CN102872209A - 一种复脉定药物提取物组合、制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明在传统经典验方的基础上,提供的复脉定药物提取物组合在药物中添加了用于以黄芪多糖为主要成分的黄芪水提物和以党参多糖为主要成分的党参水提物,新的提取物组合对心律失常病症活性更好;同时,还对胃肠功能紊乱和癌细胞具有良好的活性。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药复方制剂,更具体的说涉及一种复脉定药物提取物组合、制备方法及其应用。
技术背景
复脉定药物组合是一剂主要用于治疗心律失常的中药验方,重庆市中药研究院在复脉定冲剂的基础上,改变剂型研制了一种四类复脉定胶囊(专利号:200510057008.2);其工艺是将党参、黄芪、远志、桑椹川芎等五味药材,用60-90%的乙醇回流,提取2-5次,过滤提取液,合并滤液;然后,减压回收乙醇至干,加水加热溶解,冷却静置沉淀;过滤,抛弃沉淀,上D101大孔树脂,用80-95%乙醇洗脱,回收洗脱液,干燥,添加淀粉制备成胶囊;该药主要是在心律失常方面的应用。上述专利采用醇提水沉工艺,主要是提取药物中的脂溶性成分,对于药材中的多糖成分不能实现转移。
党参具有补中益气,健脾益肺的功效。用于脾肺虚弱,气短心悸,食少便溏,虚喘咳嗽,内热消渴等。《本草从新》记载:“补中益气、和脾胃、除烦渴。中气微弱,用以调补,甚为平妥”。其中,党参水提取物能对抗由无水乙醇、强酸(0.6NHCL)和强碱(0.2NNaOH)等所致大鼠胃黏膜损伤及胃溃疡。
黄芪具有补气固表,利尿托毒,排脓,敛疮生肌的功效。用于气虚乏力,食少便溏,中气下陷,久泻脱肛,便血崩漏,表虚自汗,痈疽难溃,久溃不敛,血虚萎黄,内热消渴。《本经》记载:“主痈疽,久败疮,排脓止痛。补虚,小儿百病。”《日华子本草》记载:“助气壮筋骨,长肉补血”。
黄芪多糖具有抗菌和肠道保健作用。其中,抗菌作用机制是多方面的,一方面是药物对细菌及其毒性产物的直接抑杀和解毒作用。另一方面更主要的是通过调动机体免疫防御功能而发挥扶正祛邪抑菌,杀菌作用。对志贺氏痢疾杆菌,炭疽杆菌,a、b型溶链球菌肺炎双球菌,金黄色球菌,大肠杆菌、沙门氏菌均有抗菌作用。黄芪多糖能够增加雏鸡肠道乳酸杆菌和双歧杆菌的数量,能够显著降低大肠杆菌的数量,可有效促进肠道有益微生物的增殖,并对肠道有害菌有抑制作用。代谢产物为短链脂肪酸,可降低肠道pH值。低的pH值一方面可以刺激肠道蠕动,从而降低致病菌的数量,另一方酸性环境有利于乳酸菌和双歧杆菌等有益菌的增殖,同时有益菌在增殖过程中产生过氧化氢、有机酸等具有抗菌活性的代谢产物,能够抑制治病类有害菌和外源性病菌的生存。动物实验表明,黄芪多糖与IL-2/LAK抗肿瘤作用相似,并对IL-2/LAK有抗肿瘤效应有明显的增强作用。二者配伍应用可明显提高LAK细胞对靶细胞的杀伤力。二者合并进行动态细胞免疫功能观察,提示二者均具有抵抗鼠脾NK细胞活性和IL-2产生能力下降的作用。说明黄芪多糖的抗肿瘤作用与增强机体免疫功能的作用有关。可改善机体肿瘤而致的免疫功能低下,促进免疫细胞活化释放内源因子,防止过氧化作用从而造成对肿瘤细胞的杀伤和抑制作用。
