积百分比从8％匀速升至10％，洗脱液B的体积百分比从92％匀速降至90％

25-30min洗脱液A的体积百分比从10％匀速升至15％，洗脱液B的体积百分比从90％匀速降至85％

30-35min洗脱液A的体积百分比从15％匀速升至20％，洗脱液B的体积百分比从85％匀速降至80％

35-40min洗脱液A的体积百分比从20％匀速升至30％，洗脱液B的体积百分比从80％匀速降至70％

40-45min洗脱液A的体积百分比为30％，洗脱液B的体积百分比为70％

45-50min洗脱液A的体积百分比从30％匀速降至3％，洗脱液B的体积百分比为从70匀速升至97％

50-55min洗脱液A的体积百分比为3％，洗脱液B的体积百分比为97％。

其中，7.6-7.9min峰代表没食子酸，23.2-23.9min峰代表儿茶素，26.1-26.7min峰代表表儿茶素，33.2-33.6min峰代表表没食子儿茶素，34.1-34.5min峰代表表儿茶素没食子酸酯，39.7-40.0min峰代表表没食子儿茶素没食子酸酯。

所述烘烤食品是指含有茶或茶提取物的烘烤食品，包括但不限于面包、饼干、糕点和方便食品。

所述茶选自绿茶、红茶、乌龙茶、白茶、黄茶和黑茶中的一种或几种。

所述茶提取物选自绿茶提取物、红茶提取物、乌龙茶提取物、白茶提取物、黄茶提取物和黑茶提取物中的一种或几种。

所述黑茶为普洱茶。

所述黑茶提取物为普洱茶提取物。

通过下述方法学对本发明进行验证：

一.线性范围考察

取GA(0.509mg/ml)对照品0.2、0.4、0.6、0.8、1ml稀释至10ml；取EGC(0.511mg/ml)对照品1、2、3、4、5ml稀释至10ml；取C(0.510mg/ml)对照品1、2、3、4、5ml稀释至10ml；取EC(0.505mg/ml)0.2、0.4、0.6、0.8、1ml稀释至10ml；取EGCG(0.514mg/ml)对照品0.2、0.4、0.6、0.8、1ml稀释至10ml；取ECG(0.493mg/ml)对照品0.2、0.4、0.6、0.8、1ml稀释至10ml。按色谱条件测定峰面积，并以峰面积(Y)对不同对照品浓度(X，mg/ml)进行线性回归，回归方程为：

Y＝a·X+b

式中：

Y为对照品溶液的峰面积；

X为对照品溶液的浓度(mg/ml)。

a，b为常数。

结果如图1-图6所示，表明本发明在检测范围内具有良好的线性范围。

二.精密度试验

取2％茶面包样(面包原料中添加占面粉质量2％的普洱茶提取物)10g，精确称定，按照样品溶液的制备方法提取，重复进样6次，计算得总儿茶素含量的RSD为1.005％(n＝6)。结果见表1。

表1精密度试验

三.重复性试验

取2％茶面包(面包原料中添加占面粉质量2％的普洱茶提取物)约10g(共6份)，精密称量，按照供试液的制备方法提取，HPLC方法测定，计算儿茶素的含量，RSD为1.51％(n＝6)。结果见表2。

表2重复性试验

四.稳定性试验

对放置不同时间(0、2、4、6、8、10、12、24h)的2％茶面包(面包原料中添加占面粉质量2％的普洱茶提取物)提取液进行HPLC分析，在0、2、4、6、8、10、12、24h于270nm下测定峰面积，计算得儿茶素含量的RSD为1.63％(n＝6)。结果见表3。

表3稳定性试验

五.回收率试验

精密称量2％茶面包(面包原料中添加占面粉质量2％的普洱茶提取物)10g，共称取6份，分别加入GA8.16mg，EGC0.19mg，C1.26mg，EC2.39mg，EGCG2.37mg，ECG0.95mg，将对照品混合用水溶解后加于面包渣上，混匀，按照供试品溶液制备方法提取，按供试品溶液的测定方法进行测定，计算总儿茶素含量，回收率RSD为1.88％(n＝6)。结果见表4。