另外据报道,以党参多糖为主要有效成分的党参水提取物,可增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力。小鼠腹腔、肌内、静脉注射党参制剂均可使小鼠腹腔巨噬细胞数明显增加,细胞体积增大,伪足增多,胞体内核酸、糖类、ATP酶、琥珀酸脱氢酶等多种酶活性增强,从而增强其吞噬作用。党参水煎液低浓度可促进体外培养淋巴细胞的有丝分裂,并促进COnA活化的小鼠脾脏淋巴细胞DNA合成。党参对正常小鼠的体液免疫功能影响不明显,但对环磷酰胺引起的免疫抑制小鼠则能明显促进其淋巴细胞的转化,增强抗体产生细胞的功能,提高抗体滴度。党参多糖是主要有效成分。同时,党参多糖可诞长小鼠游泳时间、增强耐高温能力、增强去肾上腺小鼠耐缺氧能力。党参水煎液有抗低温作用。党参灌胃给药对γ-射线照射小鼠有保护作用,能提高其存活率。党参的抗应激作用机制主要与兴奋垂体-肾上腺皮质轴的功能有关。同时黄芪总皂苷对多种实验型肿瘤有明显的抑制作用。
发明内容
研究发现,传统复脉定冲剂、胶囊采用醇提水沉工艺制备,由于醇提工艺中黄芪和党参中的水溶性成分不能转移,仅留存脂溶性成分;本发明采用水提和醇提相结合的方法,转移了黄芪和党参中水溶性成分。相对于原方添加了能够调节胃肠功能、抗癌的以黄芪多糖为主的水溶性成分,和能够增强免疫力和增强抗抗应激作用的以党参多糖为主的党参水溶性成分;具体发明内容为:
一种复脉定药物提取物组合的制备方法,包括以下步骤:
1)将黄芪、党参用水做溶媒提取,得到水提成分,得到药物残渣;
2)将药物残渣、远志、川芎和桑椹混合,用乙醇作为溶媒提取,得到醇提成分;
3)混合水提成分和醇提成分得到复脉定药物提取物组合。
步骤1)所述的用水做溶媒提取为:用总重为药材重量10-15倍的水作为溶媒,采用煎煮、温浸或渗滤任一种方法提取。
所述的的用水做溶媒提取为:用总重为药材重量10-15倍的水作为溶媒,采用煎煮作为提取方法,提取得到水提取液,将水提取液,静置冷却,抽取上清液,微孔滤膜抽滤后,挥干水分,得到水提成分。
步骤2)所述用乙醇作为溶媒提取为:用总重为药材重量10-15倍的20-95%乙醇作为溶媒,采用回流、温浸或渗滤任一种方法提取。
所述复脉定药物提取物组合由水提成分和醇提成分混合制备得到。
所述党参、黄芪、远志、桑葚和川芎组成的重量比为15~30:15~20:12~18:12~18:6~9。
所述所述党参、黄芪、远志、桑葚和川芎组成的重量比为20:17:15:15:7。
上述任一所述的复脉定药物提取物组合在制备治疗心律失常病症药物中的应用。
上述任一所述的复脉定药物提取物组合在制备治疗胃肠道功能紊乱药物中的应用。
本发明的有益技术效果是:本发明提供的复脉定药物提取物组合在药物中添加了用于以黄芪多糖为主要成分的黄芪水提物和以党参多糖为主要成分的党参水提物,新的提取物组合对心律失常病症活性更好;同时,还对胃肠功能紊乱和癌细胞具有良好的活性。
具体实施方式
实施例1黄芪、党参水提方法考察
精确称取5份黄芪和党参1:1质量混合料,每份5.0g,置于圆底烧瓶中,加入等量的去离子水,水浴加热,不断搅拌,加热温度分别为20,40,60,80,95℃,提取1h后取出,抽滤。取一定量滤液,定容,测定多糖含量,计算提取率,结果见表1所示;
表1温度对多糖提取率的影响
由表1可知总多糖的提取率随温度的上升而增加,当温度超过60℃,提取率随温度变化增加显著,当温度到100℃时,提取率为最高。而温度过高,不利于操作,如果规模化生产,则需要考虑能量消耗及设备投资等因素。因此,提取多糖的温度不宜超过95℃。
精确称量5.0g黄芪和党参混合料5份,95℃水浴加热,分别回流提取0.5,1,1.5,2,2.5h,抽滤。取滤液,测定多糖含量,结果见表2。
表2提取时间对多糖提取率的影响
由表2可知,随着提取时间的延长,多糖提取率增大。当提取时间为0.5h,提取率为2.62%,提取时间为1h时,总多糖提取率达到4.54%,之后随着提取时间的延长,提取率逐渐降低。因此,提取时间选1h为宜。
提取次数对提取率的影响
精确称量5.0g黄芪和党参混合料,置于圆底烧瓶中,加入定量的蒸馏水,95℃水浴加热lh后,抽滤,得到第1次滤液和滤渣。将滤渣置于圆底烧瓶中,再加入一定量蒸馏水,于100℃水浴加热1h后,重复操作,得到第2次滤液和滤渣。重复以上操作,得到第3、第4次滤液。然后在每次的滤液中取一定量,定容,分别测定总多糖含量,计算提取率,结果见表3所示。
表3提取次数对多糖提取率的影响
由表3可知,随着提取次数的增多,提取率降低,第4次提取液中,总多糖的提取率已降低到0.11%,综合考虑到成本因素等,提取次数选3次为宜。
综合以上单因素实验的结果,对提取温度、提取时间、提取次数3个因素进行L9(34)正交实验,选择黄芪提取过程的最佳工艺条件。因素水平见表4,结果见表5所示。
表4正交实验因素水平
表5正交实验结果
表6方差分析
由表6可知,3个因素对提取率的影响顺序为B>A>C。方差分析结果表明,提取的温度与提取时间对提取率有一定的影响,提取次数的影响不显著。综合考虑,生产周期及操作费用等因素,选取的最佳工艺条件为A﹥B﹥C,即提取温度95℃提取时间1h,提取次数为3次。
水提法提取黄芪多糖的过程中,温度、提取时间、提取次数对多糖的提取率无显著影响。考虑到能耗、设备以及操作费用等因素,水提法提取黄芪党参混合多糖的最佳工艺条件为:提取温度95℃,提取时间1h,提取次数为3次,为满足常压提取的要求,可以采用煎煮的工艺。
实施例2复脉定药物提取物组合的制备
称取药材党参20kg,黄芪17kg,远志15kg,桑椹15kg,川芎7kg;将党参和黄芪混合粉碎,用总重为药材重量10-15倍的水作为溶媒,采用煎煮作为提取方法,提取温度95℃,提取时间1h,提取次数为3次;提取得到水提取液和药物残渣,将水提取液,静置冷却,抽取上清液,用3.0-10.0μm微孔滤膜抽滤后,挥干水分,得到水提成分。
将上述药物残渣烘干,与远志、桑椹和川芎混合,用总重为药材重量10-15倍的20-95%乙醇作为溶媒,采用回流提取,提取的次数为2-5次,过滤,减压回收乙醇,得到水溶液,将水溶液加热,溶解,冷却静置,沉淀,取沉淀上清夜,上D101大孔树脂,用80-95%的乙醇洗脱,收集合并洗脱液,干燥,得到醇提成分。
混合水提成分和醇提成分得到复脉定药物提取物组合I。
称取党参30kg、黄芪15kg、远志12kg、桑葚12kg和川芎6kg,按上述的制备方法得到复脉定药物提取物组合II。
称取党参15kg、黄芪30kg、远志20kg、桑葚18kg和川芎9kg,按上述的制备方法得到复脉定药物提取物组合Ⅲ。
实施例3复脉定药物提取物组合对心动过缓大鼠的活性考察
选用健康成年Wistar大鼠,体重250g-300g,实验前动物经测试确认无异常行为。大鼠在适应性喂养7d后,每日臀部皮下注射氢化可的松,每天25mg/kg,连续注射14d。并在实验第2周时,强迫大鼠每天上、下午各游泳1次,至无力即将下沉时捞出,以诱导劳倦过度,持续1周。观察大鼠一般形态,凡出现活动减少,精神不振,反应迟钝,弓背蜷缩、饮水量减少,体重减轻等肾阳气虚症状者为造模成功。选择造模成功的大鼠72只,随机分为复脉定药物提取物组合I组、复脉定药物提取物组合II组、复脉定药物提取物组合Ⅲ组和市售复脉定胶囊,扶正助脉合剂对照组,模型对照组每组各12只,再选取12只健康大鼠为空白组,每组雌雄各半,分笼饲养。造模成功后次日开始药物干预。空白对照组和模型组常规喂养,按大鼠体重以20ml/kg剂量以蒸馏水灌胃。扶正助脉方煎剂组的药物浓度分别为20mL/kg,每组都于每日上午1O时灌胃给药一次,连续治疗14d。