表4回收率试验

六.含不同量的茶提取物的面包样品的测定

取普洱茶提取物含量不同的茶面包，按照供试品溶液的测定方法，计算总儿茶素含量。

表5三批样品含量测定结果

本实验结果表明：此方法对普洱茶面包提取率高，测定准确。

对比例

用GB8313-2008方法和本发明方法对照做对比试验如下：

1.GBT8313-2008方法检测：

(1)供试品溶液制备：

准确称取10.000g粉碎的面包样(2％茶面包样)于100ml提取液(70％甲醇，29.7％水和0.3％甲酸)在70℃水浴锅中振荡水浴30min，冷却至室温后，摇匀，倒入离心管中，在室温3500r/min离心10min。收集上清液，并用0.45μm滤膜过滤，所得滤液作为供试品溶液。

(2)测定供试品溶液。

混标品：称取没食子酸0.423mg，EGC0.416mg，C0.476mg，咖啡碱0.408mg，EC0.428mg，EGCG0.486mg，ECG0.495mg溶于70％的甲醇、29.7％的水和0.3％的甲酸溶液(甲醇(60％-80％)，水(20％-40％)，甲酸(0.1％-0.5％))

色谱条件：

高效液相色谱仪(Agilent1200)

流动相

流动相A：90ml乙腈、20ml乙酸、2mlEDTA加入1000ml容量瓶，用水定容至刻度，过0.45μm膜。

流动相B：800ml乙腈、20ml乙酸、2mlEDTA加入1000ml容量瓶中，用水定容至刻度，过0.45μm膜。

柱温：35℃

流速：1ml/min

检测波长：278nm

梯度条件：0-10min100％A

10-25min68％A，32％B

15-35min68％A，32％B

35-50min100％A

50-55min100％A

测定结果：见表6和图7、图8所示。用国标法检测检测出茶面包中含有GA，咖啡碱和ECG。

表6.GBT8313-2008的混合标准品出峰时间

2.用本发明方法测定混标品及含2％普洱茶提取物的茶面包

方法同实施例1。混标品的成分、含量与GBT8313-2008测定方法中的相同。

测定结果：见表7、图9和图10所示。用改进后的方法检测2％茶面包可检测出GA，C，咖啡碱，EC，EGCG和ECG。

表7本发明测定的混合标准品出峰时间

通过对比例可知，国标法检测只能测定出两种儿茶素和咖啡碱，而本发明方法能测定出四种儿茶素和咖啡碱，分离效果更好，测定的结果更准确可靠。

本发明的优点是：本发明的是在GB8313-2008基础上对色谱条件进行了改进，消除含有茶或茶提取物的烘烤制品(如面包)中其他杂质对儿茶素含量测定的干扰，可准确测定儿茶素的含量。方法学验证表明本发明具有良好的线性范围、精密度高、重现性好、条件稳定、回收率好。

下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步说明，并不以任何方式限制本发明的实施。

附图说明

图1为线性范围考察试验中没食子酸(GA)标准曲线

图2为线性范围考察试验中表没食子儿茶素(EGC)标准曲线

图3为线性范围考察试验中儿茶素(C)标准曲线

图4为线性范围考察试验中表儿茶素(EC)标准曲线

图5为线性范围考察试验中表没石子儿茶素没食子酸酯(EGCG)标准曲线

图6为线性范围考察试验中表儿茶素没食子酸酯(ECG)标准曲线

图7为GBT8313-2008方法测定的混合标准品的色谱图

图8为GBT8313-2008方法测定的2％茶面包色谱图

图9为本发明方法测定的混合标准品的色谱图

图10为本发明方法测定的2％茶面包色谱图

图11为实施例1测定的1％茶面包色谱图

图12为实施例1测定的2％茶面包色谱图

图13为实施例1测定的3％茶面包色谱图

图14为实施例1测定的4％茶面包色谱图

具体实施方式

实施例1：测定茶面包中儿茶素的含量

一.仪器与试剂

高效液相色谱仪(Agilent1200)；色谱柱AgilentSB-C18(4.6×250mm，5μm)；高速离心机(BeckmanCoulterA64R冷冻高速离心机)；万分之一天平(DualRangeXS105)；超声仪(昆山超声仪器有限公司KQ-500E)；水浴锅(天津市中环实验电炉有限公司XMTD-2)。