空白组动物表现为:毛发顺滑,双目有神,反应、活动灵活敏捷,叫声响亮,正常进食饮水。模型组和各治疗组大鼠在实验第1ld~14d时出现不同程度的精神萎靡,摄食减少,生长迟缓体重减轻,毛发枯燥松弛,肢冷,身体瘦削,喜蜷缩扎堆,呼吸微弱,大便溏泻等肾阳气虚症状,特别是模型对照组更为显著。
给药第14天,给药后1h用乙醚浅麻醉大鼠在其下四肢皮下埋置电极,记录大鼠清醒后标准II导联心电图。第15天以盐酸可乐定2mg/kg给各组大鼠皮下注射,并同时灌胃给药,记录灌胃后0.5h、lh、1.5h、2h心电信号,统计分析大鼠心率,心律,房室传导阻滞变化情况。
扶正助脉方煎剂对心动过缓大鼠心率的影响如表7所示,结果表明,复脉定药物提取物组合I组、复脉定药物提取物组合II组、复脉定药物提取物组合Ⅲ组、市售复脉定胶囊组与扶正助脉煎剂组都可以提高缓慢性心律失常大鼠心率;但复脉定药物提取物组合I组、复脉定药物提取物组合II组、复脉定药物提取物组合Ⅲ组活性明显优于市售复脉定胶囊组。
表7各组大鼠心律比较
注:与模型组比较:△P﹤0.05,▲P﹤0.01;与空白组比较:◇P﹤0.05,◆P﹤0.01;
实验结束后,立即断头取血、取出心脏,制备心肌匀浆,按试剂盒规定检测心肌匀浆中cAMP和cGMP含量。
如表8所示,各组相比较,复脉定药物提取物组合I组、复脉定药物提取物组合II组、复脉定药物提取物组合Ⅲ组、市售复脉定胶囊组及扶正助脉煎剂组cAMP含量均有提高,cGMP水平都有下降,尤其以复脉定药物提取物组合I组显著。
注:与模型组比较:△P﹤0.05,▲P﹤0.01;与空白组比较:◇P﹤0.05,◆P﹤0.01;缓慢性心律失常是临床常见病症,表现为不同程度的心悸气短、胸闷隐痛、头昏乏力、动则加重,严重者出现反复晕厥史,突发抽搐、心前区剧痛、可并发心力衰竭、心源性休克、心脏猝死等。
cAMP与心脏功能正相关,当心脏上的p1受体激动时,细胞内产生大量的cAMP,心率随之增快,房室传导时间缩短,心肌收缩力增加。cAMP促进脂肪分解、糖原分解、心肌收缩,而cGMP恰恰相反。cAMP与cGMP是机体内一对既相互拮抗又相互依存的生物活性物质——第二信使。它们普遍存在于生物细胞和和体液中,调节着机体细胞内新陈代谢和各种生理活动。目前认为它们对心肌细胞、血管平滑肌细胞的功能起着重要的调节作用,其血浆浓度异常变化在心血管疾病发生过程中具有重要作用。因此cAMP与cGMP的平衡,是调节机体的关键性物质,和影响整体性机制细胞功能的中间枢纽。cAMP下降,cGMP升高,是公认的阳虚证的特异性病理变化之一,维持二者的平衡与稳定在心动过缓的治疗中具有重要意义。当M受体激动时,使K+外流增加,抑制腺苷酸环化酶,cGMP的含量增加,促进血小板聚积,使心脏抑制,其含量可间接地反映心房压力的变化,可由此判断心衰程度。方中用太子参等温补肾阳药治疗可使cAMP回升而cGMP下降,与模型组比较,剂量组和扶正助脉合剂组cAMP水平均有提高,cGMP水平均有下降,其差异有显著性。与有关报道的结果一致,表明复脉定药物提取物组合I可促进机体脏腑的阴阳气血、虚实正邪逐渐趋向平衡,改善阳虚大鼠紊乱的内环境,促使阳虚大鼠向正常发展。复脉定药物提取物组合I可改善由心肾阳虚引起的心动过缓大鼠心功能和心肌细胞代谢,有利于促进心脏窦房结的营养状况、改善窦房结功能,是改善心功能、治疗心动过缓的有效制剂。
实施例4复脉定药物提取物组合对心动过速大鼠的活性考察
取健康大鼠60只,雌雄不限,平均体重为(200±10)g;分6组。第一组为模型组;第二组为心律宁片剂对照组,灌胃给予药物心律宁片剂的生理盐水溶液(210mg/lOml)。第三组为复脉定药物提取物组合I组,灌胃给予药物复脉定药物提取物组合I的生理盐水溶液(生药材,875mg/lOml);第四组为复脉定药物提取物组合II组,灌胃给予药物复脉定药物提取物组合II组的生理盐水溶液(生药材,1275mg/lOml),第六组为复脉定药物提取物组合Ⅲ组,灌胃给予药物复脉定药物提取物组合Ⅲ的生理盐水溶液(生药材,1275mg/lOml),第六组为市售复脉定胶囊组,灌胃给予药物市售复脉定胶囊的生理盐水溶液(生药材,1275mg/lOml)。2ml/只。首先将大鼠用乌拉坦(1.2g·kg-1)腹腔麻醉,然后将其固定在手术台上。连接心电示波器,记录II导,以观察心电变化(纸速50mm/s)。在尾静脉注射乌头碱(20μg·ml-1)之前,记录正常心电图。各组给药1h后注射乌头碱,观察心电变化情况。实验结果见表9。
取健康豚鼠60只。雌雄不限,平均体重为(200±10)g。分6组。第一组为模型组;第二组为心律宁片剂对照组,灌胃给予药物心律宁片剂的生理盐水溶液(210mg/lOml),2ml/只。第三组为复脉定药物提取物组合I组,灌胃给予药物复脉定药物提取物组合I的生理盐水溶液(生药材,875mg/lOml);第四组为复脉定药物提取物组合II组,灌胃给予药物复脉定药物提取物组合II组的生理盐水溶液(生药材,1275mg/lOml),第五组为复脉定药物提取物组合Ⅲ组,灌胃给予药物复脉定药物提取物组合Ⅲ的生理盐水溶液(生药材,1275mg/lOml),第六组为市售复脉定胶囊组,灌胃给予药物市售复脉定胶囊的生理盐水溶液(生药材,1275mg/lOml)。3ml/只。用乌拉坦(1.2g·kg-1)将豚鼠腹腔麻醉,仰位固定在手术台上,将针电极插入四肢皮下,并与心电机相联,记录II导以观察心电变化(纸速50mm·s-1)。在股静脉注射西地兰(0.82ml·kg-1)之前,记录正常心电。贴片组是在贴片8h后完成上述实验,然后股静脉注射西地兰(0.82ml·kg-1),观察心电变化情况,直至心律失常恢复正常为止;对照组给药l h后注射西地兰(0.82ml·kg),观察心电变化情况。实验结果见表10。
表10复脉定药物提取物组合抗乌头碱诱发室性心动过速的结果
由实验结果可知,复脉定药物提取物组合I对药物诱发的心律失常有较强的抑制作用,在有效剂量时,心电一直保持正常状况无任何变化;心律宁灌胃组偶见室性早搏或二联律,在一段时间以后消失,心律恢复正常。结果也表明,复脉定药物提取物组合I在持续作用时间上优于其他药物。
乌头碱引起心律失常的主要机制是:激活了心肌细胞的钠通道,使钠通道开放,加快心肌细胞Na+内流,促使细胞膜去极化,加快起博点自律性,诱发异位节律点,可形成多源性异位节律,缩短心肌不应期,而导致心律失常。实验结果表明,复脉定药物提取物组合I能够有效地抑制由乌头碱引起的心律失常。