供试品：普洱茶面包(原料中添加普洱茶提取物，添加量为0％-4％)

试剂：色谱纯甲醇；色谱纯乙酸；色谱纯甲酸；色谱纯乙腈。

对照品：没食子酸、儿茶素、表儿茶素，中国药品生物制品检定所(供含量测定用)。

表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯，天津一方科技有限公司(供含量测定用)。

二.高效液相色谱条件

流动相：洗脱液A：0.2％乙酸乙腈溶液

洗脱液B：0.2％乙酸水溶液

测定波长：270nm

柱温：35℃

梯度洗脱条件：洗脱液A和洗脱液B的体积百分比如下

0-8min洗脱液A的体积百分比为3％，洗脱液B的体积百分比为97％

8-14min洗脱液A的体积百分比从3％匀速升至8％，洗脱液B的体积百分比从97％匀速降至92％

14-25min洗脱液A的体积百分比从8％匀速升至10％，洗脱液B的体积百分比从92％匀速降至90％

25-30min洗脱液A的体积百分比从10％匀速升至15％，洗脱液B的体积百分比从90％匀速降至85％

30-35min洗脱液A的体积百分比从15％匀速升至20％，洗脱液B的体积百分比从85％匀速降至80％

35-40min洗脱液A的体积百分比从20％匀速升至30％，洗脱液B的体积百分比从80％匀速降至70％

40-45min洗脱液A的体积百分比为30％，洗脱液B的体积百分比为70％

45-50min洗脱液A的体积百分比从30％匀速降至3％，洗脱液B的体积百分比为从70匀速升至97％

50-55min洗脱液A的体积百分比为3％，洗脱液B的体积百分比为97％。

三.检测儿茶素含量

1.供试品溶液的制备

准确称取10.000g粉碎的含有普洱茶提取物的面包样于100ml提取液(70％甲醇，29.7％水和0.3％甲酸)在70℃水浴锅中振荡水浴30min，冷却至室温后，摇匀，倒入离心管中，在室温3500r/min离心10min。收集上清液，并用0.45μm滤膜过滤，所得滤液作为供试品溶液。

2.对照品溶液的制备

分别称取没食子酸5.09mg，儿茶素5.10mg，表儿茶素5.05mg，表没食子儿茶素5.11mg，表儿茶素没食子酸酯5.05mg，表没食子儿茶素没食子酸酯5.14mg溶于10ml70％甲醇29.3％水和0.3％的甲酸溶液中。

3.标准曲线的绘制

取没食子酸(0.509mg/ml)、表没食子儿茶素(0.511mg/ml)、儿茶素(0.510mg/ml)、表儿茶素(0.505mg/ml)、表没食子儿茶素没食子酸酯(0.514mg/ml)、表儿茶素没食子酸酯(0.493mg/ml)对照品，按色谱条件测定峰面积，并以峰面积(y)对不同对照品浓度(x，mg/ml)进行线性回归，回归方程为：