强心苷类药物(如西地兰)中毒时可抑制心肌细胞膜上Na+-K+-ATP酶,从而减少K+向细胞内的主动转运,导致细胞内缺K+,使心肌的最大舒张电位降低,舒张期自动除极速度加快,自律性升高,发生心律失常。采用几种不同的药物诱发不同类型的心律失常可有效地模拟临床症状,反映药物的疗效。结果表明,复脉定药物提取物组合I、II和Ⅲ可以有效地防治心律失常。
实施例5复脉定药物提取物组合对Beagle犬窦性心律不齐的活性考察
筛选出4条窦性心律不齐Beagle犬;雌雄各半,体重10kg左右,月龄6-12个月。Beagle犬经至少5次(隔天)II导联心电图(ECG)检查并符合以下条件者:①窦性P波,R-R周期不等,P渡后有ORS,周期差>0.16秒,P-R间期固定而且>O.12秒,与呼吸无关;②10个R-R周期出现3个以上长R-R周期,经一周观察而无改善者,确定为窦性心律不齐。连续5次(隔天1次)做心电图检查,如有一次不符合上述选择标准者则予以排除。心律不齐情况改善,心电图明显改善并符合以下两条为有效:①R-R周期差减小且接近0.16秒,P-R间期固定而且<O.12秒;②心律不齐次数减少:10个R-R周期中出现长R-R周期的次数明显减少。心电图无改善为无效。实验设复脉定药物提取物组合I组(A组)(生药3.75g/kg)、复脉定药物提取物组合II组(B组)(生药3.75g/kg)和复脉定药物提取物组合Ⅲ组(C组)(生药3.75g/kg),每天9am和4pm定时给药,先把药物配成一定浓度的混悬液加入1/3饲料中混匀,让犬自行食完,然后再给其余2/3饲料.连续17d。
ECG检查方法:犬取自然站立位,四肢皮下插入针式电极,在食前清醒状态下安静后测量II导联心电图。
观察药后1、3、5、7、8、9、11、13、15、17d和停药后2d的心电图:P-R间期、QRs间期、Q-T间期、P波、Q波、R波、s波、T波、ST段、心率和心律,并与药前进行比较。
表11复脉定药物提取物组合对心律不齐Beagle犬P-R间期及心率的影响
表12复脉定药物提取物组合对心律不齐Beagle犬R-R周期差(s)的影响
*下降百分率:药前R-R周期差-药后R-R周期差
由表11可见,P-R间期药前>0.12秒,药后3d起至17d有改善,P-R问期均<0.12秒,且持续到停药后2d。复脉定药物提取物组合I组、复脉定药物提取物组合Ⅱ组和复脉定药物提取物组合Ⅲ组均能改善心律不齐犬的心率,药后9d起药效稳定,且维持一段时间和水平:而心电图P波、Q渡、R波、S波、QRS间期、Q-T间期,无论是复脉定药物提取物组合I组、复脉定药物提取物组合II组和复脉定药物提取物组合Ⅲ组均无明显影响。
由表12可见,给药前,四条犬的R-R周期差为0.48~0.53s,远远大于0.16s,药后ld起,2个剂量组的R-R周期差均开始缩短,从药前的0.48~0.53s降为040s,其降幅为15%~25%;药后5~11d,R-R周期差均明显缩短,降为0.20~0.27秒,降幅为44~62%;在药后13~15d,R-R周期差接近正常(接近016s),复脉定药物提取物组合I组在药后13d为0.16s;复脉定药物提取物组合II组在药后15d为0.17s。复脉定药物提取物组合Ⅲ组在药后15d为0.17s;停药2d后两组分别为0.20s、0.08s和0.10s,其降幅分别为62%、83%和81%。
表13复脉定药物提取物组合对心律不齐Beagle犬心律发生频率(长R-R周期/10个R-R周期)的影响
由表13可见,给药前,四条犬心律不齐的发生频率为10个R-R周期中,出现4个长R-R周期。药后3-5d起复脉定药物提取物组合I组、复脉定药物提取物组合II组和复脉定药物提取物组合Ⅲ组均开始减少,为2-3.5个;药后7-13d明显减少,为1.5-2.5个;药后15-17d减为1-2个,停药2d减至1个,说明复脉定药物提取物组合I组、复脉定药物提取物组合II组和复脉定药物提取物组合Ⅲ组能明显减少心律不齐的发生频率,且停药后能维持一定时间。
实验结果表明,复脉定药物提取物组合I组、复脉定药物提取物组合II组和复脉定药物提取物组合Ⅲ组能明显改善心律不齐犬的心率,减少心律不齐的发生频率,对心律不齐有很好的治疗作用。选择窦性心律不齐Beagle犬作为研究对象,由于动物温顺,心电图检查方便等优点,其对实验疗效的观察结果更接近临床。在以Bealge犬冠状动脉结扎诱发心律失常的实验中,同样观察到心脉安冲剂对心律失常有很好的防治作用,因此用心律不齐犬与药物或手术造成的动物病理模型的结果一样,对抗心律失常药物的评价作用同样客观和准确.且易于评价疗效。
实施例6复脉定药物提取物组合对大鼠胃肠道功能紊乱的活性考察
胃肠功能紊乱症临床主要表现为腹泻、便秘、腹痛和腹泻便秘交替;并伴有纳少、倦怠、消瘦及烦躁等症状。利血平属于肾上腺素神经阻滞药,耗竭中枢及外周的儿茶酚胺递质,使交感神经系统功能低下,副交感神经系统功能亢进,导致植物神经系统功能失调,进而促使胃肠功能紊乱,一定剂量的利血平腹腔注射能使大鼠出现临床胃肠功能紊乱症的表现。
健康雄性大鼠按设计要求随机分成以下5组,每组20只:正常对照组:腹腔注射生理盐水5ml/(kg·d),同时灌服蒸馏水5ml/(kg·d);胃肠道功能紊乱模型组:腹腔注射利血平0.5mg/(kg·d),同时灌服蒸馏水5ml/(kg·d);复脉定药物提取物组合I组:腹腔注射利血平0.5mg/(kg·d),同时灌服复脉定药物提取物组合I(生药量2.5g,下同)/(kg·d):复脉定药物提取物组合II组:腹腔注射利血平0.5mg/(kg·d),同时灌服复脉定药物提取物组合II组;复脉定药物提取物组合Ⅲ组:腹腔注射利血平0.5mg/(kg·d),同时灌服复脉定药物提取物组合Ⅲ组;市售复脉定胶囊量组:腹腔注射利血平0.5mg/(kg·d),同时灌服市售复脉定胶囊量组,连续给药14d。6d时每组各取一半动物实验检测,14d时再取另一半动物实验检测。给药期间每日观察、记录大鼠的摄食量、体重和粪便情况。
模型组大鼠在注射利血平后24h内出现粪便不成形,并陆续出现不同程度的腹泻、肛周污秽,随之出现食欲下降,6d时便溏尤甚,9d时便溏逐渐停止,粪便粘滞不爽,甚至出现便秘、厌食,消瘦日见加重。复脉定药物提取物组合I组个别数大鼠、复脉定药物提取物组合II组少数大鼠、复脉定药物提取物组合Ⅲ组和市售复脉定胶囊多数大鼠出现上述症状,且所述四组表现程度较模型组大鼠轻,正常对照组大鼠健康如初,未见任何异常。各组大鼠胃肠道黏膜肉眼观察未发现异常,病理检查也未见有明显的炎性病变。综上所述,复脉定药物提取物组合能调节实验性胃肠道功能紊乱大鼠的胃肠激素,显著改善其胃肠功能紊乱症状,是该方治疗此症的作用机理之一。
实施例4甲基斑蝥胺脂肪乳剂对荷瘤小鼠的治疗作用研究
复脉定药物提取物组合口服剂(根据本发明实施2的方法制备得到的I、II、Ⅲ组,每瓶100ml含复脉定药物提取物组合(含原药材10±0.1g提取物),试验时根据所需浓度采用生理盐水稀释),口服维甲酸溶液(采用5%乙醇溶液将维甲酸配置成3mg/ml溶液),小鼠肝癌H22细胞株,昆明中小鼠(雌性,体重20±2g)。