Y＝a·X+b

式中：

Y为对照品溶液的峰面积；

X为对照品溶液的浓度(mg/ml)；

a，b为常数。

表8该几种待测物质的线性回归方程的结果。

四.测定供试品溶液

精密吸取20μl试品溶液，按照色谱条件，在270nm下测定峰面积。

将不同的保留时间的成分进行含量计算，最后各成分之和即各儿茶素单体成分含量之和即为总儿茶素含量。

表9

实施例2：测定茶面包中总儿茶素的含量

对实施例1中的各种条件进行改变，也可以得到和实施例1相似的结果，如：改变以下条件：

步骤(1)制备供试品溶液可以称取5-15g粉碎的烘烤食品样品于50-200ml提取液中，在60-80℃水浴锅中振荡水浴20-40min，冷却至室温后，摇匀，倒入离心管中，在室温3000-4000r/min离心5-15min；收集上清液，并用0.45μm滤膜过滤，所得滤液作为供试品溶液；

其中提取液由体积百分比含量为60％-80％的甲醇、20％-40％的水和0.1％-0.5％的甲酸组成。

步骤(2)制备对照品溶液是指：分别称取没食子酸3-8mg，儿茶素3-8mg，表儿茶素3-8mg，表没食子儿茶素3-8mg，表儿茶素没食子酸酯3-8mg，表没食子儿茶素没食子酸酯3-8mg溶于5-20ml提取液中，其中提取液由体积百分比含量为60％-80％的甲醇、20％-40％的水和0.1％-0.5％的甲酸组成。

步骤(3)绘制标准曲线(和实施例1相同)

步骤(4)测定供试品溶液是指：精密吸取10-30μl试品溶液，注入HPLC色谱仪，按照色谱条件，在250-300nm下测定测定峰面积。

所述步骤(3)和步骤(4)中的色谱条件为：

流动相：洗脱液A：0.1-0.3％乙酸乙腈溶液

洗脱液B：0.1-0.3％乙酸水溶液

测定波长：250-300nm

柱温：30-40℃

梯度洗脱条件：洗脱液A和洗脱液B的体积百分比如下

0-8min洗脱液A的体积百分比为2％，洗脱液B的体积百分比为98％

8-14min洗脱液A的体积百分比从2％匀速升至8％，洗脱液B的体积百分比从98％匀速降至92％

14-25min洗脱液A的体积百分比从8％匀速升至10％，洗脱液B的体积百分比从92％匀速降至90％

25-30min洗脱液A的体积百分比从10％匀速升至15％，洗脱液B的体积百分比从90％匀速降至85％

30-35min洗脱液A的体积百分比从15％匀速升至20％，洗脱液B的体积百分比从85％匀速降至80％

35-40min洗脱液A的体积百分比从20％匀速升至30％，洗脱液B的体积百分比从80％匀速降至70％

40-45min洗脱液A的体积百分比为30％，洗脱液B的体积百分比为70％

45-50min洗脱液A的体积百分比从30％匀速降至2％，洗脱液B的体积百分比为从70匀速升至98％

50-55min洗脱液A的体积百分比为2％，洗脱液B的体积百分比为98％。

或者梯度洗脱条件：洗脱液A和洗脱液B的体积百分比如下

0-8min洗脱液A的体积百分比为5％，洗脱液B的体积百分比为95％

8-14min洗脱液A的体积百分比从5％匀速升至8％，洗脱液B的体积百分比从95％匀速降至92％

14-25min洗脱液A的体积百分比从8％匀速升至10％，洗脱液B的体积百分比从92％匀速降至90％

25-30min洗脱液A的体积百分比从10％匀速升至15％，洗脱液B的体积百分比从90％匀速降至85％

30-35min洗脱液A的体积百分比从15％匀速升至20％，洗脱液B的体积百分比从85％匀速降至80％

35-40min洗脱液A的体积百分比从20％匀速升至30％，洗脱液B的体积百分比从80％匀速降至70％

40-45min洗脱液A的体积百分比为30％，洗脱液B的体积百分比为70％

45-50min洗脱液A的体积百分比从30％匀速降至5％，洗脱液B的体积百分比为从70匀速升至95％

50-55min洗脱液A的体积百分比为5％，洗脱液B的体积百分比为95％。

最后测定供试品溶液的峰面积，并将不同的保留时间的峰所对应的成分进行含量计算，最后各成分之和即各儿茶素单体成分含量之和即为总儿茶素含量。

液相条件：流速1ml/min

面包中总儿茶素含量(％)＝GA含量(％)+EGC含量(％)+C含量(％)+EC含量(％)+EGCG含量(％)+ECG含量(％)