取3只雌性小鼠腹腔各接种0.3ml H22细胞悬液,培养肝癌H22细胞株。10天后取腹水,传代3次,按细胞悬液与0.4%台盼蓝生理盐水液的比例为9:1计数活细胞,以RPMI-1640培养液调整H22细胞浓度为5×106个/ml,接种量为每只小鼠0.2ml细胞悬液,细胞总数为1×106个/只。
雌性小鼠40只,取浓度为5×106个/ml H22细胞,每只小鼠右腋窝皮下注射0.2ml(1×106个/只),整个操作在30min内完成;接种后随机分为3组,分别是阴性对照组、复脉定药物提取物组合I、II、组和口服维甲酸组,每组8只。阴性对照组每日静脉注射生理盐水(0.2ml/只),口服灌胃组按150ml/kg每日灌胃复脉定药物提取物组合口服剂,口服维甲酸溶液按60mg/kg每日灌胃,连续7天。
各组小鼠于末次给药后次日处死,解剖后肉眼观察小鼠H22实体瘤为球形结节状,质脆细嫩,剖面呈鱼肉状,切面可见灰白色坏死灶。对照组肿瘤多有浸润性生长,有得甚至浸润至胸骨、锁骨及腋窝后等处,与周围组织分界不清,难以剥离。复脉定药物提取物组合组和口服维甲酸组小鼠的瘤体较较对照组变小,形状规则易剥离。具体结果如如表14所示,与口服维甲酸组比较差异不明显,说明复脉定药物提取物组合对癌细胞具有一定活性。
表14甲基斑蝥胺脂肪乳剂对荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用
Claims (9)
1.一种复脉定药物提取物组合的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)将黄芪、党参用水做溶媒提取,得到水提成分,得到药物残渣;
2)将药物残渣、远志、川芎和桑椹混合,用乙醇作为溶媒提取,得到醇提成分;
3)混合水提成分和醇提成分得到复脉定药物提取物组合。
2.根据权利要求1所述的复脉定药物提取物组合的制备方法,其特征在于:步骤1)所述的用水做溶媒提取为:用总重为药材重量10-15倍的水作为溶媒,采用煎煮、温浸或渗滤任一种方法提取。
3.根据权利要求2所述的复脉定药物提取物组合的制备方法,其特征在于:所述的的用水做溶媒提取为:用总重为药材重量10-15倍的水作为溶媒,采用煎煮作为提取方法,提取得到水提取液,将水提取液,静置冷却,抽取上清液,微孔滤膜抽滤后,挥干水分,得到水提成分。
4.根据权利要求1所述的复脉定药物提取物组合的制备方法,其特征在于:步骤2)所述用乙醇作为溶媒提取为:用总重为药材重量10-15倍的20-95%乙醇作为溶媒,采用回流、温浸或渗滤任一种方法提取。
5.根据权利要求1-4任一所述的复脉定药物提取物组合,其特征在于:所述复脉定药物提取物组合由水提成分和醇提成分混合制备得到。
6.根据权利要求5所述的复脉定药物提取物组合,其特征在于:所述党参、黄芪、远志、桑葚和川芎组成的重量比为15~30:15~20:12~18:12~18:6~9。
7.根据权利要求6所述的复脉定药物提取物组合,其特征在于:所述所述党参、黄芪、远志、桑葚和川芎组成的重量比为20:17:15:15:7。
8.权利要求5-7任一所述的复脉定药物提取物组合在制备治疗心律失常病症药物中的应用。
9.权利要求5-7任一所述的复脉定药物提取物组合在制备治疗胃肠道功能紊乱药物中的应用。
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