表101％茶面包色谱结果

表112％茶面包色谱结果

表123％茶面包色谱结果

表134％茶面包色谱结果

表14茶粉色谱结果

Claims (9)

1.一种烘烤食品中儿茶素含量的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)制备供试品溶液；

(2)制备对照品溶液；

(3)制作标准曲线；

(4)测定供试品溶液；

(5)根据标准曲线和供试品溶液的峰面积计算供试品中总儿茶素的含量；

其中，所述步骤(1)制备供试品溶液是指：准确称取5-15g粉碎的烘烤食品样品于50-200ml提取液中，在60-80℃水浴锅中振荡水浴20-40min，冷却至室温后，摇匀，倒入离心管中，在室温3000-4000r/min离心5-15min；收集上清液，并用0.45μm滤膜过滤，所得滤液作为供试品溶液；提取液由体积百分比含量为70％的甲醇、29.7％的水和0.3％的甲酸组成；

其中，所述步骤(2)制备对照品溶液是指：分别称取没食子酸3-8mg，儿茶素3-8mg，表儿茶素3-8mg，表没食子儿茶素3-8mg，表儿茶素没食子酸酯3-8mg，表没食子儿茶素没食子酸酯3-8mg溶于5-20ml提取液中，提取液由体积百分比含量为70％甲醇，29.7％水和0.3％甲酸组成；

其中，所述步骤(3)制作标准曲线是指：取没食子酸0.4-0.6mg/ml、表没食子儿茶素0.4-0.6mg/ml、儿茶素0.4-0.6mg/ml、表儿茶素0.4-0.6mg/ml、表没食子儿茶素没食子酸酯0.4-0.6mg/ml、表儿茶素没食子酸酯0.4-0.6mg/ml对照品，按色谱条件测定峰面积，并以峰面积y对不同对照品浓度x，mg/ml进行线性回归，回归方程为：Y＝a·X+b；式中：

Y为对照品溶液的峰面积；

X为对照品溶液的浓度mg/ml；

b为常数；

其中，所述步骤(4)测定供试品溶液是指：精密吸取10-30μl试品溶液，按照色谱条件，在250-300nm下测定峰结果；

所述步骤(3)和步骤(4)中的色谱条件为：

流动相：洗脱液A：0.1-0.3％乙酸乙腈溶液，

洗脱液B：0.1-0.3％乙酸水溶液，

测定波长：250-300nm，

柱温：30-40℃，

梯度洗脱条件：洗脱液A和洗脱液B的体积百分比如下：

0-8min，洗脱液A的体积百分比为2％-5％中的任一值，洗脱液B的体积百分比为98％-95％中的任一值；

8-14min，洗脱液A的体积百分比从2％-5％中的任一值匀速升至8％，洗脱液B的体积百分比从98％-95％中的任一值匀速降至92％；

14-25min，洗脱液A的体积百分比从8％匀速升至10％，洗脱液B的体积百分比从92％匀速降至90％；

25-30min，洗脱液A的体积百分比从10％匀速升至15％，洗脱液B的体积百分比从90％匀速降至85％；

30-35min，洗脱液A的体积百分比从15％匀速升至20％，洗脱液B的体积百分比从85％匀速降至80％；

35-40min，洗脱液A的体积百分比从20％匀速升至30％，洗脱液B的体积百分比从80％匀速降至70％；

40-45min，洗脱液A的体积百分比为30％，洗脱液B的体积百分比为70％；

45-50min，洗脱液A的体积百分比从30％匀速降至2％-5％中的任一值，洗脱液B的体积百分比从70％-匀速升至95％-98％中的任一值；

50-55min，洗脱液A的体积百分比为2％-5％中的任一值，洗脱液B的体积百分比为98％-95％中的任一值。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)制备供试品溶液是指：准确称取10g粉碎的烘烤食品样品于100ml提取液中，在70℃水浴锅中振荡水浴30min，冷却至室温后，摇匀，倒入离心管中，在室温3500r/min离心10min；收集上清液，并用0.45μm滤膜过滤，所得滤液作为供试品溶液；提取液由体积百分比含量为70％的甲醇、29.7％的水和0.3％的甲酸组成；

所述步骤(2)制备对照品溶液是指：分别称取没食子酸5.00mg，儿茶素5.00mg，表儿茶素5.00mg，表没食子儿茶素5.00mg，表儿茶素没食子酸酯5.00mg，表没食子儿茶素没食子酸酯5.00mg溶于10ml提取液中，提取液由体积百分比含量为70％的甲醇、29.7％的水和0.3％的甲酸组成；

所述步骤(3)制作标准曲线是指：取没食子酸0.500mg/ml、表没食子儿茶素0.500mg/ml、儿茶素0.500mg/ml、表儿茶素0.500mg/ml、表没食子儿茶素没食子酸酯0.500mg/ml、表儿茶素没食子酸酯0.500mg/ml对照品，按色谱条件测定峰面积，并以峰面积y对不同对照品浓度x，mg/ml进行线性回归，回归方程为：Y＝a·X+b；式中：

Y为对照品溶液的峰面积；

X为对照品溶液的浓度mg/ml；

b为常数；

所述步骤(4)测定供试品溶液是指：精密吸取20μl试品溶液，按照色谱条件，在270nm下测定峰结果；

所述步骤(3)和步骤(4)中的色谱条件为：

流动相：洗脱液A：0.2％乙酸乙腈溶液，

洗脱液B：0.2％乙酸水溶液，

测定波长：270nm，

柱温：35℃，

梯度洗脱条件：洗脱液A和洗脱液B的体积百分比如下：

0-8min，洗脱液A的体积百分比为3％，洗脱液B的体积百分比为97％；

8-14min，洗脱液A的体积百分比从3％匀速升至8％，洗脱液B的体积百分比从97％匀速降至92％；

14-25min，洗脱液A的体积百分比从8％匀速升至10％，洗脱液B的体积百分比从92％匀速降至90％；

25-30min，洗脱液A的体积百分比从10％匀速升至15％，洗脱液B的体积百分比从90％匀速降至85％；

30-35min，洗脱液A的体积百分比从15％匀速升至20％，洗脱液B的体积百分比从85％匀速降至80％；

35-40min，洗脱液A的体积百分比从20％匀速升至30％，洗脱液B的体积百分比从80％匀速降至70％；

40-45min，洗脱液A的体积百分比为30％，洗脱液B的体积百分比为70％；

45-50min，洗脱液A的体积百分比从30％匀速降至3％，洗脱液B的体积百分比为从70匀速升至97％；

50-55min，洗脱液A的体积百分比为3％，洗脱液B的体积百分比为97％。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：所述烘烤食品是指含有茶或茶提取物的烘烤食品，包括但不限于方便食品。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述茶选自绿茶、红茶、乌龙茶、白茶、黄茶和黑茶中的一种或几种。

5.根据权利要3所述的检测方法，其特征在于：所述茶提取物选自绿茶提取物、红茶提取物、乌龙茶提取物、白茶提取物、黄茶提取物和黑茶提取物中的一种或几种。

6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述黑茶为普洱茶。

7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述黑茶提取物为普洱茶提取物。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：色谱条件为：

高效液相色谱仪；

流动相：洗脱液A：0.2％乙酸乙腈溶液，

洗脱液B：0.2％乙酸水溶液，

测定波长：270nm，

柱温：35℃，

梯度洗脱条件：洗脱液A和洗脱液B的体积百分比如下：

0-8min，洗脱液A的体积百分比为2％，洗脱液B的体积百分比为98％；

8-14min，洗脱液A的体积百分比从2％匀速升至8％，洗脱液B的体积百分比从98％匀速降至92％；

14-25min，洗脱液A的体积百分比从8％匀速升至10％，洗脱液B的体积百分比从92％匀速降至90％；

25-30min，洗脱液A的体积百分比从10％匀速升至15％，洗脱液B的体积百分比从90％匀速降至85％；

30-35min，洗脱液A的体积百分比从15％匀速升至20％，洗脱液B的体积百分比从85％匀速降至80％；

35-40min，洗脱液A的体积百分比从20％匀速升至30％，洗脱液B的体积百分比从80％匀速降至70％；

40-45min，洗脱液A的体积百分比为30％，洗脱液B的体积百分比为70％；

45-50min，洗脱液A的体积百分比从30％匀速降至2％，洗脱液B的体积百分比从70％-匀速升至98％；

50-55min，洗脱液A的体积百分比为2％，洗脱液B的体积百分比为98％。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤如下：

1)供试品溶液的制备

准确称取10.000g粉碎的含有普洱茶提取物的面包样于100ml提取液在70℃水浴锅中振荡水浴30min，冷却至室温后，摇匀，倒入离心管中，在室温3500r/min离心10min；收集上清液，并用0.45μm滤膜过滤，所得滤液作为供试品溶液；其中所述提取液由70％甲醇，29.7％水和0.3％甲酸组成；

2)对照品溶液的制备

分别称取没食子酸5.09mg，儿茶素5.10mg，表儿茶素5.05mg，表没食子儿茶素5.11mg，表儿茶素没食子酸酯5.05mg，表没食子儿茶素没食子酸酯5.14mg溶于10ml70％甲醇29.3％水和0.3％的甲酸溶液中；

3)标准曲线的绘制

取0.509mg/ml没食子酸、0.511mg/ml表没食子儿茶素、0.510mg/ml儿茶素、0.505mg/ml表儿茶素、0.514mg/ml表没食子儿茶素没食子酸酯、0.493mg/ml表儿茶素没食子酸酯对照品，按色谱条件测定峰面积，并以峰面积Y对不同对照品浓度X，mg/ml，进行线性回归，回归方程为：

Y＝a·X+b

式中：

Y为对照品溶液的峰面积；

X为对照品溶液的浓度mg/ml；

a，b为常数

4)测定供试品溶液

精密吸取20μl试品溶液，按照色谱条件，在270nm下测定峰面积；

5)将不同的保留时间的成分进行含量计算，最后各成分之和即各儿茶素单体成分含量之和即为总儿茶素含量；

其中色谱条件为：

高效液相色谱仪；

流动相：洗脱液A：0.2％乙酸乙腈溶液，

洗脱液B：0.2％乙酸水溶液，

测定波长：270nm，

柱温：35℃，

梯度洗脱条件：洗脱液A和洗脱液B的体积百分比如下

0-8min，洗脱液A的体积百分比为3％，洗脱液B的体积百分比为97％；

8-14min，洗脱液A的体积百分比从3％匀速升至8％，洗脱液B的体积百分比从97％匀速降至92％；

14-25min，洗脱液A的体积百分比从8％匀速升至10％，洗脱液B的体积百分比从92％匀速降至90％；

25-30min，洗脱液A的体积百分比从10％匀速升至15％，洗脱液B的体积百分比从90％匀速降至85％；

30-35min，洗脱液A的体积百分比从15％匀速升至20％，洗脱液B的体积百分比从85％匀速降至80％；

35-40min，洗脱液A的体积百分比从20％匀速升至30％，洗脱液B的体积百分比从80％匀速降至70％；

40-45min，洗脱液A的体积百分比为30％，洗脱液B的体积百分比为70％；

45-50min，洗脱液A的体积百分比从30％匀速降至3％，洗脱液B的体积百分比从70％-匀速升至97％；

50-55min，洗脱液A的体积百分比为3％，洗脱液B的体积百分比为97％。